UJI AKTIVITAS CHELATING LOGAM ION BESI MINUMAN GAMBIR KOMBUCHA LOKAL BALI SECARA IN VITRO YANG BERPOTENSI UNTUK PENGOBATAN ALZHEIMER Skripsi I PUTU JEFFRY SATIAWAN 1108505050 JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA 2015 i
ii
KATA PENGANTAR Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa karena berkat rahmat-nya penulis dapat menyelesaikan Skripsi yang berjudul Uji Aktivitas Chelating Logam Ion Besi Minuman Gambir Kombucha Lokal Bali Secara In Vitro yang Berpotensi untuk Pengobatan Alzheimer tepat pada waktunya, sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm.) di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana. Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada: 1. Ibu Ni Putu Eka Leliqia, S. Farm., M.Si., Apt. selaku pembimbing I yang telah membantu dengan segenap tenaga, pikiran, motivasi, dorongan, nasihat, saran dan waktu dalam membimbing penyusunan skripsi ini. 2. Bapak Drs. I Nyoman Kadjeng Widjaja, M.Si., Apt. selaku pembimbing II yang telah membantu dengan segenap tenaga, pikiran, motivasi, dorongan, nasihat, saran dan waktu dalam membimbing penyusunan skripsi ini. 3. Bapak Ir. A.A. Gde Raka Dalem, M.Sc. (Hons) selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana. 4. Bapak Dr.rer.nat I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt. selaku Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana. 5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana yang telah memberikan dukungan, semangat dan fasilitasnya. 6. Seluruh teknisi di Jurusan Farmasi Falkultas MIPA Universitas Udayana (Mbok Dwik, Mbok Nova, Kak Anggi dan Bli Pasek) yang telah memberikan bantuan kepada penulis selama melakukan penelitian. iii
7. Orang tua tercinta I Ketut Wartayasa, S.Ag., M.Ag. dan Ni Nyoman Tirta, serta saudara penulis Ni Kadek Liana Astiti serta seluruh keluarga besar yang selalu memberikan motivasi, dukungan, dan semangat dalam penyusunan skripsi ini. 8. Teman-teman LOV 2011, khususnya kepada Sastra Negara, Suparwata, Maria Fiani, Tiara Yanti, Cipta Pratiwi, Tria Wirianti, Dayu Chandra, Istri Rismayanti dan Widi Widiastuti terimakasih atas semangat dan dukungan yang diberikan kepada penulis selama proses penyusunan skripsi ini. 9. Kepada semua pihak yang namanya tidak bisa penulis sebutkan satu per satu, penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya. Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak. Bukit Jimbaran, Juli 2015 Penulis iv
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i LEMBAR PENGESAHAN... ii KATA PENGANTAR... iii DAFTAR ISI... v DAFTAR GAMBAR... vii DAFTAR LAMPIRAN... viii ABSTRAK... ix ABSTRACT... x BAB I PENDAHULUAN... 1 1.1 Latar Belakang... 1 1.2 Rumusan Masalah... 3 1.3 Tujuan Penelitian... 3 1.4 Manfaat Penelitian... 3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA... 5 2.1 Gambir... 5 2.1.1 Klasifikasi Gambir... 5 2.1.2 Produk Gambir... 5 2.1.3 Katekin... 6 2.2 Minuman Kombucha... 6 2.3 Penyakit Alzheimer... 8 2.4 Penentuan Aktivitas Chelating Logam Ion Besi Minuman Gambir Kombucha Lokal Bali... 10 2.4.1 Chelating Logam... 10 2.4.2 Penentuan Aktivitas Chelating Logam... 10 BAB III METODE PENELITIAN... 13 3.1 Tahapan Penelitian... 13 3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian... 13 3.3 Alat dan Bahan Penelitian... 14 v
3.3.1 Alat Penelitian... 14 3.3.2 Bahan Penelitian... 14 3.4 Prosedur Penelitian... 14 3.4.1 Penetapan Kadar (+)-Katekin dalam Produk Gambir... 14 3.4.2 Preparasi Sampel Uji... 16 3.4.3 Penetapan Kadar (+)-Katekin dalam Minuman Gambir Kombucha Lokal Bali dan Larutan Produk Gambir... 17 3.4.4 Pengujian Aktivitas Chelating Logam Menggunakan Metode Ferrous Ion Chelating (FIC)... 18 3.5 Data dan Analisis Data... 19 3.6 Skema Penelitian... 20 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN... 21 4.1 Penetapan Kadar (+)-Katekin dalam Produk Gambir, Larutan Produk Gambir dan Minuman Gambir Kombucha Lokal Bali... 21 4.2 Pengujian Aktivitas Chelating Logam dengan Metode Ferrous Ion Chelating (FIC)... 23 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN... 29 5.1 Kesimpulan... 29 5.2 Saran... 29 DAFTAR PUSTAKA... 30 LAMPIRAN... 33 vi
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1 Struktur kimia (+)-katekin... 6 Gambar 2.2 Reaksi β amyloid peptide (aβ) dengan ion logam (M)... 9 Gambar 2.3 Spektrum kompleks Fe 2+ - ferrozine... 11 Gambar 3.1 Skema umum penelitian... 20 Gambar 4.1 Penetapan kadar (+)-katekin dalam produk gambir, larutan produk gambir dan minuman gambir kombucha lokal Bali... 21 Gambar 4.2 Panjang gelombang maksimum kompleks Fe 2+ - ferrozine... 24 Gambar 4.3 Nilai penghambatan tengah (IC 50 ) minuman gambir kombucha lokal Bali, larutan produk gambir, standar (+)- katekin dan Na 2 EDTA... 25 vii
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1 Hasil penetapan kadar (+)-katekin produk gambir, larutan produk gambir dan minuman gambir kombucha lokal Bali... 33 Lampiran 2 Hasil uji normalitas, homogenitas, Kruskal Wallis dan Mann Whitney kadar (+)-katekin produk gambir, larutan produk gambir dan minuman gambir kombucha lokal Bali... 34 Lampiran 3 Optimasi waktu inkubasi dari kompleks Fe 2+ - Ferrozine... 36 Lampiran 4 Nilai IC 50 minuman gambir kombucha lokal Bali, larutan produk gambir, standar (+)-katekin dan Na 2 EDTA... 37 Lampiran 5 Uji normalitas, homogenitas, Kruskal Wallis dan Mann Whitney nilai IC 50 minuman gambir kombucha lokal Bali, larutan produk gambir, standar (+)-katekin dan Na 2 EDTA... 42 viii
ABSTRAK Alzheimer merupakan penyakit progresif dan neurodegeneratif fatal yang secara klinik ditandai dengan adanya penurunan kemampuan kognitif dan daya ingat. Salah satu terapi yang disarankan untuk penyakit ini adalah penggunaan kombinasi antioksidan dan chelating logam ion besi. Minuman gambir kombucha lokal Bali telah terbukti memiliki aktivitas antioksidan. Namun kemampuan chelating logam ion besi dari minuman tersebut belum dibuktikan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas chelating logam ion besi dari minuman gambir kombucha lokal Bali menggunakan metode Ferrous Ion Chelating (FIC) serta aktivitasnya dibandingkan dengan larutan produk gambir dan standar (+)-katekin. Parameter yang diamati adalah nilai absorbansi dari campuran larutan Fe 2+, larutan uji dan ferrozine yang diukur menggunakan alat spektrofotometer. Nilai absorbansi yang didapat digunakan untuk menghitung % Chelating Ability masing-masing larutan uji kemudian ditentukan nilai IC 50 -nya. Data dianalisis secara statistik menggunakan uji Kruskal Wallis dan Mann Whitney dengan taraf kepercayaan 95%. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa minuman gambir kombucha lokal Bali memiliki aktivitas chelating logam ion besi (IC 50 37,85 mg/ml), namun aktivitasnya lebih lemah dibandingkan larutan produk gambir (IC 50 7,76 mg/ml) dan standar (+)-katekin (IC 50 3,35 mg/ml) (p<0,05). Kata Kunci: Kombucha, Gambir, (+)-katekin dan Ferrous Ion Chelating (FIC) ix
ABSTRACT Alzheimer is a fatal progressive and neurodegenerative disease which was clinically marked by the reduction of memory and cognitive ability. One of the therapies that could be suggested for this disease was combination of antioxidant and iron chelating agent therapy. Bali Local Kombucha with gambier substrate drink was proven to have antioxidant activity. However, currently iron chelating agent activity test towards to this drink had not been conducted. The aim of this research is to discover the iron chelating agent activity from Bali Local Kombucha with gambier substrate drink by using Ferrous Ion Chelating (FIC) method and to compare its activity with gambier product solution and (+)-cathecin standard. The observed parameter was absorbance value from mixture of Fe 2+ solution, sample solution and ferrozine which was measured with spectrophotometer. The obtained absorbance level could be used to calculate % chelating ability from each sample solution and its IC 50. Data was analyzed statistical with Kruskal-Wallis and Mann Whitney with 95% confidence level. The obtained result showed that Bali Local Kombucha with gambier substrate drink had iron chelating agent activity (IC 50 37.85 mg/ml) but its activity was poor compared to gambier product solution (IC 50 7.76 mg/ml)and (+)-cathecin standard (IC 50 3.35 mg/ml) (p< 0.05). Keywords: Kombucha, Gambier, (+)-catechin and Ferrous Ion Chelating (FIC) x