LAMPIRAN 1. Standar zona hambat antibiotik menurut CLSI Jenis antibiotik Konsentrasi cakram antibiotik Diameter zona hambat (mm) Sensitif intermediate Resisten Kloramfenikol 30 µg 18 13 s/d 17 12 Sumber: Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS) Providing NCCLS standards and guidelines ISO/TC 212 standards, and ISO/TC 76 standards. LAMPIRAN 2. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji E. coli Post Hoc Test pelarut untuk mikroba uji E. coli Dependent Variable:ZonaHambat Source Tests of Between-Subjects Effects Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Corrected Model 265.154 a 44 6.026 20.123.000 Intercept 302.791 1 302.791 1.011E3.000 Pelarut 4.650 2 2.325 7.764.001 Konsentrasi 24.387 4 6.097 20.358.000 Isolat 47.375 2 23.688 79.097.000 Pelarut * Konsentrasi 3.515 8.439 1.467.180 Pelarut * Isolat 129.423 4 32.356 108.042.000 Konsentrasi * Isolat 16.318 8 2.040 6.811.000 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 39.486 16 2.468 8.241.000 Error 26.953 90.299 Total 594.897 135 Corrected Total 292.106 134 a. R Squared =.908 (Adjusted R Squared =.863)
LAMPIRAN 3. Post Hoc Test pelarut untuk mikroba uji E. coli Pelarut N Subset n-heksana 45 1.2358 metanol 45 1.6129 Etil asetat 45 1.6442 Sig. 1.000.787 LAMPIRAN 4. Post Hoc Test konsentrasi untuk mikroba uji E. coli 3 0 27.7100 40 27 1.4796 80 27 1.6293 60 27 1.6967 1.6967 100 27 1.9726 Sig. 1.000.173.067 LAMPIRAN 5. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji E. coli Isolat N Subset 3 S2T16-1 45.7100 S3T32-3 45 1.6442 S3T33-3 45 2.1387 Sig. 1.000 1.000 1.000
LAMPIRAN 6. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat Dependent Variable:ZonaHambat Source terhadap zona hambat pada mikroba uji S. aureus Tests of Between-Subjects Effects Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Corrected Model 90.656 a 44 2.060 1.740E3.000 Intercept 125.802 1 125.802 1.062E5.000 Pelarut 17.603 2 8.801 7.431E3.000 Konsentrasi 2.249 4.562 474.795.000 Isolat 17.603 2 8.801 7.431E3.000 Pelarut * Konsentrasi 4.499 8.562 474.795.000 Pelarut * Isolat 35.205 4 8.801 7.431E3.000 Konsentrasi * Isolat 4.499 8.562 474.795.000 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 8.998 16.562 474.795.000 Error.107 90.001 Total 216.565 135 Corrected Total 90.763 134 a. R Squared =.999 (Adjusted R Squared =.998) LAMPIRAN 7. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji S. aureus Zona hambat Pelarut N Subset n-heksana 45.7100 Etil asetat 45.7100 Metanol 45 1.4760 Sig. 1.000 1.000
LAMPIRAN 8. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji S. aureus Zona hambat 3 0 27.7100 60 27 1.0148 40 27 1.0156 80 27 1.0204 100 27 1.0659 Sig. 1.000.581 1.000 LAMPIRAN 9. Post Hoc Test Isolat untuk mikroba uji S. aureus Isolat N Subset S2T16-1 45.7100 S3T32-3 45.7100 S3T33-3 45 1.4760
LAMPIRAN 10. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji C. albicans Dependent Variable:ZonaHambat Source Tests of Between-Subjects Effects Type III Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Corrected Model 254.597 a 44 5.786 60.624.000 Intercept 305.733 1 305.733 3.203E3.000 Pelarut 170.599 2 85.300 893.702.000 Konsentrasi 21.849 4 5.462 57.229.000 Isolat 4.590 2 2.295 24.046.000 Pelarut * Konsentrasi 43.698 8 5.462 57.229.000 Pelarut * Isolat 9.180 4 2.295 24.046.000 Konsentrasi * Isolat 1.560 8.195 2.043.050 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 3.120 16.195 2.043.018 Error 8.590 90.095 Total 568.920 135 Corrected Total 263.187 134 a. R Squared =.967 (Adjusted R Squared =.951) LAMPIRAN 11. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji C. albicans Zona hambat Pelarut N Subset n-heksana 45.7100 Etil asetat 45.7100 Metanol 45 3.0947 Sig. 1.000 1.000
LAMPIRAN 12. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji C. albicans 0 27.7100 40 27 1.6044 80 27 1.6804 1.6804 60 27 1.7370 1.7370 100 27 1.7926 Sig. 1.000.140.213 LAMPIRAN 13. Post Hoc Isolat untuk mikroba uji C. albicans S2T16-1 45 1.2504 S3T32-3 45 1.5827 S3T33-3 45 1.6816 Sig. 1.000.132
LAMPIRAN 14. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji F. oxysporum Dependent Variable:ZonaHambat Source Tests of Between-Subjects Effects Type III Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Corrected Model 10.622 a 44.241 6.129.000 Intercept 111.339 1 111.339 2.827E3.000 Pelarut 3.668 2 1.834 46.562.000 Konsentrasi 2.249 4.562 14.275.000 Isolat.757 2.379 9.614.000 Pelarut * Konsentrasi 1.087 8.136 3.449.002 Pelarut * Isolat 1.063 4.266 6.749.000 Konsentrasi * Isolat.571 8.071 1.812.085 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 1.226 16.077 1.945.026 Error 3.545 90.039 Total 125.506 135 Corrected Total 14.167 134 a. R Squared =.750 (Adjusted R Squared =.627) LAMPIRAN 15. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji F. oxysporum Etil asetat 45.7596 n-heksana 45.8269 Metanol 45 1.1380 Sig..111 1.000
LAMPIRAN 16. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji F. oxysporum Zona hambat 3 0 27.7100 60 27.8730 40 27.8981 80 27.9489 100 27 1.1107 Sig. 1.000.189 1.000 LAMPIRAN 17. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji F. oxysporum S2T16-1 45.8373 S3T32-3 45.8753 S3T33-3 45 1.0118 Sig..366 1.000
LAMPIRAN 18. Analisis keragaman pengaruh pelarut, konsentrasi, dan isolat terhadap zona hambat pada mikroba uji G. boninense Dependent Variable:ZonaHambat Source Tests of Between-Subjects Effects Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Corrected Model 110.856 a 44 2.519 6.381.000 Intercept 570.992 1 570.992 1.446E3.000 Pelarut 8.190 2 4.095 10.371.000 Konsentrasi 64.555 4 16.139 40.875.000 Isolat 12.064 2 6.032 15.277.000 Pelarut * Konsentrasi 2.813 8.352.891.528 Pelarut * Isolat 12.265 4 3.066 7.766.000 Konsentrasi * Isolat 3.603 8.450 1.141.344 Pelarut * Konsentrasi * Isolat 7.367 16.460 1.166.310 Error 35.535 90.395 Total 717.384 135 Corrected Total 146.391 134 a. R Squared =.757 (Adjusted R Squared =.639) LAMPIRAN 19. Post Hoc Test Pelarut untuk mikroba uji G. boninense Etil asetat 45 1.7733 n-heksana 45 2.0227 Metanol 45 2.3738 Sig..063 1.000
LAMPIRAN 20. Post Hoc Test Konsentrasi untuk mikroba uji G. boninense Zona hambat 3 0 27.7100 60 27 2.2419 40 27 2.2433 80 27 2.4144 2.4144 100 27 2.6733 Sig. 1.000.347.134 LAMPIRAN 21. Post Hoc Test isolat untuk mikroba uji G. boninense S2T16-1 45 1.6593 S3T32-3 45 2.1300 S3T33-3 45 2.3804 Sig. 1.000.062
LAMPIRAN 22. Hasil uji antagonis ekstrak isolat terhadap mikroba uji dalam bentuk zona hambat pertumbuhan (mm) Ekstrak Metanol n-heksana Etil Asetat Mikroba uji Konsentrasi ekstrak (%) S2T16-1 S3T32-3 S3T33-3 S2T16-1 S3T32-3 S3T33-3 S2T16-1 S3T32-3 S3T33-3 E. coli 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 0 0 13,03 0 0 6,70 0 15,30 0 60 0 0 15,46 0 0 13,50 0 15,56 0 80 0 0 17,26 0 0 9,70 0 18,63 0 100 0 0 19,73 0 0 18,83 0 21,93 0 S. aureus 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 0 0 11,46 0 0 0 0 0 0 60 0 0 11,43 0 0 0 0 0 0 80 0 0 11,80 0 0 0 0 0 0 100 0 0 14,83 0 0 0 0 0 0 C. albicans 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 6,33 16,63 13,20 0 0 0 0 0 0 60 8,93 19,20 14,53 0 0 0 0 0 0 80 6,07 18,90 16,58 0 0 0 0 0 0 100 10,00 19,20 17,13 0 0 0 0 0 0 F. oxysporum 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 0,83 1,08 1,23 0 0 0 0 0,33 0 60 0,69 1,58 0,04 0 0 0 0 0,67 0 80 0,79 1,42 0,99 0 0 0,50 0 0,75 0 100 1,53 2,22 1,55 0 0 1,00 0 2,08 0 G. boninense 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 40 6,90 7,23 5,18 0 7,16 6,32 2,24 7,41 5,60 60 7,73 6,47 9,05 0 6,96 4,87 2,38 8,01 4,00 80 7,90 9,40 7,68 0 6,79 5,75 4,84 8,61 3,46 100 9,40 10,97 7,18 0 6,26 7,85 6,77 8,71 6,07
LAMPIRAN 23. Alur Kerja Isolasi Bakteri Penghasil Antimikroba dari Sampel Tanah Sampel Tanah - Ditimbang sebanyak 1 g - Ditambah aquadest steril hingga 10 ml - Dihomogenkan. Suspensi Tanah - - - Diambil sebanyak 1 ml Disebarkan pada permukaan media NA Diinkubasi dapa suhu 30±2 C selama 24-48 jam Kultur campuran bakteri - Diamati koloni yang menunjukkan daerah bening di sekitarnya - Disubkultur pada media NA Kultur murni bakteri potensial antimikroba
LAMPIRAN 24. Alur Kerja Ekstraksi Isolat Bakteri Potensial Antimikroba Menggunakan Pelarut Metanol, n-heksana dan Etil Asetat Isolat Bakteri Potensial Antimikroba - Dibuat suspense dengan kekeruhan sesuai Standar McFarland (1x10 8 CFU/ml) - Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media NA - Dibuat beberapa petri - Diinkubasi selama 5-6 hari pada suhu ruang (ditutupi dengan aluminium foil) Kultur Bakteri Maserat - Dipotong kecil-kecil - Dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer 500 ml - Ditambahkan ± 150 ml pelarut metanol - Dimaserasi selama 3 hari - Disaring dan disimpan dalam tabung Erlenmeyer lain - Dimaserasi kembali dengan volume yang sama - Disentrifuse pada kecepatan 3000 rpm selama 15 menit Supernatan Ekstrak Bakteri - Dipekatkan dengan menggunakan rotary Evaporator pada suhu tidak lebih dari 50±2 C - Hal yang sama dilakukan terhadap jenis pelarut n-heksana dan etil asetat
LAMPIRAN 23. Alur Kerja Isolasi Bakteri Penghasil Antimikroba dari Sampel Tanah Sampel Tanah - Ditimbang sebanyak 1 g - Ditambah aquadest steril hingga 10 ml - Dihomogenkan. Suspensi Tanah - - - Diambil sebanyak 1 ml Disebarkan pada permukaan media NA Diinkubasi dapa suhu 30±2 C selama 24-48 jam Kultur campuran bakteri - Diamati koloni yang menunjukkan daerah bening di sekitarnya - Disubkultur pada media NA Kultur murni bakteri potensial antimikroba
LAMPIRAN 24. Alur Kerja Ekstraksi Isolat Bakteri Potensial Antimikroba Menggunakan Pelarut Metanol, n-heksana dan Etil Asetat Isolat Bakteri Potensial Antimikroba - Dibuat suspense dengan kekeruhan sesuai Standar McFarland (1x10 8 CFU/ml) - Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media NA - Dibuat beberapa petri - Diinkubasi selama 5-6 hari pada suhu ruang (ditutupi dengan aluminium foil) Kultur Bakteri Maserat - Dipotong kecil-kecil - Dimasukkan dalam tabung Erlenmeyer 500 ml - Ditambahkan ± 150 ml pelarut metanol - Dimaserasi selama 3 hari - Disaring dan disimpan dalam tabung Erlenmeyer lain - Dimaserasi kembali dengan volume yang sama - Disentrifuse pada kecepatan 3000 rpm selama 15 menit Supernatan Ekstrak Bakteri - Dipekatkan dengan menggunakan rotary Evaporator pada suhu tidak lebih dari 50±2 C - Hal yang sama dilakukan terhadap jenis pelarut n-heksana dan etil asetat
LAMPIRAN 25. Alur Kerja Pembuatan Larutan Standar McFarland 10 8 CFU/ml (http://www.quelab.com) 0,048 M BaCl 2 0,18 M H 2 SO 4 - Diambil sebanyak 0,5 ml - Diambil sebanyak 99,5 ml - Dihomogenkan kedua larutan Hasil - Diukur densitas suspensi dengan menggunakan spektrofotometer ( nilai O.D. 625nm ± 0,13) Larutan standar 0,5 McFarland 1x 10 8 CFU/ml
LAMPIRAN 26. Alur Kerja Uji Daya Hambat Isolat Potensial Terhadap Mikroba Patogen Bakteri Patogen Isolat bakteri penghasil antimikroba - Masing-masing disubkultur selama ± 24 jam pada media NA - Diambil dengan jarum ose - Masing-masing dilarutkan dalam larutan fisiologis (NaCl 0,9%) - Dihomogenkan dan disesuaikan kekeruhannya dengan standar 0.5 McFarland (1x10 8 CFU/ml) Suspensi bakteri patogen - Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media MHA - Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi suspensi bakteri antimikroba Suspensi bakteri penghasil antimikroba - Ditetesi sebanyak 10µl pada cakram kertas steril Hasil Diameter zona hambat - Diinkubasi pada T: 30±2 C selama 24-48 jam - Diukur zona hambat yang terbentuk dengan jangka sorong
LAMPIRAN 27. Alur Kerja Uji Daya Hambat Ekstrak Isolat Potensial Terhadap Bakteri Patogen Bakteri Patogen Suspensi Bakteri Patogen - Disubkultur selama ± 24 jam pada media NA - Diambil dengan jarum ose - Dilarutkan dalam larutan fisiologis (NaCl 0.9%) - Dihomogenkan dan disesuaikan kekeruhannya dengan standar 0,5 McFarland (1x10 8 CFU/ml) Ekstrak Metabolit Sekunder - Diencerkan dengan DMSO sesuai konsentrasi yaitu 40,60,80, dan 100% - Ditetesi sebanyak 10µl pada cakram kertas steril - Kontrol (-) digunakan cakram kertas yang berisi 10µl DMSO - Kontrol (+) digunakan cakram kertas yang berisi kloramfenikol 30 µg - Disebarkan dengan cotton swab pada permukaan media MHA - Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi ekstrak meatbolit sekunder isolat potensial Hasil Diameter zona hambat - Diinkubasi pada T: 30±2 C selama 24-48 jam - Diukur zona hambat yang terbentuk dengan jangka sorong
LAMPIRAN 28. Alur Kerja Uji Daya Hambat Ekstrak Isolat Potensial Terhadap Jamur Patogen Jamur Patogen Jamur patogen usia 3-4 hari - Disubkultur selama 72-96 jam pada media PDA khusus untuk C. albicans ± 24 jam - Diletakkan cakram kertas yang sudah berisi ekstrakmetabolit sekunder isolat potensial di ke empat sisinya sesuai konsentrasi Ekstrak Metabolit Sekunder - Diencerkan dengan DMSO sesuai konsetrasi yaitu 40,60,80, dan 100% - Ditetesi sebanyak 10µl pada cakram kertas kosong steril - Kontrol (-) digunakan cakram kertas yang berisi 10µl DMSO - Kontrol (+) digunakan cakram kertas yang berisi ketokonazol 20µg Hasil - Diinkubasi pada T: 27-29 C selama 24-48 jam - Diukur zona hambat yang terbentuk dengan jangka sorong Diameter zona hambat