HASIL DAN PEMBAHASAN

Transkripsi

1 16 HASIL DAN PEMBAHASAN Penapisan Fitokimia Uji fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder yang ada dalam fraksi heksan dan etil asetat ekstrak etanol daun alpukat. Fraksinasi dilakukan dengan mengocok larutan ekstrak etanol daun alpukat ditambah pelarut dengan perbandingan 1:1 yang kemudian terbentuk dua fase yang berbeda warna. Penelitian ini menggunakan fraksinasi cair-cair, yaitu menggunakan ekstrak etanol daun alpukat dan pelarut heksan serta etil asetat. Hasil yang diperoleh pada Tabel 1 dengan menggunakan pelarut etil asetat dan heksan menunjukkan bahwa kandungan daun alpukat dengan dua pelarut mengandung flavonoid dan tanin. Tabel 1 Hasil penapisan fitokimia fraksi heksan dan etil asetat ekstrak etanol daun alpukat Jenis pelarut Heksan Etil asetat Metabolit sekunder Flavonoid, Tanin Flavonoid, Tanin Flavonoid merupakan senyawa yang larut dalam air. Golongan flavonoid dapat diekstraksi dengan etanol 70% dan akan tetap berada dalam lapisan air setelah ekstrak dikocok dengan eter minyak bumi. Flavonoid merupakan senyawa fenol yang akan berubah warna bila ditambah basa atau amonia, sehingga mudah dideteksi pada kromatografi atau dalam larutan (Harborne 1987). Flavonoid mempunyai sejumlah gugus hidroksil atau gula yang cukup larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, aseton, dan lain-lain. Sebaliknya aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon, flavon, dan flavonol cenderung lebih mudah larut dalam pelarut eter dan kloroform (Markham 1988). Flavonoid berfungsi sebagai vasodilatasi, menghambat reseptor adrenergik (Koffi et al. 2009), hipoglikemik (Chandrika et al. 2006), dan bekerja sebagai stimulan pada jantung dalam dosis kecil, diuretik dan antioksidan pada lemak apabila flavon terhidrolisis (Sirait 2007; Ebrahimzadeh et al. 2008). Tanin dapat bereaksi dengan protein membentuk kopolimer mantap yang tak larut dalam air (Harborne 1987). Berdasarkan stuktur molekulnya, tanin

2 17 dibedakan menjadi tanin terkondensasi dan terhidrolisis. Tanin terhidrolisis dapat memetabolisis senyawa lebih lanjut seperti pirogalol yang beracun bagi ruminansia. Tanin terkondensasi dapat membantu mengontrol parasit dalam gastrointestinal dan mampu mengikat protein serta molekul lain pada ph mendekati normal (Min et al. 2003). Tanin memperlihatkan aktivitas antivirus, antibakterial, dan antitumor. Tanin juga dilaporkan mampu menghambat replikasi HIV secara selektif dan sebagai diuretik (Aiyelaagbe et al. 2009). Menurut Jouad et al. (2001) dan Zeggwagh et al. (2007), pemberian flavonoid menunjukan peningkatan kecepatan filtrasi glomerulus yang dapat meningkatkan eliminasi elektrolit melalui urinasi. Peningkatan kecepatan filtrasi glomerulus bersamaan dengan peningkatan diuresis. Peningkatan pengeluaran urin timbul secara sekunder akibat inhibisi reabsorpsi natrium tubulus karena natrium yang tersisa bekerja secara osmotik untuk menurunkan reabsorpsi air (Guyton et al. 2007). Laju filtrasi ditentukan oleh daya hidrostatik membran glomerulus dan koefisien filtrasi kapiler glomerulus. Koefisien filtrasi kapiler glomerulus merupakan hasil konduktivitas hidrolik dan area permukaan kapiler tubulus. Peningkatan koefisien filtrasi akan meningkatkan GFR dan penurunan koefisien filtrasi akan menurunkan GFR. Perubahan tekanan hidrostatik glomerulus merupakan alat pengatur GFR secara fisiologis. Tekanan hidrostatik glomerulus ditentukan oleh tiga variabel, yaitu tekanan arteri, tahanan arteriol aferen, dan tahanan arteriol eferen (Guyton et al. 2007). Flavonoid yang berfungsi sebagai vasodilatator bekerja pada tahanan arteriol aferen yang akan meningkatkan tekanan hidrostatik glomerulus dan GFR. Diduga aktivitas diuretik pada fraksi heksan dan etil asetat ekstrak etanol daun alpukat karena adanya flavonoid dalam fraksi heksan dan etil asetat ekstrak etanol daun alpukat. Aktivitas Diuretik Pengujian aktivitas diuretik dilakukan dengan menggunakan metode Lipschitz (1943) dalam Adha (2009) yaitu tikus dipuasakan selama lebih kurang 18 jam sebelum perlakuan. Setiap kelompok perlakuan tikus diberikan loading dose berupa air hangat sebanyak 50 ml/kg bb secara peroral. Penelitian ini menggunakan enam kelompok perlakuan, yaitu aquades sebagai kontrol normal,

3 18 furosemid 1.8 mg/kg bb sebagai kontrol positif, fraksi etil asetat ekstrak etanol daun alpukat 100 mg/kg bb dan 300 mg/kg bb, serta fraksi heksan ekstrak etanol daun alpukat 100 mg/kg bb dan 300 mg/kg bb sebagai bahan yang akan diteliti. Setiap kelompok terdiri dari lima tikus. Pemberian bahan coba pada kelompok perlakuan dilakukan secara peroral menggunakan sonde lambung termasuk saat pemberian loading dose. Selain volume urin, variabel yang di ukur adalah ph dan warna. Tabel 2 Hasil analisis aktivitas diuretik tiap perlakuan selama 24 jam Volume urin (ml) Jam ke- Aquadest (A) Furosemid (B) EA dosis 100mg/kg bb (C) EA dosis 300mg/kg bb (D) Heksan dosis 100mg/kg bb (E) Heksan dosis 300mg/kg bb (F) ±0.74 a 1.04±0.71 ab 5.94±0.97 c 6.52±1.46 c 3.32±2.75 b 6.66±3.24 c ±1.13 a 5.14±1.40 a 9.40±0.78 a 10.36±1.23 a 7.48±1.75 a 10.68±1.19 a ±0.20 a 8.46±0.59 a 12.26±1.04 a 13.74±0.88 a 9.50±0.95 a 15.56±1.64 b ±0.73 a 9.50±1.13 ab 14.42±0.64 bc 16.02±0.72 c 10.50±1.14 ab 18.66±0.70 c ±0.21 a 10.08±0.39 ab 15.70±0.82 bc 17.36±0.48 bc 11.64±0.99 bc 20.48±0.71 c ±0.17 a 10.60±0.38 ab 17.14±0.54 cd 18.46±0.58 bcd 12.38±0.68 abc 22.14±0.84 d ±0.44 a 12.10±0.28 ab 20.36±1.33 c 20.52±1.45 a 13.82±0.21 ab 24.70±1.60 bc Keterangan: Huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang signifikan dari pengeluaran urin pada tiap perlakuan (P<0.05). Hasil analisis aktivitas diuretik selama 24 jam ditunjukkan pada Tabel 2. Aktivitas diuretik pada jam ke-1 menunjukkan kelompok C, D dan F terjadi perbedaan yang nyata terhadap perlakuan A. Ketiga kelompok ini memiliki onset untuk mempengaruhi pengeluaran urin (diuretik) pada jam pertama. Kelompok F menunjukkan perbedaaan yang nyata terhadap semua kelompok termasuk kelompok A sebagai kontrol normal perlakuan pada jam ke-3 (p<0.05). Hal ini memperlihatkan bahwa dengan pemberian heksan 300 mg/kg bb mampu meningkatkan aktivitas diuretik. Aktivitas diuretik kemungkinan dipengaruhi oleh rangsangan traktus urinarius, dan dihubungkan dengan aktivasi mekanisme neurohormon, mediator perangsang pada glomerulus, dan sifat asam pada gerakan pyelo-uretral. Efek tersebut disebabkan karena jumlah elektrolit, yang terdapat dalam tanaman, menekan epitel ginjal (Galati et al. 2002). Menurut Gowda et al. (2009), peningkatan konsentrasi elektrolit saat urinasi berarti meningkatkan pengeluaran urin. Perlakuan pada kelompok A, B, dan E baru menunjukkan peningkatan pada jam ke-2.

4 19 Furosemid digunakan sebagai diuretik pada praktek klinikk sebagai standar obat pembanding dalam respon famakologi. Obat ini meningkatkan produksi urin dan mengekskresikan Na + dengan menghambat Na +, K +, dan Cl - pada segmen ascenden ansa Henle (Nalwaya et al. 2009) ), serta menurunkan urinasi K + (Lahlou et al. 2007). Tabel 2 menunjukkan furosemid mengalami aktivitas diuretik tertinggi pada jam ke-2. Menurut Siswandono et al. (1995), furosemid mulai bekerja dalam 0.5 sampai 2 jam setelah pemberian oral, dengann masa kerja 6-8 jam. Berdasarkan hasil analisis pada Tabel 2 aktivitas urinasi optimal dari tikus hanya sampai jam ke-2, hal ini dapat dilihat dengan adanya perbedaan yang tidak nyata untuk setiap perlakuan (P>0.05). Jam ke-3 sampai jam ke-24 volume urin masih menunjukkan perbedaan yang nyata terhadap kelompok A tetapi masih saling berinteraksi antar setiap perlakuan. Aktivitas urinasi dari jam ke-3 sampai jam ke-24 sudah mengalami penurunan jumlah urin. Hal ini disebabkan karena berkurangnya cairan yang telah difiltrasi atau dengann kata lain efek dari ekstrak etanol fraksi etil asetat daun alpukat sudah menurun. Diuresis yang timbul oleh cairan hipotonik yang diminumm akan terjadi pada 15 menit setelah masuknya beban air (Ganong 2002) volume (ml) aquadest ( A) furosemid (B) EA 100 (C) EA 300 (D) 5 Heksan 1000 (E) Heksan 3000 (F) waktu (jam) Gambar 4 Aktivitas diuretik selama 6 jam awal.

5 20 Berdasarkan Gambar 4 dapat dilihat bahwa setiap perlakuan menunjukkan adanya peningkatan volume urin. Perlakuan pada A lebih rendah dari semua perlakuan karena A sebagai kontrol normal. Furosemid yang digunakan sebagai kontrol positif menunjukkan peningkatan yang signifikan. Keempat perlakuan menunjukkan kenaikan volume urin sejajar dengann kontrol positif. Aktivitas diuretik tertinggi terdapat pada heksan 300 mg/kg bb. Menurut Rathi et al. (2006), dosis pada suatu fraksi mempengaruhi peningkatan volume urin dan elektrolit pada tikus sehat. Selain volume urin, variabel lain yang diukur adalah warna dan ph urin. Tikus yang diberi aquades, furosemid, etil asetat 1000 mg/kg bb, etil asetat 300 mg/kg bb, heksan 100 mg/kg bb, dan heksan 300 mg/ /kg bb memiliki warnaa urin secara berturut-turut adalah coklat tua, kuning, kuning, kuning pucat, kuning, dan kuning pucat. Aquades (A) Furosemid (B) EA 100 Etil Asetat 100mg/ /kg bb (C) Etil Asetat 300mg/kg bb (D) Heksan 100mg/kg bb (E) Heksan 300mg/kg bb (F) Gambar 5 Warna urin pada tiap perlakuan. Warna urin normal adalah kuning-kekuningan. Setiap warna yang dihasilkan tergantungg konsentrasi pigmen urokrom (zat empedu hasil pemecahan hemoglobin). Urin yang tidak berwarna cenderung sangat cair (Schrier 2007).

6 21 Banyaknya volume urin yang dikeluarkan (diuresis) akan mempengaruhi warna urin yang terbentuk yaitu semakin banyak urin yang diekskresikan dalam satu waktu akan menghasilkan warna urin yang semakin jernih. Ginjal yang berfungsi mengatur keseimbangan asam-basa berperan penting dalam mengoreksi abnormalitas konsentrasi H + cairan ekstrasel dengan mengekskresikan asam atau basa pada kecepatan yang bervariasi. Ginjal mengatur asam-basa bersama dengan paru dan sistem dapar cairan tubuh dengan cara mengatur pengaturan dapar cairan tubuh (Guyton et al. 2007). Pegaturan asam-basa oleh ginjal dengan cara mengeksresikan urin yang asam atau basa. Apabila sejumlah HCO - 3 difiltrasi secara terus menerus ke dalam tubulus dan bila HCO - 3 dieksresikan kedala urin, maka akan menghilangan basa dari darah. Sebaliknya, bila sejumlah H + dieksresikan kedalam urin, maka akan menghilangan asam dari darah (Guyton et al. 2007). Urin tikus mempunyai ph normal antara 7.3 sampai 8 (Nor et al. 2009). Tabel 3 ph urin awal perlakuan Perlakuan ph Aquades 7 Furosemid 6 Etil asetat 100 mg/kg bb 6.8 Etil asetat 300 mg/kg bb 6.6 Heksan 100 mg/kg bb 7 Heksan 300 mg/kg bb 6.8 Tabel 3 menunjukkan ukuran ph dari semua perlakuan. Tingkat keasaman pada masing-masing perlakuan seperti aquades sebesar 7; furosemid 6; etil asetat 100 mg/kg bb sebesar 6.8; etil asetat 300 mg/kg bb sebesar 6.6; heksan 100 mg/kg bb sebesar 7; dan heksan 300 mg/kg bb sebesar 6.8. Berdasarkan data tersebut setiap perlakuan mempunyai ph yang hampir sama. Rendahnya ph urin yang dihasilkan dapat disebabkan peningkatan ekskresi asam, lemahnya bufer urin, atau keduanya (Maalouf et al. 2007). Pemberian diuretikum akan meningkatkan aliran cairan disepanjang tubulus distal dan tubulus koligentes. Keadaan ini menimbulkan peningkatan reabsorpsi Na + dari bagian nefron ini. Reabsorbsi Na + yang berpasangan dengan sekresi H + pada pompa Na-K ATPase menyebabkan peningkatan reabsorpsi Na + juga

7 22 menimbulkan peningkatan sekresi H + serta reabsorbsi bikarbonat. Perubahan ini menyebabkan terjadinya alkalosis (Guyton et al. 2007). Daun alpukat selain memiliki flavonoid yang mempengaruhi aktivitas diuretik juga memliki kandungan kalium (Adha 2009). Penumpukan kalium yang berlebih dalam darah merangsang kerja Na-K ATPase untuk menurunkan sekresi H + dan reabsorsi HCO - 3 yang cenderung menyebabkan asidosis (Guyton et al. 2007). Berdasarkan hasil yang diperoleh dari masing-masing variabel dapat diketahui bahwa dengan adanya peningkatan volume urin akan menghasilkan warna urin yang semakin jernih dan ph yang cenderung basa. Namun, dengan adanya kalium yang terdapat pada daun alpukat menyebabkan terjadi perubahan pada pompa Na-K ATPase yang menimbulkan ph menjadi asam.