Pengaruh Vitamin E Tokotrienol dan Gabungannya dengan Asam Askorbat Terhadap Jumlah dan Jenis Leukosit Tikus Putih (Rattus norvegicus L.) TESIS Diajukan kepada Program Studi Magister Biologi, Fakultas Biologi, guna memenuhi sebagian dari persyaratan untuk mencapai Gelar Magister Sains Biologi (M.Si.) Oleh : Nur Auliani Lestariningrum NPM : 422011007 Program Pasca Sarjana Universitas Kristen Satya Wacana Salatiga 2013
Pengaruh Vitamin E Tokotrienol dan Gabungannya dengan Asam Askorbat Terhadap Jumlah dan Jenis Leukosit Tikus Putih (Rattus norvegicus L.) TESIS Oleh : Nur Auliani Lestariningrum NPM : 422011007 Telah disetujui untuk diuji: Tanggal : 13 Juni 2013 Pembimbing Utama, Pembimbing Pendamping, Ir. Ferry F. Karwur, M.Sc., Ph.D. Dr. Ir. Martanto Martosupono
LEMBAR PENGESAHAN Judul Tesis : Nama Mahasiswa NPM Program Studi Pengaruh Vitamin E Tokotrienol dan Gabungannya dengan Asam Askorbat terhadap Jumlah dan Jenis Leukosit Tikus Putih (Rattus norvegicus L.) : Nur Auliani Lestariningrum : 422011007 : Magister Biologi Menyetujui, Pembimbing Utama, Pembimbing Pendamping, Ir. Ferry F. Karwur, M.Sc., Ph.D. Dr. Ir. Martanto Martosupono Mengesahkan, Ketua Program Studi Magister Biologi Ir. Ferry F. Karwur, M.Sc., Ph.D. Dinyatakan Lulus Ujian tanggal: 13 Juni 2013
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA TULIS TUGAS AKHIR Yang bertanda tangan di bawah ini: Nama : Nur Auliani Lestariningrum Program Studi : Magister Biologi Fakultas : Biologi, Universitas Kristen Satya Wacana menyatakan dengan sesungguhnya bahwa tugas akhir, judul: Pengaruh Vitamin E Tokotrienol dan Gabungannya dengan Asam Askorbat Terhadap Jumlah dan Jenis Leukosit Tikus Putih (Rattus norvegicus L.) yang dibimbing oleh: 1. Ir. Ferry F. Karwur, M.Sc., Ph.D. 2. Dr. Ir. Martanto Martosupono adalah benar-benar hasil karya saya. Di dalam laporan tugas akhir ini tidak terdapat keseluruhan atau sebagian tulisan atau gagasan orang lain yang saya ambil dengan cara menyalin atau meniru dalam bentuk rangkaian kalimat atau gambar serta simbol yang saya aku seolah-olah sebagai karya saya sendiri tanpa memberikan pengakuan pada penulis atau sumber aslinya. Salatiga, 14 April 2013 Yang memberi pernyataan, Nur Auliani Lestariningrum
PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI TUGAS AKHIR UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS Sebagai sivitas akademika Universitas Kristen Satya Wacana (UKSW), saya yang bertanda tangan di bawah ini: Nama : Nur Auliani Lestariningrum NPM : 422011007 Program Studi : Magister Biologi Fakultas : Biologi Jenis karya : Tesis demi pengembangan ilmu pengetahuan, menyetujui untuk memberikan kepada UKSW Hak bebas royalti non-eksklusif (non-exclusive royalty free right) atas karya ilmiah saya berjudul: Pengaruh Vitamin E Tokotrienol dan Gabungannya dengan Asam Askorbat terhadap Jumlah dan Jenis Leukosit Tikus Putih (Rattus norvegicus L.) Dengan hak ini, UKSW berhak menyimpan, mengalihmedia/ mengalihformatkan, mengelola dalam bentuk pangkalan data, merawat, dan mempublikasikan tugas akhir saya, selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis/pencipta. Demikian peryataan ini saya buat dengan sebenarnya. Salatiga, 17 Juni 2013 Yang menyatakan, Nur Auliani Lestariningrum Mengetahui, Pembimbing Utama, Pembimbing Pendamping, Ir. Ferry F. Karwur, M.Sc., Ph.D. Dr. Ir. Martanto Martosupono
ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk untuk mengetahui pengaruh pemberian vitamin E tokotrienol dan gabungannya dengan asam askorbat terhadap jumlah dan jenis leukosit. Metode yang digunakan untuk menghitung jumlah leukosit menggunakan Haemositometer dan jenis-jenis leukosit menggunakan sediaan darah apus tepi. Penelitian dilakukan dengan menggunakan hewan uji coba tikus putih jantan berumur 30 hari. Rancangan percobaan dilakukan dengan 3 perlakuan termasuk kontrol dan 3 ulangan per masingmasing kelompok. Data kuantatif diperoleh dengan menghitung jumlah dan jenis leukosit pada tiap kelompok perlakuan, dan data yang diperoleh reratanya dibandingkan dengan jumlah leukosit normalnya. Selain itu, data jumlah leukosit diolah menggunakan uji sidik ragam menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dan dilanjutkan dengan uji BNT taraf 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian asupan vitamin E tokotrienol dan gabungannya dengan asam askorbat memberikan pengaruh secara nyata (P>0,05) terhadap jumlah total leukosit yang ditunjukkan dengan adanya peningkatan pada hari ke-7, berturut-turut sejumlah 10333 mm 3 dan 12932 mm 3 dibanding dengan kontrol sejumlah 5047 mm 3. Selain itu, pemberian vitamin E tokotrienol dan gabungannya dengan asam askorbat memberikan pengaruh secara nyata (P>0,05) terhadap peningkatan neutrofil berturut-turut yaitu 31,66% dan 33,66% serta 24,33% dan 22,33% bila dibandingkan dengan kontrol. Terjadi penurunan pada persentase limfosit berturut-turut yaitu 26,66% dan 29,16%, serta 19,50% dan 17,00% bila dibandingkan dengan kontrol. Pemberian vitamin E tokotrienol dan gabungannya dengan asam askorbat tidak memberikan pengaruh yang nyata (P<0,05) terhadap persentase eosinofil, basofil dan monosit. Disimpulkan bahwa pemberian asupan gabungan viatmin E tokotrienol dan asam askorbat lebih efektif dalam perbaikan sel yang ditunjukkan dengan adanya peningkatan jumlah dan jenis leukosit. Kata Kunci: Vitamin E Tokotrienol, Asam askorbat, Leukosit, tikus putih
ABSTRACT This study aims to investigate the effect of vitamin E tocotrienols and combined with ascorbic acid to the total number and types of leukocytes. The method used to calculate the number of leukocytes using Haemocytometer and types of leukocytes using preparations of edge lear blood. The study was conducted using animal testing male white rats are 30 days old. The design of experiment was conducted with three treatments including control and three repetition per each group. Quantatif data obtained by calculate the number and types of leukocytes in each treatment group, and the data obtained average compared with normal leukocyte counts. In addition, data of leukocyte count is processed using analysis of variance test using a Completely Randomized Design (CRD) and followed by test of Least Significant Difference (LSD) level 5%. The results showed that feed intake of vitamin E tocotrienols and combined with ascorbic acid influenced significantly (P> 0.05) to the total number of leukocytes indicated by an increase at day 7 consecutive a total of 10 333 mm 3 and 12 932 mm 3 compared with control is 5047 mm3. In addition, In addition, feed intake of vitamin E tocotrienols and combined with ascorbic acid influenced significantly (P> 0.05) to increase neutrophil consecutive are 31.66% and 33.66% and 24.33% and 22.33% when compared with controls. There was a decrease in the percentage of lymphocytes in a consecutive are 26.66% and 29.16%, and 19.50% and 17.00% when compared with controls. Vitamin E tocotrienols and combined with ascorbic acid did not give significant effect (P <0.05) to percentage of eosinophils, basophils and monocytes. It was concluded that the combined feed intake viatmin E tocotrienols and ascorbic acid is more effective in the repair of cells indicated by an increase in the total number and types of leukocytes. Keywords: Vitamin E Tocotrienol, Ascorbic Acid, Leukocytes, White Rats
Prakata Alhamdulillah, segala puji syukur penulis panjatkan atas kehadirat Allah SWT, yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penyusunan laporan hasil penelitian dengan judul Pengaruh Vitamin E Tokotrienol dan Gabungannya dengan Asam Askorbat Terhadap Jumlah dan Jenis Leukosit Tikus Putih (Rattus norvegicus L.). Penulis juga mengucap syukur atas segala kekuatan, kesabaran dan kesehatan yang telah Allah SWT berikan dalam pemilihan tema penelitian, pelaksanaan penelitian, hingga penulisan laporan hasil penelitian ini. Penulis percaya bahwa tanpa bimbingannya, penulis tidak akan dapat memulai ataupun menyelesaikan studi di Program Pascasarjana Magister Biologi, Universitas Kristen Satya Wacana, ini. Adapun segala perencanaan, pelaksanaan dan penyelesaian penelitian ini juga tidak lepas dari bimbingan dan dukungan dari berbagai pihak. Penulis secara khusus mengucapkan terima kasih kepada: 1. Bapak Ir. Ferry F. Karwur, M.Sc., Ph.D., selaku dosen pembimbing pertama dan sebagai Ketua Program Studi magister biologi Universitas Kristen Satya Wacana. Terima kasih untuk segala bimbingan, arahan, kesabaran, dan kepercayaan yang telah diberikan kepada penulis untuk memulai dan menyelesaikan studi lanjut ini. 2. Bapak Dr. Ir. Martanto Martosupono, selaku dosen pembimbing kedua. Terima kasih untuk segala bimbingan, motivasi, masukan, keluangan waktu di tengah segala kesibukannya, dan bantuan yang diberikan. 3. Seluruh dosen pengajar dan staf di PPs. Magister Biologi. 4. Kedua orang tua penulis yang dengan tanpa lelah memberikan motivasi dan do a restu kepada penulis.
5. Bayu Perisha yang selalu senantiasa menemani dan mengiringi langkah penulis dari pengambilan sampel sampai pada terselesaikannya penulisan laporan penelitian ini. 6. Teman-teman Magister Biologi UKSW angkatan 2011-2012. Akhir kata, penulis menyadari bahwa penelitian maupun pelaporan tugas akhir ini masih jauh dari sempurna. Penulis sangat terbuka terhadap kritik, masukan, atau saran dari setiap pembaca. Semoga penelitian kecil ini dapat bermanfaat bagi para pembaca. April 2013 Penulis
Daftar Isi Abstrak... i Abstract... ii Prakata... iii Daftar Isi... v Daftar Tabel... vii Daftar Gambar... viii Daftar Lampiran... x I. PENDAHULUAN Latar Belakang... 1 Rumusan Masalah... 5 Tujuan... 6 II. TINJAUAN PUSTAKA Klasifikasi Tikus Putih... 7 Histologi Darah... 7 Jenis Darah Leukosit. A. Sel Granulosit... 8 B. Sel Agranulosit... 11 Vitamin E... 15 Vitamin C (Asam askorbat)... 16 III. METODE PENELITIAN Alat dan Bahan... 19 Perlakuan Secara in vivo Pada Tikus Putih dan Sampling... 20 Pengambilan Sampel Darah... 21 Menghitung Leukosit... 22 Pembuatan Sediaan Apus Darah Tepi (SADT)... 23 Metode Pengecatan... 24
Metode Pemeriksaan... 25 Analisis Data... 26 IV. HASIL DAN PEMBAHASAN Jumlah Total Leukosit pada Tikus Putih... 27 Hitung Jenis Leukosit pada Tikus Putih dengan Pemberian Vitamin E Tokotrienol, Vitamin E Tokotrienol + Asam Askorbat... 34 Neutrofil... 40 Limfosit... 42 Eosinofil... 44 Basofil... 45 Monosit... 46 V. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan... 50 Saran... 51 Daftar Pustaka... 52 Lampiran... 56
Daftar Tabel Tabel 1. Proses Pemberian Perlakuan Asam Askorbat dan Vitamin E Tokotrienol, dan Pengambilan Sampel... 21 Tabel 2. Rerata jumlah total leukosit tikus Putih dengan pemberian Vitamin E tokotrienol dan Vitamin E tokotrienol + Asam askorbat... 28 Tabel 3. Rerata persentase jenis-jenis sel Diferensiasi leukosit dari semua kelompok tikus putih setelah perlakuan dengan pemberian Vitamin E tokotrienol dibandingkan dengan Standar Normal... 36 Tabel 4. Rerata persentase jenis-jenis sel Diferensiasi leukosit dari semua kelompok tikus putih perlakuan dengan pemberian Vitamin E tokotrienol dan Asam askorbat... 37 Tabel 5. Analisa Statistik rerata persentase jumlah differensiasi sel leukosit dari semua kelompok tikus putih... 39
Daftar Gambar Gambar 1. Neutrofil... 9 Gambar 2. Eosinofil... 10 Gambar 3. Basofil... 11 Gambar 4. Limfosit... 12 Gambar 5. Monosit... 14 Gambar 6. Kurva Pertumbuhan Sel Leukosit pada Minggu pertama hingga Minggu akhir Pengamatan dengan perlakuan Vitamin E Tokotrienol dan Vitamin E tokotrienol + Asam askorbat... 29 Gambar 7. Sel Neutrofil perbesaran 1600x. (a) Sebelum perlakuan (b) Setelah perlakuan... 41 Gambar 8. Sel Limfosit perbesaran 1600x. (a) Sebelum perlakuan (b) Setelah perlakuan... 43 Gambar 9. Sel Eosinofil perbesaran 1600x. (a) Sebelum perlakuan (b) Setelah perlakuan... 45 Gambar 10. Sel Basofil perbesaran 1600x. (a) Sebelum perlakuan (b) Setelah perlakuan... 46
Gambar 11. Sel Monosit perbesaran 1600x. (a) Sebelum perlakuan (b) Setelah perlakuan... 47
Daftar Lampiran Lampiran 1. Jenis leukosit. a. Monosit, b. Basofil, c. Eosinofil, d. Netrofil, e. Limfosit dengan perbesaran mikroskop 1600X... 56 Lampiran 2. Alur kerja pembuatan preparat untuk menghitung jumlah total leukosit... 57 Lampiran 3. Alur kerja pembuatan preparat untuk menghitung jenis-jenis leukosit... 58 Lampiran 4. Jumlah Total Leukosit... 60 Lampiran 5. Jenis-Jenis Leukosit... 64