Richa Yuswantina, Agitya Resti Erwiyani, Prihati.

Transkripsi

1 THE IMUNOMODULATOR EFFECT OF ETHANOL EXTRACT OF BREADFRUIT LEAVES (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) TOWARD NON SPESIFIC IMMUNE RESPONSE ON MALE MICE BALB/C STRAIN Richa Yuswantina, Agitya Resti Erwiyani, Prihati ABSTRACT Breadfruit leaves contain flavonoid is suspected having effect of imunomodulator. The aims of this research is determine ethanol extract of breadfruit leaves (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) concentration to find out imunomodulator effect on non specific immune response of male mice Balb/c strain and determine of phagocytosis activity on male mice Balb/c strain after given the ethanol extract of breadfruit leaves (Artocarpus altilis (Park) Fosberg). This research is a experimental metode. The sample consist of 4 groups and each of group consist of 6 mice.the treatment is given during 5 day. Group I as control negative (aquadest), group II, III, IV were given ethanol extract of breadfruit leaves with 2,8% w/v, 5,6% w/v and 8,4% w/v concentration. On 7 th day, the blood taking on 0 minute, then was injected the carbon ink, and on 4, 8, 12, 16 minute the blood were taken again through vena tail. Blood carbon concentration had been measured using uv-vis spectrophotometer. The result of research showed on 2,8% w/v, 5,6% w/v and 8,4% w/v concentration ethanol extract of breadfruit leaves rise the imunomodulator effect toward non specific immune response on male mice Balb/c strain with k score 1,28 (weak), 1,32 (moderate), 1,43 (moderate) and ethanol extract of breadfruit leaves can influence phagocytosis activity in male mice Balb/c strain. Keywords : Imunomodulator, Carbon Clearance, Flavonoid, Breadfruit Leaves (Artocarpus altilis (Park) Fosberg).

2 EFEK IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL DAUN SUKUN (Artocarpus Altilis (Park) Fosberg) TERHADAP RESPON IMUN NON SPESIFIK PADA MENCIT JANTAN GALUR BALB/C Richa Yuswantina, Agitya Resti Erwiyani, Prihati INTISARI Daun sukun mengandung senyawa flavonoid yang diduga mempunyai efek imunomodulator. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui konsentrasi ekstrak etanol daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) yang dapat menimbulkan efek imunomodulator terhadap respon imun non spesifik pada mencit jantan galur Balb/c dan mengetahui adanya pengaruh aktivitas fagositosis pada mencit jantan galur Balb/c setelah diberi ekstrak etanol daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg). Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental. Sampel terdiri dari 4 kelompok perlakuan dan setiap perlakuan terdiri dari 6 ekor mencit. Perlakuan diberikan selama 5 hari. Kelompok I kontrol negatif (aquadest), Kelompok II, III, IV diberi ekstrak etanol daun sukun dengan konsentrasi 2,8% b/v, 5,6% b/v dan 8,4% b/v. Hari ke-7 pengambilan darah pada menit ke-0, kemudian diinjeksi tinta karbon dan pada menit ke-4, 8, 12, 16 kembali dilakukan pengambilan darah melalui vena ekor. Pengukuran kadar karbon darah menggunakan spektrofotometri uv-vis. Hasil penelitian menunjukkan pada konsentrasi 2,8% b/v, 5,6% b/v dan 8,4% b/v ekstrak etanol daun sukun menimbulkan efek imunomodulator terhadap respon imun non spesifik pada mencit jantan galur Balb/c dengan nilai k 1,28 (lemah), 1,32 (sedang), 1,43 (sedang) dan ekstrak etanol daun sukun dapat mempengaruhi aktivitas fagositosis pada mencit jantan galur Balb/c. Kata kunci : Imunomodulator, Bersihan Karbon, Flavonoid, Daun Sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg). PENDAHULUAN Secara alami tubuh memiliki mekanisme pertahanan yang digunakan untuk menangkal invasi dari berbagai mikroorganisme patogen seperti bakteri, virus, jamur, yang disebut sebagai sistem imun atau sistem kekebalan tubuh. Akibat invasi berbagai mikroorganisme patogen sel-sel yang berperan dalam sistem imun tidak mampu menjaga kondisi tubuh sehingga tubuh rentan terhadap penyakit. Beberapa penyakit yang dapat menurunkan kekebalan tubuh diantaranya adalah kanker, penyakit kronik seperti diabetes melitus, sirosis hati, tuberkulosis dan lepra. Sehingga, tubuh membutuhkan suatu senyawa yang dapat memperbaiki sistem imun yang disebut imunomodulator (Suhirman et al., 2007 cit Djauzi, 2003). Fungsi imunomodulator adalah memperbaiki sistem imun dengan cara mengembalikan fungsi sistem imun yang terganggu (imunorestorasi), stimulasi (imunostimulan) atau dengan menekan/menormalkan reaksi imun yang abnormal (imunosupresan) (Subowo, 2009). Senyawa-senyawa kimia yang dapat meningkatkan aktivitas sistem imun sangatlah membantu untuk mengatasi penurunan sistem imun. Salah satu tanaman yang berkhasiat sebagai obat adalah daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg). Sebelumnya, penggunaan daun sukun

3 sebagai obat lebih banyak diterapkan secara tradisional untuk mengobati liver, jantung, ginjal, limfa, gatal-gatal, sakit gigi, dan radang atau inflamasi (Putra, 2013). Senyawa kimia yang terkandung dalam daun sukun antara lain flavonoid, fenol, riboflavin, tanin, asetilkolin (Ach), kalium (Shabella, 2012). Menurut penelitian yang pernah dilakukan oleh Mu nisa et al pada tahun 2011 dapat diketahui bahwa ekstrak metanol daun sukun memiliki aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan dengan vitamin C dan BHT. Daun tanaman sukun mengandung beberapa zat berkhasiat, salah satu kandungannya quarcetin. Jenis flavonoid quarcetin ini diduga memiliki potensi sebagai senyawa yang sitotoksik dengan cara menstimulasi aktivasi makrofag peritoneum dan meningkatkan aktivitas sel NK (Solikhah et al., 2011). Belum ada penelitian yang melibatkan zat aktif flavonoid dari daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) sebagai imunomodulator. Oleh karena itu perlu peneliti berminat melakukan pembuktian dengan dilakukan penelitian terhadap senyawa aktif dari daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) tersebut sebagai imunomodulator. METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat yang digunakan antara lain timbangan, ayakan no. 30 mesh, blender, beker gelas, gelas ukur, labu takar, corong kaca, kain flanel, spuit oral, waterbath, kandang tikus, mikropipet, skalpel, plat tetes, tabung reaksi, autoclave, spektrofotometer UV-Vis. Bahan yang digunakan adalah mencit jantan galur Balb/C berumur 8-12 minggu, daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg), etanol 70%, aquadest, tinta karbon (pelikan B17), natrium sitrat 1%, asam asetat 1%, gelatin, NaCl 0,9%. Cara Penelitian Determinasi tanaman sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) dilakukan di Laboratorium Ekologi dan Biosistematik Jurusan Biologi fakultas MIPA Universitas Diponegoro untuk memperoleh kepastian atau kebenaran dari tanaman sukun. Daun sukun yang masih segar dicuci dengan air mengalir sampai bersih kemudian ditiriskan, dirajang selanjutnya dilakukan pengeringan. Daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) dibuat serbuk dengan blender kemudian diayak dengan ayakan nomor 30 mesh. Serbuk daun sukun diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 70% selama 7 hari. Maserat diuapkan dengan water bath pada suhu 60 0 C hingga didapat ekstrak kental. Identifikasi adanya flavonoid dengan menambahkan 3 tetes larutan ekstrak daun sukun dengan beberapa tetes larutan NaOH dan FeCl 3. Pembuatan suspensi karbon dengan mensuspensikan 1,6 ml tinta pelikan ke dalam 8,4 ml gelatin 1% b/v dalam larutan fisiologis NaCl. Uji aktivitas imunomodulator dilakukan dengan metode bersihan karbon. Pada uji ini mencit dikelompokkan 4 kelompok, tiap kelompok terdiri dari 6 ekor, masing masing kelompok hewan uji diberi perlakuan sebagai berikut : 1. Perlakuan selama 5 hari masing-masing kelompok diberi pakan standar dan perlakuan sebagai berikut : a. Kontrol negatif diberi aquades sebanyak 0,5 ml/20 g BB secara per oral dan pakan standar. b. Perlakuan I : ekstrak etanol daun sukun kadar 2,8% b/v c. Perlakuan II : ekstrak etanol daun sukun kadar 5,6% b/v d. Perlakuan III : ekstrak etanol daun sukun kadar 8,4% b/v 2. Uji Aktivitas Fagositosis : a. Pada hari ke-7, dilakukan pengambilan darah pada menit ke-0 dan diteteskan pada plat tetes (yang

4 mengandung natrium sitrat 1% sebagai anti koagulan), kemudian dipipet sebanyak 50 l dalam tabung reaksi dan ditambah 4 ml asam asetat 1%. b. Semua kelompok diinjeksi dengan karbon (tinta pelikan B17) dengan dosis 0,1 ml/10 g BB melalui vena ekor. c. Darah di ambil setiap 4 menit sekali (pada menit ke-4, 8, 12, 16) melalui vena ekor dan diteteskan pada plat tetes (yang mengandung natrium sitrat), kemudian dipipet sebanyak 50 l dalam tabung reaksi dan ditambah 4 ml asam asetat 1%. d. Diukur transmitannya menggunakan spektrofotometer uv-vis pada panjang gelombang 627 nm. Aktivitas fagositik ditentukan berdasarkan perbandingan antara kemiringan garis regresi linear antara waktu terhadap 100-%transmitan pada kelompok perlakuan dan kontrol negatif. Dengan melihat kemiringan garis regresi dapat digunakan untuk menghitung indeks fagositik yang merupakan perbandingan antara kelompok perlakuan dengan kontrol negatif. HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil determinasi adalah sebagai berikut : 1b - 2b - 3b - 4b - 12b - 13b - 14b - 17b - 18b - 19b - 20b - 21b - 22b - 23b - 24b - 25b - 26b - 27b - 799b - 800a (Famili 117. Moraceae) 1b - 2b - 4b - 6b - 8b - 9b - 15b (Genus. 9. Artocarpus) 1a - 2a - 3b - 4b (Spesies Artocarpus altilis (Park) Fosberg). Gambar 1. Tanaman Sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) Identifikasi flavonoid didapatkan hasil warna coklat pada penambahan NaOH dan warna hijau pada penambahan FeCl 3. Flavonoid Warna hijau Flavonoid Warna coklat Gambar 2. Reaksi Kimia Identifikasi Flavonoid

5 Hasil kurva hubungan waktu dengan 100-%Transmitan digunakan untuk mengetahui kecepatan eliminasi partikel karbon. Dari kurva tersebut didapatkan koefisien regresi dari masing-masing kelompok perlakuan. Gambar 3. Kurva Hubungan Waktu dengan 100-%Transmitan Hasil Indeks fagositosis dan kriteria efek imunomodulator ekstrak daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) dengan metode bersihan karbon : Kelompok uji Koefisien regresi Indeks fagositosis (ku/kk) Kriteria efek imunomodulator (Wagner, 1989) Kontrol negatif - 0, Perlakuan I - 0,7923 1,28 Imunostimulan lemah Perlakuan II - 0,8138 1,32 Imunostimulan sedang Perlakuan III - 0,8848 1,43 Imunostimulan sedang Keterangan : I = ekstrak etanol daun sukun kadar 2,8% b/v, II = ekstrak etanol daun sukun kadar 5,6% b/v, III = ekstrak etanol daun sukun kadar 8,4% b/v, ku = koefisien regresi kelompok perlakuan, kk = koefisien regresi kelompok kontrol negatif. Berdasarkan hasil kurva yang terbentuk, diperoleh kemiringan garis regresi yang menurun sebanding dengan waktu (menit). Hal tersebut menunjukkan bahwa semakin lama waktu kecepatan fagositosisnya semakin tinggi. Dari kemiringan garis regresi masingmasing kelompok selanjutnya digunakan untuk menilai kriteria efek imunomodulator dari ekstrak etanol daun sukun yang digunakan. Aktivitas imunomodulator bahan uji diklasifikasikan berdasarkan indeks fagositosisnya, apabila nilai indeks fagositosisnya (k) < 1,2 berarti tidak berefek imunostimulan, k antara 1,3-1,5 berarti memiliki daya imunostimulan sedang dan jika k > 1,5 berarti memiliki daya imunostimulan kuat (Wagner, 1989). Dari hasil dapat dilihat bahwa pada semua konsentrasi ekstrak etanol daun sukun yang diberikan pada mencit dapat mempengaruhi aktivitas fagositosis dari makrofag jaringan untuk melawan dan mengeliminasi partikel asing yang masuk kedalam tubuh. Kemampuan fagositosis dinyatakan sebanding dengan kenaikan dosis yang digunakan, hal tersebut berhubungan dengan kandungan flavonoid daun sukun yang dapat menstimulasi aktivasi makrofag dan meningkatkan aktivitas sel NK, sehingga semakin tinggi kandungan flavonoid dalam sediaan uji, jumlah makrofag yang teraktivasi dalam tubuh juga meningkat dan aktivitas fagositosisnya semakin tinggi jika terpapar antigen dari luar.

6 KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan 1. Pada konsentrasi 2,8% b/v, 5,6% b/v dan 8,4% b/v ekstrak etanol daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) menimbulkan efek imunomodulator terhadap respon imun non spesifik pada mencit jantan galur Balb/C. 2. Ekstrak etanol daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg) pada konsentrasi 2,8% b/v, 5,6% b/v dan 8,4% b/v dapat mempengaruhi akivitas fagositosis pada mencit jantan galur Balb/C dengan kategori lemah dan sedang. Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang aktivitas imunomodulator dengan menggunakan metode selain metode carbon clearance seperti metode perhitungan sel limfosit dan indeks organ limfoid. 2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai isolasi flavonoid yang terkandung dalam daun sukun (Artocarpus altilis (Park) Fosberg). DAFTAR PUSTAKA 1. Suhirman, S., dan Winarti, C., 2007, Prospek Dan Fungsi Tanaman Obat Sebagai Imunomodulator, , Jurnal Penelitian, Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik. 2. Subowo, 2009, Imunobiologi, Edisi II, 12-13, 153, Sagung Seto, Jakarta. 3. Putra, S.R., 2013, Ajaibnya Daun Sukun Berantas Berbagai Penyakit, 36-37, Flashbooks, Jakarta. 4. Shabella, R., 2012, Terapi Daun Sukun, Cetakan Pertama, 33-44, Cable Book, Klaten. 5. Solikhah, I.Y.M., Puspita, F.R., dan Samigun., 2011, Pengaruh Pemberian Ekstrak Air Herba Bidens pilosa L Terhadap Aktivitas Fagositosis Makrofag Mencit yang Diinduksi Listeria monocytogenes, Jurnal Penelitian, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta.