Tri Wijayanti, SKM, M.Sc. Instalasi Parasitologi Balai Litbang P2B2 Banjarnegara

Transkripsi

1 Tri Wijayanti, SKM, M.Sc Instalasi Parasitologi Balai Litbang P2B2 Banjarnegara

2

3 Epidemiologi Host Agent Environment

4 Diagnosis Ibu Hamil Penderita

5 +++ / - -- RDT (Serologis) Mikroskopis Gold standart

6 Asal SD Malaria ACD (Active Case Detection) PCD (Pasive Case Detection) MFS (Mass Fever Suvey) MS (Malariometric Survey) Surveilans Migrasi Contact Survey MBS (Mass Blood Survey)

7 Agent Malaria Parasit malaria adalah protozoa atau binatang bersel satu bergenus Plasmodium, hidup sebagai parasit pada sel darah merah. Parasit adalah suatu istilah, berkenan dengan cara mahluk hidup mendapatkan makanannya. Plasmodium memakan sel darah merah (hemoglobin sel darah merah) mengakibatkan induk semang/host (penderita) mengalami anemia. Taksonomi : tergolong Protozoa, genus Plasmodium, famili Plasmodiidae dari ordo coccidiidae. Semua protozoa yang tidak memiliki alat gerak khusus dan berkembangbiak dengan spora digolongkan dalam filum sporozoa, contohnya plasmodium.

8 Jenis jenis plasmodium P. falcifarum Malaria tropikana (malaria berat/malaria otak yang fatal) Gejala serangannya timbul berselang setiap dua hari (48 jam) sekali P. vivax Penyebab penyakit malaria tertiana Gejala serangannya timbul berselang setiap tiga hari P. malariae P. ovale Penyebab penyakit malaria kuartana Gejala serangannya timbul berselang setiap empat hari Penyebab penyakit limpa Plasmodium ini jarang di Indonesia, banyak dijumpai di Afrika dan pasifik barat P. knowlesi Morfologi mirip dengan P. vivax, P. falcifarum dan P. Malariae Penegakan diagnosis melalui PCR Reservoir : Macaca fasccicularis

9 Siklus hidup

10

11 Kriteria SD Berkualitas Baik Latar belakang lapang pandang (l.p) terlihat jernih. Pada setiap l.p mikroskop terdapat leukosit, Inti lekosit berwarna ungu, inti parasit merah sitoplasma biru. Warna merah, ungu, biru/abu-abu dan hitam harus kontras Bila SD diletakkan di atas koran, huruf di koran terbaca mudah.

12 Cara mencapai kualitas SD yang memenuhi standar teknis? Sediaan darah harus bersih Volume darah yang diambil harus cukup (0,5 mm) /2-3 tts Ketebalan SD harus baik (leukosit per l.p) Darah tidak boleh terfiksasi Proses hemolisa harus berlangsung sempurna. Proses hemolisa tidak sempurna

13 Faktor-faktor yang menentukan mutu SD 1. Kualitas dan kebersihan KS 2. Pengambilan darah dilakukan di tempat yang aman, terbebas dari pengaruh debu, lalat dan sinar matahari langsung 3. Biarkan kering oleh udara 4. Amankan SD sebelum diwarnai 5. Pewarnaan 24 jam hasil baik 6. Cara pembuatan SD

14

15 1. Pegang tangan kiri pasien dengan posisi telapak tangan menghadap ke atas 2. Pilih jari tengah atau jari manis (pada bayi usia 6-12 bln darah diambil dari ujung ibu jari kaki dan bayi < 6 bln darah diambil dari tumit) 3. Bersihkan jari dengan kapas beralkohol untuk menghilangkan kotoran dan minyak yang menempel pada jari tsb

16 4. Setelah kering, jari ditekan agar darah terkumpul di ujung jari 5. Tusuk bagian ujung jari (agak pinggir, dekat kuku) secara cepat dengan menggunakan lancet 6. Tetes darah pertama yang keluar dibersihkan dengan kapas kering, untuk menghilangkan bekuan darah dan sisa alkohol

17 7. Tekan kembali ujung jari sampai darah keluar, ambil object glass bersih (pegang object glass di bagian tepinya). Posisi object glass berada di bawah jari tersebut 8. Teteskan 1 tetes darah bagian tengah object glass untuk SD tipis. Selanjutnya 2-3 tetes darah yang lebih besar untuk SD tebal 9. Bersihkan sisa darah di ujung jari dengan kapas

18 10. Letakkan object glass yang berisi tetesan darah di atas meja yang rata 11. Untuk membuat SD tipis, ambil object glass baru. Tempelkan ujungnya pada tetes darah kecil sampai darah tersebut menyebar sepanjang sisi object glass 12. Dengan sudut 45 o geser object glass dgn cepat ke arah yang berlawanan dengan tetes darah tebal, shg di dapatkan sediaan hapus (bentuk lidah)

19 13. Untuk SD tebal ujung object glass kedua ditempelkan pada ke tiga tetes darah tebal. Darah dibuat homogen dgn cara memutar ujung object glass searah jarum jam, shg membentuk bulatan diameter 1 cm

20 14. Pemberian label/etiket dilakukan pada bagian pangkal SD tipis yang sudah kering dengan pinsil. Tulis nama, nomor dan tanggal pembuatan

21 Penulisan etiket Etiket dapat dibuat dari kertas label Penulisan etiket dengan menggunakan pinsil biasa dan ditulis dengan jelas Etiket meliputi kode tempat, tanggal/tahun pembuatan SD, serta nomor SD (nomor pasien). Nomor SD terkecil terletak paling dekat dengan etiket. Kode pada etiket harus sama dengan pencatatan pada buku/formulir pengambilan darah (MS, PCD, ACD). Contoh : Etiket pada pengambilan SD kegiatan MS Kode desa/lokasi kegiatan (misal Desa Air Raya) diberi kode AR; = nomor urut SD diambil = tanggal pembuatan SD No kecil yang dekat dengan etiket AR

22 PEWARNAAN SEDIAAN DARAH MALARIA

23 Pewarnaan cepat Pewarnaanlambat

24 Cara pewarnaan SD yang baik Pewarnaan individu atau pewarnaan cepat. Pewarnaan individu yang dimaksud disini adalah pewarnaan pada sediaan darah pasien yang hasil diagnosanya dapat segera diketahui karena berkepentingan dengan pengobatan yang akan diberikan. Biasanya pewarnaan pada SD hasil PCD di Rumah Sakit, Puskesmas atau Pustu, atau SD pada penderita yang dirawat di Puskesmas perawatan, atau di Rumah Sakit yang bukan SD untuk kepentingan data follow-up.

25 SD diletakkan pada rak pewarnaan atau di tempat datar dan perhatikan darah harus berada di bagian atas. Giemsa diencerkan sesuai dengan takaran lalu kocok sampai larutan homogen Stok Giemsa 2 tetes + pengencer 1 cc (konsentrasi Giemsa 10 %) untuk pewarnaan dengan waktu pewarnaan menit, atau Stok Giemsa 3 tetes + pengencer 1cc (konsentrasi Giemsa 15 %) untuk pewarnaan dengan waktu pewarnaan menit.

26 Larutan Giemsa diteteskan atau dituang sampai menutupi seluruh permukaan SD. Selama proses pewarnaan berlangsung, larutan Giemsa harus tetap menutupi permukaan SD. Perlu dicatat waktu dimulainya pewarnaan, pada awal menuangkan larutan Giemsa sudah mulai dipasang timer bell. Larutan giemsa

27 GIEMSA KEMBALI

28 Bila waktu pewarnaan sudah cukup, slide yang ada sediaan darahnya diangkat dan dibilas dengan air yang mengalir sampai semua endapan elemen-elemen zat warna terlepas dari SD. Hati-hati melakukan pembilasan, supaya SD tidak lepas. SD dikeringkan untuk siap diperiksa. Zat warna yang ada pada SD tidak dituang lebih dahulu sebelum dibilas, agar SD tidak kotor karena zat warna yang melekat pada SD itu.

29 Cara pewarnaan massal (lambat) Pewarnaan masal dilakukan untuk SD hasil penelitian khusus di lapangan atau SD hasil malariometrik survei yang jumlahnya banyak. peralatan dan bahan-bahan yang diperlukan untuk pewarnaan perlu dipersiapkan. jumlah SD yang akan diwarnai secara masal dihitung menghitung kebutuhan volume (cc) larutan Giemsa 5 % yang harus dibuat dengan ketentuan 1 cc larutan untuk satu kaca sediaan (1 cc larutan dapat menutupi seluruh permukaan kaca sediaan).

30 Kaca benda (slide) disusun satu persatu pada rak pewarnaan atau tempat yang datar dan darah harus berada di bagian atas. Kaca benda satu dengan lainnya tidak bersentuhan, agar larutan giemsa tidak meleleh waktu dituangkan ke atas kaca benda. Membuat larutan Giemsa 5 % sebanyak yang dibutuhkan.dan dilarutkan sampai homogen. Mencatat waktu dimulainya pewarnaan atau pasang timer bell. Meneteskan larutan Giemsa dengan pipet tetes pada SD satu persatu secara teratur, dimulai dari satu arah dan berakhir pada arah yang lain. Penetesan harus dilakukan cepat dan larutan Giemsa harus menutupi seluruh permukaan darah.

31 Proses pewarnaan berlangsung selama 45 menit. Peralatan dan bahan-bahan pewarnaan yang tidak diperlukan lagi sudah dapat dibersihkan dan disimpan. Sesudah 45 menit, satu persatu SD itu dapat dibilas dengan cepat dimulai dari awal SD diwarnai. Bila pembilasan sudah bersih, tegakkan Kaca Sediaan yang ada SD nya itu di tempat yang bersih dan aman supaya kering. Bila semua SD sudah kering, SD dapat dibungkus supaya tidak tercemar debu selama menunggu pemeriksaan.

32 1. Giemsa 2. Rak pewarnaan 3. Bak pewarnaan 4. Gelas ukur (ukuran disesuaikan dengan jumlah SD yang diwarnai) 5. Pipet tetes 6. Timer bell 7. Buffer tablet untuk menetralkan ph air 8. Aquades 9. Kertas Whatman no. 2

33 Pemeriksaan sediaan darah tebal

34 Pemeriksaan sediaan darah tipis :

35

36 Faktor yang menentukan mutu pewarnaan SD 1. Kualitas zat pewarna Giemsa yang digunakan Stok Giemsa tidak tercemar air Zat-zat warna pada Giemsa, yaitu eosin, metilin biru dan metilin azur masih aktif Pengadaan Giemsa harus yang kualitasnya baik. Parasit malaria pada SD tebal akan dapat dilihat atau dikenal apabila bagian-bagian morfologi dari parasitnya bereaksi dengan zat-zat warna dari Giemsa.

37 2. Kualitas air pengencer Giemsa Air pengencer Giemsa harus jernih, tidak berbau dan tidak dicemari jamur, bakteri atau tumbuh-tumbuhan spora yang mirip dengan parasit. Derajat keasaman atau ph larutan Giemsa sangat mempengaruhi warna morfologi benda-benda/sel-sel pada SD. ph yang paling ideal adalah 7,2.

38 3. Kepekatan Larutan Giemsa Pewarnaan SD malaria merupakan proses osmose yang membutuhkan kepekatan tertentu dari larutan Giemsa. Pada konsentrasi zat warna dan waktu tertentu yang dibutuhkan untuk proses pewarnaan, zat warna giemsa akan mewarnai secara optimal sehingga SD dapat terwarnai dan memenuhi standar teknis.

39 4. Lamanya reaksi pewarnaan SD tebal terdiri dari tumpukan sel darah merah yang melekat pada kaca benda. SD positip mengandung parasit malaria yang ada di dalam sel darah merah. Untuk dapat menemukan parasit dalam SD tersebut, dibutuhkan waktu tertentu pada proses pewarnaan agar semua parasit yang ada pada SD dapat menerima zat warna.

40 5. Kualitas Pembuatan SD Ketebalan SD kerekatan (fiksasi) SD. Semakin berat fiksasi akan semakin sukar bagi larutan Giemsa menerobos plasma darah untuk mencapai sel darah merah. Fiksasi yang berat, selain menghambat pewarnaan juga menghambat proses hemolisa.

41 6. Kebersihan Sediaan Darah Elemen-elemen/butir-butir zat warna yang mengendap dan golden scum yang mengambang di permukaan pada akhir pewarnaan perlu diupayakan untuk tidak tertinggal pada SD dan mengotorinya. Pada akhir pewarnaan, larutan Giemsa agar dapat dibilas atau diguyur dengan air bersih yang mengalir, tidak dibenarkan membuang larutan Giemsa terlebih dahulu sebelum dibilas. Hal ini sangat penting untuk mendapatkan kualitas pewarnaan yang memenuhi standar teknis yang dapat mempermudah pemeriksaan karena SD bersih.

42 Pedoman Pemakaian Giemsa dan dasar perhitungan kebutuhannya Untuk mendapatkan hasil yang optimal pada pewarnaan sediaan darah (SD), maka : 1. Giemsa stok perlu diencerkan dengan aquadest atau air buffer atau air 2. Pengenceran Giemsa sebanyak yang dibutuhkan saja, bila berlebihan terpaksa dibuang, karena berkenaan dengan sifat-sifat giemsa. 3. Pengambilan stok Giemsa dari botolnya perlu menggunakan pipet khusus agar stok Giemsa tidak tercemar air. 4. Untuk keperluan sehari-hari, perlu dipisahkan Giemsa di botol tetes atau botol kecil dari stok.

43 6. Pewarnaan lambat dengan memakai zat warna Giemsa dapat memberikan hasil yang lebih baik (konsentrasi giemsa 5 %). 7. Dasar perhitungan kebutuhan giemsa dan takaran pemakaiannya. 1 cc = 20 tetes. seluruh permukaan 1 (satu) slide (kaca benda) dapat ditutupi cairan sebanyak 1 cc berdasarkan perhitungan ini, dapat dihitung banyak Giemsa konsentrasi 5 % yang harus dibuat sesuai dengan kebutuhan, terutama bila melakukan pewarnaan masal pada kegiatan MS.

44 8. Takaran Pewarnaan Untuk melakukan pewarnaan individual pada kegiatan passive case detection (PCD). Stok Giemsa 2 tetes + pengencer 1 cc (Giemsa 10 %) dengan lama pewarnaan menit, atau stok Giemsa 3 tetes + pengencer 1cc (Giemsa 15 %) dengan lama pewarnaan menit. Untuk melakukan pewarnaan pada kegiatan ACD atau MS. Stok Giemsa 1 tetes + pengencer 1 cc (20 tetes), (pengenceran Giemsa 5 %) dengan lama pewarnaan menit. 9. Mengguyur pada akhir pewarnaan SD sangat penting, agar endapan zat warna tidak tertinggal pada SD. 10. Dapat digunakan pengencer yang mempunyai ph 6,8 7,2, yang paling ideal ph 7,2

45 Cara menguji giemsa Ada dua cara menguji mutu Giemsa, untuk mengetahui apakah stok Giemsa yang akan digunakan masih baik : 1. Lakukan pewarnaan pada 1 2 SD; lalu periksa di mikroskop. Kalau hasilnya sesuai dengan kriteria yang ada, berarti Giemsa dan air pengencernya masih baik. Pengujian seperti ini perlu dilakukan setiap kali akan melakukan pewarnaan masal.

46 2. Lakukan test menggunakan kertas Whatman no. 2 dan metil alkohol Letakkan kertas saring di atas gelas atau petri disk supaya bagian tengah kertas tidak menyentuh sesuatu. Teteskan 1 2 tetes stok Giemsa pada kertas saring. Tunggu sampai meresap dan melebar. Kemudian teteskan 3 4 tetes metil alkohol absolut di pertengahan bulatan Giemsa satu persatu dengan jarak waktu beberapa detik sampai garis tengah Giemsa menjadi 5 7 cm.

47 Maka akan terbentuk: lingkaran biru (metilin biru) di tengah, lingkaran cincin ungu (metilin azur) di luarnya serta lingkaran tipis warna merah (eosin) di pinggir sekali. Giemsa sudah rusak dan tidak boleh dipakai lagi, bila warna ungu atau merah tidak terbentuk.

48 Benda-benda/sel-sel yang mungkin ditemukan pd pemeriksaan SD tebal dengan pewarnaan Giemsa

49 c. Sel darah pembeku d. Sel darah putih

50 Bakteri Jamur Sel sayuran

51 Spora tumbuh-tumbuhan Benda-benda asing lainnya

52

53 Waktu dan jumlah Alat Bahan, Pewarnaan SD Bentuk SD Perbedaan SDJ Malaria dan Filaria

54 1. Malam hari 2.Endemisitas : min 300 orang per lokasi (2 lks) 1. Kepadatan : mikrokapiler 2. Hemolisa dan fiksasi Sediaan darah tebal : oval atau 3 garis sejajar

55

56 HEMOLISA DAN FIKSASI Hemolisa adalah pecahnya sel darah merah yang membantu berlangsungnya proses pewarnaan. Fiksasi adalah perekatan sel-sel darah akibat terkena alkohol/uapnya atau proses pemanasan. Fiksasi dapat menyebabkan zat warna sulit menembus sel darah merah, sehingga menghambat proses pewarnaan.

57 PEWARNAAN dan PEMERIKSAAN SEDIAAN DARAH FILARIA

58 1. Giemsa 2. Rak pewarnaan 3. Bak pewarnaan 4. Gelas ukur (ukuran disesuaikan dengan jumlah SD yang diwarnai) 5. Pipet tetes 6. Timer bell 7. Buffer tablet untuk menetralkan ph air 8. Aquades 9. Kertas Whatman no Metanol

59 Menggenangi SD dengan air bersih selama 5 menit Bilas perlahan dengan air mengalir (kecil) dan dikeringkan Fiksasi dengan methanol 1-2 menit dan dikeringkan Dicat dengan Giemsa 10% selama 8-10 menit pada suhu ruang Mengalirkan perlahan air bersih/aquadest pada permukaan SD, sehingga sisa pewarna Giemsa larut Keringkan dan disimpan pada box slide, siap untuk diperiksa

60

61