Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman

LAMPIRAN

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman 57

Lampiran 2. Hasil FTIR Kristal Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. 58

Lampiran 3. Hasil Uji Titik Lebur Kristal Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. 59

60 Lampiran 4. Data Recorder Pada Uji In Vitro A. Seri Kadar Agonis (ACh) B. Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. + Agonis (ACh)

C. Reversibilitas (Agonis ACh) 61

62 D. DMSO + Agonis (ACh) E. Atropin + Agonis (ACh)

63 Lampiran 5. Data Pengaruh Pelarut DMSO Terhadap Kontraksi Otot Polos Ileum a. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Akibat Pemberian Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Log Konsentrasi (M) Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 Mean SEM -10.0 22.22 11.11 28.57 5.56 5.56 5.56 13.10 2.88-9.5 22.22 11.11 28.57 5.56 5.56 5.56 13.10 2.88-9.0 33.33 11.11 42.86 5.56 5.56 5.56 17.33 4.77-8.5 44.44 22.22 42.86 5.56 5.56 11.11 21.96 5.16-8.0 55.56 22.22 42.86 5.56 5.56 11.11 23.81 6.06-7.5 55.56 33.33 42.86 5.56 5.56 11.11 25.66 6.15-7.0 88.89 33.33 42.86 5.56 16.67 22.22 34.92 8.50-6.5 88.89 33.33 57.14 22.22 22.22 33.33 42.86 7.48-6.0 88.89 33.33 57.14 27.78 44.44 55.56 51.19 6.31-5.5 100.00 44.44 71.43 33.33 72.22 66.67 64.68 6.77-5.0 100.00 66.67 71.43 66.67 94.44 77.78 79.50 4.17-4.5 100.00 66.67 85.71 100 100 88.89 90.21 3.79-4 100.00 88.89 100 100 100 100 98.15 1.31-3.5 100.00 100 100 100 100 100 100 0.00 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

64 b. Data Pengaruh Pelarut DMSO terhadap Kontraksi Otot Polos ileum akibat pemberian DMSO + seri kadar Asetilkolin Log Respon Kontraksi Konsentras i (M) 1 2 3 4 5 6 Mean SEM -10.0 11.11 11.11 14.29 5.56 16.67 5.56 10.71 1.30-9.5 22.22 11.11 14.29 5.56 16.67 5.56 12.57 1.89-9.0 22.22 22.22 14.29 11.11 16.67 5.56 15.34 1.88-8.5 33.33 22.22 28.57 11.11 16.67 5.56 19.58 3.04-8.0 55.56 33.33 28.57 16.67 16.67 11.11 26.98 4.70-7.5 66.67 33.33 28.57 16.67 16.67 11.11 28.84 5.86-7.0 77.78 33.33 28.57 22.22 22.22 22.22 34.39 6.27-6.5 88.89 33.33 42.86 22.22 33.33 27.78 41.40 7.00-6.0 88.89 44.44 57.14 22.22 50.00 50.00 52.12 6.24-5.5 100.00 55.56 57.14 27.78 66.67 55.56 60.45 6.74-5.0 100.00 66.67 71.43 61.11 72.22 66.67 73.02 3.99-4.5 100.00 77.78 71.43 83.33 77.78 72.22 80.42 3.04-4 100.00 88.89 100.00 100.00 100.00 100.00 98.15 1.31-3.5 100.00 88.89 100.00 100.00 100.00 100.00 98.15 1.31 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

65 Lampiran 6. Data Pengaruh Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. Terhadap Reseptor ACh Otot Polos Ileum Log Konse ntrasi (M) a. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Akbat Pemberian Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 M E A N S E M -10.0 25.00 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 0.00 25.00 4.00 9.09 11.42 2.19-9.5 25.00 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 0.00 25.00 4.00 9.09 11.42 2.19-9.0 31.25 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 12.50 25.00 8.00 9.09 13.32 2.17-8.5 31.25 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 37.50 25.00 16.00 9.09 16.07 2.88-8.0 43.75 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 37.50 25.00 16.00 9.09 17.11 3.50-7.5 43.75 21.43 8.33 7.69 15.79 13.33 15.38 22.22 50.00 25.00 16.00 9.09 20.67 3.89-7.0 56.25 28.57 25.00 15.38 26.32 20.00 23.08 33.33 50.00 25.00 28.00 9.09 28.34 3.83-6.5 62.50 42.86 33.33 15.38 42.11 33.33 30.77 44.44 50.00 37.50 28.00 18.18 36.53 3.79-6.0 75.00 64.29 66.67 46.15 52.63 53.33 46.15 66.67 50.00 50.00 32.00 22.73 52.13 4.30-5.5 75.00 85.71 83.33 61.54 73.68 73.33 69.23 88.89 62.50 75.00 48.00 54.55 70.90 3.59-5.0 81.25 92.86 100 69.23 89.47 86.67 76.92 100 75.00 75.00 60.00 63.64 80.84 3.83-4.5 87.50 92.86 100 84.62 94.74 93.33 92.31 100 87.50 100 80.00 86.36 91.60 1.89-4.0 100 100 100 92.31 100 100 100 100 87.50 100 80.00 100 96.65 1.91-3.5 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 0.00 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

66 b. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Akibat Pemberian Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. 1000 μm + Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Log Konsentrasi (M) -10.0-9.5-9.0-8.5-8.0-7.5-7.0-6.5-6.0-5.5-5.0-4.5-4 -3.5 Keterangan Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 Mean SEM 7.69 8.33 7.14 6.67 8.33 7.69 7.64 0.27 7.69 8.33 7.14 6.67 8.33 7.69 7.64 0.27 7.69 8.33 7.14 6.67 8.33 7.69 7.64 0.27 7.69 8.33 7.14 6.67 8.33 15.38 8.93 1.32 7.69 8.33 14.29 20.00 16.67 15.38 13.73 1.97 15.38 8.33 14.29 20.00 16.67 15.38 15.01 1.56 15.38 16.67 28.57 40.00 33.33 38.46 28.74 4.35 15.38 33.33 42.86 53.33 50.00 38.46 38.89 5.57 23.08 50.00 42.86 66.67 50.00 46.15 46.46 5.75 38.46 66.67 71.43 80.00 66.67 61.54 64.13 5.73 38.46 91.67 85.71 80.00 83.33 61.54 73.45 8.14 69.23 91.67 92.86 100.00 91.67 76.92 87.06 4.71 92.31 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 98.72 1.28 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100 0.00 * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

67 c. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Akbat Pemberian Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. 5000 μm + Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Log Konsentrasi (M) -10.0-9.5-9.0-8.5-8.0-7.5-7.0-6.5-6.0-5.5-5.0-4.5-4 -3.5 Keterangan Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 Mean SEM 7.14 7.14 7.69 7.14 7.69 8.33 7.52 0.20 7.14 7.14 7.69 7.14 7.69 8.33 7.52 0.20 7.14 7.14 7.69 7.14 7.69 8.33 7.52 0.20 7.14 7.14 7.69 7.14 15.38 8.33 8.81 1.33 7.14 7.14 7.69 7.14 23.08 8.33 10.09 2.60 7.14 14.29 7.69 7.14 30.77 33.33 16.73 4.98 14.29 14.29 15.38 7.14 38.46 33.33 20.48 5.06 28.57 28.57 23.08 35.71 46.15 41.67 33.96 3.59 28.57 42.86 46.15 50.00 61.54 58.33 47.91 4.84 42.86 57.14 61.54 71.43 61.54 66.67 60.20 4.01 64.29 71.43 76.92 85.71 61.54 83.33 73.87 4.04 71.43 78.57 92.31 85.71 61.54 91.67 80.20 4.95 85.71 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 97.62 2.38 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 0.00 * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

68 Lampiran 7. Data Uji Reversibilitas Alkaloid Lada Piper nigrum Linn.1000 μm dan 5000 μm Terhadap Reseptor ACh Otot Polos ileum a. Polos Ileum Akibat Pemberian Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Log Kons entra si (M) Respon kontraksi* 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Mean SEM -10.0 7.69 8.33 7.14 7.14 7.14 6.67 7.69 14.29 8.33 15.38 7.69 8.33 8.82 0.83-9.5 7.69 8.33 7.14 7.14 7.14 6.67 7.69 14.29 16.67 23.08 15.38 16.66 11.49 1.58-9.0 7.69 8.33 14.29 7.14 21.43 13.33 15.38 14.29 16.67 23.08 15.38 16.66 14.47 1.44-8.5 7.69 16.67 14.29 14.29 28.57 13.33 15.38 14.29 25.00 23.08 30.77 33.33 19.72 2.35-8.0 15.38 16.67 14.29 28.57 42.86 26.67 23.08 14.29 41.67 30.77 30.77 41.67 27.22 3.13-7.5 15.38 16.67 21.43 35.71 50.00 40.00 30.77 14.29 41.67 30.77 46.15 41.67 32.04 3.62-7.0 15.38 33.33 21.43 50.00 71.43 46.67 38.46 21.43 58.33 38.46 61.54 58.33 42.90 5.16-6.5 30.77 50.00 28.57 50.00 78.57 60.00 53.85 35.71 75.00 46.15 69.23 66.67 53.71 4.84-6.0 76.92 66.67 35.71 71.43 78.57 73.33 69.23 64.29 91.67 53.85 76.92 83.33 70.16 4.18-5.5 84.62 83.33 50.00 78.57 92.86 86.67 92.31 85.71 100 69.23 92.31 83.33 83.24 3.77-5.0 100 100 71.43 78.57 100 93.33 100 100 100 76.92 92.31 100 92.71 3.11-4.5 100 100 78.57 100 100 100 100 100 100 84.62 100 100 96.93 2.10-4 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 0.00-3.52 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 0.00 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

69 b. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Pada Uji Reversibilitas Alkaloid Lada Piper nigrum Linn.1000 µm Log Konsentrasi (M) Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 Mean SEM -10.0 1.00 8.33 7.14 6.67 16.67 23.08 10.48 3.25-9.5 1.00 8.33 7.14 13.33 16.67 23.08 11.59 3.18-9.0 7.69 8.33 14.29 13.33 33.33 23.08 16.68 4.02-8.5 7.69 8.33 21.43 26.67 33.33 30.77 21.37 4.53-8.0 15.38 16.67 21.43 26.67 41.67 30.77 25.43 4.03-7.5 15.38 16.67 35.71 40.00 50.00 46.15 33.99 6.03-7.0 23.08 25.00 64.29 53.33 66.67 46.15 46.42 7.70-6.5 38.46 41.67 71.43 73.33 83.33 61.54 61.63 7.39-6.0 61.54 58.33 78.57 86.67 83.33 61.54 71.66 5.14-5.5 84.62 75.00 92.86 86.67 91.67 69.23 83.34 3.84-5.0 100.00 83.33 92.86 93.33 100.00 76.92 91.07 3.78-4.5 100.00 83.33 100.00 100.00 100.00 76.92 93.38 4.27-4 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 0.00-3.52 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 0.00 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

70 b. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Pada Uji Reversibilitas Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. 5000 µm Log Konsentrasi (M) Respon Konraksi* 1 2 3 4 5 6 Mean SEM -8.0 7.14 7.14 15.38 7.14 15.38 8.33 10.09 1.69-7.5 7.14 7.14 15.38 7.14 15.38 16.67 11.48 1.95-7.0 21.43 7.14 15.38 14.29 15.38 16.67 15.05 1.89-6.5 21.43 14.29 23.08 14.29 30.77 16.67 20.09 2.61-6.0 28.57 14.29 23.08 14.29 30.77 33.33 24.05 3.38-5.5 35.71 28.57 23.08 21.43 53.85 33.33 32.66 4.81-5.0 35.71 35.71 30.77 28.57 53.85 50.00 39.10 4.24-4.5 42.86 42.86 46.15 42.86 61.54 58.33 49.10 3.49-4.0 42.86 50.00 61.54 57.14 61.54 75.00 58.01 4.50-3.5 50.00 71.43 76.92 78.57 76.92 91.67 74.25 5.57-3.0 64.29 78.57 92.31 92.86 84.62 100.00 85.44 5.19-2.5 78.57 78.57 100.00 100.00 100.00 100.00 92.86 4.52-2 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 0.00-1.52 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 0.00 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

71 Lampiran 8. Data Pengaruh Atropin Terhadap Reseptor ACh Otot Polos Ileum a. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Akbat Pemberian Atropin 100 + Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Log Konsentrasi (M) Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 MEAN SEM -10.0 25.00 14.29 5.26 6.67 12.50 0.00 10.62 3.56-9.5 25.00 14.29 5.26 6.67 12.50 0.00 10.62 3.56-9.0 25.00 14.29 5.26 6.67 12.50 0.00 10.62 3.56-8.5 25.00 14.29 5.26 6.67 12.50 0.00 10.62 3.56-8.0 31.25 14.29 5.26 6.67 12.50 12.50 13.74 3.79-7.5 31.25 14.29 5.26 6.67 12.50 12.50 13.74 3.79-7.0 31.25 14.29 10.53 6.67 12.50 25.00 16.70 3.84-6.5 37.50 35.71 10.53 6.67 25.00 25.00 23.40 5.17-6.0 37.50 35.71 26.32 13.33 25.00 25.00 27.14 3.57-5.5 56.25 92.86 42.11 26.67 50.00 62.50 55.06 9.10-5.0 75.00 92.86 57.89 46.67 62.50 87.50 70.40 7.30-4.5 100.00 100.00 84.21 80.00 75.00 87.50 87.79 4.22-4.0 100.00 100.00 100.00 100.00 75.00 100.00 95.83 4.17-3.5 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 0.00 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

72 b. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Akibat Pemberian Atropin 500 + Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Log Konsentrasi (M) Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 MEAN SEM -10.0 8.33 7.69 0.00 11.11 8.00 9.09 7.37 1.56-9.5 8.33 7.69 7.69 11.11 8.00 9.09 8.65 0.54-9.0 8.33 7.69 7.69 11.11 8.00 9.09 8.65 0.54-8.5 8.33 7.69 7.69 11.11 8.00 9.09 8.65 0.54-8.0 8.33 7.69 7.69 11.11 8.00 18.18 10.17 1.69-7.5 8.33 7.69 7.69 11.11 8.00 18.18 10.17 1.69-7.0 8.33 7.69 7.69 11.11 8.00 18.18 10.17 1.69-6.5 16.67 7.69 7.69 11.11 16.00 22.73 13.65 2.41-6.0 25.00 7.69 7.69 11.11 16.00 22.73 15.04 3.07-5.5 41.67 7.69 7.69 22.22 20.00 27.27 21.09 5.24-5.0 50.00 23.08 15.38 33.33 28.00 59.09 34.81 6.79-4.5 66.67 30.77 30.77 55.56 44.00 68.18 49.32 6.86-4.0 100.00 69.23 61.54 88.89 60.00 100.00 79.94 7.61-3.5 100.00 100.00 76.92 100.00 100.00 100.00 96.15 3.85 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

73 c. Data Persentase Kontraksi Otot Polos Ileum Akbat Pemberian Kontrol Atropin + Seri Konsentrasi Asetilkolin (Kontrol) Log Konsentrasi (M) Respon Kontraksi* 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 M E A N S E M -10.0 25.00 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 0.00 25.00 4.00 9.09 11.42 2.19-9.5 25.00 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 0.00 25.00 4.00 9.09 11.42 2.19-9.0 31.25 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 12.50 25.00 8.00 9.09 13.32 2.17-8.5 31.25 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 37.50 25.00 16.00 9.09 16.07 2.88-8.0 43.75 14.29 8.33 7.69 10.53 6.67 15.38 11.11 37.50 25.00 16.00 9.09 17.11 3.50-7.5 43.75 21.43 8.33 7.69 15.79 13.33 15.38 22.22 50.00 25.00 16.00 9.09 20.67 3.89-7.0 56.25 28.57 25.00 15.38 26.32 20.00 23.08 33.33 50.00 25.00 28.00 9.09 28.34 3.83-6.5 62.50 42.86 33.33 15.38 42.11 33.33 30.77 44.44 50.00 37.50 28.00 18.18 36.53 3.79-6.0 75.00 64.29 66.67 46.15 52.63 53.33 46.15 66.67 50.00 50.00 32.00 22.73 52.13 4.30-5.5 75.00 85.71 83.33 61.54 73.68 73.33 69.23 88.89 62.50 75.00 48.00 54.55 70.90 3.59-5.0 81.25 92.86 100 69.23 89.47 86.67 76.92 100 75.00 75.00 60.00 63.64 80.84 3.83-4.5 87.50 92.86 100 84.62 94.74 93.33 92.31 100 87.50 100 80.00 86.36 91.60 1.89-4.0 100 100 100 92.31 100 100 100 100 87.50 100 80.00 100 96.65 1.91-3.5 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 0.00 Keterangan * : % Respon kontraksi dihitung berdasarkan kontraksi otot polos ileum maksimal yang dicapai oleh seri konsentrasi asetilkolin (kontrol) Media : Larutan buffer tyrode

74 Lampiran 9. Perhitungan Parameter Antagonis (pa2) Alkaloid lada Terhadap Reseptor ACh 1. Perhitungan Parameter Antagonis (PA2) Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. Terhadap Reseptor ACh No. PERLAKUAN pd2 A or A' A'/A x-1 log(x-1) Kons M (um) 1 Kontrol 4.735 0.000018 (+)Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. 2 100 3.892 0.00012 6.666667 5.666667 0.753328 1000 0.001-2 (+)Alkaloid Lada Piper 3 nigrum Linn.500 3.940 0.00011 6.111111 5.111111 0.708515 5000 0.005-1 Log M 0.76 0.755 0.75 0.745 0.74 0.735 0.73 0.725 y = -0.0448x + 0.6637 0.72 R² = 1 0.715 0.71 0.705-2.5-2 -1.5-1 -0.5 0

75 Lampiran 10. Hasil Uji Statistik Pada Uji Pengaruh Pelarut DMSO Terhadap Kontraksi Otot Polos Ileum a. Hasil Uji Statistik Pada Uji Pengaruh Pelarut DMSO terhadap Kontraksi Otot Polos Ileum yang Diinduksi Asetilkolin.

76

Lampiran 11. Hasil Uji Statistik Reversibilitas Kontraksi Otot Polos Ileum 77

78

Lampiran 12. Hasil Uji Statistik Pada Uji Pengaruh alkaloid lada Piper nigrum Linn. dan asetilkolin terhadap Kontraksi Otot Polos ileum yang diinduksi atropin. 79

80

81

82 Lampiran 13. Hasil Skor Docking Pada Reseptor ACh M3 1. Validasi Docking Ligan Asli (Tiotropium) Pada Reseptor ACh M3 2. Validasi Docking Senyawa Uji Alkaloid Lada Piper nigrum Linn. Pada Reseptor ACh M3

83 3. Validasi Docking Senyawa Pembanding (Atropine Sulfate) Pada Reseptor ACh M3