PEMBUATAN KIT RIA 125 I-PROGESTERON UNTUK PENENTUAN PROGESTERON DALAM SUSU SAPI

Transkripsi

1 Siti Darwati, dkk. ISSN PEMBUATAN KIT RIA 1 I-PROGESTERON UNTUK PENENTUAN PROGESTERON DALAM SUSU SAPI Siti Darwati, Agus Ariyanto, Fitri Yunita, Gina Mondrida, Triningsih, Sutari dan Sri Setyowati P2RR BATAN ABSTRAK Progesteron merupakan hormon yang tingkat kandungannya sangat menentukan kondisi reproduksi sapi ternak. Penentuan progesteron dalam jumlah yang sangat kecil dapat dilaksanakan metoda radioimmunoassay (RIA) yang memiliki kepekaan dan kespesifikan yang tinggi. Kit RIA progesteron yang beredar saat ini diperoleh dari import harga cukup mahal, sehingga perlu dikembangkan produksi kit RIA harga cukup rendah. Dalam penelitian ini dikembangkan pembuatan kit radioimmunoassay (RIA) 1 I-progesteron untuk penentuan progesteron dalam susu sapi menggunakan metoda coated tube. Antiprogesteron poliklonal yang ditumbuhkan pada kelinci (titer 1:12,) diimobilisasikan pada tabung polipropilen utuk mendapatkan antibody-coated tube. Senyawa 1 I-progesteron sebagai tracer yang dibuat metoda chloramin-t memberikan kemurnian radiokimia 97% rendemen lebih dari 8% dan aktifitas spesifik 39 Ci/ g. Senyawa progesteron bertanda radioaktif ini stabil selama 2 bulan terlihat dari parameter imunoreaktifitas (B/T %) dan ikatan non-spesisik (NSB %) serta kemurnian radiokimianya. Larutan standar progesteron dibuat cara pelarutan didalam pelarut bovine-serum-albumin. Assay performace kit yang telah dihasilkan adalah B/T rata-rata 3%, NSB rata-rata.8% sensitifitas pengukuran 2.3 ng/ml. ABSTRACT Progesterone is hormone which concentration is a desisive factor on cow s reproduction. Determination of progesterone at a very low concentration can be performed using radioimmunoassay (RIA) of high sensitifity and specificity. Progesterone RIA kits in the market nowadays were obtained from commercial company which cost highly enough to encourage the development of RIA kit locally. This experiment developed production of 1 I-Progesterone RIA kit to determine progesterone level in cow s milk using coated tube methode. Polyclonal antiprogesterone generated in rabbits (of titer 1:12,) was immobilized onto polypropilene tube in order to obtain antibody-coated tube. 1 I-progesterone used as tracer made by chloramin-t method gave 97% radiochemical purity at 8 % yield and 39 Ci/ g specific activity. The tracer showed stability for 2 months as shown in immunoreactivity (B/T %) and non specific binding (NSB %) parameters as well as its radiochemical purity. Series of progesterone standard solution was made with bovine-serum albumin. Assay performace of the kit is 3% average B/T,.8% NSB and sensitivity of measurement at 2.3 ng/ml. A PENDAHULUAN spek kespesifikan dan kepekaan cara-cara immunoassay, telah memungkinkan metoda ini banyak digunakan untuk penentuan berbagai jenis senyawa kimia. Selain itu, metoda ini juga reproducible pengerjaan yang sederhana. Dengan demikian maka penggunaan metoda ini banyak dipakai baik dalam bidang klinis maupun non-klinis, khususnya untuk analisis steroid. Progesteron merupakan hormon steroid yang umumnya diproduksi oleh corpus luteum yang penting dalam pengaturan siklus haid. Progesteron dalam darah berfungsi antara lain untuk masa pembuahan dan mempersiapkan kelenjar susu untuk sekresi air susu, mengetahui parameter infertilitas, evaluasi gangguan haid dan menilai fungsi plasenta selama kehamilan. Kadar progesteron dalam darah adalah minimum pada saat sebelum dan selama pembuahan dan menjadi maksimum pada hari ke 1. Bila pembuahan tidak terjadi maka akan terjadi degenerasi pada corpus luteum dan konsentrasi progesteron kembali ke keadaan semula dimana siklus pembentukan sel telur kembali terjadi. Konsentrasi progesteron dalam darah Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli

2 2 ISSN Siti Darwati, dkk. berhubungan erat kesetaraan konsentrasinya dalam susu. Dalam nilai absolut, konsentrasi progesteron dalam susu lebih tinggi dibanding konsentrasi serumnya disebabkan kelarutannya dalam lemak susu. Perubahan pada berbagai fase siklus pada serum maupun susu mempunyai pola yang sama. Jadi, untuk mengevaluasi kondisi reproduksi pada hewan ternak maka penentuan kadar progesteron dalam serum dapat digantikan sampel susu. Penentuan progesteron dalam susu memberikan keuntungan dalam kesederhanaan pengambilan sampel dan dalam hal penentuan langsung tanpa memerlukan tahap pemisahan seperti memisahkan serum dari komponen darah lainnya. Tujuan penelitian ini adalah pembuatan kit RIA menggunakan metoda coated tube untuk penentuan progesteron dalam sampel susu sapi. Disini antibodi diimobilisasikan pada suatu fasa padat yaitu tabung polipropilen untuk memudahkan pelaksanaan assay, yaitu tidak diperlukan tahap pemisahan antara fraksi kompleks antigen (komponen analit dari sampel) yang terikat antibodi fraksi antigen bebasnya. Kit ini pemakaiannya sederhana dan cepat serta reproducible. BAHAN dan TATA KERJA Bahan dan Peralatan Bahan mencakup: progesteron 11 hemisuksinat Tyrosine Methyl-Ester untuk penandaan didapat dari BARC India, antiprogesterone dibuat di Pusat Pengembangan Radioisotop dan Radiofarmaka (P2RR). Tabung polipropilen berdasar bintang (7x12 mm) didapat dari Nunc. Kit 1 I-progesteron untuk pembanding didapat dari DPC, dan 1 I didapat dari Nordion. Senyawa kimia lainnya didapat dari Sigma. Peralatan mencakup: Multi-gamma-counter (GMS), vortex mixer (Thermolyne), kolom Sephadex G- (PD-1, Pharmacia), tabung reaksi (Eppendorf), pipet berbagai ukuran mulai -2 l (Eppendorf). Tata Kerja Pembuatan anti-progesteron poliklonal Konjugasi progesteron-11 -hemisuksinat ke molekul BSA untuk mendapatkan molekul immunogen dilakukan memakai prosedur Thorell et al. Sebanyak 26 mg of progesteron-11 hemisuksinat dicampurkan 1mL dioxan dan 2 ml tri-n-butylamin (.3 mmol). Campuran didinginkan sampai 11ºC, lalu ditambahkan 1 ml isobutilchloroformat. Kemudian campuran dibiarkan bereaksi pada 4ºC selama 2 menit. Sebanyak 4 ml larutan 84 mg BSA dalam campuran dioxan : air (1:1) ditambahkan kedalam campuran pada temperatur 4ºC, sambil dikocok selama 4 jam pada 4ºC. Kondisi ph diatur pada 8-9 menggunakan NaOH.1M. Kemudian campuran didialisis selama 24 jam memakai aquadest. Kondisi ph dijaga pada 4. menggunakan HCl dan kemudian dibiarkan selama 4 hari pada 4ºC. Campuran reaksi disentrifuga pada 3 rpm selama 1 menit. Supernatan dibuang dan endapannya dilarutkan kembali 1 ml aquades. Sebanyak 2 ml NaHCO3 % ditambahkan kedalam campuran reaksi dan dialisis kembali selama 4 jam menggunakan aquades. Larutan konjugat yang dihasilkan disimpan pada temperatur -2ºC masing-masing sebanyak 4 l per vial. Pembuatan emulsi untuk diinjeksikan ke kelinci dilakukan mencampurkan 1 ml NaCl dan 1.2 ml Freund s Adjuvant Complete 3 vial konjugat progesteron diatas. Pencampuran dilakukan hingga terbentuk emulsi. Kemudian emulsi ini diinjeksikan secara subcutan pada beberapa posisi di daerah punggung kelinci. Injeksi untuk booster dilakukan pada selang waktu setiap satu bulan. Pembuatan senyawa progesteron bertanda 1 I Penandaan progesteron 1 I menggunkan metoda chloramin-t. Tabung reaksi eppendorf berisi 2. g Progesteron-TME ditambahkan 1 l bufer posfat.m ph 7. (PB), 4 l (1mCi) Na- 1 I dan 1 g (1 l) chloramin-t dalam, M PB ph 7.4 (konsentrasi 1mg/ml). Campuran reaksi dikocok vortex mixer selama 1 menit pada temperatur ruang. Kemudian ditambahkan g ( l) Na 2 S 2 O dalam. PB ph 7.4 (konsentrasi 1 mg/ml) kedalamnya. Campuran reaksi dimasukkan kedalam kolom PD-1 yang telah BSA %. Kolom dielusi PB. M ph 7.4. Masingmasing fraksi sebanyak l diambil dan dicacah pencacah sinar gamma. Karakterisasi progesterone bertanda radioaktif Immunoreaktifitas (B/T) dan Ikatan Nonspesifik (Non Specific Binding, NSB) untuk progesterone bertanda radioaktif diuji Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli

3 Siti Darwati, dkk. ISSN prosedur sebagai berikut : Sebanyak l larutan standar konsentrasi nol dan l progesterone bertanda radioaktif ditambahkan kedalam tabung yang telah di coated anti-progesterone. Setelah tercampur baik, tabung diiunkubasi selama 3 jam pada temperatur kamar. Tabung-tabung dicuci dua kali l bufer posfat.m ph 7. yang mengandung,1% Tween-2, kemudian dekantasi dan dicacah pencacah sinar gamma. Immobilisasi anti-progesterone pada tabung dasar bintang Nunc Pembuatan coated tube ini dilakukan mengadopsi prosedur dari Joint FAO/IAEA Programme in Animal Production and Health, Self Coating Milk Progesterone RIA Kit sedikit modifikasi. Sebanyak L of anti-progesterone (pengenceran 1:12.) dimasukkan kedalam labu ukur ml dan ditambahkan bufer karbonat. M ph 9.6 hingga tanda batas. Larutan ini didistribusikan kedalam tabung Nunc masing-masing sebanyak 3 L. Seluruh tabung ditutup parafilm kemudian diinkubasi selama semalam pada 4 C. Kemudian dilakukan dekantasi diikuti pencucian tabung-tabung menggunakan L Tween-2.1% dalam aquadest. Pencucian dilakukan dua kali. Seluruh tabung disimpan dalam plastik tertutup pada 4 C. Pembuatan larutan standar progesteron Serangkaian larutan standar progesteron dibuat metoda pelarutan senyawa progesteron murni memakai pelarut bovin serum albumin.% dalam bufer posfat.m. Sejumlah mg of progesteron (4-pregnen-3,2- dione) dilarutkan dalam 12, ml pelarut diatas. Kemudian, ml larutan tersebut diencerkan menjadi 1 ml pelarut bovin serum albumin.% dalam bufer posfat.m. Sebanyak l larutan diencerkan lagi menjadi ml dalam labu ukur. Dengan memakai larutan ini maka dibuat serangkaian larutan standar meliputi ;.;.; 1; ; 1; 2, 4 dan 8 ng/ml Protokol assay Sebanyak 2 l larutan progesteron dalam Bovin Serum Albumin % (sebagai larutan standar) pada berbagai konsentrasi dimasukkan kedalam tabung polipropilen Nunc antibody-coated tube, dilanjutkan penambahan 3 l larutan 1 I-progesteron dan l emulsi susu colustrum pada setiap tabung. Untuk tabung keradioaktifan total maka tabung polipropilen tanpa antibody-coated tube diisi 3 l larutan 1 I-progesteron saja. Seluruh tabung ditutup alumunium foil, kemudian dilakukan inkubasi selama 3 jam pada temperatur kamar. Selanjutnya seluruh tabung (kecuali tabung keradioaktifan total) dibuang supernatannya dan dilanjutkan pencucian memakai l larutan bufer posfat,m ph 7,4 yang mengandung,% Tween-2. Pencucian dilaksanakan dua kali. Tabung-tabung dicacah pencacah sinar gamma. HASIL DAN DISKUSI Setelah satu injeksi primer dan delapan kali booster pada hewan percobaan, maka didapat hasil anti-progesteron titer yang cukup tinggi pada 1:12, volume ml. Kurva titer antibodi dapat dilihat pada Gambar 1. Anti-progesterone yang dihasilkan kemudian diimobilisasikan ke suatu fasa padat dari tabung polipropilen Nunc berdasar bintang. Coated tube yang dihasilkan dipakai dalam assay selanjutnya. Percent bound (B/T %) Dilution of antibody Gambar 1. Pembuatan anti-progesteron poliklonal pada kelinci titer 1:12.. Pembuatan tracer ( 1 I-progesterone) menggunakan metoda chloramin-t telah dapat dilaksanakan hasil yang optimal. Fraksi progesteron bertanda radioaktif yang dimurnikan kolon PD-1 (Sephadex G-, Pharmacia) didapat konsisten pada sekitar nomor 3 nilai B/T sekitar 6-7% yang reprodusibel. Kemungkinan didapatnya nilai ikatan yang lebih tinggi bila menggunakan Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli

4 22 ISSN Siti Darwati, dkk. kolom yang lebih panjang dari PD-1 merupakan hal yang harus dibuktikan. Pemurnian tracer telah dilakukan dua macam metoda, ekstraksi dan kromatografi kolom. Pada metoda ekstraksi, rendemen penandaan dan persen ikatan yang didapat sangat rendah, masing masing sebesar 7.1% dan 1.7%. Pada penggunaan Sephadex G- (PD-1, Pharmacia) yang BSA 1% untuk memurnikan hasil penandaan, maka persen ikatan dan kemurnian radiokimia yang tinggi telah didapat masing-masing sebesar 63.6% dan 92.%, rendemen penandaan 28.67%. Untuk mempertinggi rendemen dilakukan pemurnian menggunakan BSA,% untuk penjenuhan kolom. Peningkatan hasil terlihat pada tahap ini (persen ikatan 7.2%, kemurnian radiokimia 93.3% dan rendemen 7.6%). Perbaikan lebih lanjut pada kualitas tracer terlihat apabila progesteron diiodinasi menggunakan aktifitas radioisotop yang lebih tinggi. Pada penggunaan aktifitas 1 I sekitar 1 mci untuk penandaan, didapat hasil yang sangat baik ditinjau dari parameter persen ikatan, kemurnian radiokimia dan rendemen yaitu masing-masing sebesar 64.9, 99.2 dan 92.6%, disertai nilai spesifik aktifitas yang tinggi pula. Kedapat-ulangan metoda ini terlihat dari nilai imunologi yang konsisten pada beberapa kali percobaan berikutnya. Tabel 1. Hasil penandaan Progesteron-11- -hemisuksinat-tme 1 I NO I II III IV V VI VII PROCEDURE Progesretone-TME PB, M ph l 1 l 1 l 1 l 1 l 1 l 1 l Na 1 I Ci (2.2 l) Ci (2.2 l) Ci ( l) 1. mci (4 l) 1.1 mci (4. l) 1.28 mci ( l) 1 mci (4 l) Chloramin-T 1 g 1 g 1 g 1 g 1 g 1 g 1 g Na 2 S 2 O Pemurnian CHCl 3 extraction PD-1 1%BSA PD-1.%BSA PD-1.%BSA PD-1.%BSA PD-1.%BSA PD-1.%BSA RENDEMEN 7.1% 28.76% 7.66% 92.6% 92.8% 98.2% 98.6% IMMONO- REAKTIFITAS B/T (%) NSB (%) Aktifitas spesifik ( Ci/ g) KEMURNIAN RADIOKIMIA 1 I-Prog (electrophoresis) % 93.3% 99.2% 94.% 89.% 93.% Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli

5 Siti Darwati, dkk. ISSN Untuk menguji imunologi pada fraksi yang dihasilkan dari pelaksanaan iodinasi progesteron maka digunakan 1 mci Na 1 I dan 2, g progesteron-tme dan kemudian dimurnikan kolom PD-1. Hasil kromatogram dapat dilihat pada Gambar 2. Uji immunologi terhadap ketiga puncak kromatogram telah dilakukan cara assay pada ketiga fraksi puncak kromatogram pada gambar 2 diatas. Puncak pertama dan kedua memberikan nilai immunologi yang rendah, sedangkan puncak ketiga memberikan nilai immunologi yang tinggi disertai kemurnian radiokimia yang tinggi pula. (Tabel 2). Beberapa percoban yang dilakukan berikutnya memberikan hasil yang sama Count per m inutes 1I-Pr ogester one 2 1 labeled prog deriv. 1 f ree-iodine T ube no Gambar 2. Kromatogram iodinasi Progesteron metoda chloramin-t dan dimurnikan kolom Sephadex (PD-1). Tabel 2. Evaluasi 1 I-Progesteron yang dihasilkan metoda chloramin-t dan dimurnikan kolom PD-1 Peak no 1 (free 1 I) Peak no 2 (non progesterone Peak no 3 (tracer progesterone) bertanda radioaktif) NSB (%) Bo/T (%) Kemurnian radiokimia Rendemen (%) Kestabilan 1 I-progesterone Kestabilan tracer 1 I-progesteron diuji menggunakan coated tube antiprogesteron dari BARC (India) dan larutan standar DPC. Selama masa 9 minggu, tracer terlihat relatif stabil kemurnian radiokimia 99.16% sampai 93% (CV=.2%) dan persen ikatan sampai 7.3% (CV=.3%) dan nilai ikatan non-spesifik yang stabil pada 1.6% sampai.8% (CV=.4%). Penurunan kualitas tracer terlihat pada umur tracer diatas 2 bulan (data tidak ditampilkan). Profil kestabilan 1 I-progesteron dapat dilihat pada gambar 3. Persen ikatan (B/T %) Waktu (minggu) NSB % Bo/T % Rad.Chem.Purity Gambar 3. Profil kestabilan 1 I-progesteron Optimasi assay Optimasi assay pada kit RIA progesteron telah dilakukan mencakup variasi pada berbagai temperatur dan waktu inkubasi. Assay dilakukan pada kondisi inkubasi selama tiga jam pada temperatur kamar, satu jam pada 37 o C dan semalam pada 4 o C. Kurva standar di buat untuk ketiga kondisi tersebut dan dapat dilihat pada gambar Log. conc. Progesteron (ng/ml) RT., 3 hours 37oC, 1hour 4 oc, overnight Gambar 4. Optimasi assay pada kit RIA Progesteron variasi temperatur dan lamanya waktu inkubasi. Pelaksanaan assay pada 4 o C selama semalam memberikan nilai imunologi pada standar nol (ikatam maksimum untuk kit) yang Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli

6 24 ISSN Siti Darwati, dkk. sedikit lebih tinggi dibandingkan ikatan pada kit yang diinkubasi pada 37 o C selama semalam atau temperatur kamar selama satu jam. Karena perbedaan yang sedikit ini maka untuk percobaan selanjutnya assay dilakukan pada temperatur kamar selama tiga jam. Optimasi assay variasi volume larutan standar mencakup,, 1 dan 2 l. Hasil yang diperoleh memperlihatkan volume larutan standar 2 l memberikan kurva standar yang lebih curam sehingga penentuan akan lebih sensitif (Gambar) Kons. Prog. (ng/ml) 1 jam 2 jam 3 jam 4 jam 3 Gambar 6. Optimasi waktu inkubasi pada assay kit RIA-progesteron Persen ikatan (B/T%) ul std ul std 1 ul std 2 ul std ul tracer 1 ul tracer Kons standar (ng/ml) ul tracer 3 ul tracer 4 ul tracer Gambar. Optimasi volume larutan standar pada assay kit RIA-progesteron Concentration of Progesterone (nmol/l) Optimasi lamanya waktu inkubasi dilakukan pada 1 sampai 4 jam (Gambar 6). Inkubasi selama tiga jam pada temperatur kamar memberikan persen ikatan yang lebih tinggi kurva standar yang lebih baik dibandingkan hasil yang didapat pada inkubasi selama 1 atau 2 jam pada temperatur kamar. Inkubasi selama 4 jam pada temparetur kamar memberikan persen ikatan yang lebih tinggi tetapi pada konsentrasi tinggi kesensitifannya lebih rendah dibanding inkubasi pada 3 jam. Dengan demikian maka waktu inkubasi yang optimal ditetapkan pada 3 jam temperatur kamar. Optimasi volume tracer dilakukan mencakup l, 1 l, 2 l, 3 l dan 4 l cacahan sekitar 2. cpm. Berbagai persen ikatan dari hasil assay dapat dilihat pada gambar 7. Hasil terbaik persen ikatan maksimum tertinggi kurva yang curam didapat untuk volume tracer 3 l. Gambar 7. Optimasi volume tracer pada assay kit RIA-progesteron Optimasi pada penggunaan konsentrasi tracer dilakukan variasi konsentrasi 1 I- progesteron mulai 2, sampai 1, cpm per 3 l. Hasil yang didapat memberikan ikatan yang tinggi bila digunakan tracer pada 22,71 cpm, sehingga untuk assay selanjutnya digunakan tracer pada 2, cpm per 3 l. Percent bound (B/T%) Progest. conc. (ng/m l) 1771 cpm 688 cpm cpm cpm 271 cpm Gambar 8. Optimasi konsentrasi tracer pada assay kit RIA-progesteron Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli

7 Siti Darwati, dkk. ISSN Bentuk kurva standar untuk kit RIAprogesteron dapat dilihat pada Gambar 9, limit deteksi 2.3 ng/ml. Limit deteksi adalah konsentrasi progesteron nol ng/ml. yang dihitung sebagai 2x standar deviasi (2SD) pada kali pengulangan. Intra assay pada kali pengulangan (Tabel 3) dan inter assay pada 1 kali pengulangan (Tabel 4) telah dilakukan menggunakan 2 l larutan standar, 3 l 1 I-progesteron dan inkubasi dilakukan selama 3 jam pada temperatur kamar. Data intra assay memberikan %CV yang rendah pada konsentrasi progesteron tinggi dan sedang (91.4 ng/ml dan 17 ng/ml) tetapi %CV tinggi pada konsentrasi progesteron rendah (6.3 ng/ml). Hasil yang mirip juga didapat untuk inter assay. Konsentrasi rendah memberikan %CV yang tinggi. Gambar 9. Bentuk kurva standar kit RIAprogesteron. Tabel 3. Intra Assay Nomor Jumlah pengulangan Rata-rata (ng/ml) SD % CV Tabel 4. Intra assay Nomor Jumlah pengulangan Rata-rata (ng/ml) SD % CV B/Bo (%) Kestabilan kit dimonitor setiap minggu menentukan persen ikatan pada setiap konsentrasi larutan standar progesteron (Gambar 1). Data yang didapat memberikan persen ikatan yang stabil pada lima minggu pertama, dan mulai mengalami penurunan persen ikatan setelah menginjak minggu berikutnya Stability of progesterone RIA kit Conc of progesterone (ng/ml) Gambar 1. Kestabilan kit RIA progesteron week 1 week 2 week 3 week 4 week KESIMPULAN Produksi kit RIA progesteron telah dapat dilakukan di Pusat Pengembangan Radioisotop dan Radiofarmaka, BATAN. Pereaksi tracer ( 1 I-progesteron) yang dihasilkan memberikan kemurnian radiokimia sekitar 97% yang stabil selama dua bulan, sedangkan anti-progesteron yang didapat memberikan titer yang tinggi yaitu 1:12,. Kit ini mempunyai karakteristik ikatan maksimum yang cukup tinggi yaitu sekitar 3% dan ikatan non spesifik yang sangat rendah yaitu sekitar.4%. Kit RIA yang dihasilkan stabil untuk waktu lima minggu setelah diproduksi. Tahap perbaikan kestabilan kit diperkirakan memperbaiki kualitas coated tube yang dihasilkan pengeringan coated tube pada alat freeze dryer.. UCAPAN TERIMA KASIH Terimakasih diucapkan kepada Bapak Totti dari P3TIR BATAN atas bantuan reagensia yang telah diberikan dan terimakasih kepada Bapak Gationo dari Balai Pendidikan dan latihan Agribi Peternakan, Cinagara. Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli

8 26 ISSN Siti Darwati, dkk. DAFTAR PUSTAKA 1. IAEA Regional Cooperative Agreement for Asia and The Pacific, RAS//3-Feed Supplementation and Reproductive Management of Cattle. Training Workshop on the Production of Iodinated Tracer for Self-Coating RIA of Progesterone, 8-12 May 2, Office of Atomic Energy for Peace, Bangkok, Thailand. 2. Tarveen Karir, P.R. Chaudhuri, A. Samad, U.H. Nagvekar, N. Sivaprasad ; Development of Direct Radioimmunoassay of Progesterone in Bovine Milk, Immunoassay Labeled Compounds & Jonarki Medical and Biological Products Programme, Board of Radiation and Isotope Technology, DAE, Mumbai Kanchan Kothari, Ranji Lal and M.R.A. Pillai ; Development of A Direct Radioimmunoassay for Serum Progesterone, Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry Articles, Vol. 196, No.2 (199) Kanchan Kothari and M.R.A. Pillai ; Preparation and Characterization of 1 I labeled Progesterone Derivatives for the Development of A Radioimmunoassay for Progesterone, Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry Articles, Vol. 177, No. 2 (1994) Kanchan Kothari and M.R.A. Pillai ;Direct Radioimmunoassay of Serum Progesterone Using Heterologous Bridge Tracer and Antibody, Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry, Vol. 231, Nos. 1-2 (1998) Joint FAO/IAEA Programme in Animal Production and Health, Self-coating Milk Progesterone RIA Kit, Bench Protocol Version SCRIA 3., January J.I. Thorell and S.M. Larsen, Radioimmunoassay and Related Techniques, United States of America, 1978, p 8. TANYA JAWAB Basuki Agung Pudjanto Dibanding Kit impor, apa keuntungan/keunggulan Kit RIA yang dibuat sendiri? Bagaimana prospek pengembangan berikutnya? Siti Darwati Harga.Kit RIA 1 I-Progresteron jauh lebih mahal dari Kit RIA yang diproduksi lokal di BATAN. Nilai ekonomis yang didapat dibanding bila digunakan metode konvensional dalam menentukan waktu hamil pada hewan ternak. Pengembangan berikutnya melakukan kerjasama instansi lain sperti yang sedang dirintis peternakan yang ada di Jawa Barat. Muryono Apa langkah ke depan Kit RIA yang telah diperoleh? Darimana diperoleh bahan 1 I? Siti Darwati Melakukan uji lapangan menentukan konsentrasi progesteron dalam susu sapi dalam jumlah banyak, bekerjasama program iptekda Batan. 1 I diperoleh dari produksi di Pusat Pengembangan Radioisotop dan Radiofarmaka BATAN Serpong. Prosiding PPI PDIPTN Jogjakarta, 12 Juli