62 LAMPIRAN FLOW SHEET A. Alur Kerja Antagonisme In Vitro Biakan Jamur Ganoderma boninense Hasil Pengamatan Diinokulasikan pada media MGMC pada jarak 3, cm dari tempat inokulum bakteri. Diteteskan 10 µl suspensi bakteri kitinolitik pada cakram standard Oxoid Diinkubasi pada suhu 30 o C dan dilakukan pengamatan selama lima hari Dilakukan pengukuran zona hambat B. Pengamatan abnormalitas miselium G. boninense setelah uji antagonis Biakan Jamur Ganoderma boninense Dipotong ujung miselium G. boninense pada permukaan PDA berbentuk block suare Diletakkan pada objek glass Hasil Pengamatan Diamati adanya abnormalitas pertumbuhan miselium G. boninense
63 C. Pembuatan Suspensi Bakteri Kitinolitik Biakan bakteri kitinolitik Suspensi Bakteri Disubkultur dalam media NA dan diinkubasi ± 2 hari Diambil biakan bakteri kitinolitik dengan jarum ose Dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi akuades steril sebanyak 10ml Dihomogenkan dengan cara divortex Disamakan kekeruhannya dengan Standar Mac Farland yaitu 10 8 CFU/ml D. Pembuatan Suspensi Jamur Ganoderma boninense Tubuh buah Jamur Ganoderma boninense Suspensi Jamur Dicuci dengan aquadest steril Ditimbang seberat 1 gram Dimasukkan ke dalam 10 ml aquadest steril Dihomogenkan Suspensi Jamur Ganoderma boninense Diambil 1 tetes Dihitung dalam kamar hitung/haemositometer Diencerkan sehingga mencapai Kerapatan 2 x 10 konidia / ml
64 E. Penyediaan Media Tanam Tanah dari Perkebunan Di pasteurisasi selama 3- jam pada suhu 80 o C Hasil Dicampur dengan pupuk kandang yang steril dengan perbandingan 3:1 F. Uji Patogenisitas Bibit Kelapa Sawit (umur 3-4 bulan) Kontrol Positif : Pemberian G. boninense Kontrol Negatif: Tanpa Pemberian G. boninense Perlakuan : 1. Suspensi bakteri kitinolitik KR0 + Spora G. boninense 2. Suspensi bakteri kitinolitik LK 08 + Spora G. boninense 3. Suspensi bakteri kitinolitik BK 17 + Spora G. boninense 4. Suspensi bakteri kitinolitik BK 1 + Spora G. Boninense. Suspensi bakteri kitinolitik BK 13 + Spora G. boninense
6 G. Uji Efektifitas Bakteri Kitinolitik dengan Aplikasi Siram Bibit kelapa sawit yang berumur 3-4 bulan Ditumbuhkan dalam polybag berukuran 17 x 3cm Disemprotkan 20 ml suspensi bakteri kitinolitik pada bagian permukaan tanah polybag berisi bibit sawit Dibiarkan selama 24 jam Disemprotkan konidia G. boninense dengan kerapatan 2x10 spora/ml pada permukaan tanah sampai merata Hasil Dilakukan pengamatan setiap minggu selama + 3 bulan dari minggu ke-0
66 H. Pengamatan Percobaan Perlakuan pada Bibit Kelapa sawit Pengamatan Gejala Diatas Permukaan Tanah Pengamatan Luas Serangan Di Bawah Permukaan Tanah Hasil Diamati morfologi daun tanaman dengan melihat gejala penyakit seperti daun pucat/nekrosis dan layu Hasil Di cabut bibit dari polibag Diamati morfologi akar dan pangkal batang dari bibit kelapa sawit Diamati ada atau tidaknya miselium atau basidiocarp jamur pada akar dan pangkal batang
67 I. Reisolasi Jamur Patogen dan Bakteri Kitinolitik dari Akar Kelapa Sawit Akar tanaman kelapa sawit Akar tanaman sawit steril Koloni fungi/bakteri dari akar kelapa sawit Dicuci akar tanaman dengan air mengalir selama 20 menit Disterilisasi bagian permukaan akar tanaman dengan merendam bagian tanaman dengan etanol 7% selama 2 menit Direndam dalam larutan sodium hypoklorit,3% selama menit Direndam dalam larutan ethanol 7% selama 30 detik Dibilas dengan akuades steril sebanyak 2 kali Dikeringkan pada kertas saring steril Dipotong menjadi 3 bagian Diletakkan di permukaan media PDA (Potato Dextrose agar) dan media khitin Dinkubasi pada suhu ruang (2 o -30 o C) selama ± hari
68 J. Reisolasi Bakteri Kitinolitik dari Tanah Perlakuan Tanah dari perlakuan Suspensi tanah Ditimbang seberat 1 gram Dimasukkan ke dalam aquadest steril 10 ml Divorteks sampai homogen Diencerkan sampai pengenceran 10 Hasil Dipipet 0.1 ml suspensi ke dalam media khitin Disebarkan dan diratakan dengan hockey stick Diinkubasi pada suhu ruang (2 o -30 o C) selama ± hari Dihitung koloni yang muncul pada permukaan media khitin dari hari pertama sampai hari kelima
69 K. Luas Serangan patogen Minggu Ke-1 Kontrol Positif 1.87 1.8 0.7 0.7 0.7 BK1 1.87 0.7 0.7 0.7 1.8 LK08 0.7 1.8 0.7 1.87 0.7 40.32 Fk = (40.32) 2 = 162.7024 = 46.448 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 8.807 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 0.371 = 8.436 % 1% Perlakuan 6 0.371 0.061 0.203 tn 1.87 2.44 Galat 28 8.436 0.30 34 8.807 0.361 Keterangan: tn = tidak berbeda nyata
70 L. Luas Serangan patogen Minggu Ke-2 Kontrol Positif 1.87 1.8 0.7 0.7 0.7 BK1 1.87 0.7 0.7 0.7 1.8 LK08 0.7 1.8 0.7 1.87 0.7 40.32 Fk = (40.32) 2 = 162.7024 = 46.448 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 8.807 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 0.371 = 8.436 % 1% Perlakuan 6 0.371 0.061 0.203 tn 1.87 2.44 Galat 28 8.436 0.30 34 8.807 0.361 Keterangan: tn = tidak berbeda nyata
71 M. Luas Serangan patogen Minggu Ke-3 Kontrol Positif 1.87 1.8 0.7 0.7 0.7 BK1 1.87 0.7 0.7 0.7 1.8 LK08 0.7 1.8 0.7 1.87 1.8 6.9 41.72 Fk = (41.72) 2 = 1740.84 = 49.7402 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 8.30 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 0.89 = 7.941 % 1% Perlakuan 6 0.89 0.098 0.346 tn 1.87 2.44 Galat 28 7.941 0.283 34 8.30 0.381 Keterangan: tn = tidak berbeda nyata
72 N. Luas Serangan patogen Minggu Ke-4 Kontrol Positif 1.87 1.8 1.8 1.22 1.8 BK1 1.87 0.7 0.7 0.7 1.8 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 7.83 6.9 44.00 Fk = (44.00) 2 = 1936 =.314 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 7.987 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 1.106 = 6.81 % 1% Perlakuan 6 1.106 0.184 0.74 tn 1.87 2.44 Galat 28 6.81 0.244 34 7.97 0.428 Keterangan: tn = tidak berbeda nyata
73 O. Luas Serangan patogen Minggu Ke- Kontrol Positif 1.87 1.8 1.8 1.22 1.8 BK1 1.87 0.7 0.7 0.7 1.8 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 7.83 6.9 44.00 Fk = (44.00) 2 = 1936 =.314 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 7.987 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 1.106 = 6.81 % 1% Perlakuan 6 1.106 0.184 0.74 tn 1.87 2.44 Galat 28 6.81 0.244 34 7.97 0.428 Keterangan: tn = tidak berbeda nyata
74 P. Luas Serangan patogen Minggu Ke-6 Kontrol Positif 2.12 1.47 1.8 1.87 1.87 BK1 1.87 0.7 0.7 0.7 1.8 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 9.31 6.9 44.00 Fk = (4.48) 2 = 2068.4304 = 9.098 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 9.1804 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 2.398 = 6.7846 % 1% Perlakuan 6 2.398 0.3993 0.74 tn 1.87 2.44 Galat 28 6.81 0.2423 34 9.1804 0.6416 Keterangan: tn = tidak berbeda nyata
7 Q. Luas Serangan patogen Minggu Ke-7 Kontrol Positif 2.12 2.12 1.87 2.12 2.12 BK1 2.12 1.22 1.22 1.22 1.87 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 10.7 7.6 6.9 48.84 Fk = (48.84) 2 = 238.346 = 68.12 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 10.093 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 3.89 = 6.198 % 1% Perlakuan 6 3.89 0.649 2.936 ** 1.87 2.44 Galat 28 6.198 0.221 34 10.093 0.870 Keterangan: ** = berbeda sangat nyata
76 R. Luas Serangan patogen Minggu Ke-8 Kontrol Positif 2.12 2.12 1.87 2.12 2.12 BK1 2.12 1.22 1.22 1.22 1.87 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 10.7 7.6 6.9 48.84 Fk = (48.84) 2 = 238.346 = 68.12 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 10.093 JK P = ()2 +...()2 - Fk = 3.89 = 6.198 % 1% Perlakuan 6 3.89 0.649 2.936 ** 1.87 2.44 Galat 28 6.198 0.221 34 10.093 0.870 Keterangan: ** = berbeda sangat nyata
77 S. Luas Serangan patogen Minggu Ke-9 Kontrol Positif 2.12 2.12 2.12 2.12 2.12 BK1 2.12 1.22 1.22 1.22 1.87 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 10.7 7.6 6.9 49.97 Fk = (49.97) 2 = 2497.0009 = 71.342 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 11.826 JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = 6.088 % 1% Perlakuan 6.738 0.96 4.40 ** 1.87 2.44 Galat 28 6.088 0.217 34 11.826 1.173 Keterangan: ** = berbeda sangat nyata
78 T. Luas Serangan patogen Minggu Ke-10 Kontrol Positif 2.12 2.12 2.12 2.12 2.12 BK1 2.12 1.22 1.22 1.22 1.87 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 10.7 7.6 6.9 49.97 Fk = (49.97) 2 = 2497.0009 = 71.342 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 11.826 JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = 6.088 % 1% Perlakuan 6.738 0.96 4.40 ** 1.87 2.44 Galat 28 6.088 0.217 34 11.826 1.173 Keterangan: ** = berbeda sangat nyata
79 U. Luas Serangan patogen Minggu Ke-11 Kontrol Positif 2.12 2.12 2.12 2.12 2.12 BK1 2.12 1.22 1.22 1.22 1.87 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 10.7 7.6 6.9 49.97 Fk = (49.97) 2 = 2497.0009 = 71.342 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 11.826 JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = 6.088 % 1% Perlakuan 6.738 0.96 4.40 ** 1.87 2.44 Galat 28 6.088 0.217 34 11.826 1.173 Keterangan: ** = berbeda sangat nyata
80 V. Luas Serangan patogen Minggu Ke-12 Kontrol Positif 2.12 2.12 2.12 2.12 2.12 BK1 2.12 1.22 1.22 1.22 1.87 LK08 0.7 1.8 1.22 1.87 1.8 10.7 7.6 6.9 49.97 Fk = (49.97) 2 = 2497.0009 = 71.342 Jk T = (1.87) 2 +...+ (0.70) 2 - Fk = 11.826 JK P = ()2 +...()2 - Fk =.738 = 6.088 % 1% Perlakuan 6.738 0.96 4.40 ** 1.87 2.44 Galat 28 6.088 0.217 34 11.826 1.173 Keterangan: ** = berbeda sangat nyata