Lampiran 1 Gambar 2. Hasil identifikasi tanaman sirih merah
Lampiran 2 Gambar 3. Tanaman sirih merah (Piper cf. fragile Benth.) Gambar 4. Daun sirih merah
Lampiran 2 (Lanjutan) Gambar 5. Simplisia daun sirih merah
Lampiran 3 Tabel 1. Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia daun sirih merah No. Organoleptis Hasil 1 Bentuk Daun bertangkai berbentuk jantung, ujung daun runcing, bertepi rata, daun berkerut, panjang daun 10-15 cm, lebar 7-8 cm 2 Bau Beraroma wangi khas sirih 3 Rasa Sangat pahit 4 Warna Berwarna coklat
Lampiran 4 1 2 3 4 5 Gambar 6. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia daun sirih merah pada perbesaran 10 40 Keterangan: 1. Berkas pembuluh ylem 2. Rambut penutup 3. Stomata tipe anomositik 4. Kelenjar minyak atsiri 5. Tetesan minyak
Lampiran 5 Hasil perhitungan karakteristik simplisia 5.1 Penetapan kadar air Volume air (ml) Kadar air = 100 % Berat sampel (g) a. Berat sampel I = 5,000 g Volume air = 0,4 ml Kadar air 0,4 = 100 % = 8,00 % 5,000 b. Berat sampel II = 5,002 g Volume air = 0,5 ml Kadar air 0,5 = 100 % = 9,99 % 5,002 c. Berat sampel III = 5,001 g Volume air = 0,4 ml 0,4 Kadar air = 100 % = 7,99 % 5,001 Kadar air rata-rata = 8,00 % + 9,99 % + 3 7,99 % = 8,66 %
Lampiran 5 (lanjutan) 5.2 Penetapan kadar sari larut air Kadar sari larut air = Berat sari (g) 100 Berat sampel (g) 20 100 % a. Berat sampel I = 5,001 g Berat sari = 0,183 g Kadar sari larut air = 0,183 g 5,001g 100 20 100 % = 18,29 % b. Berat sampel II = 5,002 g Berat sari = 0,175 g Kadar sari larut air = 0,175 g 5,002 g 100 20 100 % = 17,49 % c. Berat sampel III = 5,002 g Berat sari = 0,194 g Kadar sari larut air = 0,194 g 5,002 g 100 20 100 % = 19,39 % Kadar sari rata-rata = 18,29 % + 17,49 % + 3 19,39 % = 18,39 %
Lampiran 5 (lanjutan) 5.3 Penetapan kadar sari larut etanol Kadar sari larut etanol = Berat sari (g) 100 Berat sampel (g) 20 100 % a. Berat sampel I = 5,001 g Berat sari = 0,125 g Kadar sari larut etanol = 0,125 g 5,001g 100 20 100 % = 12,49 % b. Berat sampel II = 5,001 g Berat sari = 0,109 g Kadar sari larut etanol = 0,109 g 5,001g 100 20 100 % = 10,89 % c. Berat sampel III = 5,002 g Berat sari = 0,115 g Kadar sari larut etanol = 0,115 g 5,002 g 100 20 100 % = 11,49 % Kadar sari rata-rata = 12,49 % + 10,89 % + 3 11,49 % = 11,62 %
Lampiran 5 (lanjutan) 5.4 Penetapan kadar abu total Kadar abu total = Berat abu (g) Berat sampel (g) 100 % a. Berat sampel I = 2,0006 g Berat abu = 0,1900 g 0,1900 Kadar abu total = 100 % 2,0006 = 9,49 % b. Berat sampel II = 2,0002 g Berat abu = 0,1884 g 0,1884 Kadar abu total = 100 % 2,0002 = 9,42 % c. Berat sampel III = 2,0005 g Berat abu = 0,1960 g 0,1960 Kadar abu total = 100 % 2,0005 = 9,79 % Kadar abu total rata-rata = 9,49 % + 9,42 % + 3 9,79 % = 9,56 %
Lampiran 5 (lanjutan) 5.5 Penetapan kadar abu tidak larut asam Kadar abu tidak larut asam = a. Berat sampel I = 2,0006 g Berat abu (g) Berat sampel (g) 100 % Berat abu = 0,0253 g 0,0253 Kadar abu = 100 % 2,0006 = 1,26 % b. Berat sampel II = 2,0002 g Berat abu = 0,0241 g 0,0241 Kadar abu = 100 % 2,0002 = 1,20 % c. Berat sampel III = 2,0005 g Berat abu = 0,0229 g 0,0229 Kadar abu = 100 % 2,0005 = 1,14 % Kadar abu rata-rata = 1,26 % + 1,20 % + 3 1,14% = 1,20 %
Lampiran 6 Tabel 2. Hasil karakteristik simplisia daun sirih merah dibandingkan dengan daun sirih (Piper betle L.) No. Parameter Daun sirih merah Daun sirih (Piper betle L.) 1 Kadar air 8,66% Tidak lebih dari 10% 2 Kadar sari larut air 18,39% Tidak kurang dari 14% 3 Kadar sari larut etanol 11,62% Tidak kurang dari 4,5% 4 Kadar abu total 9,56% Tidak lebih dari 14% 5 Kadar abu tidak larut asam 1,20% Tidak lebih dari 7% Tabel 3. Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia daun sirih merah No. Golongan senyawa kimia Hasil 1 Flavonoid + 2 Alkaloid + 3 Saponin + 4 Tanin + 5 Glikosida + 6 Steroid/triterpenoid + Keterangan : + = memberikan hasil = tidak memberikan hasil
Lampiran 7 Serbuk simplisia daun sirih merah (200 g) Dimaserasi selama 3 jam dengan pelarut etanol 96% Dimasukkan ke dalam perkolator Dituangkan pelarut etanol 96% secukupnya sampai semua simplisia terendam Didiamkan selama 24 jam Dibuka kran perkolator dan dibiarkan perkolat menetes dengan kecepatan 1 ml/menit Perkolat Ampas Diuapkan dengan rotary evaporator Dipekatkan dengan freeze dryer Ekstrak kental (53,2 g) Gambar 7. Bagan pembuatan ekstrak etanol daun sirih merah secara perkolasi
Lampiran 8 Perhitungan Kadar Glibenklamid Dari Tablet Glibenklamid Tabel 5. Konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia Mencit 20 g Tikus 200 g Marmut 400 g Kelinci 1,2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit 20 g Tikus 200 g Marmut 400 g Kelinci 1,2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg 1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,2 387,9 0,14 1,0 1,74 3,9 9,2 17,8 56,0 0,08 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2 0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1 0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,16 0,32 1,0 Diketahui: Tiap 1 tablet Glibenklamid mengandung 5 mg Glibenklamid. Dosis Glibenklamid yang digunakan 1 mg/kg berat badan (dosis dewasa 5 mg-20 mg, berat dewasa dari data konversi 70 kg, dosis untuk tikus 200 g yaitu 5 mg-20 mg 0,018 = 0,09 mg-0,36 mg). Ditanya: Berapa berat serbuk Glibenklamid yang akan diambil? Dijawab: Tablet Glibenklamid ditimbang sebanyak 20 tablet (berat = 4029 mg). 20 tablet Glibenklamid mengandung Glibenklamid sebanyak 100 mg. Glibenklamid yang digunakan = 1 mg. Maka serbuk Glibenklamid yang diambil = 1mg 100 mg 4029 mg = 40,29 mg Jadi serbuk Glibenklamid sebanyak 40,29 mg mengandung Glibenklamid sebanyak 1 mg.
Lampiran 8 (lanjutan) Contoh perhitungan dosisnya sebagai berikut: Dosis Glibenklamid yang digunakan 1 mg/kg BB = 1mg 1000 g 180 g = 0,18 mg Suspensi Glibenklamid = 40,29 mg/100 ml Maka volume larutan yang diberi = 0,18 mg 100 ml 40,29 mg = 0,44 ml
Lampiran 9 Tikus Dikondisikan selama 2 minggu Dipuasakan selama 18 jam Ditimbang berat badan Dicukur bulu ekor tikus dan dibersihkan dengan alkohol Diukur kadar gula darah puasa dengan cara mengambil darah melalui vena bagian ekor yang ditusuk dengan jarum suntik Diteteskan darah yang keluar pada test strip yang terpasang pada glukometer Kadar gula darah puasa (mg/dl) Diberikan larutan glukosa 50% dosis 5 g/kg BB secara oral Diukur kadar gula darah setelah 30 menit Tikus diabetes Diberikan perlakuan secara oral pada setiap kelompok: I.Tidak diberi obat hanya diberi larutan glukosa 50% dosis 5 g/kg BB II.Diberikan suspensi CMC 0,5% dosis 1% BB III.Diberikan suspensi glibenklamid dosis 1 mg/kg BB IV.Diberikan suspensi EESM dosis 50 mg/kg BB V.Diberikan suspensi EESM dosis 100 mg/kg BB VI.Diberikan suspensi EESM dosis 200 mg/kg BB Diukur kadar gula darah setelah perlakuan pada menit ke-60, 90, 120, 150 dan 180 Kadar gula darah tikus (mg/dl) Gambar 8. Bagan prosedur kerja pengujian farmakologi
Lampiran 10 1 2 3 4 Gambar 9. Alat Glukometer Keterangan : 1. Accu-Chek check strip 2. Accu-Chek test strip 3. Accu-Chek vial test 4. Accu-Chek Meter
Lampiran 11 Hasil analisis data SPSS Oneway ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Sig. Menit 0 Between Groups 103.000 5 20.600.725.610 Within Groups 852.000 30 28.400 Total 955.000 35 Menit 30 Between Groups 71.250 5 14.250.144.980 Within Groups 2963.500 30 98.783 Total 3034.750 35 Menit 60 Between Groups 5001.472 5 1000.294 28.648.000 Within Groups 1047.500 30 34.917 Total 6048.972 35 Menit 90 Between Groups 17335.000 5 3467.000 44.793.000 Within Groups 2322.000 30 77.400 Total 19657.000 35 Menit 120 Between Groups 23022.806 5 4604.561 169.251.000 Within Groups 816.167 30 27.206 Total 23838.972 35 Menit 150 Between Groups 14145.889 5 2829.178 69.646.000 Within Groups 1218.667 30 40.622 Total 15364.556 35 Menit 180 Between Groups 1869.250 5 373.850 22.453.000 Within Groups 499.500 30 16.650 Total 2368.750 35 Post Hoc Tests Homogeneous Subsets Menit 0 perlakuan N Subset for alpha = 0.05 1 Duncan a Glibenklamid 6 101.6667 EESM 200 6 103.5000 EESM 50 6 104.5000 Kontrol negatif 6 104.6667 EESM 100 6 105.5000 Kontrol diabetes 6 107.1667 Sig..125 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000.
Lampiran 11 (lanjutan) Menit 30 perlakuan N Subset for alpha = 0.05 Duncan a EESM 200 6 200.1667 Kontrol diabetes 6 201.0000 Kontrol negatif 6 202.5000 Glibenklamid 6 203.1667 EESM 50 6 203.5000 EESM 100 6 204.1667 Sig..547 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. 1 Menit 60 Subset for alpha = 0.05 perlakuan N 1 2 3 4 Duncan a EESM 200 6 162.5000 Glibenklamid 6 175.3333 EESM 100 6 180.5000 EESM 50 6 188.5000 Kontrol negatif 6 193.8333 193.8333 Kontrol diabetes 6 197.1667 Sig. 1.000.140.128.336 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. Menit 90 Subset for alpha = 0.05 perlakuan N 1 2 3 4 Duncan a EESM 200 6 129.1667 Glibenklamid 6 141.1667 EESM 100 6 147.8333 EESM 50 6 166.3333 Kontrol negatif 6 183.1667 Kontrol diabetes 6 189.3333 Sig. 1.000.199 1.000.234 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000.
Lampiran 11 (lanjutan) Menit 120 Subset for alpha = 0.05 perlakuan N 1 2 3 4 Duncan a EESM 200 6 104.5000 Glibenklamid 6 120.5000 EESM 100 6 123.8333 EESM 50 6 140.0000 Kontrol negatif 6 169.5000 Kontrol diabetes 6 172.8333 Sig. 1.000.277 1.000.277 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. Menit 150 Subset for alpha = 0.05 perlakuan N 1 2 3 Duncan a Glibenklamid 6 100.5000 EESM 200 6 101.1667 EESM 100 6 104.8333 104.8333 EESM 50 6 112.3333 Kontrol negatif 6 142.3333 Kontrol diabetes 6 149.1667 Sig..276.050.073 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. Menit 180 Subset for alpha = 0.05 perlakuan N 1 2 Duncan a Glibenklamid 6 98.1667 EESM 200 6 99.8333 EESM 50 6 102.8333 EESM 100 6 103.1667 Kontrol negatif 6 114.3333 Kontrol diabetes 6 117.1667 Sig..060.239 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000.
Lampiran 12 Tabel 6. Data hasil pengukuran KGD tikus setelah perlakuan Kelompok I II III IV V BB tikus (g) KGD puasa (mg/dl) KGD setelah 30 menit pemberian larutan glukosa 50% (mg/dl) 60 menit KGD setelah perlakuan (mg/dl) 90 menit 120 menit 150 menit 180 menit 184 107 197 195 187 169 139 115 186 110 211 207 199 178 162 122 183 102 194 190 185 169 138 116 188 112 201 197 188 174 155 118 187 104 204 200 192 177 147 113 184 108 199 194 185 170 154 119 182 106 207 197 185 173 137 116 181 99 190 180 172 162 144 108 187 103 201 195 181 171 148 117 190 110 210 201 197 174 153 120 188 108 198 190 173 165 126 106 185 102 209 200 191 172 146 119 190 99 190 181 139 126 105 101 197 107 217 179 134 118 95 90 192 99 189 167 124 107 97 95 189 103 215 176 153 122 106 105 195 105 210 180 159 128 102 102 188 97 198 169 138 122 98 96 195 112 221 195 184 148 117 107 174 110 206 187 160 141 115 105 184 108 214 191 163 127 108 101 191 98 189 185 154 138 110 100 197 100 201 188 160 144 117 104 200 99 190 185 177 142 107 100 176 115 214 186 158 127 108 105 190 107 201 179 144 120 101 100 178 98 199 172 148 127 110 109 186 102 211 189 150 126 101 100 193 99 190 177 146 122 107 104 198 112 210 180 141 121 102 101 172 101 199 157 130 107 104 103 191 110 209 169 131 105 102 100 VI 182 112 213 163 129 103 99 99 190 97 189 159 126 104 100 98 176 102 201 168 132 107 103 101 188 99 190 159 127 101 99 98 Rata-rata 104,40 202,32 182,27 158,70 137,67 118,00 105,83
Lampiran 13 Tabel 7. Data hasil pengukuran rata-rata KGD tikus Kelompok BB tikus (g) KGD puasa (mg/dl) KGD setelah 30 menit pemberian larutan glukosa 50% (mg/dl) 60 menit KGD setelah perlakuan (mg/dl) 90 menit 120 menit 150 menit 180 menit I 184 107 197 195 187 169 139 115 186 110 211 207 199 178 162 122 183 102 194 190 185 169 138 116 188 112 201 197 188 174 155 118 187 104 204 200 192 177 147 113 184 108 199 194 185 170 154 119 Jumlah 643 1206 1183 1136 1037 895 703 Rata-rata 107,16 201 197,16 189,33 172,83 149,16 117,16 II 182 106 207 197 185 173 137 116 181 99 190 180 172 162 144 108 187 103 201 195 181 171 148 117 190 110 210 201 197 174 153 120 188 108 198 190 173 165 126 106 185 102 209 200 191 172 146 119 Jumlah 628 1215 1163 1099 1017 854 686 Rata-rata 104,66 202,5 193,83 183,16 169,5 142,33 114,33 III 190 99 190 181 139 126 105 101 197 107 217 179 134 118 95 90 192 99 189 167 124 107 97 95 189 103 215 176 153 122 106 105 195 105 210 180 159 128 102 102 188 97 198 169 138 122 98 96 Jumlah 610 1219 1052 847 723 603 589 Rata-rata 101,66 203,16 175,33 141,16 120,5 100,5 98,16
Lampiran 13 (lanjutan) Tabel 7 (lanjutan) IV 195 112 221 195 184 148 117 107 174 110 206 187 160 141 115 105 184 108 214 191 163 127 108 101 191 98 189 185 154 138 110 100 197 100 201 188 160 144 117 104 200 99 190 185 177 142 107 100 Jumlah 627 1221 1131 998 840 674 617 Rata-rata 104,5 203,5 188,5 166,33 140 112,33 102,83 V 176 115 214 186 158 127 108 105 190 107 201 179 144 120 101 100 178 98 199 172 148 127 110 109 186 102 211 189 150 126 101 100 193 99 190 177 146 122 107 104 198 112 210 180 141 121 102 101 Jumlah 633 1225 1083 887 743 629 619 Rata-rata 105,5 204,16 180,5 147,83 123,83 104,83 103,16 172 101 199 157 130 107 104 103 VI 191 110 209 169 131 105 102 100 182 112 213 163 129 103 99 99 190 97 189 159 126 104 100 98 176 102 201 168 132 107 103 101 188 99 190 159 127 101 99 98 Jumlah 621 1201 975 775 627 607 599 Rata-rata 103,5 200,16 162,5 129,16 104,5 101,16 99,83 Keterangan: I. Tidak diberi obat hanya diberi larutan glukosa 50% dosis 5 g/kg BB II. Diberikan suspensi CMC 0,5% dosis 1% BB III. Diberikan suspensi glibenklamid dosis 1 mg/kg BB IV. Diberikan suspensi EESM dosis 50 mg/kg BB V. Diberikan suspensi EESM dosis 100 mg/kg BB VI. Diberikan suspensi EESM dosis 200 mg/kg BB
Lampiran 14 Perhitungan dosis Perhitungan dosis ekstrak etanol daun sirih merah (EESM) dosis 1 ml. Volume yang diberikan = 1 ml Konsentrasi ekstrak 1% = 1 g/100 ml = 1000 mg/100 ml = 10 mg/ml Volume 1 ml = jumlah obat 10 mg/ml Maka jumlah obat yang diberikan = 10 mg Jadi, 10 mg dosis = 200 g 1000 g 10000 mg = dosis 200 Dosis 10000 mg = 200 Dosis = 50 mg/kg BB Jadi dosis sebenarnya untuk tikus adalah 50 mg/kg BB. Dimana perhitungan dosisnya sebagai berikut: Jumlah obat yang diberikan 50 mg = 200 g 1000 g = 10 mg Maka volume larutan yang diberi = 10 mg 10 mg/ml = 1 ml
Lampiran 14 (lanjutan) Tabel 8. Volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada beberapa hewan uji Jenis hewan uji Volume maksimum (ml) sesuai jalur pemberian i.v. i.m. i.p. s.c. p.o. Mencit (20-30 g) 0,5 0,05 1,0 0,5-1,0 1,0 Tikus (200 g) 1,0 0,1 2-5 2-5 5,0 Hamster (50 g) - 0,1 1-2 2,5 2,5 Marmut (250 g) - 0,25 2-5 5,0 10,0 Kelinci (2,5 kg) 5-10 0,5 10-20 5-10 20,0 Kucing (3 kg) 5-10 1,0 10-20 5-10 50,0 Anjing (5 kg) 10-20 5,0 20-50 10,0 100,0 Lampiran 15
Daun sirih merah segar Dicuci dengan air mengalir Ditiriskan dan ditimbang Dikeringkan di lemari pengering pada temperatur ± 40 C Simplisia Ditimbang Diserbukkan Serbuk simplisia Skrining fitokimia Karakterisasi simplisia Pembuatan ekstrak - Alkaloid - Flavonoid - Saponin - Tanin - Glikosida - Steroid/triterpenoid - Pemeriksaan makroskopik - Pemeriksaan mikroskopik - Penetapan kadar air - Penetapan kadar sari larut air - Penetapan kadar sari larut etanol - Penetapan kadar abu total - Penetapan kadar abu tidak larut asam Perkolat Diperkolasi dengan pelarut etanol 96% Diuapkan dengan rotary evaporator Dipekatkan dengan freeze dryer Ekstrak kental Uji efek hipoglikemik terhadap tikus putih Gambar 16.Bagan penelitian uji efek hipoglikemik EESM terhadap tikus putih jantan