SCREENING ANTIBODY Screening antibody test melibatkan pengujian terhadap serum pasien dengan dua atau tiga sampel reagen sel darah merah yang disebut sel skrining/sel panel. Sel panel secara komersial disiapkan dari suspensi sel donor golongan O yang sudah diketahui Ag typingnya selain dari golongan ABO, contohnya : D, C, E, c, e, M,N, S, s, P, Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, dan Jkb.Sebanyak dua atau tiga sel sel skrining diperlukan untuk mendeteksi adanya antibodi dalam uji pra-transfusi.
Sel skrining yang ideal adalah sel darah merah yang homozigot untuk antigen yang signifikan (Rh, Duffy, Kidd) karena antigen yang homozigot akan bereaksi lebih kuat dengan antibodi dibandingkan dengan antigen yang heterozigot yang hanya bereaksi lemah sehingga sulit terdeteksi. Sel skrining juga kadang mengandung antigen yang menimbulkan reaksi yang lemah seperti antigen V, Cw, dan Kpa maka antigen tersebut tidak diperlukan untuk skrining sel
Tujuan Screening Antibody Test Test ini berguna untuk mendeteksi adanya suatu antibody dalam serum selain anti-a atau anti-b yang biasanya dihubungkan dengan reaksi hemolitik non-abo sehingga dapat memastikan persediaan darah yang bebas dari penyebab infeksi-infeksi penyakit dengan cara melacaknya sebelum darah tersebut ditransfusikan. Antibodi ini disebut sebagai unexpected antibody (antibodi tak terduga) karena hanya 0,3 sampai 2% dari kebanyakan orang yang memiliki positif antibody screen. Setelah unexpected antibody tersebut sudah terdeteksi, maka dilakukan skrining identifikasi antibodi untuk menetukan antibodi spesifik.
Autologous Control Autologous Control merupakan bagian dari screening antibody yang dapat dilakukan secara paralel dengan Antibody screen. Autologous Control menggunakan spesimen serum pasien dengan sel darah merah pasien.
Hasil autologous control yang positif mengindikasikan adanya keabnormalan pada pasien itu sendiri yang disebabkan adanya alloantibody di lapisan sel darah merahnya sendiri. Jika demikian biasanya hasil dari Direct Antiglobulin Test (DAT)nyapun positif. Auto-antibodi, yaitu antibodi yang biasanya terbentuk karena obat atau idiopatik dan jika pasien telah ditransfusikan.
Pemeriksaan screening antibody biasanya digunakan untuk : a. Pasien yang membutuhkan transfusi b. Pada ibu hamil c. Pada saat terjadi kasus reaksi transfusi d. Pemeriksaan terhadap darah dan plasma donor Pemeriksaan skrining antibodi menggunakan sel panel kecil karena pada tes ini hanya ingin mengetahui kemungkinan-kemungkinan antibody yang terkandung dalam serum pasien/donor
Lain halnya dengan pemeriksaan identifikasi antibodi yang menggunakan sel panel besar karena pada tes ini berguna untuk mengidentifikasi antibody yang terkandung dalam serum pasien/donor secara spesifik. Skrining antibodi dilakukan apabila hasil dari direct coomb s test negatif Prinsip dari screening test antibody : untuk mengetahui ada atau tidaknya kemungkinan irregular atau regular allo antibodi dalam serum pasien maupun donor secara invitro.
Metoda : aglutinasi tidak langsung (indirek Coomb s test) Alat dan Bahan: a. Sel Panel kecil b. Sel Panel Besar c. Bovine albumin 22 % d. Coomb s Serum (A.H.G) e. Saline Persiapan Reagensia : a. Biarkan reagen pada suhu kamar b. Catat Batch No. dan tanggal Kadaluwarsa Peralatan : a. Inkubator ( Waterbath) 37ᵒC b. Centrifuge c. Mikroskop d. Rak tabung e. Tabung reaksi ukuran 12 x 75 mm f. Pipet pasteur g. Botol semprot h. Slide test i. Beaker glass j. Wadah limbah
Prosedur Kerja Dengan Sel Panel Kecil 1. 2 tetes serum tetes sel panel 1 2. 2 tetes serum Os tetes sel panel 2 3. 2 tetes serum OS tetes suspensi sel OS 5% Medium Saline Medium BA
Medium saline 1. 2 tetes serum tetes sel panel 1 2. 2 tetes serum Os tetes sel panel 2 3. 2 tetes serum OS tetes suspensi sel OS 5% 1.B. Diinkubasi pada sushu 37 ⁰C selama 1 jam 1. A. Diinkubasi 18 ⁰ 20⁰C selma 20 60 menit Atau diinkubasi 20 ⁰C selama 20 menit, kemudian diputar 1000 rpm selama 1 menit 2.A.Dilakukan pembacaan hasil 1 A 2.B.Dilakukan pembacaan hasil 1B
Medium Bovine albumin 1. 2 tetes serum tetes sel panel 1 2. 2 tetes serum Os tetes sel panel 2 3. 2 tetes serum OS tetes suspensi sel OS 5% 1. Ditambahkkan masingmasing 2 tetes bovine albumin 22% dan di homogenkan 2. Kemudian diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 15-6menit. 3. Dilakukan pembacaan hasil.
1. Dicuci dengan sebanyak 3x saline 2. Supernatant dibuang hingga bersih. Bila hasil negatif : 3. Pada masing masing tabung diteteskan AHG sebanyak 2 tetes dan dihomogenkan 4. Diputar 3000 rpm selama 15-20 detik. 5. Dilakukan pembacaan hasil sesuai table panel Kecil
Pembacaan Hasil : 1. non aglutinasi : tidak ada irreguler allo antibody 2. aglutinasi : adanya irreguler allo antibody pada serum pasien/donor Uji validasi pekerjaan : 1. bila hasil ICT negative, maka ditambahkan CCC masing-masing 1 tetes pada semua tabung lalu dihomogenkan 2. kemudian dicentrifuge selama 15-20 detik pada kecepatan 3000 rpm 3. pembacaan hasil : a. Positif : reagensia yang dipergunakan dan pekerjaan yang dilakukan valid b. Negatif : reagensia yang dipergunakan dan pekerjaan yang dilakukan invalid Hasil pemeriksaan skrining antibodi yang menunjukkan positif aglutinasi harus dilanjutkan ke pemeriksaan identifikasi antibodi
Beberapa keuntungan yang didapat bila melakukan pemeriksaan skrining antibodi 1. Bagi resipien a. Sebagai persiapan operasi pemeriksaan ini dapat dilakukan terlebih dahulu, sehingga memudahkan mencari darah donor yang kompatibel pada pemeriksaan cocok serasi
b. Pemeriksaan reaksi silang minor dan reaksi antar donor ditiadakan, karena semua donor sudah diketahui tidak mengandung antibodi irreguler. c. Kemungkinan ditemukannya antibodi irreguler lebih besar dibandingkan dengan pemeriksaan cocok serasi. Pemeriksaan skrining antibodi dapat dilakukan bersamasama dengan pemeriksaan reaksi silang. 2. Bagi Donor Antibodi yang ditemukan dapat dicantumkan didalam kartu donor sebagai peringatan bagi UTD, baik pada saat ia mendonorkan darahnya maupun pada saat ia sendiri membutuhkan darah.
3. Bagi UTD a. Kesalahan manusia berupa kesalahan penulis identitas, tetesan maupun tertukarnya tabung-tabung reaksi akibat banyaknya tabung yang digunakan. b. Waktu yang dibutuhkan untuk pemeriksaan Uji Cocok Serasi menjadi singkat sangat menguntungkan saat permintaan darah Cito, karena minor test dan reaksi antar donor ditiadakan. c. Semua darah donor yang telah diuji saring antibodi siap pakai dan telah diketahui bebas dari antibodi irreguler baik tipe dingin maupun tipe hangat. d. Beberapa darah donor yang mengandung antibodi masih dapat digunakan sebagai PRC
Antibody yang terkandung dalam serum akan terjadi pada reaksi dan fase 1. Dari kelas IgM (regular antibody) Antibody ini akan bereaksi optimal sehingga dapat menimbulkan reaksi aglutinasi pada temperatur rendah dan dari medium saline. Contoh antibody yang sering ditemui adalah anti-n,-i dan -P (IgM)
2. Dari kelas IgG 3. Antibody ini akan bereaksi optimal pada Tahap AHG (medium salin dengan penginkubasian 37 C dan medium BA 22%). Contoh antibody yang sering ditemui adalah anti Rh, Kell, Kidd, dan Duffy (IgG). Sedangkan Lewis dan M, contoh antibody yang mungkin terkandung di dalamnya yaitu IgG, IgM, atau campuran keduanya.
Hal-hal yang harus diperhatikan pada pemeriksaan ini 1. 2. Hasil tes harus segera dibaca setelah disentrifugasi jika menunda dalam pembacaan hasil dapat menyebabkan false negatif. Langkah pertama dalam membaca hasil reaksi aglutinasi adalah melihat tanda-tanda hemolisis yang terdapat di supernatan (warna merah atau merah muda).
3. 4. Serum dari pasien dengan multiple myeloma memiliki berat molekul tinggi plasma ekspander (dextran) yang dapat menyebabkan agregasi sel darah merah tidak spesifik, yang disebut sebagai rouleaux. Alloantibodi lain (seperti Anti-M) yang sangat mungkin reaktif hanya pada suhu kamar
IDENTIFIKASI ANTIBODY Tujuan : untuk mengetahui ada tidaknya irregueler allo antibody dalam serum Prinsip : untuk mengetahui ada atau tidaknya irreguler antibodi yang spesifik dalam serum pasien. Metoda : agglutinasi tidak langsung
Prosedur Kerja dengan Sel Panel Besar 1. 2 tetes serum Os tetes sel panel 1 2. 2 tetes serum Os tetes sel panel 2 3. 2 tetes serum Os tetes sel panel 3 4. 2 tetes serum Os tetes sel panel 4 5. 2 tetes serum Os tetes sel panel 5 6. 2 tetes serum Os tetes sel panel 6 7. 2 tetes serum Os tetes sel panel 7 8. 2 tetes serum Os tetes sel panel 8 9. 2 tetes serum Os tetes sel panel 9 10.2 tetes serum Os tetes sel panel 10 Medium Saline Medium BA
1. 2 tetes serum Os tetes sel panel 1 2. 2 tetes serum Os tetes sel panel 2 3. 2 tetes serum Os tetes sel panel 3 4. 2 tetes serum Os tetes sel panel 4 5. 2 tetes serum Os tetes sel panel 5 6. 2 tetes serum Os tetes sel panel 6 7. 2 tetes serum Os tetes sel panel 7 8. 2 tetes serum Os tetes sel panel 8 9. 2 tetes serum Os tetes sel panel 9 10.2 tetes serum Os tetes sel panel 10 Medium saline 1 1. Diinkubasi 18 ⁰ - 20⁰C selma 20 60 menit Atau diinkubasi 20 ⁰C selama 20 menit, kemudian diputar 1000 rpm selama 1 menit 2.Dilakukan pembacaan hasil.
1. 2 tetes serum Os tetes sel panel 1 2. 2 tetes serum Os tetes sel panel 2 3. 2 tetes serum Os tetes sel panel 3 4. 2 tetes serum Os tetes sel panel 4 5. 2 tetes serum Os tetes sel panel 5 6. 2 tetes serum Os tetes sel panel 6 7. 2 tetes serum Os tetes sel panel 7 8. 2 tetes serum Os tetes sel panel 8 9. 2 tetes serum Os tetes sel panel 9 10.2 tetes serum Os tetes sel panel 10 Medium saline 2 1. Diinkubasi 37⁰C selma 60 menit 2.Dilakukan pembacaan hasil.
Medium Bovine albumin 1. 2 tetes serum Os tetes sel panel 1 2. 2 tetes serum Os tetes sel panel 2 3. 2 tetes serum Os tetes sel panel 3 4. 2 tetes serum Os tetes sel panel 4 5. 2 tetes serum Os tetes sel panel 5 6. 2 tetes serum Os tetes sel panel 6 7. 2 tetes serum Os tetes sel panel 7 8. 2 tetes serum Os tetes sel panel 8 9. 2 tetes serum Os tetes sel panel 9 10.2 tetes serum Os tetes sel panel 10 1. Ditambahkkan masingmasing 2 tetes bovine albumin 22% dan di homogenkan 2. Kemudian diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 15-60 menit. 3. Dilakukan pembacaan hasil.
1. Dicuci dengan sebanyak 3x saline 2. Supernatant dibuang hingga bersih. Bila hasil negatif 3. Pada masing masing tabung diteteskan AHG sebanyak 2 tetes dan dihomogenkan 4. Diputar 3000 rpm selama 15-20 detik. 5. Dilakukan pembacaan hasil sesuai table panel besar.
Pembacaan Hasil : 1. non aglutinasi : tidak ada irreguler allo antibody 2. aglutinasi : adanya irreguler allo antibody pada serum pasien/donor Uji validasi pekerjaan : 1. bila hasil ICT negative, maka ditambahkan CCC masing-masing 1 tetes pada semua tabung lalu dihomogenkan 2. kemudian dicentrifuge selama 15-20 detik pada kecepatan 3000 rpm 3. pembacaan hasil : a. Positif : reagensia yang dipergunakan dan pekerjaan yang dilakukan valid b. Negatif : reagensia yang dipergunakan dan pekerjaan yang dilakukan invalid Hasil pemeriksaan skrining antibodi yang menunjukkan positif aglutinasi harus dilanjutkan ke pemeriksaan identifikasi antibodi