Peralatan : 1. Labu digesti, sebaiknya gunakan tabung kultur borosilikat dengan tutup (model TFE-lined screw)

Transkripsi

1 124

2 PENETAPAN COD (CHEMICAL OXYGEN DEMAND) (Sumber 5220 D. Closed Reflux Colometric Method, Standard Method; 1995) Peralatan : 1. Labu digesti, sebaiknya gunakan tabung kultur borosilikat dengan tutup (model TFE-lined screw) 2. Heating block 3. Spektrofotometer, untuk digunakan pada panjang gelombang 600 nm Pereaksi : 1. Peraksi destruksi Larutkan 3,07 g K 2 Cr 2 O 7 yang telah dikeringkan pada suhu 103 C selama 2 jam dalam 250 ml air suling. Tambah dengan 50 ml H 2 SO 4 pekat dan 10 g HgSO 4. Larutkan, dinginkan hingga sama dengan suhu ruangan, dan encerkan hingga 1 liter. 2. Pereaksi asam sulfat Masukkan Ag 2 SO 4, kristal ataupun serbuk ke dalam H 2 SO 4 pekat dengan perbandingan 7,10 g Ag 2 SO 4 / 700 ml H 2 SO 4. Biarkan selama 1 atau 2 hari untuk melarutkan Ag 2 SO Asam sulfamat Hanya dibutuhkan jika pengganggu nitrit harus dihilangkan. 4. Standard kalium hidrogen pthalat Hancurkan dengan hati-hati lalu keringkan hidrogen pthalat (HOOCC 6 H 4 COOK) pada suhu 120 C hingga bobot konstan. Larutkan 500 mg dalam air suling dan encerkan hingga 1 liter. KHP memiliki COD teoritis 1,

3 mg O 2 /mg dan larutan ini memiliki COD teoritis 500 g O 2 /ml. Larutan ini stabil selama 3 bulan jika di refrigator tanpa adanya pertumbuhan biologis. a. Sampel Cara Kerja : Ambil 1 ml sampel tambahkan 2 ml reagen, panaskan selama 2 jam dengan suhu 150 C dinginkan ukur absorbansinya dengan spektrofotometer panjang gelombang 600 nm. Baca absorbansinya dan bandingkan dengan kurva kalibrasi. b. Deret standard Buat larutan dari standard kalium phtalat dengan konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 400 ppm, 600 ppm, dan 800 ppm. Ukur absorbansinya dengan spektrofotometer 600 nm. Buat kurva kalibrasi. c. Blangko 1 ml air suling dan 2 ml reagen panaskan 2 jam dengan suhu 150 C kemudian dinginkan, ukur dengan spektrofotometer. 126

4 PENETAPAN BOD (BIOLOGICAL OXYGEN DEMAND) (Sumber 5210 B. 5-Day BOD Test, Standard Method; 1995) Tahapan : 1. Memberi seed air pengencer sekurang-kurangnya 30 menit sebelum air pengencer digunakan, dengan takaran 1 ml seed/liter air pengencer. 2. Sampling contoh air. Sampling Contoh Air : 1. Ambil contoh air secukupnya, ukur ph. Jika ph di bawah 6,5 maka tambahkan NaOH 1 N, dan jika di atas 7,5 maka tambahkan H 2 SO 4 1 N hingga ph contoh antara 6,5 7,5. 2. Encerkan sampel menggunakan air pengencer berdasarkan perhitungan pengenceran BOD. Pengenceran BOD = (COD x 80%)/4 3. Pipet 20 ml contoh air dan masukkan ke dalam piala gelas di atas. 4. Tambahkan lagi air pengencer hingga 200 ml (pengenceran 10 kali) 5. Pipet 10 ml larutan di atas, tuang ke dalam piala gelas 1 liter, dan encerkan hingga tanda batas (pengenceran 1000 kali). 6. Tuang sampel ini ke dalam 2 botol winkler hingga penuh. 7. Tutup botol BOD dan buang sisa larutan yang terdapat dalam mulut botol. 127

5 8. Beri kode masing-masing DO 0 dan DO 5 9. Kerjakan blanko dengan perlakuan yang sama, dengan menggunakan sisa air pengencer dan menggunakan kode BO 0 dan BO Masukkan masing-masing 1 ml mangan sulfat dan 1 ml natrium-iodida-azida ke dalam botol berkode DO 0 dan BO 0 kemudian botol tutup kembali. 11. Masukkan semua botol di atas ke dalam inkubator 20 C dalam suasana gelap. Pereaksi : 1. Larutan mangan sulfat Dilarutkan 480 g MnSO 4. 4 H 2 O, 400 g MnSO 4. 2 H 2 O atau 364 g MnSO 4. H 2 O dalam air suling, saring bila perlu dan tepatkan volume menjadi 1 L. 2. Larutan alkali-iodida-azida Dilarutkan 500 g NaOH (atau 700 g KOH) dan 135 g NaI (atau 150 g KI) dalam air suling dan tepatkan volume menjadi 1 L. Tambahkan 10 g NaN 3 yang dilarutkan dalam 40 ml air suling. 3. H 2 SO 4 pekat 1 ml H 2 SO 4 pekat equivalen dengan 3 ml alkali-azidaiodida 4. Larutan kanji Dilarutkan 2 g kanji dan 0,2 g asam salisilat sebagai pengawet dalam 100 ml air suling panas. 5. Larutan standard thiosulfat 0,025 N 128

6 Dilarutkan 6,205 g Na 2 S 2 O 3. 5 H 2 O dalam air suling. Tambah dengan NaOH 6 N atau 0,4 g NaOH dan tepatkan menjadi 1 L. 6. Larutan standar bi-iodat 0,0021 M Dilarutkan 812,40 mg KH(IO 3 ) 2 dengan air suling dan tepatkan volume menjadi 1 L. 7. Larutan buffer fosfat Dialrutkan 8,5 g KH 2 PO 4, 21,75 g K 2 HPO 4, 33,4 g Na 2 HPO 4. 7 H 2 O dan 1,7 g NH 4 Cl dalam 500 ml air suling atur ph hingga mencapai 7,4 dan tepatkan volume menjadi 1 L. ganti larutan bila terlihat adanya pertumbuhan biologis. 8. Larutan magnesium sulfat Dilarutkan 22,5 g MgSO 4. 7H 2 O dalam air suling dan tepatkan volume hingga 1 L. 9. Larutan kalsium klorida Dilarutkan 27,5 g CaCl 2 dengan air suling dan tepatkan volume hingga 1 L. 10. Larutan ferri klorida Dilarutkan 0,25 g FeCl 3. 6H 2 O dengan air suling dan tepatkan volume hingga 1 L. Alat-alat : 1. Botol winkler (BOD) 2. Inkubator 3. Peralatan titrasi 4. Aerator Cara Kerja : 1. Persiapan air pengencer - Disiapkan air pengencer di dalam botol yang bersih. 129

7 - Tambahkan larutan Buffer phosfat, MgSO 4, CaCl 2 dan FeCl 3 masing-masing 1 ml/liter air. - Sebelum digunakan simpan pada suhu 20 C dan jenuhkan dengan oksigen melalui aerator, lalu simpan pada botol bertutup kapas. 2. Perlakuan sampel - Masukkan sampel ke dalam 2 botol BOD ml sampai meluap. - Kemudian tutup botol BOD, hindarkan terjadinya turbulensi dengan gelembung udara selama pengisian berlangsung. - Sampel siap diperiksa kadar oksigen terlarut pada nol hari dan 5 hari. 3. Pemeriksaan oksigen terlarut. - Periksa kadar oksigen terlarut nol hari dari salah satu botol BOD yang tidak dieramkan dengan penambahan 1 ml larutan MnSO 4 dan 1 ml alkali-iodida-azida. - Hindari terbentuknya gelembung udara, lalu botol ditutup, dan dikocok beberapa saat. - Ketika endapan yang terbentuk mulai turun, tambahkan 1 ml H 2 SO 4 pekat, tutup kembali dan kocok beberapa saat sampai homogen. - Kemudian ml sampel dibuang dan sisa sampel dititrasi (+ 200 ml) dengan larutan N 2 S 2 O 3 0,025 M sampai warna kuning muda, tambahkan beberapa tetes larutan kanji dan titrasi kembali hingga warna biru hilang. Catat volume penitar. - Botol yang lain dimasukkan ke dalam inkubator (dieramkan) selama 5 hari pada suhu 20 C. - Setelah 5 hari dieramkan, periksa kadar oksigen terlarut seperti perlakuan di atas. Perhitungan : 1. Oksigen Terlarut (OT) = a x N x 8000 V

8 di mana : OT = Oksigen terlarut (mg/o 2 /L) a = Volume titran natrium thiosulfat (ml) N = Normalitas larutan natrium thiosulfat (ek/l) V = Volume botol winkler (ml) 1. Bila air pengencer menggunakan seed BOD 5 (mg/l) = (D 1 - D 2 ) - (B 1 - B 2 ) P x f Dimana : D 1 = Osigen terlarut dari sampel 0 hari, mg/l D 2 = Oksigen terlarut dari sampel 5 hari, 20 C, mg/l P = Faktor pengencer B 1 = Oksigen terlarut dari seed 0 hari, mg/l B 2 = Oksigen terlarut dari seed 5 hari, 20 C, mg/l F = Ratio dari seed. 131

9 PENETAPAN TOTAL SUSPENDED SOLIDS (TSS) Peralatan : 1. Cawan crus 50 mg 2. Timbangan analitik 3. Oven 4. Sentrifuse 5. Desikator Bahan : sampel 50 ml Cara Kerja : 1. Panaskan cawan kosong ke dalam oven 105 C selama 1 jam, setelah dingin timbang (a gr). 2. Ambil 50 ml sampel lalu disentrifuse selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm. 3. Setelah disentrifuse, cairan yang ada dibuang dan padatan yang mengendap diambil dan dimasukkan pada cawan yang telah ditimbang dan panaskan ke dalam oven 105 C selama 6 jam. 4. Setelah 6 jam didinginkan di dalam desikator, lalu timbang (b gr). Perhitungan : TSS (mg/l) = (b a) x ml 132

10 PENETAPAN AMMONIUM ( NH 4 N) Alat - Peralatan destilasi - Labu takar - Spektrofotometer - Tabung nessler - Pipet Bahan - Pereaksi nessler - Larutan K Na tartrat pekat - Larutan induk NH Larutan standard - Aquades Cara Kerja : Sampel air yang akan diperiksa sebaiknya didinginkan sekitar 5 C dan penetapan harus dilakukan secepat mungkin sesudah pengambilan sampel. Apabila sampel diperkirakan mengandung NH 4 N + < 5 mg/l, volume sampel yang dianalisa adalah 50 ml, bila > 5 mg/l digunakan volume yang lebih kecil, tapi diencerkan sampai volume Pembuatan kurva kalibrasi NH 4 N + a. Siapkan 8 buah labu ukur 50 ml dan isi masing-masing dengan larutan standar NH 4 N + sebanyak 0; 1; 2; 5; 10; 15; 20; 25 ml. Yang berarti masing-masing berisi 0; 10; 20; 50; 100; 150; 200; 250 g NH 4 N + b. Buat volume menjadi 50 ml dengan menambah aquades. c. Tambahkan 2 ml larutan K Na tartrat, dan kocok dengan baik. d. Bubuhkan 2 ml pereaksi nessler dan kocok lagi. e. Tunggu 10 menit sebelum diukur dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 420 nm. 133

11 f. Catat pembacaan tiap labu ukur dan buat gambar grafik antara konsentrasi NH 4 N + terhadap absorbansi. Akan didapatkan garis lurus melalui titik nol apabila aquades yang digunakan bebas NH 4 N + Penetapan NH 4 N + sampel air a. Sampel air yang diperiksa sebanyak 50 ml atau diencerkan menjadi 50 ml diberi perlakuan yang sama dengan prosedur pembuatan kurva kalibrasi seperti yang telah diuraikan di atas. b. Catat pembacaan pada spektrofotometer dan diplotkan pada kurva kalibrasi untuk memperoleh kadar NH 4 N + dalam sampel. 134

12 PENETAPAN SURFAKTAN SEBAGAI MBAS - Spektrofotometer - Corong pemisah - Alat-alat gelas Alat : Bahan : - Chloroform (CHCl 3 ) - Asam sulfat (H 2 SO 4 ) 6 N - Natrium Phospat Monohidrat (NaH 2 PO 4.H 2 O) - Pereaksi Biru Metilen Larutkan 100 mg biru metilen dalam 100 ml air. Ambil 30 ml larutan tersebut dan masukkan ke dalam labu 1000 ml. Tambahkan 500 ml air, 41 ml H 2 SO 4 6 N dan 50 g Natrium Phospat Monohidrat (NaH 2 PO 4.H 2 O). Kocok sampai larut dan encerkan sampai 1000 ml. - Larutan Pencuci Tambahkan 41 ml H 2 SO 4 6 N ke dalam air 500 ml dalam labu 1000 ml. Tambahkan ke dalamnya 50 g NaH 2 PO 4.H 2 O dan kocok sampai larut. Encerkan sampai 1000 ml. - Aquades Cara Kerja : 1. Membuat Kurva Kalibrasi Ambil larutan standar masing-masing 0; 1; 3; 5; 7; 9; 11; 13; 15; 20 ml dan masukkan ke dalam labu ukur 100 ml. Encerkan sampai tanda, konsentrasi larutan berturut-turut : 0; 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 0,9; 1,1; 1,3; 1,5; dan 2 mg/l. Kenakan perlakuan seperti terhadap sampel yaitu ekstraksi, kemudian ukur absorbansinya pada panjang 135

13 gelombang 652 nm. Buat kurva kalibrasi dari hasil pengukurannya. 2. Perlakuan Ekstraksi Ke dalam sampel tambahkan 10 ml CHCl 3 dan 25 ml larutan biru metilen. Kocok dengan kuat selama 30 detik dan diamkan. Pisahkan lapisan CHCl 3 ke dalam corong pisah lain. Lakukan ekstraksi dua kali lagi dengan cara yang sama, dan setiap kali alpisan CHCl 3 dipisahkan. Semua larutan ekstrak CHCl 3 dikumpulkan dalam corong pisah kedua dan corong pisah pertama dibilas dengan CHCl 3 dan dikumpulkan dalam corong kedua. Ke dalam ekstrak ditambahkan 50 ml air pencuci, kemudian dikocok dan didiamkan, kemudian larutan CHCl 3 dipisahkan. Ekstrak semua larutan CHCl 3 yang dikumpulkan, ditampung dalam labu ukur 100 ml dan ditepatkan volumenya menjadi 100 ml. Ukur absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 652 nm. Plot nilai absorbansi yang diperoleh dengan kurva larutan standard. KURVA STANDARD LAS (mg/l) UNTUK PENGUKURAN KONSENTRASI SURFAKTAN SEBAGAI mg/l MBAS 136

14 PENETAPAN TOTAL SUSPENDED SOLIDS (TSS) DAN VOLATILE SUSPENDED SOLID (VSS) 1. Cawan crus 50 mg 2. Timbangan analitik 3. Oven 4. Tanur 5. Sentrifuse 6. Desikator Bahan : sampel 50 ml Cara Kerja : Peralatan : 1. Panaskan cawan kosong ke dalam oven 105 C selama 1 jam, setelah dingin timbang (a gr). 2. Ambil 50 ml sampel lalu disentrifuse selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm. 3. Setelah disentrifuse, cairan yang ada dibuang dan padatan yang mengendap diambil dan dimasukkan pada cawan yang telah ditimbang dan panaskan ke dalam oven 105 C selama 6 jam. 4. Setelah 6 jam didinginkan di dalam desikator, lalu timbang (b gr). 5. Lanjutkan dengan pembakaran pada suhu C di dalam tanur selama 2 jam. 6. Didinginkan dalam desikator kemudian timbang (c gr) Perhitungan : TSS (mg/l) = VSS (mg/l) = (b a) x ml (c a) x ml 137

15 PENENTUAN KONSENTRASI BIOMASSA (MLVSS) Alat yang digunakan : - Oven pemanas - Desikator - Furnace - Penjepit - Pompa vakum Cara Kerja : 1. Air limbah yang akan diperiksa diambil sebanyak 10 ml dengan menggunakan pipet gondok 10 ml. 2. Air limbah tersebut disaring pada kertas saring dengan menggunakan pompa vakum. 3. Kertas saring tadi kemudian dipanaskan ke dalam oven selama 2 jam pada suhu 105 C. 4. Setelah 2 jam, kertas saring tersebut diangkat dan didinginkan dalam desikator selama + 10 menit. 5. Kertas saring yang telah dingin itu kemudian ditimbang (a gram). 6. Panaskan kembali kertas saring itu dalam furnace dengan suhu 550 C selama 15 menit. 7. Angkat dan dinginkan kembali dalam desikator setelah itu timbang (b gram) Perhitungan : a b MLVSS (mg/l) = x 10 6 Volume sampel (ml) 138

16 IDENTIFIKASI MIKROORGANISME a. Cara Kerja : 1. Sampel diambil secara aseptis dengan ose dan teteskan pada pembenihan agar kaldu. Agar ini ditanam pada agar endo, agar nutrien, dan agar TCBS. Sebelum ose diletakkan, pijarkan terlebih dahulu di atas api. 2. Pembenihan yang sudah ditanami dieramkan dalam incubator pada suhu 37 C selama 24 jam. 3. Setelah 24 jam koloni kuman yang timbul pada media diamati. 4. Koloni-koloni yang timbul bebas diselidiki apakah berlendir atau membentuk zat warna dan lakukan pulasan gram dan catat hasilnya. 5. Jika kuman yang ada adalah gram negatif, maka langsung diuji coba ke dalam reaksi biokimia, antara lain : Agar miring Glukosa Laktosa Mannit Multosa Sakarosa Vogs Proleam Simon sitont TSA atau KIA Urem Semo solid 139

17 Cara Kerja : Kuman yang diperiksa, reaksi biokimianya diambil satu koloni dari satu endo agar dengan jarum (ose). Masukkan ke dalam boillom 1 ml, eramkan pada suhu 37 C selama 20 menit. Setelah tumbuh tanam ke dalam deretan warna dengan jarum, kemudian masukkan ke dalam incubator pada suhu 37 C selama 24 jam. Kecuali semo solit agar dapat disimpan pada suhu kamar 26 C. 140