SKRIPSI EKSPRESI GEN PROTEASE Badlus pumilus Y 1 DALAM Escherichia coli DH5a: ORIENTASPGEN DAN PENGARUH PENAMBAHAN IPTG (Isopropilthiogalaktosida) Oleh LILY F 30.0024 1998 FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
Lily. F 30.0024. EKSPRESI GEN PROTEASE Bacillus pumi7us Y1 DALAM Escherichia coli DHScr: ORIENTASI GEN DAN PENGARUEI PENAMBAHAN IPTG (Isopropilthiogalakto9ida). Di bawab bimbingan Dr. IT. Maggy T. Subartono dan Dr. IT. Antonius Suwanto, MSc Bacillus pumilus Y1 yang diisolasi dari limbah cair tahu di Indonesia diketahui menghasilkan protease se~pa subtilisin (Likumahwa, 1993; Ristiarini, 1996). Gen penghasil protease serupa subtilisin berukuran 3 kilo pasangbasa (kb) telah dicoba diklon dari B. pwnilus Y1 ke &lam Escherichia coli DH5a (Naibaho, 1997). Gen baukwan 3 kb tersebut dipotong dengan enzim restriksi EcoRI, diligasikan pada vektor puc19, dan ditransformasikan ke &lam E. coli DH5a. Plasmid rekombinan yang dihasiikan disebut pbn1. Ekspresi protease dari pbnl temyata tidak sebaik protease asalnya. Untuk itu, dilakukan penelitian untuk mempelajari orientasi gen dan pengaruh penambahan IPTG (isopropilthiogalaktosida) terhadap ekspresi gen tersebut, dengan harap akan memperbaiki ekspresi dan meningkatkan produksi enzimnya. Analisis terhadap orientasi gen pbnl dilakukan dengan meretransformasi pbni. Plasmid dipotong dengan EcoRI, diberi perlakuan fenol dan presipitasi etanol untuk memurnikan DNA, kemudian diligasikan dan ditransformasikan kembali. Seleksi dilakukan dengan media LA+Ampisilin yang diberi X-gal. Dari retransformasi ini diperoleh empat koloni putih, yang selanjutnya disebut TI, T2, T3, dan T4. Untuk mengetahui orientasi pbnl dan plasmid yang dibawa oleh TI, T2, T3, dan T4, dicari situs khusus pada pbnl yang diperoleh dengan pemotongan dengan enzim restriksi BamHI. Pemotongan pbnl dengan BamHI menghasilkan dua m e n DNA yang masing-masing berukuran 4.5 kb dan 1.2 kb. Dengan berpedoman pada letak situs BamHI pada pbnl dan puc19 sebagai vektomya, pembalikan terhadap gen protease pbnl diperkirakan akan menghasilkan potongan DNA dengan ukuran 3.9 kb dan 1.8 kb. Penelitian &vitas protease terhadap gen dengan orientasi beriawanan ini akan menunjukkan arah orientasi gen &lam pbnl terhadap promotor lac dari vektomya. Pemotongan TI, T2, T3, dan T4 dengan BamHI ternyata menghasilkan fragmen DNA dengan panjang 4.5 kb dan 1.2 kb
seperti pada pbni. Dengan demikian, plasmid dengan orientasi yang berlawanan dari pbnl belum dldapatkan. Analisis aktivitas protease pbnl dan TI setelah diberi IPTG 25 mglml sampai konsentrasi akhir 37.5 pdml menunjukkan hasil tertinggi pada waktu fermentasi 15 jam. Aktivitas protease dari pbnl dan TI tersebut masing-masing adalah 0.062 Ulml dan 0.105 Ulml, sedangkan aktivitas spesifiknya masing-masing 1.069 Ulmg dan 0.981 Ulmg. Aktivitas spesifik protease puc19 sebagai kontrol juga menunjukkan kenaikan yang nyata dengan penambahan IPTG, yaitu 0.971 Ulmg untuk inkubasi IS jam dan 1.673 Ulmg untuk 18 jam.
EKSPRESI GEN PROTEASE Bacillus pumaus Y1 DALAM Escherichia coli DHSa: ORIENTASK GEN DAN PENGARUH PENAMBAHAN IPTG (Isopropilthiogahktosida) Oleh: LILY F 30.0024 SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN pada JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor 1998 JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN EKSPRESI GEN PROTEASE Bacillus pumilus Y 1 DALAM Escherichia coli DHSa: ORIENTASI GEN DAN PENGARUH PENAMBAHAN IPTG (Isopropilthiogalaktosida)." SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN pada JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI Fakultas Teknofogi Pertanian Institut Pertanian Bogor Oleh: LILY F 30.0024 Dilahirkan pada tanggal 14 April 1975 di Bandung Tanggal lulus: 14 Februari 1998 Menyetujui Bogor, :Ekb~.n 1998 :,,,;x,. -...,. ".., :> I ~.., Dosen Pembimbing II ~.-T) <?., ~-),y,.-~7 '.Z7,--- -~7,;7,-, I' /",/,/ ~ r. Gosen Pembimbing I /' Ir. ~ aki T. SUMOKO