BAB V HASIL PENELITIAN

Transkripsi

1 BAB V HASIL PENELITIAN 5.1. Hasil Determinasi Daging Buah Limonia acidissima L. Buah Limonia acidissima L. yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari Kecamatan Rasanae Barat, Kota Bima, NTB (Nusa Tenggara Barat) dan telah di determinasi oleh UPT. Balai Materia Medika Kota Batu, Jawa Timur. Hasil determinasi menunjukkan bahwa buah Limonia acidissima L. ini berasal dari jenis tanaman Limonia acidissima L. dengan famili Rutaceae. Surat determinasi dapat dilihat pada Lampiran Hasil Serbuk Simplisia Daging Buah Limonia acidissima L. Buah Limonia acidissima L. yang digunakan pada penelitian ini yaitu sebanyak 15 kg, dikeringkan dan diserbukkan daging buah Limonia acidissima L. sehingga menghasilkan serbuk sebanyak 1,3 kg. Gambar 5.1. Serbuk Simplisia Daging Buah Limonia acidissima L Uji Organoleptis Fraksi Etanol Buah Limonia acidissima L. Tabel V.1. Hasil Uji Organoleptis dari Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L. No Fraksi Daging Buah Kinca Hasil 1 Warna Coklat 2 Bentuk Kental 3 Bau Aromatik 45

2 Hasil Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L. Serbuk daging buah Limonia acidissima L. yang digunakan dalam proses maserasi ini dengan total awal sebanyak 1,3 kg, kemudian untuk pelarut etanol sendiri jumlah serbuk daging buah Limonia acidissima L. yang digunakan yaitu 1,29 kg, yang sebelumnya telah di fraksinasi secara bertingkat menggunakan pelarut n-heksan dan etil asetat yang bertujuan untuk menarik golongan senyawa kimia berdasarkan tingkat kepolarannya. Hasil fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. berupa filtrat cair yang didapat dari 5x proses maserasi (perendaman) yang kemudian akan dipekatkan dengan menggunakan alat rotary evaporator vacuum yang bertujuan untuk memisahkan pelarut dari fraksi. Setelah pelarut terpisah, fraksi tersebut dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 40 C sampai didapat fraksi yang kental. Fraksi etanol yang dihasilkan yaitu 354,68 g. Setelah mengetahui jumlah fraksi kemudian dilakukan perhitungan presentase rendemen. Hasil yang didapat dari perhitungan presentase rendemen yaitu 27,49 %. Rendemen fraksi etanol = = 354,68 g 1290 g berat fraksi total berat simplisia 100% 100% = 27,49 % Gambar 5.2. Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L Hasil Identifikasi Golongan Senyawa pada Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L. Pengujian atau identifikasi golongan senyawa dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa yang terdapat pada daging buah Limonia acidissima L. Pada

3 47 pengujian kali ini dilakukan dengan metode uji buih, uji salkowski dan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan fase diam silika gel 60 F254 dengan fase gerak n-heksan : etil asetat (7 : 3). Golongan senyawa yang diuji yaitu alkaloid menggunakan penampak noda dragendorff, steroid/terpenoid menggunakan penampak noda anisaldehida-asam sulfat, flavonoid menggunakan penampak noda asam sulfat (H2SO4) 10%, polifenol menggunakan penampak noda FeCl3 10%, antrakuinon menggunakan penampak noda KOH 10% dalam metanol serta saponin dilakukan dengan metode uji buih dan uji salkowski Identifikasi Senyawa Alkaloid dengan KLT Hasil identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT) fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. menggunakan fase diam silika gel TLC 60 F254 dengan penampak noda dragendorff didapatkan hasil yang positif untuk senyawa alkaloid, hal ini ditunjukkan dengan terdapatnya noda berwarna jingga pada plat KLT yang dilihat secara visual. A B C D Gambar 5.3. Hasil Identifikasi Senyawa Alkaloid dengan Metode KLT a). UV 254, b). UV 365, c). UV 365 setelah diberi penampak noda, d). secara visual setelah diberi penampak noda menunjukkan hasil positif Identifikasi Senyawa Flavonoid dengan KLT Hasil identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT) fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. menggunakan fase diam silika gel TLC 60 F254 dengan penampak noda pereaksi asam sulfat (H2SO4) 10%, tidak didapatkan hasil yang positif untuk senyawa flavonoid, hal ini ditunjukkan dengan tidak terdapat noda berwarna kuning intensif pada plat KLT saat dilihat secara visual.

4 48 A B C D Gambar 5.4. Hasil Identifikasi Senyawa Flavonoid dengan Metode KLT a). UV 254, b). UV 365, c). UV 365 setelah diberi penampak noda, d). secara visual setelah diberi penampak noda menunjukan hasil negatif Identifikasi Senyawa Polifenol dan Tanin dengan KLT Hasil identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT) fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. menggunakan fase diam silika gel TLC 60 F254 dengan setelah diberi penampak noda pereaksi besi (III) klorida (FeCl3) 10%, tidak didapatkan hasil yang positif untuk senyawa polifenol, hal ini ditunjukkan dengan tidak terdapat noda berwarna hitam pada plat KLT saat dilihat secara visual. A B C D Gambar 5.5. Hasil Identifikasi Senyawa Polifenol dan Tanin dengan Metode KLT a). UV 254, b). UV 365, c). UV 365 setelah diberi penampak noda, d). secara visual setelah diberi penampak noda menunjukkan hasil negatif Identifikasi Senyawa Terpenoid dengan KLT Hasil identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT) fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. menggunakan fase diam silika gel TLC 60 F254 dengan diberi penampak noda anisaldehida-asam sulfat dan dipanaskan di atas hotplate dengan

5 49 suhu 100º C, didapatkan hasil yang positif untuk senyawa terpenoid, hal ini ditunjukkan dengan terdapatnya noda berwarna ungu pada plat KLT saat dilihat secara visual. A B C D Gambar 5.6. Hasil Identifikasi Senyawa Terpenoid dengan Metode KLT a). UV 254, b). UV 365, c). UV 365 setelah diberi penampak noda, d). secara visual setelah diberi penampak noda menunjukkan hasil positif Identifikasi Senyawa Antrakuinon dengan KLT Hasil identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT) fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. menggunakan fase diam silika gel TLC 60 F254 dengan diberi penampak noda pereaksi kalium hidroksida (KOH) 10% dalam metanol, didapatkan hasil yang positif untuk senyawa antrakuinon, hal ini ditunjukkan dengan terdapatnya noda berwarna kuning pada plat KLT saat dilihat secara visual. A B C D Gambar 5.7. Hasil Identifikasi Senyawa Antrakuinon dengan Metode KLT a). UV 254, b). UV 365, c). UV 365 setelah diberi penampak noda, d). secara visual setelah diberi penampak noda menunjukkan hasil positif

6 Hasil Identifikasi Saponin Steroid Uji Buih Uji buih dilakukan untuk mengetahui adanya senyawa saponin di dalam fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. Uji ini dilakukan dengan menimbang fraksi sebanyak 0,2 gram dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian ditambah dengan air suling sebanyak 10 ml, lalu dikocok kuat-kuat kira-kira selama 30 detik, apabila terjadi buih yang stabil selama lebih dari 30 menit dengan tinggi 3 cm di atas permukaan cairan maka dapat dikatakan positif mengandung saponin. Pada perlakuan ini, fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. memberikan hasil yang positif dengan menunjukkan buih yang stabil setinggi lebih dari 3 cm diatas permukaan cairan Gambar 5.8. Hasil Uji Buih Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L. menunjukkan hasil positif Uji Salkowski Uji salkowski ini dilakukan untuk mengetahui adanya senyawa steroid di dalam fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. Uji ini dilakukan dengan menimbang fraksi sebanyak 0,5 gram dan dilarutkan dalam 15 ml etanol. Lalu bagi larutan sebagai blanko dan larutan yang hendak diuji. Larutan yang hendak diuji ditambah dengan 1-2 ml H2SO4 pekat pelan-pelan melalui dinding tabung reaksi. Pengujian ini dikatakan positif mengandung steroid tak jenuh apabila terbentuk cincin berwarna merah. Dari hasil pengujian fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L., diketahui bahwa fraksi ini mengandung steroid tak jenuh. Hal ini dibuktikan dengan terbentuknya cincin merah pada larutan uji yang diberi H2SO4 pekat.

7 51 Gambar 5.9. Hasil Uji Salkowski pada Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L. menunjukkan hasil positif Hasil Identifikasi Golongan Senyawa Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L. Tabel V.2. Hasil Identifikasi Golongan Senyawa Fraksi Etanol Limonia acidissima L. dengan Fase Gerak N-Heksan : Etil Asetat (7:3) v/v No Senyawa Penampak Noda Hasil Nilai Rf Keterangan 1. Alkaloid Dragendorff (+) 0,225 Terbentuk warna jingga 2. Flavonoid H2SO4 10% Polifenol dan Tanin FeCl3 10% Terpenoid anisaldehidaasam sulfat 5. Antrakuinon KOH 10% dalam metanol (+) 0,0625; 0,1125; 0,175; 0,325; 0,4625 Terbentuk warna ungu (+) 0,05 Terbentuk warna kuning 6. Saponin Uji buih (+) Terbentuk buih stabil setinggi lebih dari 3 cm diatas permukaan cairan.

8 52 No Senyawa Penampak Noda Hasil Nilai Rf Keterangan Uji Salkowski (+) Terbentuknya cincin merah pada larutan uji yang diberi H2SO4 pekat. Keterangan: (+) menunjukkan hasil positif (-) menunjukkan hasil negatif 5.6. Hasil Identifikasi Bakteri Escherichia coli Peremajaan Bakteri Peremajaan bakteri dilakukan dengan menggunakan metode gores. Biakan murni bakteri Escherichia coli diambil satu ose kemudian di inokulasikan dengan cara digoreskan. Pertumbuhan Escherichia coli dapat diamati secara visual dari garis streak yang sangat halus pada permukaan agar, ukuran koloni kecil, kepadatan koloni sangat padat, dan warna koloni bakteri putih susu. Gambar Hasil Peremajaan Bakteri Escherichia coli Pewarnaan Bakteri Diambil 1 ose biakan yang tumbuh pada media NA diletakkan pada object glass kemudian dilakukan fiksasi. Sediaan ditetesi larutan crystal violet, didiamkan 1 menit, dibilas dengan air. Selanjutnya ditetesi dengan larutan lugol, diamkan 1 menit. Setelah itu dibilas dengan alkohol 96% selama 5-10 detik sambil digoyanggoyangkan hingga tidak terdapat zat warna yang mengalir diatas sediaan, lalu

9 53 dibilas lagi dengan air. Kemudian ditetesi lagi dengan larutan safranin sebagai warna pembanding, didiamkan selama 30 detik, dibilas dengan air, keringkan, lalu diamati dibawah mikroskop (Tim Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya, 2003). Hasil pengamatan Escherichia coli pada mikroskop dapat dilihat pada Gambar 5.11 berbentuk batang pendek (kokobasil). Gambar Bakteri Escherichia coli dibawah Mikroskop dengan Perbesaran 1000x 5.7. Hasil Uji Antibakteri Fraksi Etanol Buah Limonia acidissima L. dengan Metode Difusi Cakram Terhadap Bakteri Escherichia coli Pada penelitian ini dilakukan pengujian aktivitas antibakteri fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dengan metode difusi cakram. Digunakan 3 macam konsentrasi pada pengujian ini yaitu sebesar 100 mg/ml, 150 mg/ml, dan 200 mg/ml untuk dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Hasil pengujian antibakteri dengan metode difusi cakram dapat dilihat pada Tabel V.3 berikut ini : Tabel V.3. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Fraksi Etanol Daging Buah Limonia acidissima L. Bahan Uji Diameter Zona Hambat (mm) Rata-Rata ± Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Standar Deviasi (mm) Sampel 1 (5 mg/ml) 15,60 12,20 13,50 13, 77 ± 1,72 Sampel 2 (7,5 mg/ml) 17,30 13,20 15,90 15,47 ± 2,08 Sampel 3 (10 mg/ml) 18,00 14,20 17, 70 16,63 ± 2,11

10 54 Bahan Uji Diameter Zona Hambat (mm) Rata-Rata ± Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Standar Deviasi (mm) Kontrol Positif 15,60 16,70 17,70 16,67 ± 1,05 (Kloramfenikol 30 µg/disk) Kontrol Negatif (Aquadest + DMSO 1%) ± 0 Keterangan : Diameter zona hambat 5 mm pada kontrol negatif merupakan diameter kertas cakram Dari data rata-rata diameter zona hambat pertumbuhan bakteri diatas maka dapat di buat diagram batang sebagai berikut : Diameter Zona Hambat (mm) Sampel Uji Gambar Perbandingan aktivitas antibakteri dari berbagai konsentrasi fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. dengan metode difusi cakram Dari data diatas dapat dilihat dari konsentrasi terkecil hingga terbesar yaitu 100 mg/ml, 150 mg/ml dan 200 mg/ml memberikan hasil yang positif bahwa fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. memiliki aktivitas antibakteri terhadap

11 55 bakteri Escherichia coli dan semakin tinggi konsentrasi yang digunakan maka semakin besar pula zona hambat yang dihasilkan. A). 7,5 mg/disk 10 mg/disk 7,5 mg/disk 10 mg/disk K (-) K (-) 5 mg/disk K (+) 5 mg/disk K (+) B). 7,5 mg/disk 10 mg/disk 7,5 mg/disk 10 mg/disk K (-) K (-) 5 mg/disk K (+) 5 mg/disk K (+) C). 7,5 mg/disk 10 mg/disk 7,5 mg/disk 10 mg/disk K (-) K (-) 5 mg/disk K (+) 5 mg/disk K (+) Gambar Hasil pengujian difusi cakram fraksi etanol daging buah Limonia acidissima L. A) replikasi 1 gambar sebelum dan sesudah disk cakram diangkat : B) replikasi 2 gambar sebelum dan sesudah disk cakram diangkat : C) replikasi 3 gambar sebelum dan sesudah disk cakram diangkat