JST Kesehatan, April 2016, Vol.6 No.2 : ISSN

Transkripsi

1 JST Kesehatan, April 2016, Vol.6 No.2 : ISSN UJI EFEK IMUNOSTIMULAN KOMBINASI EKSTRAK MAHKOTA BUNGA KASUMBA TURATE (Carthamus tinctorius L.) DAN EKSTRAK UMBI BAWANG DAYAK (Eleutherine palmifolia) PADA MENCIT (Mus musculus) Immunostimulant Effect Combination Syrup of Carthamus tinctorius L. and Eleutherine Palmifolia Extracts on Mice (Mus musculus) Yuri Pratiwi Utami, Aliyah, Rahmawati Syukur Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin Makassar ( yuri_pratiwi@yahoo.co.id) ABSTRAK Telah dilakukan penelitian uji efek imunomodulator kombinasi ekstrak mahkota bunga kasumba turate dan ekstrak umbi bawang dayak pada mencit. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan kombinasi ekstrak mahkota bunga kasumba turate dan ekstrak umbi bawang dayak sebagai imunomodulator terhadap mencit. Penelitian ini bersifat eksperimental. Jumlah mencit yang digunakan pada penelitian ini adalah 21 ekor dan dibagi secara acak menjadi 7 kelompok, masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor. Kelompok pertama (K1) Ekstrak mahkota bunga kasumba turate 1% b/v, kelompok kedua (K2) Ekstrak umbi bawang dayak 2% b/v, kelompok ketiga (K3) Ekstrak umbi bawang dayak 4% b/v, kelompok keempat (K4) Kombinasi ekstrak mahkota bunga kasumba turate 1% b/v dan ekstrak umbi bawang dayak 2% b/v, kelompok 5 (K5) Kombinasi ekstrak mahkota bunga kasumba turate 1% b/v dan ekstrak umbi bawang dayak 4% b/v, kelompok 6 (K6) kontrol positif diberi stimuno, dan kelompok 7 (K7) kontrol negatif diberi Na-CMC. Sebelum diberikan perlakuan, semua mencit dalam setiap kelompok perlakuan diimunisasi dengan sel darah merah domba (SDMD 2%) sebanyak 0,1 ml/10g BB mencit. Pengamatan aktivitas imunoglobulin M (IgM) dilakukan pada hari keenam dan imunoglobulin G (IgG) denga n menggunakan metode hemaglutinasi titer antibodi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa analisis statistik anova dan dilanjutkan dengan post hoc test uji beda nyata terkecil (BNT) duncan memperlihatkan bahwa pada tingkat kepercayaan 95% K4 (Kombinasi ekstrak mahkota bunga kasumba turate 1% b/v dan ekstrak umbi bawang dayak 2% b/v) signifikan terhadap K1, K2, K3, K5, dan K7 (P<0,005), tetapi K4 tidak mampu menyamai efek peningkatan IgM dan IgG pada K6 (stimuno). Hal ini menunjukkan bahwa kelompok 4 memiliki aktivitas imunostimulan yang lebih baik dari kelompok lain. Kata Kunci: Kasumba Turate, Bawang Dayak, Imunostimulan, IgG, IgM ABSTRACT A research about the immunomodulatory effects combination of Carthamus tinctorius L dan ethanol Eleutherine palmifolia extracts in mice (Mus musculus) has been carried out. This research aimed at investigating the capability of the combination of the Carthamus tinctorius L and the ethanol Eleutherine palmifolia extracts as an immunomodulator on the mice. This was an experimental research. The number of mice used in the research was 21 mice and they were randomly diveded into 7 groups. Each group comprised of 3 mice. Group 1 (K1) was given the Carthamus tinctorius L extract 1% w/v, group 2 (K2) was given the Eleutherine palmifolia extract 2% w/v, group 3 (K3) was given the Eleutherine palmifolia extract 4% w/v, group 4 (K4) was given combination of the Carthamus tinctorius L extract 1% w/v dan the Eleutherine palmifolia extract 2% w/v, group 5(K5) was given combination of the Carthamus tinctorius L extract 1% w/v dan the Eleutherine palmifolia extract 4% w/v, group 6 (K6) as the positive control was given the stimuno, and group 7 (K7) as the negative control was given Na-CMC. Before being given the treatment, all mice in each treatment group were immunized with the Sheep Red Blood Cells 2% as much as 0,1 ml/10g of mice body weight. The observation of immunoglobulin M (IgM) activity was conducted on sixth day and immunoglobulin G (IgG) activity was carried out on eleveb day using the hemagglutinating antibody titer (HAT). The result of the statistical analysis of anova and is countinued by Least Significant Difference test Duncan indicated that on significance level of 95%, K4 (the combination of the Carthamus tinctorius L extract 1% w/v and the Eleutherine palmifolia extract 2% w/v) is significant on K1, K2, K3, K5, and K7 (P<0,005), however, K 4 is not able to match the effect of the 179

2 Yuri Pratiwi Utami ISSN improvement of IgM and IgG on K6 (Stimuno). This indicates that group 4 possesse the better immunostimulant activity than other groups. Keywords: Carthamus Tinctorius L, Eleutherine palmifolia, Immunostimulant, IgM, IgG PENDAHULUAN Manusia sejak dilahirkan telah dilengkapi dengan sistem pertahanan tubuh yang spesifik maupun yang non spesifik. Dengan sistem pertahanan tubuh yang disebut sistem imun ini diharapkan manusia dapat menangkal berbagai bakteri, virus, jamur, dan zat-zat asing lain yang dapat menimbulkan berbagai gangguan penyakit (Tjokronegoro, 1990). Imunomodulator merupakan zat ataupun obat yang dapat mengembalikan ketidak-seimbangan sistem kekebalan yang terganggu dengan cara merangsang dan memperbaiki fungsi sistem kekebalan (Bratawidjaja, 2002). Tumbuhan obat yang bekerja pada sistem imunitas bukan hanya bekerja sebagai efektor yang langsung menghadapi penyebab penyakitnya, melainkan bekerja melalui pengaturan imunitas. Bahan-bahan yang bekerja demikian digolongkan sebagai imunomodulator. Jadi apabila kita mengobati penyakit yang disebabkan oleh infeksi mikroorganisme dengan imunomodulator, maka imunomodulator tersebut tidak akan menghadapi secara langsung mikroorganismenya, melainkan sistem imunitas akan di dorong untuk menghadapi melalui efektor sistem imunitas (Subowo, 1996). Mahkota bunga kasumba turate yang diseduh dengan air panas secara empiris telah digunakan sebagai obat campak. Penelitian yang dilakukan terhadap ekstrak etanol dari kasumba turate memberikan peningkatan aktivitas imunoglobulin G (IgG) (Manggau dkk, 2009), dan aktivitas imunoglobulin A (IgA) (Syukur & Usmar, 2008). Penelitian lain yang dilakukan oleh Syukur (2013), memperlihatkan bahwa ekstrak air kasumba turate memiliki efek sebagai imunostimulan pada konsentrasi 1%. Annisa (2012), juga telah menguji efek imunomodulator ekstrak etanol bawang dayak pada mencit. Hasilnya menunjukkan bahwa pada konsentrasi 2% dan 4% berpotensi sebagai imunostimulan, sedangkan konsentrasi 1% berbeda tidak nyata dengan kontrol negatif, yang berarti tidak berpotensi sebagai imunostimulan. Dari uraian di atas dapat dilihat adanya kesinergisan antara kasumba turate dan bawang dayak, namun selama ini pengujian kasumba turate dan bawang dayak masih merupakan pengujian dalam sediaan tunggal, oleh karena itu timbul pemikiran untuk mengkombinasi ekstrak bunga kasumba turate dan ekstrak umbi bawang dayak. Dengan mengkombinasi diharapkan memiliki efek imunostimulan yang lebih baik dari ekstrak bunga kasumba turate dan ekstrak umbi bawang dayak yang diuji secara tunggal atau sendiri-sendiri. Penelitian ini bertujuan mengetahui efek imunostimulan kombinasi ekstrak bunga kasumba turate dan ekstrak umbi bawang dayak pada mencit. BAHAN DAN METODE Bahan Bahan-bahan yang digunakan adalah air suling, alkohol 70%, ekstrak bunga kasumba turate ( Carthamus tinctorius L.), umbi bawang dayak (Eleutherine palmifolia), larutan PBS (Phosphate Buffered Saline), sel darah merah domba (SDMS), Na.CMC dan stimuno. Pengolahan Sampel Sampel terdiri atas ekstrak kasumba turate, bawang dayak, dan buah markisa. Ekstrak kasumba turate yang diperoleh dari hasil penelitian Rahmawati Syukur. Bawang dayak diperoleh dari Kabupaten Jeneponto, Sulawesi Selatan. Pembuatan ekstrak umbi bawang dayak umbi bawang dayak disortasi, dibersihkan dari tanah yang melekat pada kulitnya, dicuci dan dikupas kulitnya kemudian di iris-iris tipis dan dikeringkan, lalu diserbukkan menjadi serbuk kasar. Umbi yang telah diserbukkan diekstraksi secara maserasi dengan etanol 70% menggunakan sonikator selama 3 jam, kemudian disaring. Perlakuan ini diulang sebanyak 3 kali, filtratnya dikumpulkan lalu diuapkan dengan rotavapor hingga diperoleh ekstrak etanol bawang dayak yang kental. 180

3 Kasumba Turate, Bawang Dayak, Imunostimulan, IgG, IgM ISSN Rendamen ekstrak dihitung menggunakan rumus (Depkes RI, 1986) sebagai berikut: = 100% Uji Bebas Etanol Memasukkan sejumlah ekstrak kedalam tabung reaksi ditambahkan 1 ml asam asetat glasial, dan 1 ml asam sulfat pekat, menghomogenkan dan memanaskan, kemudian menutupi bagian atas tabung dengan kapas. Jika tidak tercium bau ester maka positif bebas etanol (Depkes RI, 1995). Pengujian Aktivitas IgM dan IgG Pada Hewan Uji Penyiapan Phosphat Buffred Saline (PBS) ph 7,4 terdiri dari larutan I yaitu natrium dihidrogen fosfat ditimbang sebanyak 0,8 g, larutan II yaitu dinatrium hidrogen fosfat ditimbang sebanyak 3,79 g, larutan III yaitu natrium klorida ditimbang sebanyak 2,2 g. Masing-masing larutan dilarutkan dalam 100 ml aquadest. Campur ketiga larutan tersebut dan ditambahkan aquadest sampai volumenya 500 ml (Depkes RI, 1979). Penyiapan Suspensi Sel Darah Merah Domba (SDMD) 2 % yaitu sebanyak 1 ml darah domba ditampung dalam tabung yang bersih dan telah dikeringkan yang berisi 1 mg EDTA yang berfungsi sebagai antikoagulan. Kemudian disentrifus pada kecepatan 1500 rpm untuk memisahkan sel darah merah domba (SDMD) dari plasmanya. Sel darah merah diambil dan dicuci dengan PBS dalam tabung, dikocok, kemudian disentrifus kembali. Pencucian dilakukan paling sedikit 3 kali. Setelah disentrifus, PBS dipisahkan sehingga yang tertinggal adalah SDMD 100%, lalu ditambahkan lagi PBS dengan jumlah yang sama hingga diperoleh suspensi SDMD 50%, kemudian diambil sebanyak 0,4 ml dan diencerkan dengan 9,6 ml PBS hingga diperoleh suspensi antigen dengan konsentrasi SDMD 2 % v/v (Kresno, 2004). Pemilihan hewan uji Hewan uji yang digunakan adalah mencit jantan ( Mus musculus) yang sehat dengan bobot badan antara g (Malole & Paramono, 1989). Penyiapan hewan uji Disiapkan 21 ekor mencit dan dibagi ke dalam 7 kelompok. Tiap kelompok terdiri atas 3 ekor mencit. Mencit tersebut diberikan perlakuan yaitu kelompok 1 yaitu pemberian ekstrak bunga kasumba turate 1%, kelompok 2 yaitu pemberian ekstrak umbi bawang dayak 2%, kelompok 3 yaitu pemberian ekstrak umbi bawang dayak 4%, kelompok 4 yaitu pemberian kombinasi ekstrak bunga kasumba turate 1 % dan ekstrak umbi bawang dayak 2%, kelompok 5 yaitu pemberian kombinasi ekstrak bunga kasumba turate 1 % dan ekstrak umbi bawang dayak 4%, kelompok 6 yaitu pemerian sirup stimuno sebagai kontrol positif, kelompok 7 yaitu pemerian Na.CMC sebagai kontrol negatif. Pemberian perlakuan pada hewan uji masingmasing kelompok yaitu kelompok 1, 2, 3, 4, 5, 6, dan 7. Mula-mula mencit diimunisasi secara intraperitoneal dengan SDMD 2 % sebanyak 1 ml untuk berat mencit 30 g. Selanjutnya masingmasing diberi perlakuan seperti di atas dengan volume 1 ml per 30 g bobot badan secara oral setiap hari selama 5 hari untuk pengamatan terhadap IgM dan 10 hari untuk IgG. Pada hari ke-6, darah mencit diambil secara intrakardiak untuk aktivitas IgM, dan pada hari ke-11, darah mencit jantan diambil untuk aktivitas IgG (Kresno, 2004). Cuplikan darah dibiarkan membeku/ menggumpal pada suhu kamar selama 2 jam, lalu disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit dan diambil serumnya (supernatan) (Kresno, 2004). Uji hemaglutinasi yaitu serum yang diperoleh lalu diencerkan secara double dilution dengan PBS dengan perbandingan 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, dan 1/512. Dari masingmasing perbandingan ini dipipet sebanyak 50 μl ke dalam 8 sumur piring mikrotiter (well plate 96) untuk setiap konsentrasi sirup, setelah itu ditambahkan 50 μl suspensi sel darah merah domba 2 % pada setiap sumur dan digoyanggoyang selama 5 menit agar homogen. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37ºC selama 60 menit dan didiamkan 24 jam pada suhu kamar. Setelah itu, dilakukan pengamatan pengenceran tertinggi dari setiap serum darah mencit yang masih dapat mengaglutinasi sel darah merah domba (Kresno, 2004). HASIL Hasil pengujian imunoglobulin M ( IgM) menunjukkan pada tingkat kepercayaan 95% 181

4 Yuri Pratiwi Utami ISSN kelompok 4 (kombinasi ekstrak bunga kasumba turate 1% dan ekstrak umbi bawang dayak 2%) signifikan terhadap kelompok 1, 2, 3, 5, dan 7 (P>0,005) (Tabel 1). Hasil pengujian imunoglobulin G (IgG) menunjukkan pada tingkat kepercayaan 95% kelompok 4 (kombinasi ekstrak bunga kasumba turate 1% dan ekstrak umbi bawang dayak 2%) signifikan terhadap kelompok 1, 2, 3, 5, dan 7 (P>0,005) (Tabel 2). Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada tingkat kepercayaan 95% kelompok 4 (kombinasi ekstrak bunga kasumba turate 1% dan ekstrak umbi bawang dayak 2%) signifikan terhadap kelompok 1, 2, 3, 5, dan 7 (P>0,005), tetapi kelompok 4 tidak mampu menyamai efek peningkatan IgM dan IgG pada kelompok 6 (stimuno) sebagai kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa kelompok 4 memiliki aktivitas imunostimulan yang lebih baik dari kelompok lain. PEMBAHASAN Penelitian ini menunjukkan efektivitas imunostimulan kombinasi ekstrak etanol mahkota bunga kasumba turate dan ekstrak umbi bawang dayak pada mencit jantan ( Mus musculus). Pengujian efek imunostimulan meliputi pengujian IgM dan IgG. Bunga kasumba turate dan umbi bawang dayak merupakan tanaman yang telah digunakan dalam pengobatan tradisional oleh masyarakat. Berdasarkan hasil uji pendahuluan yang telah dilakukan oleh Syukur (2013), diketahui ekstrak ekstrak bunga kasumba turate mengandung berbagai senyawa polisakarida, sehingga terbukti memiliki aktivitas imunomodulator. Sedangkan uji pendahuluan oleh Annisa (2014), diketahui ekstrak umbi bawang dayak mengandung senyawa flavanoid dan glikosida, sehingga diduga memiliki aktivitas imunomodulator. Menurut Wagner & Jursic (1991), terdapat dua kelas yang memiliki aktivitas imunostimulasi potensial. Kelas pertama terdiri dari senyawasenyawa alkaloid, terpenoid, kuinon, dan senyawa fenolik sederhana, sedangkan kelas kedua terdiri dari polisakarida, peptide, glikoprotein, dan nukleotida. Sampel umbi bawang dayak ini diambil di daerah Jeneponto, Sulawesi Selatan, kemudian dicuci bersih, dikeringkan, lalu diserbukkan. Ekstrak sampel disari dengan metode sonikasi menggunakan alat sonikator karena dapat mempermudah dan mempercepat beberapa langkah preparasi, seperti pelarutan. Tabel 1. Hasil Pengujian IgM Replikasi K1 K2 K3 K4 K5 K6 K7 I 1/64 1/64 1/128 1/256 1/32 1/512 1/4 II 1/64 1/64 1/64 1/256 1/64 1/512 1/4 III 1/64 1/64 1/128 1/256 1/64 1/512 1/4 Tabel 2. Hasil Pengujian IgG Replikasi K1 K2 K3 K4 K5 K6 K7 I 1/128 1/128 1/128 1/256 1/64 1/512 1/4 II 1/128 1/128 1/128 1/256 1/32 1/512 1/4 III 1/128 1/128 1/128 1/256 1/16 1/512 1/4 Ket: K1: Ekstrak Kasumba Turate 1% K2: Ekstrak Umbi Bawang Dayak 2% K3: Ekstrak Umbi Bawang Dayak 4% K4: Ekstrak Kasumba Turate 1% + Ekstrak Umbi Bawang Dayak 2% K5: Ekstrak Kasumba Turate 1% + Ekstrak Umbi Bawang Dayak 4% K6: Stimuno (Kontrol Positif) K7: Na.CMC (Kontrol Negatif) 182

5 Kasumba Turate, Bawang Dayak, Imunostimulan, IgG, IgM ISSN Hal ini dikarenakan efek dari gelombang ultrasonik yang membentuk local high temperature dan gerakan mekanik antarmuka zat padat dan zat cair, sehingga akan mempercepat laju perpindahan massa (Rathod & Rathod, 2014). Proses penyarian dilakukan selama 3 jam dengan pergantian penyari sebanyak 3 kali menggunakan pelarut etanol 70%. Ekstrak etanol yang diperoleh kemudian dipekatkan menggunakan rotavapor sampai diperoleh ekstrak etanol kental. Sedangkan, ekstrak bunga kasumba turate diperoleh dari penelitian sebelumnya oleh Syukur R merupakan ekstrak kering berupa serbuk ekstrak air bunga kasumba turate. Untuk mendeteksi adanya antibodi di dalam serum di dalam serum secara in vitro, dapat dilakukan uji presipitasi atau aglutinasi. Prepitasi lebih dapat terjadi apabila antigen yang digunakan dalam bentuk antigen yang larut. Sementara, aglutinasi terjadi apabila antigen yang digunakan bersifat tidak larut (Radji, 2010). Pada penelitian ini, digunakan antigen berupa sel darah merah domba (SDMD) yang bersifat tidak larut, sehingga metode yang digunakan adalah metode hemaglutinasi (aglutinasi menggunakan sel darah merah oleh antibodi). Digunakan SDMD karena SDMD merupakan antigen polivalen, yang merupakan protein dengan determinan potensial yang lebih besar dibandingkan dengan antigen monovalen. Semakin asing antigen yang digunakan, semakin efektif memnimbulkan respon imun. Antigen ini diinjeksikan ke tubuh mencit secara intraperitoneal. Hari pertama setelah pemberian SDMD mencit diberikan perlakuan berdasar kelompok masing-masing. Kelompok 1 diberikan ekstrak bunga kasumba turate 1%, kelompok 2 diberikan ekstrak umbi bawang dayak 2%, kelompok 3 diberikan umbi bawang dayak 4%, kelompok 4 diberikan kombinasi ekstrak kasumba turate 1% dan umbi bawang dayak 2%, kelompok 5 diberikan kombinasi ekstrak bunga kasumba turate 1 % dan ekstrak umbi bawang dayak 4%, kelompok 6 diberikan sirup stimuno sebagai kontrol positif, dan kelompok 7 diberikan Na.CMC sebagai kontrol negatif, secara oral selama 5 hari (IgM) dan 10 hari (IgG) berturutturut. Pada hari ke-6, setelah penginduksian SDMD, darah mencit diambil secara intravena untuk mengamati aktivitas IgM dan hari ke-11 untuk IgG. Hal ini disebabkan karena injeksi suatu bahan asing ke dalam hewan yang mampu membuat respon imun akan menghasilkan antibodi spesifik yang muncul dalam serum sesudah beberapa waktu berlangsung. Imunogen tersebut akan menyebabkan pengiriman sinyal pada sel-sel yang bertugas untuk membuat antibodi. Darah yang telah diambil kemudian didiamkan pada suhu kamar selam 1-2 jam lalu disentrifuse untuk memisahkan antara cairan serum dan plasma darah. Serum yang didapat kemudian diuji hemaglutinasi pada well plate menggunakan dapar posfat ph 7,2 yang diencerkan secara bertingkat dan menambahkan antigen yang sama yaitu sel darah merah domba 2%. Interaksi antara antigen dan antibodi menyebabkan reaksi sekunder, yaitu berupa aglutinasi sebab antigen merupakan partikelpartikel yang tidak larut (Bratawidjaja, 2002). Gumpalan yang terbentuk antara antigen dan anti serum spesifik akan bersatu dan akhirnya mengendap sebagai gumpalan-gumpalan besar. Hal ini terjadi karena pada umumnya antibodi memiliki lebih dari satu respon pengikat antigen sehingga antibodi bereaksi dengan molekul antigen lain yang mungkin sudah berikatan dengan salah satu moleku antibodi dan terbentuklah gumpalan. Reaksi aglutinasi baru dapat terjadi bila rasio antara antigen dan antibodi seimbang, sehingga terbentuk zona ekuivalen, dibantu oleh suhu yang tingggi (37-56 o ) dan gerakan yang menambah kontak antigen dan antibodi (misalnya mengocock, mengaduk, dan memutar) serta berkumpulnya gumpalan memerlukan garam-garam yang berasal dari PBS yang digunakan (Bratawidjaja, 2002). Pengamatan aktivitas imunoglobulin dilakukan dengan melihat aglutinasi yang terjadi dan dihitung sebagai titer antibodi yaitu pengenceran tertinggi dari serum darah mencit yang masih menunjukkan reaksi aglutinasi positif pada sumur mikrotitrasi. Hasil akhir dari uji hemaglutinasi dapat ditentukan dengan melihat pola pengendapan sel darah merah pada dasar well plate. Apabila sel darah merah membentuk titik berwarna merah pada pusat sumur dan terlihat bening uji dinyatakan negatif. Sel yang teraglutinasi akan menyebar pada cairan di dalam sumuran. 183

6 Yuri Pratiwi Utami ISSN Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada tingkat kepercayaan 95% kelompok 4 (kombinasi ekstrak bunga kasumba turate 1% dan ekstrak umbi bawang dayak 2%) signifikan terhadap kelompok 1, 2, 3, 5, dan 7 (P< 0,005), tetapi kelompok 4 tidak mampu menyamai efek peningkatan IgM dan IgG pada kelompok 6 (stimuno) sebagai kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa kelompok 4 memiliki aktivitas imunostimulan yang lebih baik dari kelompok lain. KESIMPULAN DAN SARAN Kelompok 4 (Ekstrak bunga kasumba turate 1% dan umbi bawang dayak 2%) dapat meningkatkan aktivitas imunoglobulin M (IgM) dan imunoglobulin G (IgG) dibandingkan dengan kelompok 1, 2, 3, 5, dan 7 tetapi tidak dapa t menyamai aktivitas imunoglobulin M (IgM) dan imunoglobulin G (IgG) kelompok 6 (stimuno). Saran penelitian yaitu sebaiknya dilakukan formulasi sediaan imunostimulan kombinasi ekstrak mahkota bunga kasumba turate dan ekstrak umbi bawang dayak. UCAPAN TERIMA KASIH Penulis mengucapkan terimakasih pada Kementrian Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi yang telah membantu membiayai penelitian ini. DAFTAR PUSTAKA Annisa. (2012). Uji efek imunomodulator ekstrak etanol umbi bawang dayak pada mencit. Bratawidjaja K.G. (2002). Imunologi Dasar Edisi 7. Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. Departemen Kesehatan RI. (1995). Materia Medika Indonesia, Direktorat Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta. Departemen Kesehatan RI. (1979). Farmakope Indonesia Edisi III. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. Departemen Kesehatan RI. (1986). Sediaan Galenik. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. Kresno S. B. (2004). Imunologi : Diagnosa dan Prosedur Laboratorium Edisi 4. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. Malole M.B.M. & Pramono C.S.U. ( 1989). Penggunaan Hewan-Hewan Percobaan di Laboratorium. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi Pusat Antara. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Manggau M., Syukur R., & Rante H. (2009). Effect of Ethanolic Extract of Kasumba Turate Flower ( Carthamus tinctorius L.) on the Immunoglobulin Activity of Male Mice (Mus musculus). IOCD International Symposium, Seminar of Indonesian Medicinal Plants XXXI, Surabaya. Radji M. (2010). Imunologi dan Virologi. Penerbit PT ISFI. Jakarta. Rathod S.S. & Rathod V.K. (2014). Extraction of piperine from piper longum using ultrasound. Industrial Crops and Products. Subowo. (1996). Efek Imunomodulator dari Tumbuhan Obat. Warta Tumbuhan Obat Indonesia. Syukur R & Usmar. (2008). Laporan Hasil Penelitian Penetapan Bilangan Parameter Ekstrak Bunga Kasumba Turate ( Carthamus tinctorius Linn.). Syukur R. (2013). Aktivitas Imunostimulan Sediaan Sirup Kasumba Turate (Carthamus tintorius Linn.) Secara In Vitro dan In Vivo. Program Studi Ilmu Kedokteran (S3). Universitas Hasanuddin. Tjokronegoro A. (1990). Peranan Mikroorganisme dan Komponenya sebagai Imunomodulator Sistem Imun Tubuh Manusia. Majalah Kedokteran Indonesia. Wagner H. & Jusric K. (1991). Assay for Imunomodulation and Effect on Mediators of Inflamation in Methods in Plant Biochemistry Vol 6. Academic Press. Munich. 184