BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Transkripsi

1 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN IV.1 Ekstraksi Daun Miana (Coleus antropurpureus Benth) Sampel daun Miana (Coleus antropurpureus Benth) asal desa Kesetnana Kabupaten TTS, sebanyak 200 gram, diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70% sebanyak 500 ml. Maserasi dilakukan selama 24 jam sebanyak 5 kali. Filtrat yang diperoleh pada maserasi 24 jam pertama berwarna coklat kehitaman. Intensitas warna filtrat semakin menurun pada maserasi kedua hingga maserasi kelima. Pada tahap maserasi yang kelima, diperoleh filtrat berwarna bening yang sesuai dengan warna pelarut. Filtrat hasil maserasi dituang ke dalam piring dan disimpan pada suhu ruangan selama 24 jam untuk penghilangan pelarut. Dari tahap ini, diperoleh ekstrak dengan bobot 31,89 gram (Gambar dapat dilihat pada lampiran 2), dan rendemen sebesar 15,945%. Sifat fisik dari ekstrak yang diperoleh yakni: berwarna coklat kehitaman (Gambar dapat dilihat pada lampiran 2) berbentuk pasta, bersifat lengket, dan larut baik dalam air Ekstrak kental yang diperoleh digunakan untuk analisis selanjutnya yakni: identifikasi fitokimia dengan metode Harbone, (1987), uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi sumur, fraksinasi menggunakan KLT, kromatografi kolom, dan identifikasi senyawa menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan Infrared. IV.2 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Miana Terhadap Bakteri Salmonella typhimurium Uji aktivitas antibakteri dilakukan untuk mengetahui kemampuan ekstrak daun miana dalam menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella typhimurium. Pengujian ini menggunakan metode sumur difusi. Aktivitas antibakteri dihitung dengan mengukur zona hambat di sekitar sumur difusi menggunakan jangka sorong. Hasil uji aktivitas antibakteri dari sampel daun miana (Coleus antropurpureus Benth), diketahui mampu menghambat pertumbuhan bakteri 34

2 35 Salmonella typhimurium pada konsentrasi yang tinggi. Hal ini ditunjukan oleh terbentuknya zona bening di sekitar sumur difusi. Hasil uji aktivitas antibakteri sampel daun miana terhadap bakteri Salmonella typhimurium, tertera pada Tabel IV.3. Tabel IV.3 Hasil Pengukuran KHTM Bakteri Salmonella typhimurium Konsentrasi larutan uji (%), (v/v) Pengulangan I I I Rata-rata (mm) Zona bening Keterangan 1,56% ,13% ,25% ,5 13,8 13,9 1 13,93 Kuat 25% 17,7 15,4 14,5 15,72 Kuat 50% 18,7 19, ,87 Sangat kuat 100% 26 19,5 20,9 22,13 Sangat kuat Aquades Ampisilin 1% 33,4 24,6 13,8 23,93 Sangat kuat Data pada Tabel IV.3 memperlihatkan ukuran luas zona bening yang terbentuk di sekitar sumur difusi, setelah pada sumur difusi dimasukan ekstrak daun miana, dan diinkubasi selama 24 jam. Hasil inkubasi selama 24 jam, kemudian dilakukan pengukuran rata-rata diameter zona bening di sekitar sumur difusi. Tampak bahwa ekstrak etanol sampel daun miana dengan konsentrasi 100% dan 50%, memiliki daya hambat yang sangat kuat terhadap pertumbuhan bakteri. Pada konsetrasi 25%, dan 12,5% memiliki daya hambat yang kuat terhadap pertumbuhan bakteri, sedangkan pada konsentrasi 6,25%, 3,13% dan 1,56% tidak memiliki daya hambat. Menurut Davis dan Stout, (1971) dalam Nahak, (2016), apabila zona bening berukuran kurang dari 5 mm, maka aktivitas penghambatnya dinyatakan lemah. Jika zona hambat berkisar 5-10 mm, maka dinyatakan sedang, jika zona bening berukuran mm dinyatakan kuat, dan luas zona bening 20 mm atau lebih dinyatakan sangat kuat. Berdasarkan pendapat Davis dan Stout (1971), maka dari hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak sampel daun miana dalam penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa semakin besar konsentrasi larutan uji maka semakin besar pula zona hambat yang terbentuk di sekitar sumur difusi terhadap isolat bakteri Salmonella typhimurium.

3 36 Dari hasil pengujian ini diperoleh bahwa pada konsentrasi 12% memberikan efek daya hambat yang tergolong kuat terhadap bakteri uji, sedangkan pada konsentrasi 6,25%, 3,13% dan 1,56% tidak memberikan efek penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji. Hasil pengamatan ini belum dapat disimpulkan bahwa 12% merupakan konsentrasi hambat tumbuh minimum terhadap bakteri uji. Sebab pada konsentrasi 12% masih memberikan efek penghambatan yang masih kuat (bakterisidal). Aquades steril yang digunakan sebagai kontrol negatif, tidak menghasilkan zona bening di sekitar sumur difusi, karena aquades steril tidak mengandung zat yang memiliki aktivitas antibakteri. Ampisilin sebagai kontrol postif menghasilkan zona bening dengan rata-rata 23,93 mm. Hal ini dapat terjadi karena ampisilin merupakan bahan antibiotik sintetik. Adanya zona hambat yang terbentuk di sekitar sumur difusi oleh ekstrak daun miana, dapat disebabkan karena kandungan kimiawi dalam ekstrak daun miana, sebagaimana yang terdeteksi pada identifikasi fitokimia. Pada uji fitokimia terhadap ekstrak sampel daun miana, diketahui mengandung senyawa-senyawa yang bersifat sebagai antibakteri yakni: alkaloid, flavonoid dan tanin. IV.3 Identifikasi Komponen Aktif IV.3.1 Uji Fitokimia Ekstrak Daun Miana (Coleus antropurpureus Benth) Uji fitokimia menggunakan metode Harbone, (1987) untuk mengetahui jenis kandungan senyawa metabolit sekunder yang merupakan golongan senyawa aktif dalam ekstrak daun miana. Uji fitokimia dalam penelitian ini, meliputi ujii alkaloid, flavonoid, steroid, terpenoid saponin, dan tannin. Hasil uji fitokimia tertera pada Tabel IV.2.

4 37 Tabel IV.2 Hasil uji fitokimia ekstrak daun miana asal desa Kesetnana Kabupaten TTS Senyawa Pereaksi Warna teoritis Hasil Uji Ket Alkaloid - Mayer - Wagner - Dragendorff - Endapan putih - Endapan coklat - Endapan jingga - Endapan putih - Endapan coklat - Endapan jingga Flavonoid Metanol, H 2 SO 4 Hijau Hijau + Steroid Liberman Bauchard Hijau kehitaman Kuning - Terpenoid Liberman Bauchard Merah atau Ungu Kuning - Saponin Aquades Busa Tidak berbusa - Tanin FeCl 3 Hijau kehitaman atau biru kehitaman Sumber: Dian dkk, (2016) Hijau kehitaman + Berdasarkan Tabel IV.2 di atas tampak bahwa sampel daun miana asal desa Kesetnana, Kabupaten TTS mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, dan tidak mengandung senyawa steroid, saponin serta terpenoid. Menurut Frederik, (2015) daun miana memiliki kandungan kimia yakni minyak atsiri, alkaloid, flavonoid, dan saponin. Saponin tidak teridentifikasi dalam pengujian sampel ini. Hal ini dapat disebabkan karena pengaruh lingkungan, cuaca, tekstur tanah dan cara merawat tanaman. Menurut Salim dkk, (2016), hal ini dapat dipengaruhi oleh tekstur tanah pada tempat tumbuh tanaman tersebut dan cara merawat tanaman. IV.3.2 Penentuan Eluen untuk Fraksinasi melalui Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Ekstrak etanol sampel ditentukan eluen fraksinasinya (fase geraknya) melalui KLT. Fase diam yang digunakan adalah Plat Silika G 60 F 254. Pengamatan terhadap noda pada plat KLT dilakukan menggunakan lampuuv 254nm dan 366 nm. Pencarian fase gerak (eluen) diawali dengan eluen tunggal, dan kemudian kombinasi eluen, untuk mendapatkan pemisahan terbaik, yang ditunjukan melalui tahap pemisahan antar noda (spot). Hasil yang diperoleh adalah kombinasi 2 pelarut yakni kloroform : etil asetat dengan perbandingan 0,5 : 2 (v/v). Kombinasi dari pelarut ini menghasilkan 4 spot yang terpisah secara relatif berjauhan

5 38 (gambar IV.14). Menurut Yani, (2011) eluenterbaik adalah eluen yang menghasilkan jumlah noda terbanyak dan terpisah. Berdasarkan hasil KLT, maka digunakan kombinasi larutan etil asetat dan kloforom dengan perbandingan 2 : 0,5 (v/v) sebagai eluen untuk fraksinasi senyawa pada sampel melalui kromatografi kolom. Gambar IV.15 Hasil KLT menggunakan sinar UV 366 nm dan 254 nm IV.3.3 Fraksinasi Sampel melalui Kromatografi Kolom Eksrak etanol sampel difraksinasi melalui kromatografi kolom menggunakan fase diam yakni silica gel 60 dan fase gerak yakni kombinasi pelarut etil asetat : kloroform (2 : 0,5, v/v). Berdasarkan banyaknya volume eluen yang disiapkan maka diperoleh fraksi sebanyak 40 tabung. Pemeriksaan atau pengamatan kandungan senyawa pada setiap fraksi dilakukan dengan cara KLT. Berdasarkan hasil pengamatan melalui KLT tersebut maka dilakukan pengelompokan fraksi-fraksi berdasarkan kesamaan nilai Rf dan karakter spot. Dari hasil analisis terhadap sampel ini, diperoleh 3 kelompok fraksi (Gambar IV.16). Larutan hasil fraksinasi (40 fraksi)

6 39 A B C Pengamatan karakter fraksi Perbedaan warna larutan kelompok fraksi ada pengelompokan fraksi, diperoleh pula hasil lain yakni ketiga fraksi memiliki warna larutan yang berbeda. Fraksi A (Rf: 3,48) bening, fraksi B (Rf: 3,65) kuning jernih, dan fraksi C (Rf: 2,7) hijau muda. IV.3.4 Hasil Uji Spektrofotometer UV-Vis Fraksi sampel (fraksi A, fraksi B, fraksi C) masing-masing dilakukan penguapan pelarut sehingga diperoleh hasil berupa pasta dan dilarutkan kembali menggunakan etanol p.a untuk uji Spektrofotometer UV-Vis dan Infrared dengan tujuan untuk mengetahui panjang gelombang maksimum dan gugus fungsi senyawa. Hasil Spektrofotometer UV-Vis dapat dilihat pada Gambar IV.17, IV.18, dan IV.19.

7 40 Gambar IV.17 Hasil spektrum UV-Vis Fraksi A sampel daun miana Gambar IV.18 Hasil spektrum UV-Vis Fraksi B daun miana Gambar IV.19 Hasil spektrum UV-Vis Fraksi C daun miana

8 41 Hasil spektrofotometri UV-Vis untuk Fraksi A diperoleh dua puncak serapan maksimum pada daerah 205 nm yang mengindikasikan adanya serapan benzene yang kuat (Astutiningsih, 2012), dan Panjang gelombang 210 nm mengindikasikan bahwa senyawa tersebut merupakan golongan alkaloid indol (Kong et al, 1985 dalam Pramita, 2013). Fraksi B diperoleh 3 puncak serapan maksimum pada daerah yang sama seperti fraksi A yaitu panjang gelombang 205 nm yang mengindikasikan adanya serapan benzene yang kuat (Astutiningsih, 2012). Panjang gelombang 230 nm mengindikasikan adanya serapan anilin. Panjang gelombang 230 nm dan 340 nm merupakan senyawa golongan alkaloid isokuinolin (Cordell, 1981 dalam Widi dkk, 2007). Fraksi C diperoleh 2 puncak serapan maksimum yang sama pada fraksi B yaitu Panjang gelombang 230 nm mengindikasikan adanya serapan anilin dan panjang gelombang 340 nm. Panjang gelombang 230 nm dan 340 nm merupakan senyawa golongan alkaloid isokuinolin (Cordell, 1981 dalam Widi dkk, 2007). Dengan demikian hasil analisis spektrofotometer UV-Vis sampel daun miana diduga mengandung senyawa alkaloid. IV.3.5 Hasil Uji Spektrofotometer Infrared Analisis Spektrum Infrared terhadap fraksi A,B, dan C sampel daun miana dapat dilihat pada gambar IV.20, IV.21, dan IV.22.

9 42 Gambar IV.20 Hasil Spektrum IR Fraksi A daun miana Gambar IV.21 Hasil Spektrum IR Fraksi B daun miana

10 43 Gambar IV.22 Hasil Spektrum IR Fraksi C daun miana Analisis spektrum IR terhadap fraksi A, fraksi B, dan fraksi C kemungkinan terdapat gugus fungsi seperti N-H (amina primer) pada daerah serapan gelombang 3600 cm -1 dan 3500 cm -1. Adanya pita tajam pada bilangan 2900 cm -1 merupakan gugus fungsi C-H alifatik. Adanya serapan tajam pada bilangan gelombang 1741,72 cm -1 merupakan gugus fungsi karbonil (C=O). Adanya gugus fungsi C-N (amina aromatik) dengan serapan tajam pada bilangan gelombang 1373,32 cm -1. Adanya serapan tajam pada bilangan gelombang 1242,16 cm -1 dan 1047,35 cm -1 merupakan gugus fungsi C-N (amina alifatik). Adanya serapan tajam pada bilangan gelombang 758,02 cm -1 merupakan gugus fungsi kibasan N-H. Hasil analisis fraksi sampel daun miana melalui spektrofotometri infrared disajikan pada Tabel IV.4.

11 44 Tabel IV.4 Hasil Data Spektrum Infrared fraksi A,B,C sampel daun miana Bilangan Gelombang (cm -1 ) Komponen Teridentifikasi Fraksi sampel daun miana Pustaka Bentuk Gugus Fungsi A B C Rujukan Pita Tajam N H (amina primer) Tajam C H alifatik 1741, , , Tajam C = O karbonil 1373, , , Tajam C N aromatic 1242,16; 1242,16; 1242,16; 1047, , , Tajam C N alifatik 758,02 758,02 758, Tajam Kibasan N H Sumber: Silverstein,dkk.hal , (1986). Berdasarkan analisis data IR Fraksi A, Fraksi B, dan Fraksi C sampel daun miana ditemukan gugus fungsi: N-H (amina primer), C-H alifatik, C=O, dan C-N (alifatik dan aromatik) yang merupakan kekhasan senyawa alkaloid (Aksara dkk, 2013).