SKRIPSI ROSYIDATUL MALIHAH

Transkripsi

1 SKRIPSI ROSYIDATUL MALIHAH SITOTOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN BENALU KEMIRI (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) TERHADAP SEL KANKER SERVIKS (Sel HeLa) DENGAN METODE MTT SECARA IN VITRO PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2014 i

2 Lembar Pengesahan SITOTOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN BENALU KEMIRI (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) TERHADAP SEL KANKER SERVIKS (Sel HeLa) DENGAN METODE MTT SECARA IN VITRO SKRIPSI Dibuat Untuk Memenuhi Syarat Mencapai Gelar Sarjana Farmasi Pada Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang 2014 Oleh: Rosyidatul Malihah Disetujui Oleh: Pembimbing I Pembimbing II Siti Rofida, S.Si., M. Farm., Apt. Ahmad Shobrun Jamil, S. Si., M.P. NIP NIP ii

3 Lembar Pengujian SITOTOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN BENALU KEMIRI (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) TERHADAP SEL KANKER SERVIKS (Sel HeLa) DENGAN METODE MTT SECARA IN VITRO SKRIPSI Telah diuji dan dipertahankan di depan tim penguji Pada tanggal 24 Juni 2014 Oleh: Rosyidatul Malihah Tim Penguji: Penguji I Penguji II Siti Rofida, S.Si., M. Farm., Apt. Ahmad Shobrun Jamil, S. Si., M.P. NIP NIP Penguji III Penguji IV Drs. H. Achmad Inoni, Apt. Nailis Syifa, S.Farm., M. Sc., Apt. NIDN NIP iii

4 KATA PENGANTAR Assalamu alaikum warohmatullahi wabarokatuh Alhamdulillahirrobbil alamin, segala puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT atas segala rahmat, nikmat dan pertolongannya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul SITOTOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN BENALU KEMIRI (Dendrphthoe sp. grew on Aleurites moluccana) TERHADAP SEL KANKER SERVIKS (SEL HeLa) DENGAN METODE MTT SECARA IN VITRO. Skripsi ini diajukan untuk memenuhi syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang. Dalam penyusunan skripsi ini penulis tidak terlepas dari peranan pembimbing dan bantuan dari seluruh pihak. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati, penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada: 1. Siti Rofida, S. Si., M.Farm., Apt. selaku dosen pembimbing I dan Ahmad Shobrun Jamil, S. Si., MP. selaku dosen pembimbing II atas saran, bimbingan, dan arahannya yang dengan sabar telah meluangkan waktu untuk membimbing dan mengarahkan penulis sampai terselesaikannya skripsi ini. 2. Nailis Syifa, S. Farm., M. Sc., Apt. Dan Drs. H. Achmad Inoni, Apt. selaku dosen penguji yang telah banyak memberikan saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini. 3. Yoyok Bekti Prasetyo, M. Kep., Sp. Kom. selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan yang telah memberikan kesempatan penulis belajar di Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang. 4. Nailis Syifa, S. Farm., M. Sc., Apt. selaku Ketua Program Studi Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang yang telah memberi motivasi dan kesempatan penulis belajar di Program Studi Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang. 5. Sovia Aprina Basuki, S. Farm., M. Si., Apt. selaku Kepala Laboratorium di Program Studi Farmasi, yang telah memberi kesempatan kepada penulis iv

5 supaya bisa menyelesaikan penelitian skripsi di laboratorium Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang. 6. Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gajah Mada, khususnya Prof.Dr.Supargiyono,DTM&H.,SU.,PhD.,Sp.ParK dan Ibu Rumbi yang telah bersedia meluangkan waktu dan memberikan tempat agar penulis dapat melaksanakan penelitiannya dengan baik. 7. Hidajah Rachmawati, S. Farm., Apt., Sp. FRS. selaku dosen wali. Terima kasih atas arahan ibu baik tentang akademik atau non akademik selama ini. 8. Untuk semua Dosen Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang yang sudah memberikan waktunya untuk mengajarkan ilmu-ilmu yang sangat bermanfaat. Terutama Ibu Arina Swastika Maulita, S.Farm., Apt., dan Ibu Sendi Lia Yunita, S. Farm., Apt. yang telah susah payah membantu jalanya ujian skripsi sehingga kami dapat melaksanakan ujian skripsi dengan baik. 9. Staff Tata Usaha Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang terima kasih karena telah banyak membantu dalam hal administrasi. 10. Untuk Bapak (H. Saifullah Sholeh) dan Bunda (Siti Rohana) serta Ibu (Sri Pujiati) tercinta dan tersayang yang tiada hentinya memotivasi dalam segala hal, dengan sabar mendoakan untuk kebaikan dan kesuksesan putrinya. Terima kasih banyak atas didikan dan kerja keras untuk membuat putrinya bahagia serta mendapatkan ilmu yang bemanfaat. 11. Untuk semua saudara tersayang, terutama adik Rizal, adik Iva, adik Tus dan adik Vickry yang selalu mendoakan dan memberikan semangat kepada penulis dalam proses perampungan skripsi ini. 12. Untuk mas Bagus, terima kasih atas semangat, pengertian dan perhatiannya selama ini untuk bisa menyelesaikan skripsi ini, semoga Allah selalu memberikan kemudahan dan keberkahan untuk kita. 13. Teman teman seperjuangan bahan alam : Iin, Miftah dan Ina atas kebersamaan, bantuan, motivasi dan semangat serta kerjasamanya sehingga skripsi ini dapat terwujud. 14. Para sahabat yang tersayang dan setia menemani saya sampai saat ini: Anis Khn, Anis Sofi dan Pipit, terima kasih atas motivasi dan v

6 kebersamaannya selama ini dan juga terima kasih atas pelajaran yang kalian berikan yang tidak pernah saya dapat di bangku pendidikan. 15. Teman-teman Farmasi 2010 terutama Mbak Lailis, Iin, Rahayu dan Desi, terimakasih atas kebersamaannnya selama 4 tahun terakhir ini, kalian memberikan semangat baru dalam kehidupan ini. 16. Bapak dan Ibu kos terima kasih atas motivasi dan perhatiannya selama ini beserta teman-teman kos Jalan Bendungan Sutami Gang 2A. No. 51 atas kebersamaannya. 17. Untuk semua pihak yang belum disebutkan namanya, penulis mohon maaf dan terima kasih yang sebesar-besarnya. Semua keberhasilan ini tak luput dari bantuan, doa yang telah kalian semua berikan. Jasa dari semua pihak yang telah membantu dalam penelitian ini, penulis tidak mampu membalas dengan apapun. Semoga amal baik semua pihak mendapat imbalan dari Allah SWT. Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari pembaca demi kebaikan skripsi ini. Semoga penulisan skripsi ini dapat berguna bagi penelitian berikutnya ataupun bagi semua pihak yang membaca skripsi ini, amiin. Wassalamu alaikum warohmatullohi wabarokatuh Malang, 24 Juni 2014 Penyusun Rosyidatul Malihah vi

7 RINGKASAN Pada dewasa ini, Penyakit kanker merupakan penyebab kematian kedua setelah penyakit kardiovaskular (Diananda; 2007, Nafrialdi dan Gan; 2011). Kanker serviks adalah kanker primer dari serviks. Kanker serviks merupakan jenis kanker tersering kedua di dunia pada wanita, dengan estimasi kasus baru dan kematian pada tahun 2008 (Rachmawati dkk; 2013). Menurut Depkes RI pada tahun 2010 angka kejadian kanker serviks di negara Indonesia mencapai angka 100/ penduduk pertahun (Ocviyanti dkk; 2013). Hingga kini pengobatan neoplastik atau kanker dapat dilakukan dengan 3 cara yaitu: pembedahan, radiasi, dan dengan pemberian obat antineoplastik atau antikanker (Mulyadi; 1997). Namun demikian, pada pengobatan kemoterapi biasanya menyebabkan penekanan/supresi sumsum tulang, yang akhirnya menyebabkan keletihan, anemia, kecenderungan perdarahan, dan peningkatan resiko infeksi (Corwin; 2008). Selain pengobatan konvensional tersebut, masyarakat banyak mencoba kemungkinan penyembuhan dengan pengobatan alternatif menggunakan tanaman herbal. Salah satunya yaitu dengan menggunakan tanaman benalu. Benalu merupakan tanaman parasit yang pada awalnya dianggap tidak bermanfaat ternyata berpotensi sebagai agen kemopreventif (Ikawati dkk; 2008). Salah satu tanaman benalu yang dapat dimanfaatkan adalah benalu kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana). Studi pendahuluan tentang benalu sudah pernah dilakukan sebelumnya, namun tanaman benalu sebagai agen antikanker masih membutuhkan eksplorasi lebih lanjut. Benalu berpeluang untuk dikembangkan sebagai fitofarmaka (Ikawati; 2008 ), salah satunya yaitu benalu teh dan benalu mangga yang tergolong dalam famili Loranthaceae dilaporkan memiliki efek sebagai agen antikanker yang mempunyai nilai IC 50 < 50 μg/ml dan benalu kelor mempunyai IC 50 < 33,89 μg/ml (Multiawati, 2013). Ekstrak yang diuji yaitu ekstrak kental etanol, dimana untuk memperoleh ekstrak kental etanol digunakan ekstraksi dengan cara maserasi. Daun benalu kemiri diekstraksi sebanyak 3x24 jam. Ekstrak kental etanol daun benalu kemiri diuji kromatografi lapis tipis terlebih dahulu supaya dapat diketahui kandungan senyawa kimia yang berada di dalam benalu kemiri tersebut. Hasil dari kromatografi lapis tipis tersebut menyatakan bahwa tanaman daun benalu kemiri positif mempunyai kandungan senyawa kimia flavonoid, steroid dan saponin. Hasil ekstraksi tersebut setelah diuji dengan kromatografi lapis tipis kemudian diuji lagi dengan menggunakan metode MTT Assay untuk mengetahui sitotoksisitas dari daun benalu kemiri ini. Sebelumnya dibuat konsentrasi ekstrak bahan uji dengan konsentrasi 800 µg/ml, 400 µg/ml, 100 µg/ml, 50 µg/ml, 25 µg/ml, lalu dilakukan pembacaan absorbansi untuk mengetahui nilai IC 50 dari daun benalu kemiri dengan menggunakan ELISA reader dan dianalisis menggunakan probit log, daun benalu kemiri mempunyai nilai IC µg/ml. Microculture Tetrazolium Salt (MTT) Assay merupakan senyawa yang tereduksi menjadi ungu di dalam mitokondria sel hidup. Reduksi hanya terjadi apabila terdapat enzim reduktase yang diproduksi oleh mitokondria yang aktif, sehingga perubahan tersebut secara langsung berhubungan dengan jumlah sel yang hidup (CCRC; 2009). vii

8 Berdasarkan literatur pada penelitian sebelumnya dan dengan perolehan nilai IC 50 tersebut dapat disimpulkan bahwa ekstrak benalu kemiri bersifat sitotoksik dalam menghambat pertumbuhan sel kanker serviks (sel HeLa) dengan menggunakan metode MTT Assay secara in vitro serta kandungan senyawa kimia yang terdapat di dalam daun benalu kemiri adalah senyawa golongan flavonoid, saponin dan triterpenoid. Berdasarkan penggunaan pelarut etanol pada penelitian ini yang penggunaannya untuk melarutkan kandungan senyawa kimia yang mempunyai efek sitotoksik pada tanaman daun benalu kemiri, perlunya dilakukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan pelarut yang lain, seperti metanol, n-heksana, dan etil asetat serta diaplikasikan pada sel kanker yang lain dengan menggunakan ekstrak yang sama misalnya dengan menggunakan sel kanker ovarium atau sel kanker myeloma, serta adanya penambahan variasi konsentrasi yang banyak dari ekstrak tersebut. viii

9 ABSTRACT In this early time cancer is the second leading cause of death after cardiovascular disease, one of which is that cervical cancer is the second most common type of cancer in women in the world. Treatment of cancer that is often used at present is surgery, radiation, and combine with anticancer drugs. But at the moment many people are using herbal remedies, one of which is the use of mistletoe (Dendrophthoe sp.) Which has benefits as cough medicine, cancer, diuretics and pain relievers. It also occurs in Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana leaves. This study aims to determine the cytotoxic activity of chemical compounds as well as knowing the content inside of ethanol extract of Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana leaves against cervical cancer cells (HeLa cells). Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana leaves extracted using 96% ethanol was tested by thin layer chromatography test and to determine cytotoxic of it, it used MTT method (Microculture Tetrazolium Salt) Assay. The results of the screening group of chemical compounds using TLC is known that ethanol extract of Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana leaves contain flavonoid compounds, steroids and saponins. Based on research conducted by Multiawati if in a cytotoxic test compound IC 50 values <33.89 mg / ml, then the compound could be developed into an anticancer compound. Extracts were tested, namely ethanol extract, ethanol extract which has IC 50 is 2592 ug / ml, and all of concentration against cervical cancer cells (HeLa cells)> 100 ug / ml, so that the extract of mistletoe leaves of kemiri are cytotoxic and can inhibit the growth of cancer cells cervical (HeLa cells). Keywords: Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana leaves, HeLa cells, MTT Assay. ix

10 ABSTRAK Pada saat ini kanker merupakan penyebab kematian kedua setelah penyakit kardiovaskular, salah satunya yaitu kanker serviks yang merupakan jenis kanker tersering kedua di dunia pada wanita. Pengobatan pada kanker yang sering digunakan pada saat ini yaitu pembedahan, radiasi, dan dengan pemberian obat antikanker. Namun pada saat ini sudah banyak masyarakat yang menggunakan pengobatan herbal, salah satunya yaitu penggunaan tanaman daun benalu (Dendrophthoe sp.) yang mempunyai manfaat sebagai obat batuk, kanker, diuretik dan penghilang nyeri. Hal ini juga terjadi pada tumbuhan daun benalu kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas sitotoksik serta mengetahui kandungan senyawa kimia yang berada di dalam ekstrak etanol daun benalu kemiri terhadap sel kanker serviks (sel HeLa). Daun benalu kemiri diekstraksi dengan menggunakan etanol 96% diuji dengan kromatografi lapis tipis uji sitotoksiknya digunakan metode MTT (Microculture Tetrazolium Salt) Assay. Hasil skrining golongan senyawa kimia dengan menggunakan KLT diketahui bahwa ekstrak etanol daun benalu kemiri mengandung senyawa golongan flavonoid, steroid dan saponin. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Multiawati jika pada suatu uji sitotoksik suatu senyawa memiliki nilai IC 50 < 33,89 μg/ml, maka senyawa tersebut bisa dikembangkan menjadi senyawa antikanker. Ekstrak yang diuji yaitu ekstrak etanol, dimana ekstrak etanol mempunyai IC 50 yaitu 2592 μg/ml, dan semua konsentrasinya terhadap sel kanker serviks (sel HeLa) > 100 µg/ml, sehingga ekstrak daun benalu kemiri ini bersifat sitotoksik dan dapat menghambat pertumbuhan dari sel kanker serviks (sel HeLa). Kata kunci: Daun Benalu Kemiri, Sel HeLa, MTT Assay. x

11 DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i LEMBAR PENGESAHAN... ii LEMBAR PENGUJIAN... iii KATA PENGANTAR... iv RINGKASAN... vii ABSTRACT... ix ABSTRAK... x DAFTAR ISI... xi DAFTAR TABEL... xiv DAFTAR GAMBAR... xv DAFTAR LAMPIRAN... xvi DAFTAR SINGKATAN... xvii BAB 1 PENDAHULUAN Latar belakang Rumusan Masalah Penelitian Tujuan Penelitian Hipotesis Penelitian Manfaat Penelitian... 4 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA Tinjauan Tentang Benalu Kemiri Klasifikasi Sinonim Nama Daerah Deskripsi Etiologi dan Penyebaran Khasiat Kandungan Tinjauan tentang Kanker Definisi... 9 xi

12 2.2.2 Penyebab Terjadinya Kanker Sifat dan Karakteristik Sel Kanker Proses Terjadinya Karsinogenesis Tinjauan tentang Kanker Serviks Definisi Tanda dan Gejala Kanker Serviks Tinjauan Sel HeLa Tinjauan tentang Ekstraksi Tinjauan tentang MTT Assay Tinjauan Nilai IC 50 pada Tumbuhan Benalu...19 BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL BAB 4 METODE PENELITIAN Bahan Penelitian Bahan Tanaman Bahan Kimia dan Bahan Lainnya Alat-alat Penelitian Variabel Penelitian Variabel Bebas Variabel Tergantung Metode Penelitian Rancangan Percobaan Penelitian Kerangka Operasional Prosedur Kerja Pembuatan Ekstrak Bahan Uji Identifikasi Golongan Senyawa kimia dengan Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Pembuatan Media Penumbuhan Sel Penggantian Media Panen Sel Perhitungan Sel Pembuatan Larutan Induk dan Larutan Uji xii

13 Uji Aktivitas Antikanker dengan Metode MTT Analisis Data BAB V HASIL PENELITIAN Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) Hasil Uji KLT Bahan Uji Ekstrak Etanol Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) Perhitungan Sel HeLa dan Volume Panenan Sel yang Ditransfer ke Dalam Plate Uji Sitotoksisitas dari Ekstrak Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) Terhadap Sel Kanker Serviks (Sel HeLa) dengan Metode MTT Analisis Data BAB VI PEMBAHASAN BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Saran DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN xiii

14 DAFTAR TABEL Tabel Halaman II.1 Stadium Kanker Serviks IV.1 Kelompok perlakuan kultur sel kanker serviks (sel HeLa) dalam tiap percobaan V.1 Hasil Pembuatan Ekstrak Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) V.2 Data Hasil Uji MTT Ekstrak Etanol Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) terhadap Sel Kanker Serviks (Sel Hela) xiv

15 DAFTAR GAMBAR Gambar Halaman 2.1 Tanaman Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) Struktur Kuersetin Proses Terjadinya Karsinogenesis Sel HeLa Kerangka Konseptual Kerangka Operasional Skema Pembuatan Ekstrak Etanol 96% Daun Benalu Kemiri Ekstrak Kental Etanol Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) Hasil Identifikasi Golongan Flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis Kondisi Sel Antara Kontrol Sel dan Sel yang Sudah Diberikan Ekstrak Etanol Daun Benalu Kemiri Kondisi Sel Pada Kontrol dan Kelompok Uji Sesudah Pemberian MTT Dilihat Di Bawah Mikroskop dengan Perbesaran 40 Kali Hubungan Antara Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) xv

16 DAFTAR LAMPIRAN Lampiran Halaman 1. Daftar Riwayat Hidup Surat Pernyataan Surat Determinasi Tanaman Analisis Probit Ekstrak Etanol Daun Benalu Kemiri (Dendrophthoe sp. grew on Aleurites moluccana) Foto Alat dan Bahan yang digunakan xvi

17 DAFTAR SINGKATAN CCRC = Cancer Chemoprevention Research Center DMEM = Dulbecco s Modified Eagle Medium DMSO = Dimethyl Sulfoxide DNA = Deoxyribose Nucleic Acid EDTA = Ethylenediamine tetraacetic acid ELISA = Enzyme Linked Immunosorbent Assay ER = Endoplasma Reticulum FBS = Fetal Bovine Serum FIGO = International Federation of Gynecologists and Obstetricians HCl = Hidroclhoride Acid HIV = Human Immunodificiency Virus HPV = Human Papiloma Virus HTLV = Human T-lympocyte Virus IC 50 = Inhibitory Concentration 50 LAF = Laminar Air Flow MK = Media Kultur MTT = Microculture Tetrazolium Salt NaOH = Natrium Hidroksida PBS = Phospate Buffer Saline RPMI = Rosewell Park Memorial Institute SDS = Sodium Dedocyl Sulfate USDA = United State Department of Agricultural WHO = World Health Organization xvii

18 DAFTAR PUSTAKA Anggraini, Polis Novita, Aktivitas Campuran Ekstrak Etanol Herba Sambiloto dan Rimpang Kunyit Terhadap Sel Kanker Payudara Manusia T47D In Vitro Dengan Metode MTT, Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Airlangga. Artanti, N., Firmansyah, T., and Darmawan, A., Bioactivities Evaluation of Indonesian Mistletoes (Dendrophthoe pentandra (L.) Miq.) Leaves Extracts. Journal of Applied Pharmaceutical Science, Vol. 02 No. 01, p Astuti, Retno Dwi., Uji Antiproliferasi Ekstrak Etil Asetat Daun Benalu Kepel (Dendrophtoe curvata (Blume) Miq.) Terhadap Cell Line Kanker Payudara T47D. Yogyakarta: Skripsi Universitas Islam negeri Sunan Kalijaga. Awik, P.D.N., Sukardiman., dan Fadjri, H. T., Uji Toksisitas dan Efek Ekstrak Spons Laut Aaptos suberitoides Terhadap Sel Kanker Serviks (HeLa) Secara In Vitro. ITS Undergraduated Thesis of Biology. BPOM RI., Acuan Sedian Herbal. Volume ke-5. Edisi ke-1, Jakarta: Direktorat Obat Asli Indonesia Debuti Bidang Pengawas Obat Tradisional, Kosmetik dan Produk Komplementer, CCRC (Cancer Chemoprevention Research Center)., Prosedur Tetap. Yogyakarta Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada. Diakses tanggal 30 Oktober CCRC (Cancer Chemoprevention Research Center)., Kanker Leher Rahim (serviks). Yogyakarta : Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada. Diakses tanggal 19 September CCRC (Cancer Chemoprevention Research Center)., Sel HeLa. Yogyakarta : Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada. Diakses tanggal 19 September Chrestella, Jessy., Neoplasma. Departemen Patologi Anatomi. Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara. Medan. Corwin, J. E., Buku Saku Patofisiologi. Edisi 3, Jakarta: EGC. Hal 91. Dalimartha, S., Ramuan Tradisional Untuk Pengobatan Kanker. Cetakan VI. Jakarta : Penebar Swadaya. Davey, Patrick., At A Glance Medicine. Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal 335. Dewi, I. G. A. N., Sawitri, A. A. S., dan Adiputra, N., Paparan Asap Rokok dan Higiene Diri Merupakan Faktor Risiko Lesi Prakanker Leher Rahim di Kota Denpasar Tahun Public Health and Preventive Medicine Archive, Vol. 1 No. 1, Hal. 85.

19 Diananda, Rama., Seluk-Beluk Kanker. Jogjakarta: Kata Hati. Hal 17. Dina, F., Prista, K. P., dan Iwang, Y., Efek Sitotoksik Ekstrak Etanol Sarang Semut (Myrmecodia pendens) Pada Sel Line Kanker Serviks HeLa. Uji Eksperimental Secara In Vitro. Jurnal Fakultas KedokteranUniversitas Islam Sultan Agung (UNISSULA), Vol. 3 No. 2. Hal Dipiro, T. Joseph., Talbert, L. Robert., Yee, C. Gary., Matzke, R. Gary., Welss, G. Barbara., Posey, Michael. L Pharmacotherapy A Pathophysiologic Approach. Sevent Edition. Direktorat Jendral PP&PL Kementrian Kesehatan RI., Apakah Anda Tahu tentang Kanker., Panduan Memperingati Hari Kanker Sedunia Di Indonesia Tahun 2013, Jakarta. Hal 3. Dinkes. Jatimprov.go.id. Diakses pada tanggal 04 Oktober Fajriah, S., Darmawan, A., Sundowa, A., dan Artanti, N., Isolasi Senyawa Antioksidan dari Ekstrak Etil Asetat Daun Benalu Dendrophthoe pentandra L. Miq yang Tumbuh pada Inang Lobi-Lobi. Jurnal Kimia Indonesia., Vol. 2 (1), p Farid, A. dkk., Panduan Pelayanan Medik: Model Interdisiplin Penatalaksanaan kanker Serviks dengan Gangguan Ginjal. Jakarta. EGC. Fitriana, N. A., Ambarini, T. K., Jurnal Psikologi Klinis dan Kesehatan Mental, Vol. 1 No. 02. Departemen Psikologis Klinis dan Kesehatan Mental. Fakultas Psikologi Unversitas Airlangga. Fried, George. H., Hademenos, George. J., Schaum s Outline of Theory and Problems of Biology. Second edition. The McGraw-Hill Companies. Ghofar, Abdul., Cara Mudah Mengenal & Mengobati Kanker. Cetakan I, Jogjakarta: Flamingo. Hal 126. Gibney, M. J., dkk., Gizi Kesehatan Masyarakat. Hal 422. Health Technology Assessment Indonesia., Skrining Kanker Leher Rahim Dengan Metode Inspeksi Visual Dengan Asam Asetat (IVA). Hal 10. Ikawati, Muthi., Wibowo, A.E., Octa, N.S., dan Adelina, Rosa., Pemanfaatan Benalu Sebagai Agen Antikanker. Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Indiastuti, D. N., Purwaningsih, S., Setyawati, Y., dan Cholies, N., Skrining Pendahuluan Toksisitas Beberapa Tumbuhan Benalu terhadap Larva Udang Artemia salina Leach. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, Vol. 06, No. 02, ISSN Jong, D.W., Kanker, Apakah Itu? (Pengobatan, Harapan Hidup, dan Dukungan Keluarga). Jakarta: Arcan. Hal 2. Larasati, Y., MTT Assay. author/yonikalarasatijournal/. Diakses pada tanggal 20 November Mardiana, Lina Kanker Pada Wanita, Pencegahan dan Pengobatan dengan Tanaman Obat. Depok: Penebar Swadaya. Multiawati, Nur., Uji Antikanker Ekstrak Metanol Daun Benalu Kelor (Helixanthera sessiliflora) (Merr.) Denser) Terhadap Cell Line Kanker Payudara T47D. Yogyakarta: Skripsi Program Sarjana.

20 Mulyadi., Kanker, Karsinogen, Karsinogenesis dan Antikanker. Yogyakarta: PT Tiara Wacana Yogya. Hal 94. Nafrialdi, Gan., Sulistia., Farmakologi dan Terapi. Edisi V., Jakarta: Badan Penerbit FKUI. Hal Nurwijaya, Hartati., Suheimi, H. K. A., Kanker Serviks. Surabaya: Hal 5. Ocviyanti, D., Handoko, Y., Peran Dokter Umum Dalam Pencegahan Kanker Serviks di Indonesia. J Indon Med Assoc, Vol. 63 No. 1, Hal. 1. Putri, F. W., Pengetahuan dan Perilaku Mahasiswi Fakultas Farmasi Universitas Surabaya Dalam Upaya Pencegahan Kanker Serviks. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya, Vol. 2 No. 1, hal Rachmawati, A, E, V., Muliartha, I, K, G., dan Kusworini Pengaruh Ekstrak Daun Benalu Mangga (Dendrophthoe pentandra) Terhadap Viabilitas dan Ekspresi Caspase 3 Aktif pada Sel Kanker Serviks (Sel HeLa). Program Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya. Malang. Rosida, J., Uji Saponin Dalam Lidah Buaya, Limbah Buah Mengkudu dan Daun Mimba. Temu Teknis Fungsional Non Peneliti, Hal 1-7. Rossaria, Nella., Kajian Antiproliferatif Ekstrak Daun Benalu Duku (Loranthaceae dendrophthoe species) Terhadap Sel Mieloma Secara In Vitro. Artikel Ilmiah Universitas Airlangga. Rusmana, Djaja., Aspek Onkologi Human Papillomavirus. JKM, Vol. 1 No.9, hal Sari, R. K., Syafii, W., Achmadi, S. S., Hanafi, M., dan Laksana, Y. T., Aktivitas Antikanker dan Kandungan Kimia Ekstrak Kayu Teras Suren (Toona sureni). Jurnal Ilmu Teknologi Kayu Tropis, Vol. 10 No. 01, Hal Smeltzer, C. Suzanne., Brenda, G. Bare., Buku Ajar Keperawatan Medikal-bedah Brunner&Suddarth. Edisi 8. Vol 2, Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran. Hal Sudiana, I. K., Patologi Molekuler Kanker. Jakarta: Salemba Media. Hal 27. Sundaryono, A., Teratogenitas Senyawa Flavonoid Dalam Ekstrak Metanol Daun Benalu (Dendrophthoe pentandra (L) Miq. ) pada Mus musculus. Jurnal Exacta., Vol. IX No. 1, ISSN Sundaryono, A., Uji Aktivitas Senyawa Flavonoid Total Dari Gynura segetum (Lour) Terhadap Peningkatan Eritrosit dan Penurunan Leukosit Pada Mencit (Mus musculus). Jurnal Exacta., Vol. IX No. 2 ISSN Suryapratama, A. S., Karakteristik Penderita Kanker Serviks di RSUP Dr. Kariadi Semarang Tahun Semarang. Karya Tulis Ilmiah. Syaifuddin, M., Agen Penekan Tumor p53, Kanker, dan Radiasi Pengion. Buletin Alara. Hal Tjay, T. H., Rahardja, K., Obat-Obat Penting. Edisi ke enam. Cetakan I, Jakarta: PT Elex Media Komputindo.

21 USDA., Species 2000 & ITIS Catalogue of Life. Taxonomic Information for Dendrophthoe pentandra. Diakses pada tanggal 08 Januari Wahyuningsih, M. S. H., Syarif, R. A., Suharmi, S., Murini, T., Saputra, F., dan Adiguno, S. W., Selectivity of Purified Extract From the Leaves of Tithonia diversifolia (Hemsley) a. Gray) Againts HeLa Cell. Traditional Medicine Journal, Vol. 18 No. 01, p Waji, R. A., Sugrani, A., Flavonoid (Quersetin). Makassar: Makalah Kimia Organik Bahan Alam. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Hasanuddin. Wardhani, Lilies Kusuma dan Sulistyani, Nanik Uji Aktivitas Antikbakteri Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) terhadap Shigella flexneri Beserta Profil Kromatografi Lapis Tipis. Yogyakarta : Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan. WHO (World Health Organization) Cancer Mortality and Morbidity. Diakses tanggal 07 Oktober Wicaksono, M. H. B., Permana, S., Potensi Fraksi Etanol Benalu Mangga (Dendrophthoe pentandra) sebagai Agen Anti Kanker Kolon pada Mencit (Mus musculus Balb/c) setelah Induksi Dextran Sulvat (DSS) danazoxymethane (AOM). Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya Jalan Veteran Malang, Jawa Timur, Indonesia. Wikanta, T., Prabukusuma, A., Ratih, D., dan Januar, H., Bioaktivitas Ekstrak Kasar Aseton, Fraksi, dan Subfraksinya dari Ulva fasciata Terhadap Sel Lestari Tumor HeLa. Hal Yan, L.L., Zhang, Y.J., Gao, W.Y., Man, S.l., Wang, Y., In Vitro and In Vivo Anticancer Activity of Steroid Saponins of Paris polyphylla Var. yunnanensis. Experimental Oncology, Vol. 31, pp