The Experiment Antioxidant Activity Of Aleurites moluccana (L.) Willd Leaves Ethanolic Extract By DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl) Method. Richa Yuswantina, Oni Yulianta W dan Peni Warisman ABSTRACT Antioxidant can neutralize the free radical formation, one of substances cause cell or tissue damage. One of compound which has antioxidant activity is flavonoid. Aleurites muluccana (L.) Willd leaves is one of plant that has flavonoid content. This research aims to know antioxidant activity of ethanolic extract of Aleurites muluccana (L.) Willd leaves that was analyzed by DPPH method (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil). This research is pure eksperimen research. Antioxidant activity was examined as scavengers of DPPH radical using UV-Vis spectrophotometer at maximum wavelength 514 nm. Concentration of etaholic extract of Aleurites muluccana (L.) Willd leaves were 200 ppm, 400 ppm and 600 ppm. Meanwhile for ascorbic acid as positive control by concentration 8 ppm, 12 ppm and 16 ppm. The research results showed that IC 50 value of Aleurites muluccana (L.) Willd was 643,98 ppm and ascorbic acid was 13,98 ppm. This research concluded that ethanolic extract of Aleurites muluccana (L.) Willd leaves has very low antioxidant activity and ascorbic acid has a very strong antioxidant activity. Keywords : Aleurites muluccana (L.) Willd leaves, Flavonoid, Antioxidant, DPPH (2,2- Diphenyl-1-picrylhydrazyl), IC 50. 1
2 Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kemiri (Aleurites moluccana (L.) Willd) Dengan Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Richa Yuswantina, Oni Yulianta W dan Peni Warisman INTISARI Antioksidan mempunyai aktivitas menetralisir senyawa radikal bebas yang merupakan salah satu penyebab kerusakan sel dan jaringan. Salah satu antioksidan dalam tanaman adalah flavonoid. Daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) merupakan tanaman yang mengandung flavonoid. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) dengan metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni. Aktivitas antioksidan diukur dengan melalui penangkapan radikal DPPH dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang serapan maksimal 514 nm. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) adalah 200 ppm, 400 ppm dan 600 ppm. Sedangkan konsentrasi vitamin C sebagai pembanding adalah 8 ppm, 12 ppm dan 16 ppm. Hasil penelitian menunjukkan nilai IC 50 untuk ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) adalah sebesar 643,98 ppm dan vitamin C sebesar 13,98 ppm. Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) memiliki efek yang sangat rendah sebagai antioksidan, sedangkan vitamin C memiliki daya antioksidan yang sangat kuat. Kata kunci : Aleurites muluccana (L.) Willd, Flavonoid, Antioksidan, DPPH (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil), IC 50. PENDAHULUAN Radikal bebas adalah suatu atom, gugus atom atau molekul yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan pada orbital paling luar, termasuk diantaranya adalah atom hidrogen, logam-logam transisi dan molekul oksigen. Radikal bebas merupakan molekul yang tidak stabil karena kehilangan elektronnya. Antioksidan dari bahan sintetis memberikan efek samping yang cukup berbahaya bagi kesehatan. Oleh karena itu dicari sumber antioksidan alami yang lebih aman untuk dikembangkan. Salah satu tanaman yang mengandung flavonoid adalah daun kemiri. Selain senyawa flavonoid, daun kemiri juga mengandung senyawa tannin, saponin, sterol,
3 asam amino, karbohidrat dan polifenol. Secara tradisional daun kemiri bisa digunakan sebagai pengobatan bisul, sakit kepala, demam, diare, dan hipokolesterolemia. Selain itu daun kemiri juga digunakan untuk anti-inflamasi dan anti-piretik (Junaid Niazi, et al., 2010). Adanya senyawa flavonoid yang terkandung pada daun kemiri dan beberapa khasiat yang terkait, memungkinkan adanya efek antioksidan, sehingga perlu dilakukan penelitian tentang uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites moluccana (L.) Willd) dengan metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), serta membandingkan aktivitasnya dengan antioksidan alami yaitu vitamin C. Penelitian ini bertujuan untuk memberikan informasi ilmiah tentang potensi ekstrak etanol daun kemiri sebagai antioksadan alami yang dapat dipakai secara luas oleh masyarakat. BAHAN DAN CARA Alat untuk membuat ekstrak antara lain : gelas ukur, cawan penguap, kain flanel, ayakan nomor 30 mesh, blender, timbangan elektrik dan waterbath. Alat untuk pengujian senyawa flavonoid dan pengujian aktivitas antioksidan antara lain : tabung reaksi, pipet tetes, gelas ukur, kertas saring, lampu spiritus, sentrifuge, pipet volume, mikropipet, inkubator dan spektrofotometer UV-VIS. Bahan utama yang digunakan adalah daun kemiri (Aleurites moluccana (L.) Willd), yang diperoleh dari Desa Nampirejo, Kecamatan Tumanggung. Sediaan yang digunakan dalam bentuk serbuk kering daun kemiri. Reagen yang digunakan adalah etanol 70 %, etanol p.a, larutan DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), Vitamin C, metanol, H 2 SO 4 pekat dan metanol. PROSEDUR PENELITIAN a. Determinasi Tanaman Determinasi dilakukan di Laboratorium Ekologi dan Biosistematik Jurusan Biologi UNDIP Fakultas MIPA untuk mengetahui kebenaran dari daun kemiri (Aleurites moluccana (L.) Willd). b. Pembuatan Simplisia Daun Kemiri Penyiapan bahan baku daun kemiri dicuci dahulu dengan menggunakan air mengalir sampai bersih, kemudian dikeringkan di bawah sinar matahari secara tidak langsung dengan ditutup kain hitam. Setelah kering daun dibuat serbuk dengan cara diblender sampai halus dan diayak dengan ayakan nomor 30 mesh.
4 c. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kemiri Pembuatan ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites moluccana (L.) Willd) menggunakan metode maserasi dengan perbandingan 1 : 10 bagian untuk 100% ekstrak murni. Maserasi pertama dengan perbandingan 1 : 7,5 bagian Sebanyak 100 g serbuk kering simplisia dimasukkan dalam wadah kemudian diberi pelarut etanol sebanyak 750 ml. Maserasi dilakukan selama 5 hari dalam ruangan yang terlindung dari cahaya matahari dan dilakukan pengadukan secara berkala minimal 3 kali sehari. Setelah itu ekstrak yang diperoleh disaring dengan menggunakan kain flannel, kemudian hasil sarinya di remaserasi dengan menggunakan sisa dari pelarut etanol sebesar 250 ml dan didapatkan ampas. Maserat I dan II digabung, hasil dari maserat tersebut diuapkan pada waterbath temperatur 60 0 C sehingga diperoleh hasil ekstrak kental (Anief, 2000). d. Identifikasi Senyawa Flavonoid Sebanyak 0,1 g ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites moluccana (L.) Willd) ditambahkan metanol sampai terendam lalu dipanaskan kemudian filtratnya ditambahkan H 2 SO 4, terjadi perubahan warna dari kuning kehijauan menjadi warna merah menunjukkan adanya senyawa flavonoid (Markham, 1988). e. Pengujian Ativitas Antioksidan Pengujian antioksidan dilakukan dengan metode (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) (DPPH). Ekstrak daun kemiri dibuat dalam berbagai konsentrasi (200 ppm, 400 ppm dan 600 ppm) dalam pelarut etanol p.a. Masing-masing ekstrak sampel sebanyak 100 µl dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ke dalam tiap tabung reaksi ditambahkan 1 ml larutan DPPH 0.4 mm dalam ethanol p.a, kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C sesuai hasil operating time yang diperoleh. Selanjutnya serapan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis sesuai hasil penentuan panjang gelombang maksimum yang diperoleh. Sebagai pembanding digunakan vitamin C (konsentrasi 8 ppm, 12 ppm dan 16 ppm) dalam pelarut etanol p.a. Nilai IC 50 dihitung masing-masing dengan menggunakan persamaan regresi linier dan dilakukan sebanyak 5 kali pengulangan.
5 ANALISIS DATA Data yang diperoleh berupa nilai absorbansi dari ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) dan vitamin C yang didapat dari pengukuran serapan radikal DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) menggunakan spektrofotometer UV-Vis tereduksi pada panjang gelombang maksimum 514 nm, kemudian dihitung persentase aktivitas antioksidannya dengan rumus : % inhibisi = Absorban kontrol Absorban sampel x100 % Absorban Kontrol setelah didapatkan persentase aktivitas antioksidan dari masing-masing konsentrasi, dilanjutkan dengan perhitungan secara regresi linier (x,y) untuk mendapatkan nilai IC 50 dimana x sebagai konsentrasi (ppm) dan y sebagai persentasi aktivitas antioksidan. Nilai IC 50 menunjukkan konsentrasi yang dapat meredam radikal DPPH sebanyak 50 %. IC 50 ekstrak etanol daun kemiri dan vitamin C diperoleh dengan rumus : Y = BX + A Nilai IC 50 didapatkan dari nilai x setelah mengganti y dengan 50. HASIL Berdasarkan hasil determinasi dapat diperoleh kepastian bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd). Metode yang digunakan adalah maserasi, karena metode ini merupakan metode paling sederhana, dengan merendam simplisia ke dalam larutan penyari yaitu larutan etanol 70 %. Hasil ekstrak kental daun kemiri diperoleh sebanyak 25 gram dengan perhitungan rendemen sebanyak 25 % yang berarti kandungan zat aktif yang tersari cukup bagus karena memenuhi kriteria yaitu > 10 %. Hasil pengujian kualitatif senyawa flavonoid menunjukkan daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) mengandung senyawa flavonoid yang ditunjukkan dengan perubahan warna dari hijau kekuningan menjadi warna merah karena penambahan metanol dan H 2 SO 4 pekat. Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) diawali dengan penentuan panjang gelombang maksimum DPPH pada rentang ƛ 490-530 nm. Hail yang diperoleh yaitu DPPH 0.4 mm dalam etanol p.a memiliki panjang gelombang maksimum sebesar 514 nm dengan absorbansi sebesar 0.89. Langkah berikutnya yaitu operating time. Berdasarkan hasil operating time diperoleh bahwa pengujian antioksidan akan sangat baik jika dilakukan inkubasi pada suhu 37 0 C selama
6 20-25 menit. Inkubasi selama 20-25 menit menunjukkan bahwa sampel yang mengandung antioksidan telah optimum dalam meredam radikal bebas DPPH. Hal ini ditunjukkan dengan nilai absorbansi yang stabil. Tabel. Hasil Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) Dan Vitamin C Pada Berbagai Konsentrasi % aktivitas antioksidan Konsentrasi ekstrak etanol daun Konsentrasi vitamin C (ppm) Replikasi kemiri (ppm) 200 400 600 8 12 16 1 26.97 33.71 42.70 32.58 49.44 57.30 2 31.46 37.08 53.93 34.83 44.94 55.06 3 24.72 34.83 47.19 32.58 44.94 52.81 4 22.47 34.83 49.44 30.34 44.94 53.93 5 24.72 32.58 49.44 30.34 42.70 57.30 Mean ± 26.07 ± 34.61 ± 46.75 ± 32.13 ± 45.39 ± 55.28 ± SD 3.41 1.67 4.08 1.88 2.46 2.01 IC 50 (ppm) 643.98 13.98 Harga IC 50 berbanding terbalik dengan aktivitas antioksidan. Semakin besar harga IC 50 aktivitas antioksidan semakin kecil, artinya konsentrasi yang dibutuhkan untuk menghasilkan aktivitas antioksidan sebesar 50 % semakin besar. Secara spesifik, suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 50 ppm, kuat untuk IC 50 bernilai 50-100 ppm, sedang jika IC 50 bernilai 100-150, sedangkan jika IC 50 bernilai 151-200 ppm dikatakan antioksidannya rendah dan jika IC 50 bernilai >200 ppm maka aktivitas antioksidan yang dimiliki sangat rendah. Vitamin C memiliki daya antioksidan yang sangat kuat sedangkan ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) memiliki efek yang sangat rendah sebagai antioksidan. Berdasarkan tabel di atas, bahwa ekstrak etanol daun kemiri memiliki nilai IC 50 sebesar 643,98 ppm, hal ini menunjukkan bahwa sampel memiliki efek yang sangat rendah sebagai aktivitas antioksidan dibandingkan dengan vitamin C yang memiliki nilai IC 50 sebesar 13,98 ppm yang menunjukkan aktivitas antioksidannya sangat kuat.
7 Kesimpulan 1. Ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) mempunyai efek yang sangat rendah sebagai aktivitas antioksidan. 2. Ekstrak etanol daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) memiliki potensi yang sangat lemah sebagai antioksidan dikarenakan nilai IC 50 daun kemiri sebesar 643,98 ppm dan IC 50 vitamin C sebesar 13,98 ppm Saran 1. Perlu dilakukan penelitian yang lain dengan senyawa selain flavonoid yang terkandung dalam daun kemiri (Aleurites muluccana (L.) Willd) seperti senyawa tannin, saponin, sterol, asam amino dan polifenol. UCAPAN TERIMA KASIH 1. Kepada Drs.Jatmiko Susilo, Apt., M.Kes., selaku ketua Program Studi Farmasi STIKES Ngudi Waluyo Ungaran. 2. Kepada Richa Yuswantina, S. Farm., Apt., M.Si., selaku dosen pembimbing I. 3. Kepada Oni Yulianta Wilisa, S. Farm., Apt., selaku dosen pembimbing II. DAFTAR PUSTAKA Junaid Niazi., Vikas Gupta., Prithviraj Chakarborty., dan Pawan Kumar, (2010). Anti- Inflammatory And Antipyretic Activity Of Aleuritis Moluccana Leaves, Jurnal. Department of Pharmaceutical Sciences, Govt. Polytechnic for Girls, Patiala, Punjab. Anief, M., 2000, Ilmu Meracik Obat, Teori dan Praktik, Cetakan ke 9, 168-169, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Markham, K.R., 1988, Techniques of Flavonoid Identification, diterjemahkan oleh Padmawinata, K., 10, 15, Penerbit ITB, Bandung.