Spektrofotometri uv & vis

Transkripsi

1 LOGO Spektrofotometri uv & vis Fauzan Zein M., M.Si., Apt.

2 Spektrum cahaya tampak

3 Spektrum cahaya tampak

4 INSTRUMEN Diagram instrumen Spektrofotometer uv-vis

5

6

7 1. Prisma MONOKROMATOR

8 2. Kisi MONOKROMATOR

9 DETEKTOR

10 KUVET

11 Aplikasi Metode Spektrofotometri UV/VIS: Analisis Senyawa Obat Senyawa Tunggal Dan Multikomponen

12 Daerah UV-VIS Daerah UV Dekat : nm Daerah UV-Vakuum : nm Daerah Visibel: nm

13 Uji Identitas dan kemurnian: digunakan dalam monografi farmakope Penentuan kadar (kegunaan utama): (1) One-point method: baku eksternal, penambahan baku (2) multi-point method, kurva kalibrasi: baku eksternal, penambahan baku (3) Senyawa tunggal, multi komponen Sebagai detektor: HPLC, CE

14 Uji Identitas dan Kemurnian Pengukuran spektrum UV/VIS suatu zat,pembandingan dengan spektrum baku pembanding atau dengan spektrum dari literatur Panjang gelombang maksimum Penentuan Absorptivitas pada panjang gelombang maksimum

15 Penentuan Kadar Senyawa Obat Metode relatif: perlubakupembanding Pembuatan larutan larutan baku (perhatikan keberlakuan Hukum Lambert-Beer, konsentrasi sekitar 10 ug/ml) Untuk one-point method: cukup 1 larutan baku,konsentrasi harus dekat dengan konsentrasi sampel Untuk multi-point method (kurva kalibrasi): dibuat larutan dengan pengenceran bertingkat, pembuatan kurva kalibrasi/regresi linier konsentrasi vs absorbansi Untuk multi-point method (standard adisi): penambahan larutan baku secara bertingkat, sampel tetap, regresi linier konsentrasi baku yang ditambahkan vs absorban

16 One Point Method Cs = ( As / Ab) x Cb Cs = Konsentrasi Sampel As = Absorbansi Sampel Ab = Absorbansi Baku Cb = Konsentrasi Baku

17 MULTIPOINT METHOD Kalibrasi eksternal

18 MULTIPOINT METHOD Standar adisi

19 Hk. Lambert-Beer A = Absorban ε(λ) = Absorptivitas molar C = Konsentrasi [ mol / l] c = Konsentrasi [g/ 100 ml] b = Tebal sel(kuvet [cm] A1%, 1 cm = Absorptivitas jenis ε(λ) adalah absorban A suatu larutan zat (C= 1 mol/ l) bila tebal sel 1 cm (b= 1) dan panjang gelombang λ.

20 Daerah Keberlakuan Hk. Lambert-Beer 0,2-0,8 satuan absorban (A) 1 mg/ 100 ml setara dengan 0,2-0,8 satuan absorban(a) A > 0,8 : gangguan A < 0,2 : presisi dan akurasi buruk Kesalahan fotometrik terkecil bila A = 0,434

21 Penentuan Simultan: Kasus I Bila panjang gelombang masing-masing senyawa terletak berjauhan dapat ditentukan masing-masing seperti padapenentuan tunggal masing-masing senyawa

22 Penentuan Simultan: Kasus 2 Spektrum absorpsi kedua senyawa bertumpang tindih. Tentukan absorpsi total kedua senyawa. Dengan pengubahan ph atau pelarut serapan maksimum dapat dipisahkan

23 Penentuan Simultan: Kasus 3 Penentuan UV ganda (prosedur perhitungan): perhitungan konsentrasi c1 dan c2 dari dua persamaan dengan dua variabel

24 Penentuan Simultan: Kasus 3

25 Penentuan Simultan: Kasus 3 Percobaan dan Perhitungan Buat larutan baku masing-masing senyawa 1 dan 2 Ukur absorban larutan baku senyawa 1 pada λ1 dan λ2,tentukan a1(λ1) dan a1(λ2) Ukur absorban larutan baku senyawa 2 pada λ1 dan λ2,tentukan a2(λ1) dan a2(λ2) Ukur absorban larutan sampel (campuran senyawa 1 dan 2) pada λ1 (Aλ1) dan λ2 (Aλ2) Berlaku persamaan berikut ini: Aλ1 = a1(λ1) c1 + a2(λ1) c2 Aλ2 = a1(λ2) c1 + a2(λ2) c2 Dari kedua persamaan tersebut c1 dan c2 dapat ditentukan

26 Pergeseran Efekbatokromik: pergeseran merah Efek hipsokromik: pergeseran biru Efek hiperkromik: penguatan signal Efekhipokromik: pelemahan signal Penyebab: auksokrom = gugus fungsi dengan n-orbital yang langsung terikat dengan sistem kromofor Tipikal:-OH, -OR, -SH, -SR, Halogen, dan Amino

27

28 Pengaruh ph Terhadap Spektrum

29 Titik Isosbestik

30 Contoh Aplikasi Klinis

31 Kalibrasi Spektrofotometer Perlu dilakukan untuk mencegah kesalahan pembacaan panjang gelombang dan absorban Kalibrasi skala panjang gelombang: larutan holmium dioksid dalam asam perklorat. Perbedaan penunjukkan skala panjang gelombang pada alat dengan panjang gelombang seharusnya digunakan untuk mengoreksi pembacaan alat. Kalibrasi skala fotometrik: larutan kalium bikromat dalam asam sulfat. Berhubungan dengan intensitas sumber radiasi (life time sumber radiasi)

32 Kalibrasi skala panjang gelombang

33 Kalibrasi skala fotometrik

34 LOGO Fauzan Zein M., M.Si., Apt.