MANFAAT VITAMIN E DAN SELENIUM DALAM FERMENTASI IN VITRO RANSUM YANG DISUPLEMENTASI ASAM LEMAK TIDAK JENUH SKRIPSI ANNITA AVIANTRI

Transkripsi

1 MANFAAT VITAMIN E DAN SELENIUM DALAM FERMENTASI IN VITRO RANSUM YANG DISUPLEMENTASI ASAM LEMAK TIDAK JENUH SKRIPSI ANNITA AVIANTRI DEPARTEMEN ILMU NUTRISI DAN TEKNOLOGI PAKAN FAKULTAS PETERNAKAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2012

2 RINGKASAN Annita Aviantri. D Manfaat Vitamin E dan Selenium dalam Fermentasi in Vitro Ransum yang Disuplementasi Asam Lemak Tidak Jenuh. Skripsi. Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor. Pembimbing Utama Pembimbing Anggota : Prof. Dr. Ir. Toto Toharmat, M.Agr.Sc : Ir. Asep Tata Permana, M.Sc Minyak sebagai sumber lemak seringkali ditambahkan ke dalam ransum terutama ransum ternak ruminansia dengan tujuan untuk meningkatkan kandungan energi ransum dan meningkatkan kandungan asam lemak tidak jenuh produk ternak. Akan tetapi, penambahan minyak ke dalam ransum harus diperhatikan karena memiliki pengaruh negatif terhadap kecernaan nutrien ransum. Salah satu pengaruh negatif supelementasi asam lemak dapat menurunkan kecernaan, laju fermentabilitas serta populasi protozoa total rumen. Pengaruh negatif ini terjadi karena adanya reaksi oksidasi dari asam lemak terutama asam lemak tidak jenuh selama penyimpanan serta reaksi biohidrogenasi di dalam rumen. Salah satu contoh minyak sumber asam lemak jenuh adalah CPO, dan sumber asam lemak tidak jenuh adalah minyak jagung. Penambahan antioksidan dapat meminimalisasi pengaruh negatif dari oksidasi dan biohidrogenasi asam lemak tidak jenuh. Antioksidan alami yang umum digunakan adalah vitamin C, selenium (Se), karotenoid, flavonoid, minyak esensial dan vitamin E (Purba, 2010). Pada penelitian ini antioksidan yang digunakan adalah vitamin E dan selenium (Se). Selenium yang umum digunakan untuk supelementasi pada ternak adalah sodium selenit (Na 2 SeO 3 ). Informasi mengenai peran antioksidan dalam mempengaruhi oksidasi asam lemak dan pengaruhnya terhadap kecernaan belum banyak diketahui.oleh karena itu, penelitian ini dirancang untuk mengkaji pengaruh penambahan antioksidan terhadap ferementasi in vitro pakan yang disuplementasi dengan asam lemak jenuh dan asam lemak tidak jenuh. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan lima perlakuan (P0 = kontrol, P1 = P0+vitamin E+CPO, P2 = P0+vitamin E+minyak jagung, P3 = P0+Se+CPO, P4 = P0+Se+minyak jagung) dan tiga ulangan. Dosis vitamin E yang digunakan dalam pakan adalah 100 ppm, selenium (Na 2 SeO 3 ) sebanyak 0,5 ppm dan minyak yang ditambahkan sebanyak2 gram. Analisis data dilakukan menggunakan ANOVA (Analysis of Variance), jika berbeda nyata akan diuji lanjut Duncan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan suplementasi minyak jagung yang ditambah dengan vitamin E memiliki nilai kecernaan bahan kering paling tinggi. Jika dilihat dari kecernaan bahan organik, fermentabilitas dan populasi protozoa total dalam rumen semua perlakuan tidak memiliki perbedaan yang nyata. Sehingga, penambahan antioksidan pada ransum yang disuplementasi minyak sebanyak 2 gram disarankan untuk mengurangi pengaruh negatif terhadap fermentasi dan kecernaan bahan kering. Kata kunci: asam lemak, antioksidan, kecernaan, fermentasi, protozoa.

3 ABSTRACT The Role of Vitamine E and Selenium in in Vitro Fermentation of Ration Supplemented with Poly Unsaturated Fatty Acid Aviantri A., T. Toharmat and A.T. Permana Supplementation of vegetable oil in formulating ruminants ration is a common practice to increase energy content of ration and the content of functional fatty acids in the animal products. Corn oil is a source of poly unsaturated fatty acids (PUFA) and as a defaunating agent, while the crude palm oil (CPO) is a source of saturated fatty acids. Dietary supplementation of vitamin E and selenium (Se) may reduce the oxidation of PUFA in the rumen. It also was reduce the negative effects of fatty acids oxidation on the microbial activity in the rumen. The study was aimed to evaluate the effect of vitamin E and Se supplementation on digestibility and fermentability of the diets supplemented with PUFA, as well as the total population of protozoa in the fermentation subtance. This study used a completely randomized design, with five treatments (P0 = control; P1 = P0+vitamin E+CPO; P2 = P0+vitamin E+corn oil; P3 = P0+Se+CPO; P4 = P0+Se+corn oil). All the treatments were replicated three times. Data was analized according to the Analysis of Variance procedure. The results showed that treatment P2 is higher than P4 in dry matter digestibility, but all treatments had no effect on digestibility, fermentability (VFA and NH 3 ) and total population of protozoa. It was concluded that supplementation of antioxidants (vitamin E and Se) prevented the negative effects of dietary supplementation of oil containing PUFA up to 2 gram. Dietary addition of antioxidant was likely necessary to reduce the negative effect of unsaturated fatty acid oxidation in the rumen. Keywords: fatty acid, antioxidant, digestibility, fermentability, protozoa.

4 MANFAAT VITAMIN E DAN SELENIUM DALAM FERMENTASI IN VITRO RANSUM YANG DISUPLEMENTASI ASAM LEMAK TIDAK JENUH ANNITA AVIANTRI D Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Peternakan pada Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor DEPARTEMEN ILMU NUTRISI DAN TEKNOLOGI PAKAN FAKULTAS PETERNAKAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2012

5 LEMBAR PENGESAHAN Judul Nama NIM : Manfaat Vitamin E dan Selenium dalam Fermentasi in Vitro Ransum yang Disuplementasi Asam Lemak Tidak Jenuh : Annita Aviantri : D Menyetujui, Pembimbing Utama, Pembimbing Anggota, (Prof. Dr. Ir. Toto Toharmat, M.Agr.Sc) (Ir. Asep Tata Permana, M.Sc) NIP NIP Mengetahui : Ketua Departemen, Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan (Dr. Ir. Idat Galih Permana, M.Sc.Agr) NIP Tanggal Ujian : 07 September 2012 Tanggal Lulus :

6 RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan pada tanggal 16 Januari 1991 di Jakarta. Penulis adalah anak ketiga dari empat bersaudara dari pasangan Bapak Suwito dan Ibu Ma rifah. Penulis mengawali pendidikan dasar pada tahun 1996 di Sekolah Dasar Swasta Kartini Tangerang dan diselesaikan pada tahun Pendidikan lanjut tingkat pertama dimulai pada tahun 2002 dan diselesaikan pada tahun 2005 di Sekolah Menengah Pertama Negeri 2 Tangerang. Penulis melanjutkan pendidikan di Sekolah Menengah Atas Negeri 95 Jakarta pada tahun 2005 dan diselesaikan pada tahun Penulis diterima masuk Institut Pertanian Bogor pada tahun 2008 melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI) dan diterima di Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan pada tahun Penulis aktif dalam organisasi Koperasi Mahasiswa (KOPMA) periode sebagai anggota Event Organizer dan Himpunan Mahasiswa Nutrisi dan Makanan Ternak (HIMASITER) periode sebagai anggota.

7 KATA PENGANTAR Penambahan minyak ke dalam ransum merupakan hal yang umum dilakukan. Namun kajian manfaat penambahan antioksidan dalam ransum yang disuplementasi minyak dengan kandungan asam lemak jenuh dan tidak jenuh yang tinggi terhadap kecernaan, fermentabilitas dan populasi protozoa rumen masih terbatas. Penelitian ini dirancang untuk mengkaji manfaat penambahan vitamin E dan selenium dalam ransum yang disuplementasi minyak yang mengandung asam lemak jenuh dan asam lemak tidak jenuh tinggi. Sumber asam lemak jenuh yang ditambahkan adalah CPO (crude palm oil), sedangkan sumber asam lemak tidak jenuh menggunakan minyak jagung. Minyak yang disuplementasikan pada ransum penelitian adalah sebesar 2 gram. Kajian difokuskan pada manfaat penambahan antioksidan dan minyak terhadap kecernaan dan pola fermentasi serta populasi protozoa total. Penambahan asam lemak tidak jenuh biasanya ditujukan untuk mendapatkan produk ternak yang rendah kolesterol dan kaya asam lemak tidak jenuh, sedangkan penambahan asam lemak jenuh digunakan untuk meningkatkan kandungan energi pakan. Penambahan minyak ke dalam pakan juga memiliki pengaruh negatif, oleh karena itu penggunaannya harus diperhatikan. Penambahan minyak yang tinggi dalam ransum ternak ruminansia menyebabkan efek negatif terhadap fermentasi rumen seperti sintesis mikroba rumen dan pencernaan serat kasar yang terbatas. Pengaruh negatif adanya penambahan asam lemak dapat diminimalisasi dengan adanya penambahan agen perlindungan lemak. Sudah banyak penelitian yang menggunakan perlindungan asam lemak khususnya asam lemak tidak jenuh seperti penggunaan tanin. Perlindungan terhadap asam lemak tidak jenuh juga dapat menggunakan antioksidan karena antioksidan dapat melindungi asam lemak tidak jenuh dari reaksi oksidasi.antioksidan yang digunakan adalah vitamin E dan Se. Vitamin E dan Se memiliki fungsi yang sama dalam mencegah reaksi oksidasi. Adanya penambahan antioksidan diharapkan dapat melindungi minyak sehingga tetap dapat dimanfaatkan sebagai agen defaunasi yang dapat mengurangi populasi protozoa. Penurunan populasi protozoa dapat meningkatkan kecernaan dan konsentrasi VFA karena adanya peningkatan populasi bakteri rumen. Penggunaan vitamin E dalam penelitian ini sebesar 100 ppm, sedangkan penggunaan Se sebesar 0,5 ppm dengan suplementasi minyak sebesar 2 gram. Penggunaan vitamin E dan Se

8 dalam penelitian ini disesuaikan dengan standar kebutuhan ruminansia berdasarkan NRC. Penelitian ini dilakukan secara in vitro selama satu bulan dimulai bulan Februari 2012 sampai dengan Maret 2012 yang bertempat di Laboratorium Ilmu Nutrisi Ternak Perah. Penghitungan populasi total protozoa dilakukan di Laboratorium Biokimia, Fisiologi dan Mikrobiologi Nutrisi, Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor. Bogor, September 2012 Penulis vii

9 DAFTAR ISI ` RINGKASAN... ABSTRACT... LEMBAR PERNYATAAN... LEMBAR PENGESAHAN... RIWAYAT HIDUP... KATA PENGANTAR... DAFTAR ISI... DAFTAR TABEL... DAFTAR GAMBAR... DAFTAR LAMPIRAN... PENDAHULUAN... Latar Belakang... Tujuan... TINJAUAN PUSTAKA... Manfaat Vitamin E sebagai Antioksidan... Manfaat Selenium sebagai Antioksidan... Rumen... Asam Lemak... Minyak Jagung dan Crude Palm Oil... Kecernaan Nutrien... Kadar VFA (Volatile Fatty Acid) Cairan Rumen... Kadar Amonia (NH 3 ) Cairan Rumen... Protozoa Rumen... MATERI DAN METODE... Lokasi dan Waktu... Materi... Prosedur Kerja... Analisis Data... Halaman i ii iii iv v vi viii x xi xii HASIL DAN PEMBAHASAN... 21

10 KESIMPULAN... Kesimpulan... Saran UCAPAN TERIMAKASIH DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN ix

11 Nomor DAFTAR TABEL Halaman 1. Komposisi Asam Lemak pada Minyak Jagung dan CPO Formulasi Ransum yang Digunakan dalam Penelitian Kecernaan in Vitro Ransum Komplit yang Mengandung Minyak dengan Asam Lemak Berbeda Fermentabilitas in Vitro Ransum Komplit yang Mengandung Minyak dengan Asam Lemak Berbeda Populasi Protozoa Total dalam Media Fermentasi Ransum Komplit yang Berbeda Kandungan Lemaknya dan Disuplementasi Vitamin E atau Se... 24

12 Nomor DAFTAR GAMBAR Halaman 1. Reaksi Oksidasi Asam Lemak Tidak Jenuh Proses Metabolisme Karbohidrat dalam Rumen Ternak Ruminansia Proses Metabolisme Protein dalam Rumen Ternak Ruminansia Protozoa Rumen... 12

13 DAFTAR LAMPIRAN Nomor Halaman 1. ANOVA dan Uji Lanjut Kecernaan Bahan Kering dan Bahan Organik in Vitro ANOVA VFA dan NH 3 in Vitro Foto-foto Penelitian... 33

14 PENDAHULUAN Latar Belakang Minyak atau lemak merupakan salah satu bahan yang sering ditambahkan ke dalam ransum. Tujuan penambahan minyak yang umum adalah untuk mendapatkan ransum ternak ruminansia dengan energi tinggi terutama pada kondisi cekaman panas atau pada ternak ruminansia awal laktasi. Penambahan minyak ke dalam ransum juga sering dilakukan dengan harapan bahwa komponen lemak tersebut dapat diekskresikan pada hasil ternak.penambahan minyak sumber asam lemak tidak jenuh dalam ransum dapat menghasilkan produk rendah kolesterol atau berkadar asam lemak esensial yang tinggi. Penambahan minyak juga memiliki pengaruh positif dari segi kandungan energinya yang tinggi (2,25 x karbohidrat),dapat menurunkan heat increament, mengurangi sifat berdebu dari ransum, meningkatkan konsentrasi asam lemak esensial, meningkatkan palatabilitas ransum, menurunkan produksi metan dalam rumen pada pemberian pakan yang tinggi hijauandan memperbaiki rasio asetat : propionat sehingga dapat meningkatkan efisiensi ransum secara umum. Penambahan asam lemak jenuh ataupun tidak jenuh juga memiliki pengaruh negatif yaitu dapat menurunkan kecernaan ransum terutama kecernaan serat pada ruminan yang diberikan ransum tinggi hijauan.penambahan minyak yang tinggi juga dapat menyebabkan terganggunya sistem fermentasi dan kematian protozoa.asam lemak tidak jenuh juga memiliki sifat negatif yaitumudah teroksidasi dandi dalam rumen akan mengalami biohidrogenasi menjadi asam lemak jenuh yang akan bersifat toksik terhadap mikroba rumen. Reaksi-reaksi tersebut dapat diminimalisasi dengan cara melindungi asam lemak rantai panjang dengan penambahan agen perlindungan. Vitamin E dan selenium (Se)dapat digunakan sebagai agen perlindungan karena mampumelindungi membran sel dari peroksidasi. Penggunaan vitamin E dan Se ke dalam pakan sudah banyak dilakukan dalam penelitian, namun belum diketahui manfaat penambahan antioksidan dalam mengurangi efek negatif penambahan minyak. Adanya penambahan vitamin E dan Se diharapkan dapat menurunkan populasi protozoa rumen, sehingga kecernaan dan fermentabilitas dapat meningkat.penambahan vitamin E dan Se juga diharapkan

15 dapat melindungi asam lemak tidak jenuh agar dapat diekskresikan pada produk ternak serta mengurangi pengaruh negatif dari penambahan asam lemak jenuh. Tujuan Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji manfaat supelementasi vitamin E dan selenium (Se) dalam mengurangi pengaruh negatif penambahan sumber asam lemak jenuh dan asam lemak tidak jenuh ke dalam pakan melalui kajian fermentasi dan penghitungan populasi protozoa rumen dengan media cairan rumen sapi in vitro. 2

16 TINJAUAN PUSTAKA Manfaat Vitamin E Sebagai Antioksidan Vitamin E dalam sejarahnya pertama kali ditemukan oleh seorang Fisikawan Amerika bernama Herbert Evans bersama asistennya, Kathrine dari Universitas California tahun Vitamin E merupakan substansi larut lemak sebagai antioksidan utama yang terdapat pada eritrosit dan lipoprotein plasma yang mampu mempertahankan integritas membran (Winarsi, 2007).Sifat umum vitamin E antara lain tahan terhadap panas, mudah dioksidasikan dan rusak apabila terdapat dalam lemak tengik. Vitamin E (tokoferol) adalah salah satu fitonutrien yang penting dalam minyak makan dan memiliki 8 isomer yaitu 4 tokoferol (α, β, γ, dan δ) dan 4 tokotrienol (α, β, γ, dan δ) homolog. Sebagai antioksidan, α-tokotrienol memiliki potensi lebih tinggi dibandingkan α-tokoferol (Winarsi, 2007). Fungsi lain vitamin E menurut Llyod et al. (1978) yaitu sebagai antioksidan pada jaringan ternak dan tanaman, esensial dalam respirasi sel dan regulator dalam sintesis komponen tubuh.gropper et al. (2005) menambahkan bahwa vitamin E juga berfungsi memelihara integritas sel tubuh, mencegah peroksidasi asam-asam lemak tidak jenuh yang berada pada fosfolipid membran mitokondria dan endoplasmik retikulum. Supelementasi vitamin E dapat diperoleh dari vitamin E sintetis maupun alami. Sumber vitamin E yang alami yaitu pada lemak dan minyak hewan atau pada tanaman terutama pada bagian kecambah jagung, telur dan kolostrum susu sapi. Penambahan vitamin E sebagai antioksidan ke dalam pakan memberikan hasil yang bervariasi terhadap peranan lemak di dalam pakan tersebut. Sejumlah kecil vitamin E akan tersimpan di dalam tubuh dalam waktu yang lama. Setelah menjalankan fungsinya, vitamin E tidak didaur ulang, sehingga untuk meneruskan peran biologisnya di dalam sel harus digantikan. Vitamin E yang tidak tersimpan akan diekskresikan dengan jalur utama adalah empedu. Biasanya kurang dari 1% konsumsi vitamin E akan diekskresikan melalui urin (McDowell, 2000). Manfaat Selenium Sebagai Antioksidan Selenium memiliki nomor atom 34 dan berat atom 78,96. Banyak penemuan yang mengindikasikan bahwa struktur organik dari Se memiliki daya serap yang lebih tinggi dibandingkan dengan selenit,namun dari penelitian Dilaga (1992) tidak

17 semua Se organik diretensi oleh tubuh lebih tinggi daripada Se inorganik pada seluruh keadaan, tetapi paling tidak untuk jaringan tertentu, keadannya berbeda. Se inorganik yang biasa disupelementasikan pada hewan adalah selenit (Spears dan Hansen, 2008). Fungsi Se berhubungan erat dengan vitamin E, keduanya berfungsi untuk melindungi membran biologis dari degenerasi oksidatif. Mekanisme kerja antara Se dan vitamin E yaitu, vitamin E mencegah penempelan radikal bebeas pada membrane sel, sedangkan Se-GSH-Px mencegah terbentuknya OH - dari H 2 O 2 (sebagai antioksidan) (Dilaga, 1992). Se dan vitamin E juga berhubungan dengan insiden dan keparahan mastitis pada sapi perah. Vitamin E dan Se juga dilaporkan diperlukan untuk fungsi kekebalan tubuh optimal dalam ayam (McDowell, 2003). Fungsi lain Se yaitu untuk komponen pembentuk enzim Glutathione Peroksidase (GSH-Px) dan daya kebal tubuh (Dilaga, 1992) dan membantu melindungi membran sel dari proses autooksidasi (Cheeke, 2005). Absorbsi Se pada hewan poligastrik lebih sedikit (35%) dibandingkan pada monogastrik (85%), karena terjadi reduksi selenite menjadi bentuk yang sukar larut dalam rumen (Dilaga, 1992). Spears dan Hansen (2008) menyatakan bahwa hewan non-ruminan mampu mengabsorbsi Se organik dan inorganik lebih baik.kebutuhan minimum selenium bergantung pada bentuk Se yang dikonsumsi dan sifat ransum, terutama kadar vitamin E-nya (Parakkasi, 1999). Sapi yang sedang tumbuh (sapi kebiri maupun sapi dara) memiliki kebutuhan sekitar 0,10 mg/kg ransum kering, sapi jantan yang sedang kawin atau sapi induk yang sedang bunting dan atau laktasi kebutuhannya antara 0,05-0,10 mg/kg ransum kering (Parakkasi, 1999). Sementara itu, rekomendasi supplementasi Se untuk ternak ruminansia sebesar 0,1 ppm (NRC, 1996) dengan batas toleransi maksimum untuk sapi perah sebesar 5 ppm (Dilaga, 1992). Rumen Perut hewan ruminansia terdiri atas rumen, retikulum, omasum dan abomasum.rumen merupakan tabung besar untuk menyimpan dan mencampur ingesta bagi fermentasi oleh mikroba. Kerja ekstensif bakteri dan mikroba lain terhadap nutrien menghasilkan produk akhir yang dapat dimanfaatkan ternak untuk memenuhi kebutuhan nutrien.tekanan osmosis pada rumen mirip dengan tekanan 4

18 aliran darah, ph dipertahankan oleh adanya absorpsi asam lemak dan amonia. Isi rumen mempunyai karakteristik yang khas untuk mendukung proses fermentasi oleh mikroba rumen. Penambahan asam lemak tidak jenuh dalam ransum ternak ruminansia akan mengalamibiohidrogenasi di dalam rumen oleh mikroba rumen menjadi asam lemak jenuh (Cheeke, 2005 dan Tiven et al., 2011), sehingga semua lipida pakan yang masuk ke duodenum sebagian besar berupa asam lemak jenuh (Wood et al., 2008). Proses biohidrogenasi asam lemak tidak jenuh pada kondisi netral dalam rumen (ph 6-7) dapat dicegah karena adanya ikatan antara protein dengan formaldehida yang mengelilingi partikel minyak, namun pada kondisi asam di dalam abomasum (ph 2-3) ikatan tersebut akan terpecah, asam lemak tidak jenuh dapat diabsorbsi dan dicerna di dalam usus halus (Tiven et al., 2011). Asam Lemak Berbeda dengan karbohidrat, bahan makanan utama ruminan (hijauan) tidak banyak mengandung lemak (hanya sekitar 3%). Lemak ransum umumnya berasal dari penambahan minyak baik minyak sumber asam lemak jenuh maupun tidak jenuh. Penambahan lemak atau minyak ke dalam ransum memiliki pengaruh positif dan pengaruh negatif terhadap proses fermentasi dalam rumen ternak ruminansia. Pengaruh positif tersebut antara lain kandungan energinya yang tinggi (2,25 x karbohidrat), dapat menurunkan heat increament, mengurangi sifat berdebu dari ransum, meningkatkan kadar asam lemak tidak jenuh (sebagai sumber asam lemak esensial bagi anak ruminan), meningkatkan palatabilitas ransum, menurunkan produksi gas metan dalam rumen pada pemberian pakan ruminansia yang tinggi hijauan dan memperbaiki rasio asetat : propionat sehingga dapat meningkatkan efisiensi ransum secara umum (Parakkasi, 1999). Parakkasi (1999) serta Wilson dan Brigstocke (1981)melaporkan bahwa penambahan lemak memiliki pengaruh negatif terhadap ruminan yaitu menurunkan kecernaan serat ransum terutama terlihat pada ruminan yang diberikan ransum tinggi hijauan, dapat mengganggu penggunaan N (dengan pemberian 5% lemak dan urea dalam ransum) dan menyebabkan flavor daging kurang disukai (dengan penambahan minyak biji kapas 5% dengan ransum 30%-50% tongkol jagung). 5

19 Lemak di dalam rumen akan mengalami proses pembebasan asam lemak yang teresterifikasi (lypolisis), fermentasi gliserol dan proses biohidrogenasi asam lemak tidak jenuh(garton, 1967). Minyak selain mengalami lypolisis juga mengalami proses oksidasi jika terdapat dalam keadaan aerob. Oksidasi minyak dapat menyebabkan ketengikan pada bahan pakan.mekanisme reaksi oksidasi asam lemak tidak jenuh dapat dilihat pada gambar berikut: R 1 CH 2 CH CH CH 2 R 2 Energi R 1 CH CH CH CH 2 R 2 + H Panas/UV Asam Lemak Tidak Jenuh Radikal Bebas Hidrogen Labil + O 2 R 1 CH CH CH CH 2 R 2 O O Peroksida Aktif + R 1 CH CH CH CH 2 R 2 O O R 1 CH CH CH CH 2 R 2 + R 1 CH CH CH CH 2 R 2 Gambar 1. Reaksi Oksidasi Asam Lemak Tidak Jenuh Sumber : Rorong et al., Jika proses biohidrogenasi dibiarkan terjadi di dalam rumen, maka dapat menyebabkan lemak yang terserap pada dinding usus halus banyak berupa asam lemak jenuh. Pencegahan atau minimalisasi proses biohidrogenasi dapat dilakukandengan adanya penambahan agen perlindungan terhadap asam lemak tidak jenuh tersebut. Menurut Parakkasi (1999), prinsip perlindungan lemak yaitu dengan cara melindungi protein dari degradasi mikrobial.manfaat adanyaperlindungan terhadap lemak memungkinkan penggunaaan minyak dalam jumlah banyak di dalam rumen tanpa menyebabkan kerusakan kecernaan selulosa dan pembentukan gas metan (Scott dan Ashes, 1993). Beberapa agensia yang sering digunakan dalam penelitian sebagai pelindung lemak tidak jenuh adalah tanin dan aldehid (formaldehid), gum Arab dan sabun kalsium sebagai agensia perlindungan asam lemak tidak jenuh (Mirwandhono, 2003). 6

20 Minyak Jagung dan Crude palm oil Kecukupan energi dan asam lemak esensial pada ternak ruminansia dapat terpenuhi dengan adanya penambahan minyak seperti minyak jagung, minyak kacang tanah atau minyak ikan (Tanuwiria et al., 2011). Umumnya, peternak mendapatkan tambahan energi dengan penambahan minyak sawit kasar (CPO/crude palm oil) yang mengandung asam lemak jenuh tinggi. Minyak jagung sebagai sumber asam lemak tidak jenuh banyak mengandung asam linoleat (C18:2n-6)(Ketaren, 1986). Sementara itu, CPO sebagai asam lemak jenuh memiliki kandungan asam palmitat (C16:0) yang tinggi. CPO juga dapat dijadikan sumber asam lemak tidak jenuh, terutama CPO yang diekstrak dari mesokarp buah sawit (Loi et al.,2010).berikut adalah kandungan asam lemak pada CPO dan minyak jagung. Tabel 1. Komposisi Asam Lemak pada Minyak Jagung dan CPO Asam Lemak Minyak Jagung (%) a CPO (%) b Miristat (C14:0) 0,1 1,36 Palmitat (C16:0) 11,6 42,59 Stearat (C18:0) 2,1 0,13 Oleat (C18:1) 36,6 43,24 Linoleat (C18:2) 48,7 12,15 Linolenat (C18:3) 0,8 0,29 Sumber : a = Wildan (1997), b =Suharyanto (2006) Kecernaan Nutrien Kecernaan adalah perubahan fisik dan kimia yang dialami pakan dalam alat pencernaan, perubahan tersebut berupa penghalusan pakan menjadi butir-butir atau partikel kecil.kecernaan didefinisikan sebagai bagian pakan yang tidak diekskresikan dalam feses sehingga diasumsikan bagian tersebut diserap oleh tubuh hewan (Kurniawati, 2009). Pengukuran kecernaan pada ruminansia dapat dilakukan melalui dua teknik yaitu teknik in vivo dan in vitro. Kecernaan in vitro dipengaruhi beberapa hal yaitu pencampuran pakan, cairan rumen dan inokulan, ph kondisi fermentasi, pengaturan suhu fermentasi, lamanya waktu inkubasi, ukuran partikel sampel dan buffer (Selly, 1994).Derajat keasaman (ph) cairan rumen merupakan faktor penting dalam 7

21 pemanfaatan bahan organik pada sistem pencernaan ruminansia, sedangkan faktor yang mempengaruhi degradasi ransum dalam saluran pencernaan ruminansia adalah struktur makanan, ruminansi, produk saliva dan ph optimum (Anggorodi, 1994). Pakanruminansia akanmengalami perombakan sehingga sifat-sifat kimianya berubah secara fermentatif sehingga menjadi senyawa lain yang berbeda dengan zat makanan asalnya. Kecernaan adalah indikasi awal ketersediaan nutrien yang terkandung dalam bahan pakan tertentu bagi ternak yang mengkonsumsinya dan dinyatakan dengan dasar bahan kering (McDonald et al., 2002). Kecernaan yang tinggi mencerminkan besarnya sumbangan nutrien pada ternak, sementara itu pakan yang mempunyai kecernaan rendah menunjukkan bahwa pakan tersebut kurang mampu menyuplai nutrien baik untuk hidup pokok maupun untuk tujuan produksi ternak. Kecernaan bahan organik merupakan faktor penting yang menentukan kualitas pakan. Setiap jenis ternak ruminansia memiliki mikroba rumen dengan kemampuan yang berbeda-beda dalam mendegradasi pakan yang mengakibatkan perbedaan pula pada kecernaan dalam rumen(sutardi, 1979).Nilaikoefisien cerna bahan kering (KCBK) yang tinggimenunjukkan peluang nutrien yang dapat dimanfaatkan ternak untuk pertumbuhannya tinggi pula. Koefisien cerna bahan organik (KCBO) menggambarkan senyawa protein, karbohidrat, lemak yang dapat dicerna oleh ternak. Kecernaan bahan kering dan bahan organik dapat diduga denganmenggunakan metode Tilley and Terry (1963).Metode produksi gas dilakukan berdasarkan laju gas (CO 2 dan CH 4 ) yang diproduksi dari inkubasi in vitro pakan dengan media cairan rumen. Kadar VFA (Volatile Fatty Acid) Cairan Rumen Proses pencernaan karbohidrat di dalam rumen ternak ruminansia akan menghasilkan asam-asam lemak atsiri (VFA) antara lain yaitu asetat, propionat, butirat, valerat dan asam lemak lainnya seperti format. Menurut Hungate (1966), proporsi VFA dalam rumen berkisar 63% asetat, 21% propionat, 16% butirat dan asam lemak lainnya. Proses metabolisme karbohidrat dan pembentukan VFA disajikan pada Gambar 2. 8

22 Selulosa Pati Selubiosa Maltosa Isomaltosa Glukosa-1-phospat Glukosa Glukosa-6-phospat Pektin Asam Uronat Sukrosa Hemiselulosa Pentosa Fruktosa-6-phosphat Fruktosa Fruktan Pentosan Fruktosa-1,6-diphosphat Asam piruvat Format Asetil CoA Laktat Oksaloasetat Metilmalonil CoA Malonil Asetoasetil Laktil CO2 H2 CoA CoA CoA Malat Metan B-Hidroksibutiril Akrilil Fumarat Asetil phosphat CoA CoA Krotonil Propionil Suksinat CoA CoA Butiril CoA Suksinil CoA Asetat Butirat Propionat Gambar 2. Proses Metabolisme Karbohidrat dalam Rumen Ternak Ruminansia Sumber : McDonald et al., Produksi VFA di dalam cairan rumen dapat digunakan sebagai tolak ukur fermentabilitas pakan(hartati, 1998). Konsentrasi VFA mengindikasikan mudah tidaknya pakan tersebut didegradasi oleh mikroba rumen. Komposisi VFA di dalam rumen dapat berubah dengan adanya perbedaan bentuk fisik, komposisi pakan, taraf dan frekuensi pemberian pakan serta pengolahan.produksi VFA yang tinggi merupakan petunjuk kecukupan energi bagi ternak (Sakinah, 2005). Kisaran produksi 9

23 VFA cairan rumen yang mendukung pertumbuhan mikroba yaitu 80 mm sampai 160 mm dengan titik optimumnya 110 mm (Suryapratama, 1999). Produksi VFA dapat dipengaruhi oleh protozoa melalui mekanisme pencernaan partikel pati sehingga VFA menjadi rendah dan rasio butirat : propionat dari 0,5 menjadi 1,7 (Whitelaw et al., 1972). Sebagian besar ransum ternak ruminansia mengandungpolisakarida atau karbohidrat struktural seperti selulosa, hemiselulosa dan karbohidrat lain yang tidak dapat dihidrolisa oleh enzim yang dihasilkan oleh alat pencernaan. Polisakarida akan dihidrolisa menjadi monosakarida terutama glukosa oleh enzim yang dihasilkan mikroba. Selanjutnya glukosa akan difermentasi menjadi VFA, terutama asetat (C 2 ), propionat (C 3 ) dan butirat (C 4 ), disamping itu dihasilkan juga isobutirat (ic 4 ), isovalerat (ic 5 ), valerat (C 5 ) serta gas CH 4 dan CO 2 (Sutardi, 1977). Sekitar 75% dari total VFA yang diproduksi akan diserap langsung oleh retikulo-rumen yang masuk ke darah, sekitar 20% diserap abomasum dan omasum, dan sisanya sekitar 5% diserap di usus halus (McDonald et al., 2002). Parakkasi (1999) menambahkan bahwa sebagian besar VFA diserap langsung melalui dinding rumen, hanya sedikit asetat, beberapa propionat, dan sebagian besar butirat termetabolisme dalam dinding rumen. Sedangkan, pakan yang tidak dicerna akan disalurkan ke abomasum dan dicerna secara hidrolitik oleh enzim-enzim pencernaan sama seperti yang terjadi pada hewan monogastrik. Kadar Amonia (NH 3 ) Cairan Rumen Protein pakan di dalam rumen dipecah oleh mikroba menjadi peptida dan asam amino, beberapa asam amino dipecah lebih lanjut menjadi amonia. Amonia diproduksi bersama dengan peptida dan asam amino yang akan digunakan oleh mikroba rumen dalam pembentukan protein mikroba (McDonald et al., 2002). Produksi NH 3 berasal dari protein yang didegradasi oleh enzim proteolitik. Di dalam rumen, protein dihidrolisis pertama kali oleh mikroba rumen. Tingkat hidrolisis protein bergantung dari daya larutnya yang berkaitan dengan kenaikan kadar NH 3 (Arora, 1989). Kadar amonia dalam rumen merupakan petunjuk antara proses degradasi dan proses sintesis protein oleh mikroba rumen. Jika pakan defisien akan protein atau proteinnya tahan degradasi maka konsentrasi amonia dalam rumen akan rendah dan pertumbuhan mikroba rumen akan lambat yang menyebabkan 10

24 turunnya kecernaan pakan (McDonald et al., 2002). Amonia hasil fermentasi tidak semuanya disintesis menjadi protein mikroba, sebagian diserap ke dalam darah, dan amonia yang tidak terpakai akan dibawa ke hati kemudian diubah menjadi urea dan sebagian disalurkan melalui urin serta lainnya akan di bawa ke saliva.berikut adalah gambar proses metabolism protein di dalam rumen: Pakan Protein Non-protein N Sulit Mudah Non-protein N Didegradasi Didegradasi Kelenjar Saliva Enzim Protease Peptida Enzim Peptidase Deaminasi Asam Amino Rumen Protein Mikroba Amonia NH3 Hati Urea Dicerna di Usus Halus Disekresikan (Urine) Ginjal Gambar 3. Proses Metabolisme Protein dalam Rumen Ternak Ruminansia Sumber : McDonald et al., Amonia merupakan sumber nitrogen utama untuk sintesis protein mikroba oleh karena itu konsentrasinya dalam rumen merupakan suatu hal yang perlu diperhatikan. Konsentrasi amonia 5 persen setara dengan 3,57 mm sudah mencukupi kebutuhan nitrogen mikroba. Kisaran konsentrasi NH 3 yang optimal untuk sintesis protein oleh mikroba rumen menurut McDonald, et al. (2002) adalah 6-21 mm. Protozoa Rumen Protozoa merupakan salah satu mikroorganisme rumen. Populasi protozoa lebih sedikit jika dibandingkan dengan populasi bakteri yaitu hanya sekitar sel/ml (McDonald et al., 2002). Jumlah protozoa dari setiap ternak berbeda 11

25 bergatung dari jenis makanan, umur dan keturunan hewan tersebut (Arora, 1989).Ukuran tubuhnya lebih besar dengan panjang tubuh sekitar mikron, oleh karena itu biomassa total dari protozoa hampir sama dengan biomassa total bakteri (McDonald, et al., 2002). Gambar 4. Protozoa Rumen Sumber : Wallace (2010) Populasi protozoa rumen umumnya disominasi oleh spesies ciliata. Spesies flagellata biasanya banyak terdapat pada anak sapi (pedet), sebelum populasi spesies ciliata berkembang dengan pesat. Protozoa diklasifikasikan berdasarkan morfologinya sebab mudah dilihat berdasarkan penyebaran silianya. Menurut morfologinya, protozoa dibagi menjadi 2 yaitu: Holotrichsmirip sel-sel paramecium dan memiliki dua ukuran yaitu Isotricha dan Dasytricha, sedangkan Oligotrichsberbentuk oval panjang dengan syncitia dan diklasifikasikan menjadi 5 kelas yaitu Epidinium ecaudatum caudatum, Entodinium caudatum, Polyplastron multiresiculatum, Ophyroscolexdan Diplodinium(Arora, 1989). Pola pertumbuhan bakteri dan protozoa rumen dipengaruhi oleh pola fermentasi yang ditunjukkan oleh proporsi molar VFA dan ph rumen (Sunaryadi, 1999). Ketika ph rumen 6,0 kemungkinan protozoa jenis entodinia, ph 6,5 didominasi oleh ophyroscolecids dan holotrichs, sedangkan pada ph 6,5 sebelum inkubasi maka semua spesies protozoa ada (Hungate, 1966). Kondisi pakan yang rendah gula dan pati menyebabkan protozoa yang berada dalam populasi tersebut akan memangsa bakteri yang merupakan mikroba utama dalam rumen. Sunaryadi (1999) menyatakan bahwa protozoa dan bakteri bersaing dalam menggunakan beberapa bahan makanan, protozoa akan menggunakan bakteri sebagai sumber protein untuk kehidupannya sehingga populasi bakteri dalam rumen berkurang 12

26 setengah atau lebih. Sifat negatif protozoa lainnya adalah dapat menghidrogenasi asam lemak tidak jenuh menjadi asam lemak jenuh (Arora, 1989). Faktor utama berkurangnya populasi protozoa adalah kelaparan atau kekurangan makanan dalam jangka waktu yang lama karena akan menyebabkan menurunnya ph. Jika ph rendah, maka populasi protozoa akan menurun secara drastis sehingga mengganggu aktivitas bakteri rumen. Populasi protozoa juga dapat dikurangi dengan sengaja yaitu dengan menambahkan agen defaunasi ke dalam ransum. Defaunasi adalah suatu upaya yang dilakukan untuk mengurangi sebagian (defaunasi parsial) atau menghilangkan seluruh populasi protozoa (defaunasi total) di dalam rumen suatu ternak.pengaruh defaunasi terhadap mikroba rumen yaitu fungsi protozoa mungkin digantikan oleh bakteri (Hungate, 1966). Efek defaunasi sangat dipengaruhi oleh situasi pakan, ternak, dan mikroba rumen. Oleh karena itu, perlu tindakan yang cermat untuk mempelajari ekosistem di dalam rumen terutama peranan ptrotozoa, sehingga didapatkan suasana yang kondusif dalam proses pencernaan dan metabolisme ternak ruminansia (Sunaryadi, 1999). Penerapan defaunasi sebaiknya mempertimbangkan hal-hal berikut, tidak berbahaya bagi ternak, tidak mengganggu pertumbuhan bakteri dan fungi dan tidak perlu menghilangkan seluruh populasi protozoa karena diketahui protozoa memiliki peran di dalam rumen. Oleh karena itu, penerapan defaunasi parsial mungkin lebih baik daripada defaunasi total. Bahan yang dapat digunakan sebagai agen defaunasi dibagi menjadi 2 yaitu bahan alami dan bahan sintetis. Bahan alami meliputi minyak berupa minyak kelapa dan minyak jagung atau bahan-bahan yang mengandung saponin seperti kembang sepatau (Hibatus rosasinensis) dan saponin dari buah lerak (Sapindus rarak). Sunaryadi (1999) melaporkan bahwa ekstrak saponin buah lerak dapat digunakan sebagai agen defaunasi parsial yang aman namun, penggunaannya harus memperhatikan kadar amonia rumen. Sedangkan, produk komersial yang dapat dijadikan sebagai agen defaunasi adalah Teric GN9 (alcohol ethoxylate), alkanet 3SL3 (calcium peroxide = Ixper 80C), monoxol, dan sodium dioctylsulphosuccinate. Namun, pemakaian bahan kimia tersebut dapat berbahaya jika dosis yang diberikan tidak tepat, karena selain membunuh protozoa bahan tersebut juga bersifat toksik bagi bakteri dan fungi. 13

27 Penerapan teknologi defaunasi telah diketahui dapat meningkatkan efisiensi pertumbuhan mikroba rumen dan aliran protein asal mikroba rumen serta protein pakan ke organ pasca rumen (Nolan et al., 1989). Hal senada juga disampaikan oleh Merchen dan Titgemeyer (1992), yang menyatakan bahwa defaunasi dapat meningkatkan aliran protein kasar ke organ pencernaan pasca rumen sebesar 18%. 14

28 MATERI DAN METODE Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Ilmu Nutrisi Ternak Perah dan Laboratorium Biokimia, Fisiologi dan Mikrobiologi Nutrisi, Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Institut Pertanian Bogor.Penelitian ini dilakukan selama satu bulan terhitung mulai Februari 2012 sampai Maret Materi Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat alat-alat analisa in vitro seperti timbangan digital, tabung fermentor, shaker waterbath, tabung gas CO 2, oven C, tanur listrik C, cawan porselen, alat-alat destilasi, kertas saring Whatman no.41, cawan Conway, erlenmeyer, alat-alat titrasi, ph meter, spoit, botol film, mikroskop, counting chamber dan cover glass. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain ransum komplit. Ransum terdiri dari rumput gajah, bungkil kedelai giling, onggok giling, dedakd dan jagung, serta supelemen berupa vitamin E, unsur Se (Na 2 SeO 3 ), crude palm oil (CPO)dan minyak jagung. Bahan lain yang digunakan adalah kemasan, label, larutan McDougall dengan komposisi (Na 2 CO 3, Na 2 HPO 4.2H 2 O, KCl, NaCl, MgSO 4.7H 2 O, CaCl 2 dan aquadest), larutan buffer rumen dan larutan TBFS (tryphan blue formalinesalin). Metode Perlakuan Perlakuan yang digunakan adalah berupa perlakuan ransum.perlakuan meliputi penambahan vitamin E sebanyak 100ppm pakan, Se (Na 2 SeO 3 ) sebesar 0,5 ppm, CPOatau minyak jagung sebanyak 2 gram. Penggunaan CPO sebagai sumber asam lemak jenuh adalah sebagai pembanding terhadap penggunaan minyak jagung sebagai sumber asam lemak tidak jenuh.perlakuan tersebut adalah: P0 = ransum basal P1 = P0 + vitamin E +CPO P2 = P0 + vitamin E + minyakjagung P3 = P0 + selenium + CPO P4 = P0 + selenium + minyakjagung

29 Peubah yang diamati Peubah yang diamati pada penelitian ini adalah: 1. Pengukuran VFA totaldengan steam destilation methode(department of Diary Science, 1966) 2. Pengukuran NH 3 total dengan conway micro difussion methode(department of Diary Science, 1966). 3. Koefisien cerna bahan kering (KCBK) dan koefisien cerna bahan organik (KCBO) metode Tilley and Terry (1963) 4. Penghitungan populasi protozoa dengan metode pewarnaan Persiapan Sampel Prosedur Kerja Sampel diambil dari ransum komplit baik ransum basal maupun ransum perlakuan. Ransum komplit disusun dengan komponen bahan pakan yang sama kecuali komponen minyak. Formulasi ransum komplit yang digunakanserta kandungan nutriennya berdasarkan perhitunganditunjukkan dalam Tabel 1. Tabel 2. Formulasi Ransum Komplit yang Digunakan Sebagai Kontrol dalam Penelitian Komposisi (%) Bahan Pakan Rumput Gajah 35 Onggok 5 Dedak 15 Jagung 25 Bungkil Kedelai 20 Total 100 Kadar Nutrien BK 87,57 Abu 9,55 Lemak 1,55 SK 14,59 BETN 57,46 16

30 Pakan perlakuan disupelementasi dengan minyak. Minyak yang digunakan adalah CPO sebagai sumber asam lemak jenuh dan minyak jagung sebagai sumber asam lemak tidak jenuh. Ransum komplit perlakuan disupelementasi dengan vitamin E atau Se (Na 2 SeO 3 ). Semua bahan pakan dicampur secara manual. Sampel dari pakan yang telah dibuat diambil segera dan digunakan untuk analisis fermentasi in vitro dengan peubah yang diukur adalah kecernaan, kadar VFA, NH 3 dan populasi total protozoa dalam filtrat. Analisis Karakteristik Fermentasi Kajian karakteristik fermentasi rumen dilakukan melalui proses fermentasi menggunakan cairan rumen segar. Sebanyak 0,5 g sampel dari masing-masing perlakuan dimasukkan ke dalam tabung fermentor kemudian ditambahkan 40 ml larutan McDougall dan dimasukkan ke dalam shaker waterbath dengan suhu 39 o C. Setelah itu cairan rumen dimasukkan sebanyak 10 ml, tabung dikocok dengan dialiri gas CO 2 selama 30 detik. Keasaman larutan dikontrol agar berada pada ph (6,5-6,9) dan kemudian ditutup dengan tutup karet berventilasi. Fermentasi dilakukan selama 4 jam. Setelah 4 jam, tutup karet tabung fermentor dibuka, ditambahkan 2-3 tetes HgCl 2 untuk membunuh mikroba. Tabung fermentor disentrifugasi pada kecepatan 4.000rpm selama 10 menit. Substrat terpisah menjadi endapan di bagian bawah dan supernatan yang bening berada di bagian atas. Supernatan diambil untuk keperluan analisanh 3 dan VFA. Supernatan dimasukkan ke dalam botol film, apabila tidak dilakukan analisis segera, sampel disimpan dilemari pendingin (freezer). Pengukuran KCBK dan KCBO Tabung fermentor yang telah diisi dengan 0,5 g sampel dari masing-masing perlakuan, ditambahkan ke dalamnya 40 ml larutan McDougall. Tabung dimasukkan ke dalam shaker waterbath dengan suhu 39 o C, kemudian diisi cairan rumen 10 ml, tabung dikocok dengan dialiri CO 2 selama 30 detik. Keasaman media dipertahankan pada ph 6,5-6,9. Kemudian ditutup dengan karet berventilasi, dan difermentasi selama 48 jam. Setelah 48 jam, tutup karet tabung fermentor dibuka dan diteteskan 2-3 tetes HgCl 2 untuk membunuh mikroba. Tabung fermentor disentrifugasi pada kecepatan 4.000rpm selama 10 menit. Substrat terpisah menjadi endapan di bagian bawah dan supernatan yang bening berada di bagian atas.supernatan dibuang dan 17

31 endapan hasil sentrifusa ditambah 50ml larutan pepsin-hcl 0,2%. Campuran tersebut lalu diinkubasi kembali selama 48 jam tanpa tutup karet. Sisa pencernaan disaring dengan kertas Whatman no. 41 (yang sudah diketahui bobotnya) dengan bantuan pompa vakum. Endapan yang ada di kertas saring dimasukkan ke dalam cawan porselen, setelah itu dimasukkan ke dalam oven 105⁰C selama 24 jam. Setelah 24 jam, cawan porselen + kertas saring + residu dikeluarkan, dimasukkan ke dalam eksikator dan ditimbang untuk mengetahui persentase bahan keringnya. Selanjutnya bahan dalam cawan diabukan dalam tanur listrik selama 6 jam pada suhu o C, kemudian setelah didinginkan dalam eksikator ditimbang untuk mengetahui persentase bahan organiknya. Sebagai blanko dipakai residu asal fermentasi tanpa sampel. Perhitungan kecernaan bahan kering (KCBK) dan bahan organik (KCBO) dilakukan dengan menggunakan rumus sebagai berikut: BK sampel (g) {BK residu (g) BK blanko (g)} KCBK (%) = BKsampel x 100% KCBO (%) = BOsampel (g) {BOresidu (g) BOblanko (g)} BOsampel x 100% Pengukuran Konsentrasi NH 3 Amonia dalam filtrat diukur dengan metoda mikro difusi Conway (Department of Diary Science, 1966).Bibir cawan Conway dan tutupnya diolesi dengan vaselin, supernatan yang berasal dari proses fermentasi diambil 1 ml kemudian ditempatkan pada salah satu ujung alur cawan Conway. Larutan Na 2 CO 3 jenuh sebanyak 1 ml ditempatkan pada salah satu ujung cawan Conway bersebelahan dengan supernatan. Larutan asam borat berindikator sebanyak 1 ml di tempatkan di dalam cawan kecil yang terletak di tengah cawan Conway. Cawan Conway yang sudah diolesi vaselin ditutup rapat hingga kedap udara, larutan Na 2 CO 3 dicampur dengan supernatan hingga merata dengan cara menggoyang goyangkan dan memiringkan cawan tersebut. Setelah itu dibiarkan selama 24 jam dalam suhu kamar. Setelah 24 jam suhu kamar, dibuka dan asam borat berindikator dititrasi dengan H 2 SO 4 0,005 N sampai terjadi perubahan warna dari biru menjadi merah. Perhitungan kadar NH 3 filtrat dihitung dengan rumus berikut: 18

32 mm NH 3 = ml H 2 SO 4 x N H 2 SO 4 x 1000 g sampel x BK sampel Pengukuran Konsentrasi VFA Kadar VFA (Volatile Fatty Acids) diukur dengan metoda destilasi uap (Department of Diary Science, 1966). Presscookersumber uap diisi dengan aquades sampai tanda MAX. Kemudian air pendingin dari kran dipastikan mengalir agar berfungsi dengan baik. Kompor gas selanjutnya dinyalakan, sehingga aquades yang ada dalam presscooker tersebut mendidih dan menghasilkan uap yang masuk ke tabung-tabung destilasi, hal ini menandakan bahwa analisis VFA bisa dimulai. Supernatan yang sama dengan analisa NH 3 diambil sebanyak 5ml, kemudian dimasukkan ke dalam tabung destilasi. Erlenmeyer yang berisi 5 ml NaOH 0,5 N ditempatkan di bawah selang tampungan. Larutan H 2 SO 4 15% sebanyak 1 ml ditambahkan ke tabung destilasi yang telah diisi larutan sampel, kemudian segera ditutup, dan dibilas dengan aquadest. Uap air panas mendesak VFA dan terkondensasi dalam pendingin. Air yang terbentuk ditampung labu erlenmeyer yang berisi 5 ml NaOH 0,5 N sampai mencapai 300 ml. Indikator PP (Phenolpthalein) ditambahkan sebanyak 2-3 tetes dan dititrasi dengan HCl 0,5 N sampai warna titran berubah dari merah menjadi merah muda seulas. Larutan HCl 0,5 N sebagai titrat distandardisasi terlebih dahulu sehingga didapat konsentrasi dengan empat digit di belakang koma. Kadar VFA total dalam filtrat dihitung dengan rumus: (a-b) x N HCl x 1000 VFA total(mm) = 5 Keterangan: a = volume titran blanko; b = volume titran contoh. Pengukuran Populasi Protozoa Pengukuran populasi protozoa dilakukan dengan menggunakan metode pewarnaan dengan larutan tryphan blue formaline salin (TBFS) seperti yang dilakukan dalam penelitian Sunaryadi (1999). Larutan TBFS terbuat dari 100 ml formaldehid 35%, 2 g triphan blue, 9 g NaCl, dan 900 ml aquades. Sebanyak 1 ml larutan TBFS dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dicampur dengan 1 ml cairan rumen segar kemudian diaduk merata sambil dialiri gas CO 2. Cairan tersebut diteteskan ke dalam counting chamber dan ditutup dengan cover glass sampai rata. 19

33 Counting chamber yang digunakan mempunyai ketebalan 0,1 mm, dengan luas kotak terkecil 0,0625 mm yang terdapat 16 kotak dan kotak yang dibaca sebanyak 5 kotak. Populasi protozoa diamati dengan mikroskop lensa obyektif sebanyak 5 kotak, dengan pembesaran 400 kali.populasi protozoa dihitung dengan persamaan berikut: 1000 x FP x C Populasi protozoa total = 0,0625 x 0,1 x 16 x 5 Keterangan:C = jumlah protozoa terhitung dalam counting chamber (sisi kanan atas,kiri atas,kanan bawah,kiri bawah dan tengah);fp = faktor pengenceran (jumlah perbandingan yaitu 2);0,1 = ketebalan counting chamber;0,0625 = luas kotak terkecil (mm 2 ); 16 = jumlah kotak dalam counting chamber;5 = jumlah kotak yang dibaca. Analisis Data Percobaan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) lima perlakuan dengan tiga ulangan. Analisis data dilakukan terhadap kecernaan, VFA, NH 3 dan populasi protozoa total.model matematik yang digunakan adalah sebagai berikut (Mattjik dan Sumertajaya, 2006) : Y ij = µ + τ i + ε ij atau Y ij = µ i + ε ij Keterangan: i = 1, 2,..., t; j = 1, 2,..., r; Y ij = Nilai pengamatan pada perlakuan ke-i dan ulangan ke-j; μ = Nilai rataan umum; τi = Pengaruh perlakuan ke-i, = μ i - μ; εij = Pengaruh acak perlakuan ke-i dan ulangan ke-j. Data yang diperoleh dianalisis dengan sidik ragam (ANOVA),jika terdapat perbedaan yang nyata, maka dilakukan uji kontras lanjut Duncan. 20

34 HASIL DAN PEMBAHASAN Kecernaan In Vitro Ransum Bersuplemen Vitamin E dan Se Kecernaan didefinisikan sebagai bagian pakan yang tidak diekskresikan dalam feses sehingga diasumsikan bagian tersebut diserap oleh tubuh hewan. Kecernaan pakan pada ternak ruminasia dapat diduga melalui pengujian in vitro. Rataan nilai kecernaan ransum perlakuan disajikan pada Tabel 2. Tabel 3. Kecernaan In Vitro Ransum Komplit yang Mengandung Minyak dengan Asam Lemak Berbeda Perlakuan KCBK (%) KCBO (%) P0 62,44±0,84 a 63,86±0,52 P1 59,61±2,66 ab 62,21±2,34 P2 60,39±0,89 a 62,07±0,63 P3 59,87±2,90 ab 61,21±3,44 P4 56,66 ±1,01 b 58,29 ±1,01 Keterangan: P0 = kontrol (ransum komplit), P1 = P0+vitamin E+CPO, P2 = P0+vitamin E+minyak jagung, P3 = P0+Se+CPO, P4 = P0+Se+minyak jagung. Superscript yang berbeda pada tiap kolom menunjukkan perbedaan yang nyata berdasarkan uji lanjut Duncan (P<0,05). Ransum yang digunakan termasuk ke dalam ransum berkualitas baik karena memiliki kecernaan yang lebih besar dari 50%. Penambahan asam lemak yang berbeda jenis kandungan lemaknya dan dikombinasikan dengan supelementasi vitamin E atau Se, memiliki pengaruh yang berbeda nyata terhadap kecernaan bahan kering sedangkan pengaruhnya terhadap kecernaan bahan organik ransum perlakuantidak berbeda nyata. Kecernaan bahan kering tertinggi terjadi pada perlakuan ransum basal dan ransum perlakuan supelementasi vitamin E dengan minyak jagung. Hasil ini menunjukkan bahwa nutrisi yang dapat termanfaatkantinggi. Kecernaan bahan kering pada perlakuan ransum basal dan ransum P2 (vitamin E + minyak jagung) menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05) dengan ransum P4 (Se + minyak jagung), namun tidak berbeda nyata(p>0,05) dengan perlakuan ransum yang ditambahkan dengan CPO. Kecernaan bahan kering pada ransum P2 yang ditambahkanoleh vitamin E lebih tinggi dibandingkan ransum P4 yang ditambahkan denganse.hasil tersebut

35 menunjukkan bahwa supelementasi vitamin E lebih baik dalam melindungi minyak jagung dari proses oksidasi dan biohidrogenasi dibandingkan dengan supelemense.vitamin E lebih mudah diserapoleh bakteri rumen, sehingga nilai kecernaan bahan keringnya lebih tinggi dibandingkan dengan kecernaan bahan kering yang disupelementasikan Se.Menurut Dilaga (1992) dan Adawiah et al, (2006), absorbsi Se pada hewan poligastrik lebih rendah dibandingkan pada hewan monogastrik karena terjadi reduksi selenit menjadi bentuk yang sukar larut dalam rumen. Sedangkan pengaruh supelementasi dari masing-masing perlakuan terhadap kecernaan bahan organiktidak berbeda nyata. Hasil yang tidak berbeda nyatamenunjukkan bahwa suplementasi vitamin E ataupun Se memiliki manfaat yang sama dalam mengurangi pengaruh negatif penambahan asam lemak jenuh dan asam lemak tidak jenuh ke dalam pakan terhadap kecernaan bahan organik. Pengaruh yang tidak berbeda nyata pada supelementasi asam lemak jenuh dan tidak jenuh diduga karena adanya pengaruh positif dari vitamin E atau Se. Vitamin E diperkirakan dapat mencegah reaksi peroksidasi asam lemak tidak jenuh dan juga reaksi-reaksi lain yang mempengaruhi kehidupan mikroba rumen, sedangkan Se dapat mencegah peroksidasi asam lemak tidak jenuh. Nilai kecernaan baik bahan kering maupun kecernaan bahan organik perlakuan supelementasi minyak menurun jika dibandingkan dengan ransum basal.adanya vitamin E dan Se menyebabkan penurunan kecernaan yang terjadi tidak berbeda nyata dengan ransum basal perlakuan. Fermentabilitas In Vitro Ransum Bersuplemen Vitamin E dan Se Indikator karakteristik fermentasi pakan percobaan ditunjukkan dengan konsentrasi NH 3 dan VFA dalam filtrat hasil fermentasi. Rataan konsentrasi NH 3 dan VFA dalam filtrat ditunjukkan dalam Tabel 3.Tingginya konsentrasi VFA menunjukkan bahwa bahan pakan mudah difermentasi dan tingginya kandungan energi yang dihasilkan untuk memenuhi kebutuhan ternak(sakinah, 2005). Nilai VFA ransum perlakuan dapat dikategorikan tinggi karena di atas 110 mm (Suryapratama, 1999).Adanya defaunasi melalui penambahan asam lemak tidak jenuh (minyak jagung) dapat menurunkan nilai VFA(Huet al., 2005 dan Arora, 1989).Ransum perlakuan yang ditambahkan dengan mionyak jagung (P2 dan P4) 22

36 memiliki nilai VFA yang lebih rendah dibandingkan ransum basal, namun penurunannya tidak signifikan.ransum yang ditambahkan dengan minyak CPO sebagai sumber asm lemak jenuh juga mengalami penurunan yang tidak signifikan.tingginya nilai VFA mengindikasikan semakin tinggi pula energi yang dapat dimanfaatkan oleh ternak dan penurunan VFA yang tidak signifikan menunjukkan adanya pengaruh positif dari vitamin E dan Se dalam mempertahankan konsentrasi VFA. Konsentrasi NH 3 mengindikasikanbesarnyaprotein pakan yang mudah didegradasi oleh mikroba rumen.tingginya konsentrasi NH 3 menunjukkan bahwa protein pakan mudah didegradasi sebaliknya jika pakan tahan degradasi maka konsentrasi NH 3 rendah dan kecernaan menurun (McDonaldet al, 2002). Konsentrasi NH 3 yang diperlukan untuk mendukung aktivitas dan pertumbuhan mikroba rumen adalah sebesar 6-21 mm (McDonald, 2002). Ransum perlakuan dan ransum basalmemiliki nilai NH 3 yang rendah, hal ini berarti bahwa protein ransum perlakuan sulit untuk didegradasi oleh mikroba rumen. Faktor lain yaitu karena adanya defaunasi sehingga amonia yang berasal dari protozoa menurun. Hasil ini menunjukkan bahwa penambahan vitamin E dan Se bermanfaat dalam melindungi minyak sehingga tetap dapat dimanfaatkan sebagai agen defaunasi. Tabel 4. Fermentabilitas In Vitro Ransum Komplit yang Mengandung Minyak dengan Asam Lemak Berbeda Perlakuan Konsentrasi VFA (mm) Konsentrasi NH 3 (mm) P0 159±56 2,89±0,51 P1 117±53 4,31±0,73 P2 154±85 3,57±1,15 P3 168±97 4,68±0,93 P4 121±72 4,02±0,42 Keterangan: P0 = kontrol (ransum komplit), P1 = P0+vitamin E+CPO, P2 = P0+vitamin E+minyak jagung, P3 = P0+Se+CPO, P4 = P0+Se+minyak jagung. Konsentrasi VFA dan NH 3 dipengaruhi oleh populasi protozoa. Penurunan populasi protozoa dapat menurunkan nilai konsentrasi VFA dan NH 3. Konsentrasi VFA pada ransum perlakuan ini tidak berkorelasi dengan populasi protozoa, hal ini 23

37 bias terjadi karena adanya VFA yang tidak tertangkap oleh alat yang digunakan. Akan tetapi, konsentrasi NH 3 pada ransum perlakuan P1 dan P2 memiliki korelasi dengan populasi total protozoa yang teramati. Populasi total protozoa P2 lebih rendah daripada P1, sehingga konsentrasi NH 3 mpada ransum P2 juga lebih rendah dibandingkan P1. Setelah dilakukan analisis, nilai VFA dan NH 3 dari masing-masing perlakuan sama, hal ini menunjukkan bahwa aktivitasmikroba dalam memfermentasi karbohidrat dan aktivitasnya mendegradasi protein tidak terpengaruh oleh penambahan minyak dengan kadar asam lemak tidak jenuh dan tidak jenuh tinggi.hasil ini menggambarkan bahwa pengayaan energi ransum dengan penambahan minyak tidak mempengaruhi aktivitas fermentasi mikroba rumen khususnya kalau ransum disupelementasi dengan vitamin E atau Se. Pengaruh Ransum Perlakuan Terhadap Populasi Protozoa Total Tingkat kecernaan pakan berpengaruh terhadap keseimbangan bakteri dan protozoa rumen. Kadar VFA dan NH 3 dalam rumen yang rendah dapat mengganggu kerja bakteri pencerna bahan makanan di dalam rumen. Jika keseimbangan bakteri terganggu, maka kecernaan bahan pakan di dalam rumen pun terganggu. Oleh karena itu, untuk mengetahui hubungan antara nilai kecernaan secara in vitro, dilakukan pengamatan lebih lanjut terhadap populasi protozoa total.data hasil analisis populasi protozoa total disajikan pada Tabel 4. Tabel 4. Populasi Protozoa Total dalam Media Fermentasi Ransum Komplit yang Berbeda Kandungan Lemaknya dan Disupelementasi Vitamin E atau Se Perlakuan Populasi Protozoa Total (sel/ml) Rumen segar P ±4.163 P ±7.572 P ±1.155 P ±7.572 P ±5.033 Keterangan: P0 = kontrol (ransum komplit), P1 = P0+vitamin E+CPO, P2 = P0+vitamin E+minyak jagung, P3 = P0+Se+CPO, P4 = P0+Se+minyak jagung. 24

38 Jumlah protozoa hasil pengamatan berada di bawah kisaran normal populasi protozoa rumen sel/ml (McDonald et al., 2002). Protozoa dalam cairan rumen segar yang merupakan sumber mikroba rumen menunjukkan populasi yang rendah pula. Banyak sedikitnya protozoa rumen berpengaruh terhadap kecernaan karena kerja protozoa dan bakteri dalam rumen saling bersaing dalam penggunaan bahan makanan terutama protein.peningkatan populasi protozoa dapat menurunkan populasi bakteri pencerna pakan.peningkatan populasi bakteri pencerna dapat dilakukan dengan melakukan defaunasi terhadap protozoa. Data yang ditunjukkan dalam Tabel 4 menunjukkan bahwa populasi protozoa total semua perlakuan sama. Walaupun demikian populasi protozoa total pada perlakuan P1 dan P3 (supelementasi CPO)cenderung lebih banyak dibandingkan pada perlakuan P2 dan P4 (supelementasi minyak jagung). Hasil ini didukung oleh Hristov et al. (2004) yang menyatakan bahwa populasi protozoa pada pakan yang tinggi asam lemak linoleat lebih rendah dibandingkan pada pakan yang tinggi asam lemak oleat.akan tetapi, penurunan populasi protozoa hasil pengamatan tidak berbeda nyata.jumlah protozoa total yang tidak berbeda sejalan dengan peubah kecernaan bahan organik, kadar VFA dan NH 3 media fermentasi yang tidak berbeda nyata pula.penurunan populasi protozoa menunjukkan bahwa vitamin E dan Se mampu melindungi asam lemak jenuh sehingga masih dapat dimanfaatkan sebagai agen defaunasi.menurut Arora (1989), protozoa memiliki kemampuan dapat menghidrogenasi asam-asam lemak tidak jenuh menjadi asam lemak jenuh. Sehingga, dengan adanya defaunasi dari penambahan minyak serta supelementasi vitamin E dan Se mampu meningkatkan perlindungan terhadap asam lemak tidak jenuh itu sendiri sehingga manfaatnya tetap ada dan pengaruh negatifnya berkurang. 25

39 KESIMPULAN Supelementasi vitamin E atau Se ke dalam ransum komplit dapat mengurangi pengaruh negatif penambahan minyak hingga 2 gram terhadap kecernaan bahan kering dan bahan organik, karakteristik fermentasi yang diindikasikan dengan kadar VFA dan NH 3 serta populasi totdal protozoa. Pengaruh positif supelemen tersebut sama terhadap kecernaan bahan organik, karakteristik fermentasi dan populasi total protozoa, baik pada penambahan minyak sumber asam lemak jenuh maupun tidak jenuh. Kecernaan bahan kering ransum basal dan ransum perlakuan yang disupelementasi minyak jagung dengan penambahan vitamin E berbeda nyata dengan ransum perlakuan yang disupelementasi minyak jagung dengan penambahan Se. Ransum perlakuan yang ditambahkan vitamin E dapat melindungi asam lemak tidak jenuh lebih baik daripada yang ditambahkan dengan Se. SARAN Penambahan antioksidan ke dalam pakan untuk mengurangi pengaruh negatif daripenambahan minyak ke dalam pakan disarankan untuk pakan yang ditambahkan minyak di atas 2 gram.penambahan antioksidan ke dalam ransum yang ditambahkan minyak 2 gram hanya untuk mengurangi pengaruh negatif dari asam lemak tersebut terhadap aktivitasfermentasi mikroba rumen serta kecernaan bahan kering. Penambahan Se ke dalam pakan harus memperhatikan kadar Se dalam pakan juga agar tidak terjadi keracunan.

40 UCAPAN TERIMAKASIH Puji syukur kehadirat Allah SWT sehingga penulis mampu menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi ini. Penulis ingin mengucapkan terimakasih kepada Prof.Dr.Ir. Toto Toharmat,M.Agr.Sc selaku pembimbing utama skripsi dan Ir. Asep Tata Permana,M.Sc selaku pembimbing anggota sekaligus pembimbing akademik, atas motivasi, bimbingan, masukan dan pelajaran serta koreksi yang diberikan sejak perencanaan penelitian hingga selesainya penyusunan skripsi ini. Ucapan terima kasih ingin penulis sampaikan kepada dosen-dosen yang membantu lancarnya penulisan skripsi inidr.ir.kukuh Budi Satoto,MS sebagaidosen penguji seminar, Prof.Dr.Ir. Dewi Apri Astuti,MS dan Tuti Suryati,S.Pt,M.Si sebagai dosen penguji sidang, Ir. Lidy Herawati,MS sebagai panitia seminar dan Iwan Prihantoro,S.Pt,M.Si sebagai panitia sidang. Ucapan terimakasih dan rasa hormat setinggi-tingginya juga ingin penulis sampaikan kepada yang tercinta Ayahanda Suwito dan Ibunda Ma rifah atas doa, dukungan moril maupun materiil, nasihat, kesabaran dan cinta kasih yang sangat berlimpah dan tiada henti. Kakak dan adik Annisa Rinduwati,SE, Ari Fahtoni,SE dan Arbillah Fahtoni atas dukungan dan kasih sayang yang diberikan.ucapan terimakasih juga ingin penulissampaikan untuk yang terkasih Riki Ariyadi atasdukungan dan semangat selama masa perkuliahan hingga penyusunan skripsi. Penulis mengucapkan rasa terimakasih kepada Ibu Dian atas kerja sama, kesabaran, pelajaran dan bantuannya selama penelitian berlangsung. Terimakasih kepada teman satu kost dan satu perjuangan PKM-P Dhiki Mardiana Januari atas masukan, bantuan dan dukungan. Altami Nurmila, Putri Hidayah dan Ali Nurhadi, teman-teman tim PKM-P 2010 atas dukungan dan ide yang mendasari penelitian ini. Ide Risentito dan Dea Justia atas bantuannya dalam penelitian ini. Sahabat suka maupun duka Ira Dewiyana Sambas, Liza Nur Azizah, Tia Dwi Agustiana dan GENETIC 45 serta sahabat-sahabat terdekat atas kebersamaan yang indah. Seluruh dosen dan staff Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan yang sabar dan penuh pengertian.seluruh dosen dan staff program studi minor Gizi Masyarakat atas pelajaran dan bantuannya sehingga terselesaikannya program studi minor penulis. Terima kasih kepada semua pihak yang tidak mampu penulis sebutkan satu persatu,semoga skripsi ini berguna bagi pembaca.

41 DAFTAR PUSTAKA Adawiah, T. Sutardi, T. Toharmat, W. Manalu, Nahrowi,& U. H. Tanuwiria Suplementasi sabun mineral dan mineral organik serta kacang kedelai sangrai pada domba. Med. Pet. 29: Anggorodi,R Ilmu Makanan Ternak Umum. PT. Gramedia, Jakarta. Arora, S.P Pencernaan Mikroba pada Ruminansia.Terjemahan: Ratih Muwarni. Gajah Mada University Press, Yogyakarta. Cheeke, P.R Applied Animal Nutrition Feeds and Feeding. Pearson Education Inc., New Jersey. Department of Diary Science General Laboratory Procedures. University Wisconsin Madisson Dilaga, S.H Nutrisi Mineral pada Ternak. Edisi Pertama. Akademika Pressindo, Jakarta. Garton, G.A The Digestion and Absorbtion of Lipids in Ruminant Animals. In World Rev. of Nutr. and Dietetics. Baurne, G.H. (Ed.). Hafmor Publ. Coy., Inc., New York. Gropper, S.S., J.L. Smith,& J.L. Groff Advanced Nutrition and Human Metabolism.4thed. Thomson Learning Inc., USA. Hartati, E Suplementasi minyak lemuru dan seng ke dalam ransum yang mengandung silase pod kakao dan urea untuk memacu pertumbuhan sapi Holstein jantan. Disertasi. Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Hu, W., Y. Wu, J. Liu, Y. Guo, & J. Ye Tea saponinsaffect in vitro fermentation and methanogenesis in faunated and defaunated rumen fluid. J. Zhejiang UniversityScience.6B(8): Hristov, A.N., M. Ivan,& T.A. Mc Allister In vitro effects on individual fatty acids in protozoal numbers and on fermentation products in ruminal fluid from cattle fed a high concentrate, barley-based diet. J.Anim.Sci. 82: Hungate, R.E The Rumen and Its Microbes. Academic Press Inc., New York. Ketaren, S Minyak dan Lemak Pangan. Edisi Pertama. UI-Press, Jakarta. Kurniawati, A Evaluasi suplementasi ekstrak lerak (Sapindus rarak) terhadap populasi protozoa, bakteri, dan karakteristik fermentasi rumen sapi peranakan Ongole secara in vitro.skripsi. Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Lloyd, L.E., B.E. Mc. Donald,& E.W. Crampton Fundamentals of Nutrition. 2nd ed. W.H. Freeman and Company, San Francisco. Loi, C.C., H.C. Boo, A.S. Mohammed,& A.A. Ariffin A high performance liquid chromatography method for determination of furfural in crude palm oil. J. Food Chem. 12: 108.

42 Mattjik, A.H. & M. Sumertajaya Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab. IPB Press, Bogor. McDonald, P., R.Edward,& J. Greenhalgh Animal Nutrition.6thed. Academic Press Inc., New York. McDowell, L.R Vitamins in Animal and Human Nutrition. Academic Press, Inc., San Diego California. McDowell L.R Minerals In Animal And Human Nutrition. 2nd ed. Elsevier Science B.V., Netherlands. Merchen, N.M.R. & E.C. Titgemeyer Manipulation of amino acid supply to The Growing Ruminant. J. Anim. Sci. 70: Mirwandhono, R.E Berbagai usaha meintas rumenkan asam lemak tak jenuh. Disertasi. Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Nolan, J.V., R.A. Leng,& D.I. Demeyer The Role of Protozoa and Fungi in Ruminant Digestion. Penambull Books, Armidale. [NRC] National Research Council Nutrient Requirements of Beef Cattle. 7th ed. National Academic Press, Washington D.C. Parakkasi, A Ilmu Nutrisi dan Makanan Ternak Ruminan.UI-Press, Jakarta. Purba, M Penurunan intensitas off odor pada daging itik local dengan suplementasi santoquin dan vitamin E dalam ransum.disertasi. Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Rorong, J., H. Aritonang,& F.P. Ranti Sintesis metal ester asam lemak dari minyak kelapa hasil pemanasan. Chem. Prog.1 (1). Sakinah, D Kajian suplementasi probiotik bermineral terhadap produksi VFA, NH 3, dan kecernaan zat makanan pada domba. Skripsi. Fakultas Peternakan,Institut Pertanian Bogor, Bogor. Scott, T.W. & J.R. Ashes Dietary lipids for ruminants : protection, utilization and effects on remodeling of skeletal muscle phospolipids. Aust. J. Agric. Res. 44: Selly Peningkatan kualitas pakan serat bermutu rendah dan amoniasi dan inokulasn digesta rumen. Skripsi. Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Spears, J.W. &Hansen, S.L Bioavailability Criteria for Trace Minerals in Monogastrics and Ruminants.In: P. Schlegel, S. Dunsoy & A.W. Jongbloed (Eds.). Trace Elements in Animal Production Systems.Wageningen Academic Publishers, The Netherlands. Suharyanto, T. Panji, M. I. Abdullah,& K. Syamsu Biokonversi CPO dengan desaturasi amobil sistem kontinyu pada skala semipilot untuk produksi minyak mengandung GLA. Menara Perkebunan. 74: Sunaryadi Ekstraksi dan isolasi buah lerak (Sapindus rarak) serta pengujian daya defaunasinya. Tesis. Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor. 29

43 Suryapratama, W Efek suplementasi asam lemak volatile bercabang dan kapsul lisin serta treonin terhadap nutrisi protein sapi Holstein.Disertasi.Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor, Bogor. Sutardi, T Ikhtisar Ruminologi. Bahan Kursus Peternakan Sapi Perah. Kayu Ambon, Lembang. Direktorat Jenderal Peternakan, Jakarta. Sutardi, T Ketahanan protein bahan makanan terhadap degradasi oleh mikroba rumen dan manfaatnya bagi peningkatan produktivitas ternak. Prosiding Seminar dan Penunjang Peternakan. Lembaga Penelitian Peternakan, Bogor. Tanuwiria, U.H., D.C. Budinuryato, S. Darodjah,& W.S. Putranto Studi pembuatan kompleks mineral-minyak dan efek penggunaannya dalam ransum terhadap fermentabilitas dan kecernaan (in vitro). J. Ilmu Ternak 1: Tilley, J.M.A. & R.A. Terry A two stage technique for the in vitro digestion of forage. J. British Grassland Society. 18: Tiven N.C., L.M. Yusiati, Rusman,& U. Santoso Ketahanan asam lemak tidak jenuh dalam crude palm oil treproteksi terhadap ativitas mikrob rumen domba in vitro. Med. Pet. 42: Wallace, J Plants and plant extract to replace growth-promoting antibiotics in farm livestock production. [27 Agustus 2012]. Wilson, D.N. & T.D.A. Brigstocke Improved Feeding of Cattle and Sheep. Garanada Publishing, New York. Wildan, F Perbandingan komposisi asam lemak rantai panjang dari lemak hewani dan lemak nabati.lokakarya Nasional Non Penelitian, Bogor. Winarsi, H Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Kanisius, Yogyakarta. Whitelaw, F.G., J.M. Eadie, S.O. Mann,& R.S. Reid Some effects of rumen ciliate protozoa in cattle given restricted amount of barley diet. Br. J. Nutr. 27: Wood, J.D., M. Enser, A. V. Fisher, G.R. Nute, P.R. Sheard, R.I. Richardson, S.I. Hughes,& F.M. Whittington Fat deposition, fatty acid composition and meat quality. Meat Sci. 78:

44 LAMPIRAN

45 Lampiran 1. ANOVA dan Uji Lanjut Kecernaan Bahan Kering dan Bahan Organik in Vitro ANOVA Kecernaan Bahan Kering dan Bahan Organik in Vitro JK df JKT F Signifikansi KCBK Perlakuan 51, ,944 3,596 0,046 Ulangan 35, ,600 Total 87, KCBO Perlakuan 48, ,083 3,177 0,063 Ulangan 38, ,803 Total 86, Uji Lanjut Kecernaan Bahan Kering dengan Menggunakan Uji Lanjut Duncan Perlakuan N α= 0, , , , , , , ,4433 Signifikansi 0,075 0,118 Lampiran 2. ANOVA VFA dan NH 3 in Vitro ANOVA VFA dan NH 3 in Vitro JK df JKT F Signifikansi NH 3 Perlakuan 5, ,290 2,163 0,147 Ulangan 5, ,596 Total 11, VFA Perlakuan 6.518, ,674 1,569 0,256 Ulangan , ,577 Total ,

46 Lampiran 3. Foto-foto Penelitian Gambar 1.Pengambilan Isi Rumen Gambar 2. Pemerasan Cairan Rumen Gambar 3.Sebelum Titrasi NH 3 Gambar 4. Sesudah Titrasi NH 3 Gambar 5. Proses Titrasi NH 3 33