UJI AKTIVITAS SITOTOKSIK DAN PROLIFERASI DARI KANGEN WATER PADA SEL KANKER PAYUDARA T47D SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi RIDWAN SETIAJI 1308010119 PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO 2018 i
ii
iii
iv
KATA PENGANTAR Bismillahirohmanirohim, Alhamdulillahirobbil alamin, segala puji bagi Allah SWT, karena dengan petunjuk dan pertolongannya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Uji Aktivitas Sitotoksik Dan Proliferasi Dari Kangen Water Pada Sel Kanker Payudara T47D sebagai salah satu syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto. Penulis menyadari dalam penyusunan skripsi ini masih banyak kekurangan, oleh sebab itu kritik dan saran yang membangun penulis harapkan untuk perbaikan di masa yang akan datang. Penulis mengucapkan banyak terima kasih atas segala bantuan, bimbingan, serta kerjasama dengan berbagai pihak yang terkait dalam penyusunan skripsi ini, karena terselesaikannya skripsi ini tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H., selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto 2) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto yang telah memimpin keseluruhan proses mengajar ditempat penulis menuntut ilmu. 3) Wahyu Utaminingrum, M.Sc., Apt., selaku Ketua Progam Studi Sarjana Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto. 4) Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M.Si dan Elza Sundhani, M.Sc., Apt selaku pembimbing yang telah memberikan arahan, bimbingan dan inspirasi kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. 5) Dwi Hartanti, M. Farm., Apt dan Wahyu Utaminingrum, M.Si., Apt., selaku penguji yang telah memberi masukan dalam menyelesaikan skripsi ini. v
vi
RIWAYAT HIDUP Nama : Ridwan Setiaji Tempat, Tanggal Lahir : Cilacap, 08 Agustus 1995 Nama Orang Tua (Ibu) : Satiwan (Ayah), Siti Markhamah Riwayat Pendidikan : a. Sekolah Dasar : SD Negeri 05 Kedawung b. Sekolah Menengah Pertama : SMP Negeri 1 Kroya c. Sekolah Menengah Atas : SMA Negeri 1 Kroya d. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto Riwayat Organisasi 1. Anggota Badan Eksekutif Mahasiswa BEM Fakultas Farmasi periode 2013-2014 dan 2014-2015 2. Ketua Staff Departemen Agama Badan Eksekutif Mahasiswa BEM Fakultas Farmasi periode 2015-2016 vii
MOTTO Apa yang kita tanam baik pada hari ini, maka kita akan menuai baik pula pada keesokan hari Hidup berlandaskan Al-Qur an dan As-Sunnah viii
ix
PERSEMBAHAN Anugerah terindah dari Allah SWT yang tak ternilai hingga terciptalah sebuah karya sederhana. Alhamdulillahirabbil alamin, puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberikan kemudahan dan kelancaran kepada saya sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik dan benar. Bismillahirrahmanirrahim, skripsi ini saya persembahkan untuk: Ibu dan Ayah yang selalu memberikan doa dan segala bentuk dukungan hingga saat ini. Kedua kakak saya yang memberikan semangat. Teman-teman kos (Rizko, Ronny, Prayogo, Agif, Surya, Muji, Rere, Riza) yang selalu bersama hampir setiap hari. Teman-teman Tim Kultur (Aisyah, Senja, Dyfa, Binaripan, Atika, Yanah, Miya, Endah, Yosi, Darsini, Desi) yang selalu membantu dalam skripsi dan saling mensupport. Dosen pembimbing saya Ibu Asmi dan Ibu Elza, terimakasih bimbingannya dari awal penyusunan proposal hingga skripsi selesai. Kelompok praktikum dalam perkuliahan yang selalu bersama. Semua teman-teman yang membantu dan berjuang bersama selama 4 tahun. x
Uji Aktivitas Sitotoksik dan Proliferasi dari Kangen Water pada Sel Kanker Payudara T47D Ridwan Setiaji 1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil 2, Elza Sundhani 3 ABSTRAK Kangen water adalah air yang dihasilkan dari mesin ionisasi air, dengan menggunakan proses elektrolisis, mesin kangen water sanggup merestrukturisasi air biasa dan mengubahnya menjadi air yang bersifat alkali. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah kangen water memiliki aktivitas sitotoksik dan antiproliferasi terhadap sel kanker payudara T47D. Kangen water yang digunakan diperoleh dari produsen di wilayah Purwokerto. Uji sitotoksik dilakukan menggunakan metode MTT assay dengan waktu inkubasi selama 24 jam, sedangkan kinetika proliferasi sel dilakukan dengan metode doubling time. Uji sitotoksik kangen water menunjukkan potensi sitotoksisitas yang sedang pada ph 2,5 (IC 50 59,439 %), ph 6 (IC 50 46,986 %), ph 9 (IC 50 46,611 %). Sel T47D mengalami penurunan jumlah sel pada jam ke-24 hingga 72 pada sel yang diberi perlakuan dibanding dengan kontrol sel. Pemberian sampel kangen water dengan ph 6 konsentrasi 12,5% dapat menurunkan proliferasi sel T47D lebih baik dibandingkan dengan ph lainnya pada konsentrasi yang bervariasi. Kata Kunci: Kangen water, antikanker, sel T47D xi
Test of Cytotoxic and Proliferative Activity of Kangen Water against T47D Breast Cancer Cells Ridwan Setiaji 1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil 2, Elza Sundhani 3 ABSTRACT Kangen Water is water produced from water ionization machine by using an electrolysis process. The machine that is used to produce Kangen Water is able to restructure ordinary water and convert it into alkaline water. This research aims to determine whether or not Kangen Water has cytotoxic and anti-proliferative activity against T47D breast cancer cells. The Kangen Water that was used in this research was from one of the producers addressed in Sumampir, Purwokerto. The cytotoxic test in this research was performed by using MTT assay method with 24 hours incubation time, while cell proliferation was performed by using doubling time method. The cytotoxic test on Kangen Water showed a potential moderate cytotoxicity at ph 9 (IC 50 46.611 %). The treated T47D cells were having a cell amount reduction during 24 to 72 hours. The sampling of Kangen Water by using ph 6 with 12.5% concentration could decrease the proliferation of cell T47D better than other ph in various concentrations. Keywords: Kangen Water, anti-cancer, cell T47D xii
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i LEMBAR PERSETUJUAN... ii LEMBAR PENGESAHAN... iii LEMBAR PERNYATAAN ORISINALITAS... iv KATA PENGANTAR... v RIWAYAT HIDUP... vii MOTTO... viii LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI... ix PERSEMBAHAN... x ABSTRAK... xi ABSTRACT... xii DAFTAR ISI... xiii DAFTAR TABEL... xvi DAFTAR GAMBAR... xvii DAFTAR LAMPIRAN... xviii BAB I. PENDAHULUAN... 1 A. Latar Belakang Masalah... 1 B. Perumusan Masalah... 3 C. Tujuan Penelitian... 3 D. Manfaat Penelitian... 3 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA... 4 A. Penelitian Terdahulu... 4 B. Landasan Teori... 4 1. Kanker... 4 2. Daur Sel (Cell Cycle)... 6 xiii
3. Kanker Payudara... 7 4. Sel T47D... 8 5. Kangen Water... 8 C. Kerangka Konsep... 10 D. Hipotesis... 11 BAB III. METODE PENELITIAN... 12 A. Jenis dan Rancangan Penelitian... 12 B. Variabel Penelitian... 12 C. Definisi Variabel Operasional... 12 D. Waktu dan Tempat Penelitian... 13 E. Alat dan Bahan... 13 F. Jalannya Penelitian... 14 1. Preparasi Sel... 14 2. Pembuatan Larutan Sampel... 15 3. Uji Sitotoksik Menggunakan Metode MTT... 15 4. Pengamatan Proliferasi Sel... 15 G. Analisis Data... 16 1. Analisisi IC 50... 16 2. Analisisi Proliferasi Sel... 16 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN... 17 A. Pengumpulan Sampel Kangen Water... 17 B. Uji Nilai ph Sampel Kangen Water... 17 C. Potensi Sitotoksik Kangen Water... 18 D. Uji Proliferasi dengan Doubling Time... 24 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN... 27 A. Kesimpulan... 27 B. Saran... 27 xiv
DAFTAR PUSTAKA... 28 LAMPIRAN... 31 xv
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 4.1 Hasil pengukuran ph sampel kangen water... 17 Tabel 4.2 Hasil nilai IC 50 dari masing-masing ph... 24 xvi
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1 Sel Kanker... 6 Gambar 2.2 Bagan generator elektrolisis air dan senyawa yang dihasilkan (Huang et al., 2008)... 9 Gambar 2.3 Kangen water (sumber pribadi: diambil di Laboratorium Kultur Sel dan Jaringan, 2017)... 10 Gambar 4.1 Uji pengecekan nilai ph Kangen Water pada alat ph meter... 18 Gambar 4.2 Reduksi MTT didalam sel hidup oleh enzim reduktase didalam mitokondria menghasilkan kristal formazan (Ebada et al, 2008)... 19 Gambar 4.3 Morfologi sel T47D setelah diberi perlakuan selama 24 jam dengan sampel kangen water diamati menggunakan mikroskop... 21 Gambar 4.4 Morfologi sel T47D sebelum dan sesudah diberi MTT (A) kontrol sel sebelum diberi MTT terlihat sel normal dengan bentuk bulat sampai memanjang dan berisi; (B) kontrol sel setelah diberi MTT, MTT masuk kedalam sel; (C) ph6 konsentrasi 50% sebelum diberi MTT; (D) ph6 konsentrasi 50% setelah diberi MTT dilanjutkan dengan inkubasi selama 4 jam... 22 xvii
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Uji Pengecekan Nilai ph Sampel Kangen Water... 31 Lampiran 2. Perhitungan Seri Konsentrasi untuk Uji Sitotoksik Sel T47D... 32 Lampiran 3. Pemetaan Uji Sitotoksik dan Proliferasi.... 33 Lampiran 4. Hasil Uji Sitotoksik ph 2,5... 34 Lampiran 4. Hasil Uji Sitotoksik ph 6... 40 Lampiran 4. Hasil Uji Sitotoksik ph 9... 46 Lampiran 5. Hasil Uji Proliferasi dengan Doubling Time... 52 xviii