METODE MEMPELAJARI PERTUMBUHAN MIKROORGANISME

Transkripsi

1 METODE MEMPELAJARI PERTUMBUHAN MIKROORGANISME Diyan Herdiyantoro Laboratorium Biologi & Bioteknologi Tanah Jurusan Tanah Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran 2009

2 KURVA PERTUMBUHAN Diyan Herdiyantoro

3 TOTAL POPULASI MIKROORGANISME TANAH Metode plate count/hitungan agar cawan Sejumlah massa tanah tertentu diencerkan secara serial lalu diinokulasikan ke dalam agar cawan untuk dihitung populasi mikroorganismenya Hanya dapat menghitung 1 10% total mikroorganisme tanah Diyan Herdiyantoro

4 Teknik Pengenceran Contoh: pada cawan10 6 dihitungada8 koloni. Berapa SPK/g tanahtotal mikroorganismenya? 10 6 Jawab: 1/10x 8x10 6 x10 = 8x10 6 SPK/g tanah Diyan Herdiyantoro

5 4 General Rules Banyaknya serial pengenceran Pengenceran bakteri Pengenceran fungi Pengenceran actinomycetes Koloni yang dihitung Koloni yang tumbuh diantara permukaan agar bagian bawah & bagian bawah cawan disebut spreader Bila spreader besar & menutupi koloni lain maka tidak perlu dihitung koloni dalam cawan ini Bila spreader tumbuh kecil & terpisah maka dapat dihitung sebagai 1 koloni Diyan Herdiyantoro

6 4 General Rules (Lanjutan) Jumlah bakteri dari pengenceran berturut2 misalnya 10 3 & 10 4 kurang lebih sama atau hasil perbandingan jumlah bakteri yang banyak : yang sedikit (d) kurang dari 2 maka hasil kedua pengenceran tersebut dirata2kan Contoh: jumlah bakteri dari pengenceran 10 3 = 225x10 3 koloni & dari 10 4 = 370x10 3 koloni d = 370x10 3 /225x10 3 = 1.64 Oleh karena nilai d kurang dari 2 maka hasil kedua pengenceran tersebut dirata2kan sehingga jumlah koloni menjadi [( )/2]x10 3 = koloni Bila nilai d tersebut lebih dari 2 maka yang digunakan adalah jumlah koloni bakteri dari pengenceran sebelumnya yaitu dari yang 10 3 Diyan Herdiyantoro

7 Spreader (a) spreader koloni bakteri koloni bakteri spreader Cawan (a) mengandung spreader berukuran besar sehingga menutupi koloni bakteri maka jumlah koloni bakteri tidak perlu dihitung Cawan (b) mengandung spreader berukuran kecil & tidak menutupi koloni bakteri maka koloni bakteri & spreader dihitung (b) Diyan Herdiyantoro

8 Colony Counter Jumlah koloni mikroorganisme dalam agar cawan dapat dihitung secara manual atau dengan menggunakan colony counter Diyan Herdiyantoro

9 TURBIDIMETRIK Diyan Herdiyantoro

10 TURBIDIMETRIK Menghitung mikroorganisme berdasarkan kerapatan sel (OD = optical density) pada media cair Cahaya yang mampu menembus biakan mikroorganisme dalam media cair diukur (%T = % Transmitan) OD = 2 log %T Diyan Herdiyantoro

11 RESPIRASI TANAH Bila bahan organik dirombak oleh mikroorganisme maka O 2 digunakan & CO 2 dibebaskan (CH 2 O) x + O 2 CO 2 + H 2 O + energi Respirasi tanah lebih mencerminkan aktivitas mikroorganisme dalam tanah dari pada populasinya Berkorelasi erat dengan jumlah bahan organik, ph & rata2 jumlah mikroorganisme Diyan Herdiyantoro

12 Penetapan Respirasi Tanah Metode Verstraete titrasi Prinsip: CO 2 yang dihasilkan dari tanah ditangkap oleh KOH & jumlahnya dititrasi dengan HCl Cara kerja Tanah dimasukkan ke dalam toples kedap udara kemudian diberi 2 tabung film berisi 5 ml 0.2 N KOH & 10 ml air Diinkubasi selama 3, 7 atau 14 hari pada suhu ruang di tempat gelap Hal yang sama dilakukan pada kontrol yaitu toples tanpa tanah Pada akhir inkubasi ditambahkan 2 tetes penolptalin ke dalam tabung film KOH kemudian dititrasi dengan HCl sampai warna merah hilang Selanjutnya ditambahkan 2 tetes metil oranye & dititrasi lagi dengan HCl sampai warna kuning berubah menjadi pink lalu volume HCl yang diperlukan dicatat r = (a b) x t x 12 x (1000/BKM) n r = CO 2 yang dihasilkan (mg/kg tanah/hari) a = HCl contoh tanah (ml) b = HCl kontrol (ml) t = normalitas HCl (1 N) n = jumlah hari inkubasi BKM = bobot kering tanah (g) Tanah mineral biasanya mempunyai nilai r antara 5 10 Diyan Herdiyantoro

13 Contoh Seorang mahasiswa Jurusan Tanah UNPAD sedang melakukan penelitian pengaruh bahan organik terhadap aktivitas mikroorganisme tanah pada tanah Ultisols asal Kentrong. Dia bermaksudmengukur aktivitas mikroorganisme tanah dengan menggunakan metode Verstraete. Tanah yang dipakai 100 g dengan kadar air 14%. Tanah diinkubasi selama 7 hari. Pada stoples tanpa tanah KOH dititrasi dengan HCl & didapatkan 15 ml sedangkan pada contoh tanah 25 ml. Berapakah respirasi tanah tersebut? Jawab: BKM tanah = BKU tanah/(1+ka) BKM = 100/(1+0.14) = g r = (a b) x t x 12 x (1000/BKM) n r = (25 15) x 0.1 x 12 x (1000/87.72) = mg CO 2 /kg/hari 7 Diyan Herdiyantoro

14 When will we have one? Pengukuran respirasi otomatis Diyan Herdiyantoro

15 BIOSENSOR Target Biocomponent Bioproduct Transducer Electrical signal Target DNA Beta emission Charge-coupled device (CCD camera) Bound DNA Menggambarkan jumlah & jenis mikroorganisme tanah Metode kuantitatif terkini: biosensor Perkawinan fisika molekuler & biologi molekuler --- bioelektrik Mampu menjawab jumlah keanekaragaman spesies mikroorganisme tanah lebih akurat dibanding penghitungan & identifikasi konvensional yang hanya 1-10% saja Sebuah elektroda biosensor Diyan Herdiyantoro

16 SAMPAI JUMPA & SELAMAT BELAJAR Diyan Herdiyantoro