PENYISIPAN GEN FITASE PADA GENOME BEBERAPA KULTIVAR TEBU, REGENERASI, EKSPRESI DAN AKLIMATISASI. Oleh SUSIYANTI A

Transkripsi

1 PENYISIPAN GEN FITASE PADA GENOME BEBERAPA KULTIVAR TEBU, REGENERASI, EKSPRESI DAN AKLIMATISASI Oleh SUSIYANTI A SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2008

2 PERNYATAAN MENGENAI DISERTASI DAN SUMBER INFORMASI Dengan ini saya menyatakan bahwa disertasi Penyisipan gen fitase pada genome beberapa kultivar tebu, regenerasi, ekspresi dan aklimatisasi belum diajukan dalam bentuk apapun kepada perguruan tinggi manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebut dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir disertasi ini. Bogor, Juli 2008 Susiyanti NIM A

3 ABSTRACT SUSIYANTI. Insertion of phytase gene into genome of sugarcane cultivars, regeneration, expression and acclimatization. Under supervision of G.A. WATTIMENA, DWI ANDREAS SANTOSA, MEMEN SURAHMAN, AND AGUS PURWITO. Sugarcane (Saccharum officinarum L.) is one of the important crops grown in marginal land in Indonesia. Phosphorus (P) is critical to the growth and development of plant in the marginal land. P is stored in plant as phytic acid (myo-inositolhexakisphosphate). Phytic acid is hydrolyzed by the activity of phytases to yield inositol and free phosphate. Genus Sacharum has low phytase activity, so it needs phytase gene insertion from other source. Genetic transformation of sugarcane holds promise to provide enough P during period of rapid cell division and growth of plant. The efficient insertion of phytase gene from other source requires plant transformation process through Agrobacterium tumefaciens. Plant transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens, has become the most used method for the introduction foreign genes into plant cells and the sub sequens regeneration of transgenic plant. Successfulness of transformation process depends on regeneration, transformation, gene expression, and methode of acclimatization. In vitro culture technique is needed to multiply clones of transgenic sugarcane. As the first step in many tissue culture experiment, it is necesssary to induce callus formation from the primary explant before regenerating to be plantlets. In general sugarcane transformed lines show chlorophyll content and leaf colour such as albino, discloration, lack of chlorophyll in the particular spot of leaves. The abnormal leaves showed low chloprophyll content. To increase the chlorophyll content of sugarcane transgenic line can be treated with putrescine. At the moment there is no data about the expression of phytase gene in form of phytase activity and its effect to phosphate and chloprophyll content in sugarcane. The transformed sugarcane plantlets should be able to acclimatize to field condition. The appropriate callus induction from 3 clones of sugarcane was observed on medium containing 3 mg l D. Shoot of sugarcane has able to induce by using modified MS medium + kinetin (0.1 mg l -1 ) + BAP (0.5; 1.0 ; 1.5; 2.0 mg l -1 ). Shoot started with the appeareance of green dot on callus within a week on regeneration medium. The best shootlet medium of three clones of sugarcane was MS + kinetin (0.1 mg l -1 ) + BAP (1.5 mg l -1 ). The best rooting medium of three clones of sugarcane was MS + kinetin (0.1 mg l -1 ) + IBA (1.0 mg l -1 ). The research showed that callus of putative transgenic line can survive under 150 mgl -1 kanamycin medium. The efficiency regeneration of putative transgenic line cv. Triton, cv. PSJT 94-41, and cv. PA 175 were succesively 30 %; 25 %; and 30 %. Efficiency transformation of putative transgenic line were: cv. Triton = 21 %; cv. PSJT 94-41= 15 %; and cv. PA 175= 24 %. The analyzed of integrated phytase gene was proven by the appearance of 900 bp of PCR band.

4 Concentration of 3.64 x 10 4 M putrescine yielded a optimum chlorophyll content of three lines tested, where the total chlorophyll content increased at above 28 % compare to the controll lines. The result indicated that the increasing of phytate concentration in culture media would increase phytase activity and P total in plantlet. Expression of phytase activity in sugarcane, signifincantly improved phosphorus absorption and chlorophyll content. Phytase activities in plant of the transgenic sugarcane were increased %. Data showed that several transgenic varieties can increase P content in plant (2-29 %) and total chlorophyll. From three transformed lines tested, two lines (cv. PSJT and cv. PA 175) with green leaves grew well in the field condition, in contrary, the yellow leaves (cv. Triton) did not show similar result. The transformed line grew slowly in the first seven day after planting, however it grew normally in the next growing period. Total chlorophyll, chlorophyll a and chlorophyll b were (cv. PS 851) increased as the phytase activity increase. Key words: Sugarcane, Agrobacterium tumefaciens, expression, phytase gene and, acclimatization.

5 RINGKASAN SUSIYANTI. Penyisipan gen fitase pada genome beberapa kultivar tebu, regenerasi, ekspresi dan aklimatisasinya. Dibimbing oleh G.A. WATTIMENA, DWI ANDREAS SANTOSA, MEMEN SURAHMAN, DAN AGUS PURWITO. Tebu (Saccharum officinarum L.) merupakan komoditas utama yang banyak ditanaman dilahan marginal di Indonesia. Phosphor (P) merupakan unsur yang menjadi faktor pembatas dalam pertumbuhan tanaman di lahan marginal. P disimpan tanaman dalam bentuk asam fitat (myo-inositolhexakisphosphate). Asam fitat dihidrolisis oleh fitase menjadi inositol dan P yang dapat digunakan tanaman. Genus Sacharum memiliki aktivitas fitase yang rendah, sehingga perlu penyisipan gen fitase dari sumber lain. Guna mendapatkan tanaman yang memiliki kecukupan P selama proses pembelahan sel dan pertumbuhannya dapat dilakukan melalui transformasi genetik. Transformasi melalui Agrobacterium tumefaciens, merupakan metode yang paling sering digunakan untuk mengintroduksi gen asing ke dalam tanaman dan diregenerasikan sehingga menghasilkan tanaman transgenik. Proses transformasi yang berhasil harus melalui tahap regenerasi, transfrormasi, ekspresi gen, dan aklimatisasinya. Salah satu metode yang banyak digunakan untuk perbanyakan klonal tebu transgenik adalah melalui kultur jaringan. Langkah pertama dalam kultur jaringan adalah menginduksi pembentukan kalus dari eksplan, sebelum diregenerasikan menjadi plantlet. Pada umumnya tebu hasil transformasi menunjukkan variasi kandungan klorofil berupa warna daun albino, kuning, hijau muda, hijau belang putih, dan hijau. Pembentukkan daun yang abnormal mengindikasikan kandungan klorofil yang rendah. Guna meningkatkan klorofil tanaman tebu hasil transformasi dapat dilkukan dengan penambahan putresina. Saat ini belum ada informasi secara lengkap mengenai ekspresi gen fitase berupa aktivitas fitase dan pengaruhnya terhadap kadar P dan klorofil tebu. Selanjutnya, tanaman tebu hasil transformasi perlu diaklimatisasi pada kondisi di lapangan. Pembentukan kalus yang sesuai terdapat pada media yang mengandung 3 mg l D. Pembentukan tunas tebu dengan menggunakan media MS + kinetin (0.1 mg l -1 ) + BAP (0.5; 1.0 ; 1.5; 2.0 mg l -1 ). Tunas mulai terbentuk dengan munculnya noktah hijau pada kalus setelah seminggu dalam media regenerasi. Media perakaran yang terbaik untuk 3 kultivar tebu terdapat pada media MS + kinetin (0,1 mg l -1 ) + BAP (1.5 mg l -1 ). Media perakaran yang terbaik untuk 3 kultivar tebu adalah MS + kinetin (0,1 mg l -1 ) + IBA (1.0 mg l -1 ). Hasil penelitian menunjukkan kalus transgenik putatif dapat bertahan hidup pada media 150 mgl -1 kanamisin. Efisiensi regenerasi transgenik putatif: cv. Triton = 30 %; cv. PSJT 94-41= 25 %; dan cv. PA 175= 30 %. Efisiensi transformasi transgenik putatif cv. Triton = 21 %; cv. PSJT 94-41= 15 %; dan cv. PA 175= 24 %. Analisa integrasi gen fitase ditunjukkan dengan pemunculan pita PCR 900 bp. Putresina 3.64 x 10 4 M merupakan konsentrasi optimum untuk peningkatan kadar klorofil 3 kultivar tebu yang diuji. Peningkatan total klorofil berkisar 28 % bila dibandingkan dengan tebu kontrol. Peningkatan konsentrasi fitat dalam media akan meningkatkan P total dalam plantlet. Ekspresi berupa

6 aktivitas fitase tebu secara signifikan meningkatkan absorbsi fosfor dan kadar klorofil tanaman. Aktivitas fitase tanaman tebu hasil transformasi meningkat %. Data juga menunjukkan beberapa kultivar yang ditransformasi memiliki peningkatan kadar P tanaman (2-29 %) dan total klorofil. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dua dari tiga kultivar (hasil transformasi) yang diuji (cv. PSJT and cv. PA 175) dengan daun hijau dapat tumbuh di lapangan, tetapi tidak pada tebu dengan daun kuning (cv. Triton). Tebu hasil transformasi mulanya tumbuh lambat pada 7 hari pertama, kemudian tumbuh normal pada periode berikutnya. Total klorofil a dan klorofil b pada tebu cv. PS 851 ditemukan meningkat sejalan dengan peningkatan aktivitas fitase.

7 Hak cipta milik IPB, tahun 2008 Hak cipta dilindungi 1 Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan atau menyebutkan sumber: a Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian, penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penyusunan laporan, penulisan kritik atau tujuan suatu masalah b Pengutipan tidak merugikan kepentingan wajar Institut Pertanian Bogor 2 Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh karya tulis dalam bentuk apapun tanpa izin Institut Pertanian Bogor.

8 PENYISIPAN GEN FITASE PADA GENOME BEBERAPA KULTIVAR TEBU, REGENERASI, EKSPRESI DAN AKLIMATISASI Oleh SUSIYANTI A DISERTASI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Doktor pada Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2008

9 Penguji pada Ujian Tertutup : Dr Ir Darda Efeni, MSc Penguji pada Ujian Terbuka : Dr Ir Gatot Irianto, MS Dr Ir Desta Wirnas, MSi

10 Judul Disertasi : Penyisipan gen fitase pada genome beberapa kultivar tebu, regenerasi, ekspresi dan aklimatisasi Nama : Susiyanti NIM : A Disetujui Komisi Pembimbing Prof Dr Ir G.A. Wattimena, MSc Ketua Dr Ir Dwi Andreas Santosa, MSc Anggota Dr Ir Memen Surahman, MSc Anggota Dr Ir Agus Purwito, MSc Anggota Mengetahui, Ketua Program Studi Agronomi Dekan Sekolah Pasca Sarjana Dr Ir Munif Ghulamahdi, MS Prof Dr Ir Khairil Anwar Notodiputro, MS Tanggal ujian: 25 Agustus 2008 Tanggal lulus:

11 RIWAYAT HIDUP Penulis merupakan anak kedua dari lima bersaudara yang lahir pada tanggal 11 Maret 1971 di Manggopoh (Kabupaten Agam, Sumatera Barat) dari pasangan: Ayahanda dr. Martibas Mara dan Ibunda Arnellys Arlina. Pendidikan Sekolah Dasar Negeri I (Teladan) diselesaikan di Kotabumi (Lampung Utara) pada tahun 1984, Sekolah Menengah Pertama Negeri 2 pada tahun 1987 dan Sekolah Menengah Atas Negeri 2 pada tahun 1990 di Tanjungkarang. Tahun 1996 penulis mendapatkan gelar Sarjana Pertanian dari Universitas Lampung pada Jurusan Budidaya Pertanian dengan Program Studi Agronomi. Tahun 2000 penulis mendapatkan gelas Magister Pertanian pada program Pascasarjana Universitas Andalas (Program Studi Agronomi dengan Pemusatan: Pemulian Tanaman). Pada tahun 2000 penulis bekerja sebagai dosen Yayasan Universitas Tamansiswa, Padang. Pada tahun 2003 penulis tercatat sebagai mahasiswa S3 Sekolah Pascasarjana IPB pada program Studi Agronomi (Pemusatan: Pemulian Tanaman dan Bioteknologi) dengan dana BPPS. Pada tahun 2005 penulis diterima menjadi dosen PNS pada Universitas Sultan Ageng Tirtayasa (Untirta), Serang, Banten. Karya ilmiah dengan judul: Transformasi gen fitase pada beberapa klon tebu melalui Agrobacterium tumefaciens GV 2260 dengan plasmid pbin dan pma, telah disajikan pada Seminar Nasional Bioteknologi dan Pemuliaan Tanaman tanggal 1-2 Agustus Sebuah artikel dengan judul: Transformasi tanaman tebu (cv. PSJT 94-41) dengan gen fitase menggunakan Agrobacterium tumefaciens GV 2260 (pbinpi-iiec), diterbitkan pada Jurnal Buletin Agronomi, Vol. XXXV, No. Desember Karya ilmiah tersebut merupakan bagian dari S3 penulis.

12 PRAKATA Puji dan syukur penulis persembahkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan karunia-nya sehingga penulis dapat menulis disertasi ini. Disertasi ini adalah sebagai salah satu syarat untuk untuk memperoleh gelar Doktor pada Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Penelitian dilakukan pada bulan September 2004 sampai dengan Desember 2007 di Laboratorium Bioteknologi-Kultur Jaringan-Departemen Agronomi dan Hortikultura, IPB; Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi PPLH, IPB; Laboratorium Saraswanti Indo-Genetech (SIG), Bogor; serta Laboratorium Indonesia Center for Biodiversity and Biotecnology (ICBB), Situgede-Bogor. Penulis ingin mengungkapkan terimakasih yang setulus-tulusnya kepada: Bapak Prof Ir G.A. Wattimena, MSc sebagai Ketua Komisi Pembimbing, Bapak Dr. Ir. Dwi Andreas Santosa, MSc selaku pembimbing dan telah memberi kesempatan berpartisipasi dalam penelitian yang didanai RAPID; Bapak Dr Ir Memen Surahman, MSc dan Dr Ir Agus Purwito, MSc selaku anggota komisi pembimbing yang telah memberikan bantuan dan pengarahan. Juga penulis tak lupa mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr Ir Nurul Khumaida, MSc selaku penguji di luar komisi pada ujian prakualifikasi program Doktor. Ucapan terimakasih juga diucapkan untuk Dr Ir Darda Efendi, MSc selaku penguji di luar komisi pada ujian tertutup, juga untuk Dr Ir Gatot Irianto, MS dan Dr Ir Desta Wirnas, MSi selaku penguji di luar komisi pembimbing pada Ujian Terbuka. Ucapan terimakasih dihaturkan juga Dr Ir Munif Ghulamahdi, MS selaku Ketua Program Studi Agronomi, serta Bapak dan Ibu Dosen yang telah memberikan ilmu dan bimbingan selama menuntut ilmu yang tidak bisa penulis sebutkan satu persatu. Terimakasih untuk bapak Adhi yang telah membantu dalam pengolahan statistik. Terima kasih juga dihaturkan kepada pihak Dikti yang telah memberikan beasiswa BPPS serta Rektor Unitas dan Untirta beserta staf dan karyawannya. Ucapan terima kasih juga untuk Reni, Ade, Uli, Neni, Nana, Dian, teteh Tati, Salma, Mbak Lastri, Mbak Ayi, Mas Iwan, Mas Putra dan Adek-adek kost untuk bantuan dan persahabatannya selama ini, serta Gandi Kungkung, Bang

13 Andi atas persaudaraannya yang telah memberikan dukungan. Mama dan Papa atas kasih sayang beliau yang tak akan terbalas, serta Uni Meri, Evi, Nela, Rini, Slamet, dan Kintan, Ega, Alika, Aza, Ica, Kevin dan Uda Al (Alm.) atas segala bentuk perhatian dan kasih sayang yang diberikan. Semoga ini bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan dan menjadi amal saleh bagi semua pihak yang terkait dengannya. Amin. Bogor, Agustus 2008 Penulis

14 DAFTAR ISI Halaman DAFTAR ISI... DAFTAR TABEL... DAFTAR GAMBAR... DAFTAR LAMPIRAN... i iii iv vi I PENDAHULUAN... 1 Latar Belakang... 1 Tujuan Penelitian... 6 Manfaat Penelitian... 7 BAB II TINJAUAN PUSTAKA... 8 Tanaman tebu... 8 Kultur jaringan tebu dan poliamin Peranan phosphor pada pertumbuhan Tanaman Fitat dan fitase Plasmid dan gene cassette Transformasi gen Analisis PCR BAB III REGENERASI TEBU SECARA IN VITRO Abstrak Pendahuluan Bahan dan Metode Hasil dan Pembahasan Simpulan BAB IV PENYISIPAN GEN FITASE PADA TANAMAN TEBU MELALUI Agrobacterium tumefaciens GV Abstrak Pendahuluan Bahan dan Metode Hasil dan Pembahasan Simpulan... 77

15 Halaman BAB V PENINGKATAN KLOROFIL PLANTLET TEBU HASIL TRANSFORMASI DENGAN PEMBERIAN PUTRESINA Abstrak Pendahuluan Bahan dan Metode Hasil dan Pembahasan Simpulan BAB VI.EKSPRESI GEN FITASE PADA BEBERAPA KULTIVAR TEBU HASIL TRANSFORMASI Abstrak Pendahuluan Bahan dan Metode Hasil dan Pembahasan Simpulan BAB VII AKLIMATISASI PLANTLET TEBU HASIL TRANSFORMASI Abstrak Pendahuluan Bahan dan Metode Hasil dan Pembahasan Simpulan BAB VIII PEMBAHASAN UMUM BAB IX SIMPULAN DAN SARAN DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN

16 DAFTAR TABEL Halaman 1 Pengaruh pemberian 2.4 D terhadap pdiameter kalus beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 6 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian 2.4 D terhadap persentase membentuk kalus..beberapa kultivar...tebu secara in vitro usia 6 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian 2.4 D terhadap struktur dan warna kalus.. beberapa kultivar...tebu secara in vitro usia 6 minggu setelah tanam Rata-rata pengaruh pemberian BAP terhadap jumlah tunas. kultivar.tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian BAP terhadap tinggi tunas.kultivar tebu secara in. vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian BAP terhadap persentase pembentukan tunas..beberapa...kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian IBA terhadap jumlah akar..beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian IBA terhadap panjang akar..beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian IBA terhadap persentase membentuk akar beberapa..kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Data rata-rata lamanya kalus bertahan hidup dalam media kanamisin (mg ml -1 ) Data rata-rata persentase kalus hidup, lamanya kalus bertahan hidup serta struktur dan bentuk kalus dalam media kanamisin Struktur dan warna kalus dalam media seleksi kanamisin usia 4 minggu setelah tanam Jumlah dan persentase kalus resisten, jumlah kalus bergenerasi, Efisiensi regenerasi, efisiensi transformasi, pada tanaman tebu Aktivitas fitase dan PCR plantlet non transgenik dan transgenik putatif Rata-rata pengaruh putresina terhadap pembentukan klorofil plantlet tebu transgenik usia 4 minggu setelah tanam

17 Halaman 16 Rata-rata pengaruh putresina terhadap klorofil b plantlet tebu.transgenik usia 4 minggu setelah tanam Rata-rata pengaruh putresina terhadap total klorofil plantlet tebu transgenik usia 4 minggu setelah tanam Data pengaruh pemberian fitat terhadap aktivitas fitase, P total plantlet tebu Rata-rata pengaruh pemberian fitat terhadap P total plantlet tebu Peningkatan P total dan aktivitas fitase tebu transgenik... dibanding non transgenik yang dikulturkan selama 1 minggu... pada media yang diberi fitat Data pengaruh pemberian fitat terhadap kadar klorofil plantlet... tebu yang dikulturkan dalam media fitat Data pengamatan pada tebu transgenik yang diaklimatisasi selama.28 hari

18 DAFTAR GAMBAR Halaman 1 Skema alur penelitian transformasi regenerasi, ekspresi aklimatisasi beberapa kultivar tebu yang disisipi gen fitase bakteri Biosintesis poliamina, metabolisme, fungsi dan interaksi dengan etilen Struktur fitat Lintasan biosintesis fitat Skema sintesis dan penyimpanan fitin Sekuen reaksi fitase dengan substrat myo-inositol heksakisphosphate Konstruksi gene cassette pbinpi-iiec Pengaruh pemberian 2.4 D terhadap diameter kalus beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 6 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian 2.4 D terhadap persentase membentuk kalus beberapa kultivar...tebu secara in vitro usia 6 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian 2.4 D terhadap pertumbuhan kalus beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 6 minggu setelah tanam Struktur dan bentuk kalus tebu Rata-rata pengaruh konsentrasi BAP terhadap jumlah tunas kultivar.tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Perkembangan eksplan tebu menjadi tunas Pengaruh pemberian BAP terhadap tinggi tunas.kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam tanam Pengaruh pemberian BAP terhadap persentase pembentukan tunas beberapa...kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah Pengaruh pemberian BAP terhadap pertumbuhan tunas beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian IBA terhadap pertumbuhan akar beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian IBA terhadap panjang akar..beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Pengaruh pemberian IBA terhadap pertumbuhan akar beberapa kultivar tebu secara in vitro usia 4 minggu setelah tanam Kalus beberapa kultivar tebu yang dikulturkan dalam media Kanamisin usia 4 minggu Rata-rata lamanya kalus bertahan hidup pada media kanamisin (mg ml -1 ) Rata-rata persentase kalus hidup dalam media kanamisin Kalus hasil transformasi (usia 4 minggu) yang dikulturkan dalam media kanamisin 150 mgl Halaman

19 24 Penampilan tunas tebu transgenik putatif Hasil elektroforesis PCR tebu (cv. PSJT ) dengan primer spesifik EC1 dan EC Grafik pengaruh putresina terhadap klorofil a plantlet tebu.transgenik usia 4 minggu setelah tanam Penampilan plantlet tebu transgenik dalam media MS yang diberi.konsentrasi putresina berbeda usia 4 minggu setelah tanam Hubungan antara total klorofil dengan klorofil a pada...tebu transgenik yang ditanam pada media yang diberi putresina usia 4 minggu..setelah tanam Hubungan antara total klorofil dengan klorofil b pada..tebu transgenik.yang ditanam pada media yang diberi putresina usia 4 minggu setelah tanam Grafik pengaruh pemberian fitat terhadap aktivitas fitase... plantlet tebu Grafik hubungan antara pengaruh pemberian fitat terhadap P... total plantlet tebu.transgenik dan nn transgenik Pengaruh fitat yang diberikan dalam media terhadap pertumbuhan plantlet tebu Korelasi antara pengaruh fitat yang diberikan dalam media terhadap aktivitas fitase plantlet tebu cv. Triton non transgenik dan transgenik Korelasi antara pengaruh fitat yang diberikan dalam media terhadap aktivitas fitase transgenik dan non transgenik Korelasi antara pengaruh fitat yang diberikan dalam media terhadap.aktivitas fitase plantlet tebu cv. PA 175 transgenik dan non transgenik Korelasi antara aktivitas fitase terhadap P total dalam jaringan... dan non transgenik Korelasi antara aktivitas fitase terhadap P total dalam jaringan... plantlet tebu cv. PSJT non transgenik dan non transgenik Korelasi antara aktivitas fitase terhadap P total dalam jaringan... plantlet tebu cv. PA 175 non transgenik dan non transgenik P yang diserap oleh plantlet tebu putatif transgenik dan non... trangenik usia 1 minggu setelah tanaman pada media fitat Korelasi antara aktivitas fitase terhadap total klorofil dalam... jaringan plantlet tebu cv. Triton non transgenik dan..transgenik... yang ditanam pada media fitat Korelasi antara aktivitas fitase terhadap total klorofil dalam... jaringan..plantlet tebu cv. PSJT non transgenik dan.... transgenik..putatif..yang ditanam pada media fitat Korelasi antara aktivitas fitase terhadap total klorofil dalam... jaringan plantlet tebu cv. PA 175 non transgenik dan..transgenik.... yang ditanam pada media fitat Aklimatisasi tebu transgenik cv. PSJT Halaman

20 44 Aklimatisasi tebu transgenik cv. PA Aklimatisasi tebu transgenik cv. PS Korelasi antara aktivitas fitase dan klorofil a tebu transgenik... (cv. PS...851) di lapangan Korelasi antara aktivitas fitase dan klorofil b tebu transgenik (cv. PS 851) di lapangan Korelasi antara aktivitas fitase dan total klorofil tebu transgenik... (cv. PS 851) di lapangan

21 DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1 Komposisi bahan kimia dan media yang digunakan dalam penelitian Pembuatan media kultur Analisis kandungan klorofil Deskripsi dan morfologi kultivar tebu Analisis sidik ragam Glossary (istilah umum yang digunakan dalam disertasi)