VALIDASI METODE PENETAPAN KADAR PENTAGAMAVUNON-1 DALAM DARAH SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Transkripsi

1 Validasi Metode Penetapan Kadar PGV Dalam Darah Secara KCKT VALIDASI METODE PENETAPAN KADAR PENTAGAMAVUNON DALAM DARAH SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI Anita Dwi Juwita Ningrum, Siluh Made Yuni Astini, dan Arief Rahman Hakim Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Sekip Utara, Yogyakarta 28 Korespondensi: ABSTRACT Pentagamavunon (PGV) is curcumin s analogue that reported as analgesic, antioxidant, antiinflamatory, and has antiproliferation activity to breast cancer. The aim of this study is to develop and validate the method for determinating PGV s concentration in blood by reverse phase HPLC. Analytical method validation include system suitability test, determination of LOD and LOQ, linearity test, accuracy and precision s determination, stability test of PGV in blood and acetonitrile. Concentration of PGV in blood is measured by HPLC using LiChrosphere 00 Cartridge RP C8 (2 x 4 mm i.d., μm), mixed mobile phase methanol : buffer acetate 0,0 M ph 3, (80: v/v), flow rate 0, ml/minute, detector Vis46 nm, and injection volume 80 μl. System suitability tests suggest that separation condition is suitable to analyze PGV s concentration in blood. The recomended method up to standard selectivity, linearity (corelation coefficient = 0,9999), accuracy, and precision. Value of LOD and LOQ is 4,93 ng/ml and 6,42 ng/ml, respectively. PGV in blood is stable for the first hour. In acetonitrile at room temperature, PGV is stable for 3 hours while storage at C, PGV is stable for 3 days. Therefore, the recomended analytic method is applicable to determine PGV s concentration in blood. Keywords: PGV, Validation method, HPLC ABSTRAK Pentagamavunon (PGV) merupakan analog kurkumin yang telah terbukti berkhasiat sebagai antioksidan, antiinflamasi, dan mempunyai aktivitas antiproliferasi terhadap sel kanker payudara. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan dan memvalidasi metode penetapan kadar PGV dalam darah secara KCKT fase terbalik. Validasi metode analisis meliputi uji kesesuaian sistem, penentuan LOD dan LOQ, uji linearitas, penentuan akurasi dan presisi, uji stabilitas PGV dalam darah dan asetonitril. Kadar PGV dalam darah ditetapkan menggunakan KCKT dengan kondisi kolom LiChrosphere 00 Cartridge RP C8 (2 x 4 mm i.d., μm), fase gerak campuran metanol : bufer asetat 0,0 M ph 3, (80: v/v), kecepatan alir 0, ml/menit, detektor Vis46 nm, dan volume injeksi 80 μl. Uji kesesuaian sistem menunjukkan bahwa kondisi pemisahan sesuai untuk analisis PGV dalam darah. Metode yang diusulkan memenuhi syarat selektivitas, linieritas (r hitung = 0,9999), akurasi dan presisi. Nilai batas deteksi dan kuantitasi yang didapat masingmasing sebesar 4,93 ng/ml dan 6,42 ng/ml. PGV dalam darah stabil hingga jam pertama. Dalam asetonitril pada penyimpanan suhu kamar, PGV stabil selama 3 jam sedangkan pada penyimpanan suhu C, PGV stabil selama 3 hari. Dengan demikian, metode analisis yang diusulkan dapat diaplikasikan untuk menetapkan kadar PGV dalam darah. Kata kunci: PGV, validasi metode, KCKT 3

2 Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 3 Januari 09: 3 4 PENDAHULUAN Penelitian mengenai kurkumin dan senyawa analognya terus ditingkatkan dalam rangka penemuan dan pengembangan obat baru. Pengembangan obat baru dilakukan untuk menggantikan obatobat lama yang memiliki efikasi rendah atau memberikan efek samping yang merugikan. Oleh karena itu, banyak dilakukan penelitianpenelitian yang mendukung penemuan obat baru serta ujiuji baik praklinik maupun klinik. Struktur kurkumin dimodifikasi menjadi beberapa analog dengan tetap mempertahankan aktivitas antiinflamasinya, salah satu diantaranya adalah pentagamavunon [2,bis(4'hidroksi 3','dimetilbenzilidin)siklopentanon atau PGV]. Senyawa ini memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi yang lebih poten dibanding kurkumin meskipun lebih rendah dibanding aspirin dan indometasin (). Aktivitas antiinflamasi tersebut melalui penghambatan biosintesis prostaglandin jalur siklooksigenase (2). Efek farmakologi lain yang dimiliki PGV adalah sebagai antioksidan (3) dan aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker payudara (4). Telah banyak penelitian yang dilakukan untuk mengetahui aktivitas farmakologis PGV. Senyawa ini merupakan senyawa baru yang diharapkan dikemudian hari bisa dikembangkan menjadi obat baru. Hingga saat ini belum pernah dilakukan penelitian mengenai metode penetapan kadar PGV dalam darah. METODOLOGI PENELITIAN Bahan Bahan penelitian yang digunakan yaitu senyawa PGV (Laboratorium Molekul Nasional UGM, Yogyakarta) memiliki jarak lebur o C dan Rf 0,83 pada sistem KLT yang menggunakan fase diam silika gel GF 24 dengan fase gerak campuran etil asetat : CCl 4 (:), Heparin (Leo, Denmark), natrium asetat, asam asetat, metanol dan asetonitril (pro HPLC, Merck, Damstradt, Germany), dan aquabidestilata steril (PT. Ikapharmindo Putramas, Indonesia). Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain alat pemusing (Kokusan H00 BC, Tokyo), vortex (CAT.M. Zippear GmbH.Etzenbach, W. Germany), neraca analitik elektrik (Chyo Jupiter C300 MD), alatalat gelas, ph meter tipe PHM82 (Radiometer, Copenhagen), penyaring bufer dengan pori 0,4 μm, seperangkat HPLC Prominence (Shimadzu) yang terdiri dari LC Solution software, LC Workstation manual injector, system controller CBMA/A lite Prominence, solvent delivery module LCAD Prominence, detektor UV Vis SPDA/SPDAV Prominence dan injektor syringe perfection 00 μl.kolom HPLC LiChrosphere 00 LCCatridge Reverse Phase C 8 (Merck, Germany) dengan panjang kolom 2 mm, diameter dalam kolom 4 mm, dan ukuran partikel kolom μm, micro tube (Brand), bluetip dan yellowtip (Brand), pipet mikro Transferpette (Brand), dan almari pendingin. Cara kerja Scanning λ (panjang gelombang) maksimum PGV: Scanning λ maksimum larutan PGV kadar 0 μg/ml kemudian dilakukan menggunakan spektrofotometer Genesis 0 pada λ 3040 nm. 36

3 Validasi Metode Penetapan Kadar PGV Dalam Darah Secara KCKT Uji kesesuaian sistem: Larutan PGV dalam fase gerak dengan konsentrasi 00 μg/ml diambil μl, dimasukkan dalam 0 μl darah sehingga diperoleh kadar 0 μg/ml PGV dalam darah, divortex selama 30 detik, kemudian ditambah 600 μl asetonitril, dan divortex kembali selama menit. Campuran yang diperoleh disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm pada suhu 4ºC selama 0 menit kemudian ambil supernatan. Supernatan diinjeksikan dalam sistem KCKT sebanyak 80 μl kemudian dirunning pada λ maksimum selama 0 menit, dilakukan lima replikasi. Uji kesesuaian sistem yang dilakukan meliputi penentuan waktu retensi, luas area puncak, tinggi puncak, capacity factor, tailling factor, number of theoritical plates, resolution dan dihitung ratarata dan simpangan baku relatif masingmasing parameter. Penentuan selektivitas: Penentuan selektivitas metode dilakukan dengan membandingkan kromatogram PGV dalam darah (spike ) dan blanko. Penentuan LOD dan LOQ: Dibuat larutan PGV dalam darah kadar 0,, 40, 80, dan 00 ng/ml. Supernatan didapat dengan cara kerja sesuai dengan poin b dan diinjeksikan 80 µl ke sistem KCKT. Selanjutnya dibuat regresi linear hubungan antara luas area kromatogram terhadap kadar PGV. LOD dan LOQ dihitung secara statistik melalui garis regresi linier. Penentuan linearitas: Dibuat larutan PGV dalam darah kadar 0,; 0,2; 0,4; 0,8; ; 0; ; 40; 80; dan 00 µg/ml. Supernatan diperoleh dengan cara kerja b dan 80 µl diinjeksikan ke sistem KCKT kemudian dibuat kurva persamaan garis lurus antara kadar PGV terhadap luas area kromatogram dan dihitung nilai koefisien korelasinya. Koefisien korelasi dapat diteria jika nilainya lebih besar atau sama dengan 0,999 (). Penentuan nilai perolehan kembali (recovery) dan kesalahan acak: Dibuat larutan PGV dalam darah kadar, 0, 80 ng/ml. Lakukan cara kerja b untuk mendapatkan supernatan kemudian diinjeksikan 80 μl dalam sistem KCKT. Kadar PGV masingmasing dihitung dengan menggunakan persamaan kurva baku PGV dalam darah kemudian dihitung kadar rataratanya, nilai recovery (perolehan kembali), dan kesalahan acak. Uji stabilitas PGV dalam darah: Dari larutan stok mg/ml dibuat larutan PGV 360 μg/ml dengan mengencerkan 360 μl larutan stok dengan 640 μl fase gerak. Darah tanpa perlakuan diambil sebanyak,8 ml kemudian tambahkan sebanyak 00 μl larutan PGV kadar 360 μg/ml sehingga diperoleh μg/ml PGV dalam darah lalu divorteks selama 30 detik dan diamkan pada suhu kamar. Ambil 0 μl campuran darah dan larutan PGV pada jam ke0,, dan 2, masingmasing 3 tabung. Supernatan diperoleh sesuai cara kerja poin b dan diinjeksikan ke KCKT sebanyak 80 μl. Kadar PGV dihitung menggunakan persamaan kurva baku dalam darah dan dianalisis persentase obat yang terdegradasi. Uji stabilitas PGV dalam asetonitril: Uji stabilitas dalam asetonitril dilakukan dalam suhu kamar ( C) dan pada suhu penyimpanan ( 0 C). Dari larutan stok mg/ml PGV diencerkan dengan asetonitril hingga diperoleh kadar μg/ml 3

4 Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 3 Januari 09: 3 4 kemudian disimpan sampai waktu pengujian. Pengujian dilakukan pada jam ke0,, 2, 3 untuk penyimpanan pada suhu kamar, serta pada hari ke 0,, 2, 3 untuk penyimpanan pada suhu 0 C. Pengujian dilakukan dengan menginjeksikan 80 μl larutan dalam sistem KCKT dan masingmasing dilakukan replikasi sebanyak 3 kali. Kadar PGV diperoleh dengan menggunakan persamaan kurva baku PGV dalam asetonitril dan dihitung persentase obat yang terdegradasi. Penetapan kadar PGV dalam darah: Tikus putih jantan Wistar diberi PGV secara intravena dengan dosis mg/kgbb selanjutnya darah di sampling melalui vena lateralis ekor tikus pada menit ke2,, 0,,, 30, 60,, 240, dan 360. Darah ditampung dalam microtube yang berisi heparin. Sampel 0 µl ditambah asetonitril 6 µl lalu divortex selama menit. Campuran tersebut kemudian disentrifuge selama 0 menit dengan kecepatan 3000 rpm pada suhu 4 C. Supernatan diambil kemudian disuntikkan ke dalam sistem KCKT 80 µl. HASIL DAN PEMBAHASAN Scanning panjang gelombang (λ) maksimum Hasil scanning panjang gelombang maksimum PGV dalam fase gerak (campuran bufer asetat ph 3, : metanol (:80) menggunakan spektrofotometer Genesis 0 pada panjang gelombang 3040 nm menunjukan bahwa PGV memiliki serapan maksimum pada 46 nm sehingga pembacaan serapan PGV dilakukan pada panjang gelombang 46 nm. Pengukuran kadar PGV harus dilakukan pada panjang gelombamg maksimal (λmaks) karena pada panjang gelombang maksimal akan memberikan kepekaan (sensitivitas) yang tinggi dan kesalahan paling kecil. Uji kesesuaian sistem Uji kesesuaian sistem perlu dilakukan sebelum suatu sistem analisis digunakan dengan tujuan untuk memastikan keefektifan sistem operasional akhir. Pengujian ini didasarkan pada suatu konsep bahwa elektronik, peralatan, zat uji, dan kondisi operasional analisis membentuk satu sistem analitik tunggal yang dapat diuji fungsinya secara keseluruhan (6). Hasil uji kesesuaian sistem yang dapat dilihat pada tabel menunjukkan bahwa parameterparameter yang diukur memenuhi kriteria untuk dapat diterima menurut Yuwono & Indrayanto () yaitu nilai simpangan baku relatif dari waktu retensi kurang dari atau sama dengan % (untuk n = ), k (capacity factor) > 2, Tf (tailling factor) < 2, N (number of theoritical plates > 00 dan Rs (resolusi) > 2 sehingga sistem kromatografi yang digunakan dalam penetapkan kadar PGV dalam darah dapat menghasilkan data dengan kualitas yang dapat diterima. Hasil yang didapat dari lima penyuntikkan tersebut menunjukkan bahwa puncak PGV selalu muncul pada waktu retensi (t R ) di sekitar menit ke8,39 dengan CV 0,29% sehingga puncak yang muncul disekitar menit ke8,39 ditetapkan sebagai puncak PGV. Penentuan selektivitas Pada penetapan kadar obat dalam cuplikan hayati, selektivitas metode menempati prioritas utama karena harus dapat membedakan obat yang dimaksud dari metabolitnya, obat lain, maupun kandungan endogen cairan hayati. Penentuan selektivitas dilakukan dengan membandingkan kromatogram darah blanko (gambar I) dan kromatogram darah yang dispike 38

5 Validasi Metode Penetapan Kadar PGV Dalam Darah Secara KCKT PGV (gambar 2). Pada kromatogram blangko tidak muncul puncak disekitar waktu retensi 8,39 menit yang berarti tidak ada gangguan serapan dari senyawa endogen dalam darah terhadap puncak dari PGV sedangkan pada kromatogram PGV darah spike dan dalam darah sampel muncul puncak disekitar waktu retensi PGV, yaitu 8,39 menit. Hal ini menunjukkan bahwa metode analisis memenuhi syarat selektivitas. Kadar PGV (μg/ml) t R (menit) Tabel Data uji kesesuaian sistem Luas area Tinggi puncak k' Tf N Rs 8,39 8,388 8,366 8,394 8, ,86 2,9 2,80 2,8 3 2,9 0 2,88 6,38,3,34,33 9, 4, , ,6 9034,6 9396,90 982, ,30 4 3,0 3,699 3, 3,99 3,882 Ratarata 8, ,8 3440, 2 3,80 SD 0,024 88, 22, 0, 0, 3,6 0, 6 CV (%) 0,29,62 6,3 2,84 6,36 3,8,9 Gambar. Kromatogram darah blanko 39

6 Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 3 Januari 09: 3 4 Gambar 2. Kromatogram PGV kadar 00 ng/ml dalam darah (spike) Keterangan untuk gambar dan 2: Analisis dilakukan dengan HPLC Prominence (Shimadzu) Kolom HPLC LiChrosphere 00 LCCatridge Reversed Phase C 8 (Merck, Germany) dengan panjang kolom 2 mm, diameter dalam kolom 4 mm, dan ukuran partikel kolom μm Fase gerak metanol : bufer asetat 0,0 M ph 3, (80: v/v) Kecepatan alir fase gerak 0, ml/menit Detektor Vis46 nm Minimum area detection: count AUFS: 0,0 Volume injeksi: 80 μl Penentuan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) LOD dan LOQ merupakan parameter sensitivitas suatu metode. Semakin kecil nilai LOD dan LOQ menunjukkan semakin sensitifnya suatu metode. LOD menunjukkan kadar PGV terkecil yang dapat dideteksi dalam sampel dan masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blangko dengan nilai S/N = 3. Nilai LOQ menunjukkan kadar PGV terendah yang masih dapat memenuhi persyaratan cermat dan seksama dan ditandai dengan nilai S/N = 0. Namun pada penelitian ini, nilai LOD dan LOQ dianalisis secara statistik melalui garis regresi linier kurva baku PGV. Sensitivitas metode ini terlihat dari perolehan nilai LOD = 4,93 ng/ml dan LOQ = 6,42 ng/mg. Menentukan linieritas Linieritas metode analisis merupakan kemampuan untuk memberikan hasil uji yang proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel baik secara langsung maupun dengan bantuan transformasi matematika tertentu (6). Data konsentrasi PGV dan luas area kromatogramnya dapat dilihat pada tabel 2. Dari plot antara kadar PGV (x) dengan luas puncak (y) diperoleh persamaan regresi linier y =,9x 0,04 (gambar 3) dan koefisien korelasi (r hitung ) = 0,9999. Nilai r hitung yang sudah mencapai 0,999 dapat digunakan sebagai parameter linieritas tanpa harus disertai pembuktian linieritas dengan parameter yang lain misalnya V xo, X p, Mandeltest, pengujian linieritas dengan ANAVA (). 40

7 Luas area kromatogram PGV (x0 ) Validasi Metode Penetapan Kadar PGV Dalam Darah Secara KCKT Berdasarkan nilai r hitung yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa metode analisis yang digunakan memenuhi syarat linieritas. Tabel 2 Luas area kromatogram untuk penentuan linearitas PGV Kadar (μg/ml) luas area (x0 ) 0 0,02 0,04 0,03 0,08 0,08 0, 0,09 0,2 0,8 0,4 0,36 0,8 0,9,2 0,33 22,30 Penentuan akurasi dan presisi metode Akurasi atau kecermatan merupakan parameter untuk menunjukkan derajat kedekatan hasil analisis dengan kadar analit sebenarnya. Akurasi dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (% recovery) analit. Akurasi hasil analisis sangat tergantung pada sebaran kesalahan sistematik dalam keseluruhan tahapan metode analisis. Menurut Lindholm () dalam pengukuran persen recovery untuk bioanalisis, nilai ratarata persen recovery yang diperbolehkan adalah 8 %. Presisi atau keseksamaan diperlukan untuk menunjukkan derajat kesesuaian antar hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil individual dari nilai ratarata jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampelsampel yang diambil dari campuran homogen. Presisi diukur sebagai simpangan baku atau simpangan baku relatif (koefisien variasi) dan dapat dinyatakan sebagai keterulangan (repeatability) atau ketertiruan (reproducibility). Penelitian ini hanya menetapkan keterulangan saja sebagai parameter presisinya. Keterulangan merupakan keseksamaan metode jika dilakukan berulang kali oleh analis sama pada kondisi sama dalam interval waktu pendek. Untuk bioanalisis syarat nilai koefisien variasi (CV) yang diijinkan maksimal % (). 2 y =,9x 0,03 r = Kadar PGV dalam darah (μg/ml) Gambar 3. Kurva hubungan luas area kromatogram versus kadar PGV dalam darah pada penentuan linieritas 4

8 Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 3 Januari 09: 3 4 Hasil perhitungan menunjukkan bahwa seluruh hasil uji akurasi memiliki nilai perolehan kembali diantara 8% hingga % dan semua pengujian presisi memberikan nilai koefisien variasi kurang dari %, sehingga dapat disimpulkan bahwa metode pengukuran PGV ini telah memenuhi syarat akurat dan teliti. Data dan hasil penentuan akurasi dan presisi metode dinyatakan dalam tabel 3. Tabel 3 Nilai akurasi dan presisi pengukuran kadar PGV dalam darah Kadar PGV diketahui (ng/ml darah) Kadar PGV terukur (ng/ml darah) 8,40 22,23 2, 0 46,8 38, 4, 80 3,8 9,80,0 Penentuan stabilitas PGV dalam darah Stabilitas obat dalam cairan biologis merupakan fungsi dari kondisi penyimpanan, sifat kimia obat, komponen cairan biologis, dan sistem wadah. Stabilitas PGV dalam matriks darah pada penilitian ini harus dievaluasi untuk membuktikan bahwa tidak terjadi degradasi diantara waktu pengambilan sampel sampai dilakukan penambahan asetonitril ke dalam darah. Waktu (jam) 0 2 Recovery (%) 92,00, 08, 92,36,02 9, 9,48 99, 96,04 Ratarata ± SD CV (%) 03,8±0,34 9,96 88,30 ± 9,89, 96,04 ± 4, 4,3 Hasil uji stabilitas PGV dalam darah pada jam ke dan 2 dinyatakan sebagai persen degradasi terhadap kadar awal. Dari data yang disajikan pada tabel 4 terlihat bahwa PGV dalam darah masih stabil sampai jam pertama dan mengalami degradasi,0 4,8% pada jam kedua sehingga preparasi sampel harus dilakukan sebelum mencapai jam kedua setelah pengambilan. Tabel 4 Hasil penentuan stabilitas PGV dalam darah pada suhu kamar Kadar PGV diketahui (μg/ml darah) Luas area (x0 ) 2,24 28,9 2,32 2,30 28, 2,4 24,82 23,24 22, Kadar PGV terukur (μg/ml darah) 9, 2,6 9,23,68 2,3,8 8,86, 6,93 Degrada si (%),92,6, Ratarata ± SD (%),0 4,8 42

9 Validasi Metode Penetapan Kadar PGV Dalam Darah Secara KCKT Penentuan stabilitas PGV dalam asetonitril Penentuan stabilitas PGV dalam asetonitril dilakukan dalam dua kondisi penyimpanan yaitu pada suhu kamar (2 30 C) dan suhu C. Hal ini dilakukan untuk memastikan bahwa tidak terjadi degradasi PGV pada kedua kondisi penyimpanan tersebut hingga dilakukan pengukuran kadar. Hasil uji stabilitas PGV dalam asetonitril yang tersaji pada tabel menunjukkan bahwa sampai jam ketiga pengujian kadar PGV masih stabil dan belum mengalami degradasi sehingga memungkinkan PGV dalam asetonitril disimpan pada suhu kamar selama tiga jam sebelum ditetapkan kadarnya menggunakan KCKT. Pengujian pada kondisi penyimpanan C menunjukkan bahwa PGV cukup stabil hingga hari ketiga pengujian (tabel 6). Hal ini dapat dilihat dari nilai persen degradasi yang kecil sehingga dalam kondisi penyimpanan ini memunginkan bila dilakukan penyimpanan PGV dalam asetonitril hingga hari ketiga sebelum ditetapkan kadarnya dalam KCKT. Penentuan kadar PGV dalam darah Kadar PGV dalam darah yang terdeteksi pada setiap waktu sampling lebih besar dari nilai LOQ. Hal tersebut menunjukkan bahwa kadar PGV dalam darah yang diperoleh dengan metode ini akurat dan presis. Berdasar hasil penelitian yang diperoleh, diketahui bahwa metode analisis yang diusulkan dapat digunakan untuk menetapkan kadar PGV dalam darah setelah pemberian PGV secara intravena pada tikus putih jantan Wistar dengan dosis mg/kgbb. Kurva hubungan kadar PGV dalam darah dan waktu sampling dapat dilihat pada gambar 4. Tabel Hasil penentuan stabilitas PGV dalam asetonitril pada suhu kamar Waktu (jam) Kadar PGV diketahui (μg/ml) Luas area (x0 6 ) 8,23 8,0,8 8,99 8,82 8, 8,9 8,99 8,9 9,0 9,02 8,9 Kadar PGV terukur (µg/ml) 8,8 8,49,90,,9 9,9,49,8,4,0,6,48 Degradasi (%) Ratarata ± SD (%) 43

10 Log kadar PGV dalam plasma darah (ng/ml) Jurnal Farmasi Indonesia Vol. 4 No. 3 Januari 09: 3 4 Waktu (hari) Tabel 6 Hasil penentuan stabilitas PGV dalam asetonitril pada suhu ºC Kadar PGV diketahui (μg/ml) Luas area (x0 6 ) 8,29 8,8 8,28 8,24 8,29 8,2 8,4 8,0 8,38 8,3 8, 8,29 Kadar PGV dalam darah (µg/ml) 2,83 2,3 2,80 2,0 2,82 2,69 22,29 2,2 22,06 2,9 22,39 2,82 Degradas i (%) 0, 0, 2, Ratarata ± SD (%) 0,09 0,08 0,2, Waktu (menit) Gambar 4. Kurva hubungan kadar PGV dalam darah dan waktu pada tikus putih setelah pemberian PGV secara intravena dosis mg/kgbb KESIMPULAN Uji kesesuaian sistem menunjukkan bahwa kondisi pemisahan sesuai untuk analisis PGV dalam darah. Metode yang diusulkan memenuhi syarat selektivitas, linieritas (r hitung = 0,9999), akurasi dan presisi. Nilai batas deteksi dan kuantitasi yang didapat masingmasing sebesar 4,93 ng/ml dan 6,42 ng/mg. PGV dalam darah stabil hingga jam pertama. Dalam asetonitril pada penyimpanan suhu kamar, PGV stabil selama 3 jam sedangkan pada penyimpanan suhu C, PGV stabil selama 3 hari. Dengan demikian, metode analisis yang diusulkan dapat diaplikasikan untuk menetapkan kadar PGV dalam darah. 44

11 Validasi Metode Penetapan Kadar PGV Dalam Darah Secara KCKT UCAPAN TERIMA KASIH Ucapan terima kasih disampaikan kepada Fakultas Farmasi UGM 0 yang telah membiayai penelitian ini. DAFTAR PUSTAKA. Sardjiman. Synthesis of some new series of curcumin analogues, antioxidative, antiinflammatory, antibacterial activities and qualitative structureactivity relationship (dissertation). Yogyakarta: Gadjah Mada University; Nurrochmad A. Penghambatan Biosintesis Prostaglandin Melalui Jalur Siklooksigenase oleh Siklovalon dan Tiga Senyawa Analognya (skripsi) Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada; Da i M. Pengaruh Gugus βdiketon Terhadap Daya Mereduksi Kurkumin dan Turunannya Pada Ion Ferri (skripsi) Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada; Melannisa R. Pengaruh PGV pada Sel Kanker Payudara T4D yang Diinduksi βestradiol: Kajian Antiploriferasi, Pemacuan Apoptosis, dan Antiangiogenesis (thesis). Yogyakarta: Program Pascasarjana Universitas Gadjah Mada; 04.. Yuwono M dan Indrayanto G. Validation of Chromatographic Methods of Analysis, Profiles of Drug Substances Excipiens and Related Methodology. Bandung: 0. p The United States Pharmacopeia TwentyEighth Revision and The National Formulary TwentyThird Edition, 2389, United State Pharmacopeial Convention, Rockville, 0.. Lindholm J. Development and Validation of HPLC Method for Analytical and Preparative Purposes (dissertation) Uppsala: Universitatis Upsaliensis; 04. 4