BAB 4 HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

Transkripsi

1 BAB 4 HASIL PERCBAAN DAN PEMBAHASAN Penandaan falerin dengan 131 I adalah jenis penandaan tak seisotop. Falerin ditandai dengan menggunakan 131 I yang tidak terdapat dalam struktur falerin. Proses yang terjadi dalam reaksi adalah reaksi oksidasi 131 I pada larutan Na 131 I oleh oksidator Iodogen (1,3,4,6 tetrakloro-3α,6α difenilglikouril). Reaksi oksidasi terjadi pada dinding tabung reaksi yang mana Iodogen akan mengoksidasi iodida menjadi ion iodinium ( 131 I + ). Kemudian ion 131 I + yang bersifat elektrofil akan menyerang atom C atau tertentu dalam struktur falerin melalui reaksi substitusi aromatik elektrofilik. 131 I CH 3 H Na 131 I Iodogen CH 3 H + HI H H Gambar 4.1 Reaksi iodinasi falerin Pada percobaan telah dilakukan optimasi terhadap jumlah falerin dan jumlah Iodogen untuk menghasilkan hasil penandaan yang tinggi. Hasil penandaan optimal didapatkan pada jumlah falerin µg, jumlah Iodogen 1 µg, dan penambahan larutan Na 131 I dengan aktivitas 1 mci. Pada reaksi iodidasi dilakukan penambahan µl larutan dapar fosfat ph 7,4 dengan molaritas,5 M untuk menurunkan ph yang tinggi yang terjadi saat reaksi iodinasi terjadi. Setelah 1 menit reaksi berlangsung, reaksi dihentikan dengan menambahkan larutan dapar fosfat,5 M ph 7,4. Hasil penandaan falerin dengan 131 I mencapai 9,% ±,8 dengan pengulangan 7 kali. 17

2 18 Kromatografi cair kinerja tinggi digunakan untuk mengetahui apakah reaksi iodinasi menghasilkan falerin bertanda 131 I. Hasil penandaan falerin dengan 131 I dibandingkan dengan hasil reaksi antara Iodogen dengan larutan Na 131 I dan falerin tidak bertanda. Pada analisis dengan kromatografi cair kinerja tinggi digunakan fasa gerak metanol 7%. Kromatogram hasil pembacaan detektor ultraviolet menunjukkan pada hasil penandaan falerin dengan 131 I terdapat 4 puncak pada waktu retensi 5,8 menit, 6,6 menit, 6,8 menit dan 8,8 menit. Sedangkan pada pembanding yang merupakan hasil reaksi antara Iodogen dengan larutan Na 131 I terdapat tiga puncak yaitu pada waktu retensi 6 menit, 6,7 menit dan 7,1 menit. Falerin tidak bertanda memiliki puncak pada waktu retensi 6,8 menit. Puncak radioaktivitas 131 I yang terukur oleh detektor radioaktif muncul pada menit ke 4,6 sedangkan puncak radioaktivitas hasil reaksi iodogen dengan larutan Na 131 I pada menit ke 5,1 dan 7,4. Puncak radioaktivitas falerin bertanda yang diukur dengan gamma counter muncul pada waktu retensi mendekati menit ke-9. Dengan demikian dapat diketahui bahwa falerin berhasil ditandai dengan adanya puncak radioaktivitas tersebut dan puncak hasil pembacaan detektor ultraviolet sinar tampak pada waktu retensi 8,8 menit. Gambar 4. Kromatogram falerin murni

3 19 Gambar 4.3 Kromatogram sampel falerin hasil penandaan Gambar 4.4 Kromatogram sampel falerin hasil penandaan dan hasil reaksi Iodogen dengan Na 131 I Perolehan hasil penandaan dianalisis dengan menggunakan kromatografi lapis tipis dengan menggunakan pelat silika gel GF 54 dengan pengembang campuran kloroform - metanol (9:). Setelah dikembangkan dalam bejana kromatografi dikeringkan kemudian dihitung cacahan radioaktivitasnya dengan menggunakan alat Single Channel Analyzer dengan detektor NaI (TI). Pada kurva radioaktivitas dapat diketahui besar persentase perolehan hasil penandaan dan Rf hasil penandaan yang ditunjukkan dengan posisi terdapatnya puncak pada kurva. Rf falerin bertanda 131 I dengan pengembang tersebut adalah,,3.

4 Hasil reaksi iodinasi untuk menandai senyawa falerin dengan 131 I dimurnikan dengan kromatografi eksklusi-ukuran menggunakan kolom sephadex G-5 dan eluen larutan basa fosfat ph 7,4,5 M. Kolom sephadex G-5 yang digunakan memiliki diameter,5 cm dengan tinggi kolom,5 cm. Kolom sephadex G-5 memiliki kemampuan untuk memisahkan senyawa berdasarkan besar berat molekul. Kolom ini stabil terhadap semua jenis larutan dapar yang umum digunakan. Hasil reaksi iodinasi pasti masih mengandung 131 I bebas yang memiliki radioaktivitas. Pemisahan dengan berdasarkan pada ukuran molekul ini memungkinkan falerin bertanda 131 I terpisah dari 131 I bebas karena berat molekulnya lebih besar. Setiap fraksi yang ditampung dari hasil elusi diukur cacahan radioaktivitasnya dengan alat Gamma Counter dan dilihat profil kenaikan serta penurunan cacahan radioaktivitasnya sehingga fraksi yang berisi falerin bertanda 131 I dapat dipisahkan dari 131 bebas yang berat molekulnya lebih kecil. Hasil pemurnian mencapai 96, ±,4% pada pengulangan sebanyak 3 kali. Kelompok Mencit Tabel 4.1. Nilai Penimbunan Falerin Bertanda dalam Berbagai Jaringan Nilai Penimbunan Relatif Falerin Bertanda Darah Ginjal Usus Lambung Hati Jantung Paruparu Limpa Paha kanan Paha kiri Sehat (1 jam) 8,3 ± 1,9 5, ± 4,3,7 ±, 3,1 ± 1,6,1 ±,1 4,1 ±,8 5,7 ± 4,,1 ± 1,5 1, ±,9 1, ±,8 Sehat (4jam) 11,6 ±,4 3,6 ±,8,8 ± 1,,8 ±,4,5 ±,6 4,4 ±1,5 6,3 ±,4 1,8 ±,5 1,4 ±,1 1,1 ±,1 Sehat (4 jam) 6,6 ±,9 1,8 ±,9,6 ±, 1,3 ±, 1,5 ±,3,6 ±,1 4,9 ±,9 1, ±,1 1,5 ±,4 1,3 ±,1 Radang (1 jam) 13,4 ± 8,4 4,1 ± 1, 1,8 ±,7 3,1 ±, 3,6 ± 1,5 5, ±, 3,4 ±,7 1,6 ±,4 1,8 ± 1, 1,1 ±,4 Radang (4jam) 8,4 ± 1, 3,1 ±,3,1 ±,3,4 ±,1,1 ±,3 3, ± 1,5 3, ±,3 1,3 ±, 1,8 ±,7 1,3 ±,4 Radang (4jam) 6,4 ±,7 1,9 ±,4 1,3 ±,3 1,3 ±,4 1, ±,3 1,8 ±, 3, ± 1,7,9 ±,1 1,6 ±, 1, ±,1 Radang,disuntik falerin (1 jam) 1,1 ± 3,8 4,9 ±,8,6 ± 1,1,3 ±1,,7 ±,9 4,7 ±,3 5, 7 ±,7,4 ± 1, 1,6 ± 1, 1,3 ±,9 Falerin bertanda 131 I yang telah murni diuji biodistribusinya pada mencit sehat, mencit yang radang dan pada mencit yang radang kemudian disuntik dengan falerin tidak bertanda dengan dosis,5 mg/kg bb yang terbukti menghambat radang. Mencit dipilih sebagai hewan percobaan karena sampel yang akan diamati biodistribusinya sangat kecil sehingga diharapkan dengan menggunakan mencit cacahan biodistribusi dapat diamati dengan baik pada organ dan sampel darah hewan percobaan. Biodistribusi dilakukan pada tiga rentang waktu yaitu 1, 4 dan 4 jam untuk mengetahui pola perubahan biodistribusi falerin bertanda 131 I dalam tubuh hewan percobaan.

5 jam 4 jam 4 jam penimbunan relatif phalerin bertanda darah ginjal usus lambung hati jantung paru-paru limpa paha kanan sampel darah dan organ paha kiri Gambar 4.5 Biodistribusi falerin bertanda pada mencit sehat 1, 4 dan 4 jam setelah penyuntikan jam 4 jam 4 jam penimbunan relatif phalerin bertanda darah ginjal usus lambung hati jantung paru-paru limpa paha kanan paha kiri sampel darah dan organ Gambar 4.6 Biodistribusi falerin bertanda pada mencit radang 1, 4 dan 4 jam setelah penyuntikan

6 Darah Ginjal Usus Lambung Hati Jant ung Paruparu Limpa Paha kanan Paha kiri Gambar 4.7 Biodistribusi falerin bertanda pada mencit radang yang telah disuntik falerin pada waktu satu jam setelah penyuntikan Biodistribusi pada mencit yang telah diinduksi radang menunjukkan bahwa pada rentang waktu satu jam setelah penyuntikan nilai penimbunan relatif falerin bertanda pada paha kanan memiliki perbedaan yang bermakna (p<,5) dengan paha kanan mencit sehat. Setelah 4 dan 4 jam penimbunan relatif falerin bertanda 131 I pada paha kanan mencit radang tidak memilki perbedaan yang bermakna dengan mencit sehat akan tetapi masih lebih besar daripada mencit sehat jam 4 jam 4 jam mencit normal mencit radang Gambar 4.8 Penimbunan relatif falerin bertanda pada paha kanan mencit Jika dibandingkan penimbunan relatif falerin bertanda 131 I pada bagian paha kanan antara mencit radang dan mencit sehat, pada rentang waktu satu jam setelah penyuntikan terdapat

7 3 kenaikan mengalami kenaikan sebesar 69,%. Pada waktu empat jam setelah penyuntikan nilai penimbunan relatif falerin bertanda 131 I pada paha kanan mencit radang lebih besar 6,4% dibandingkan dengan penimbunan pada paha kanan mencit sehat. Sedangkan pada waktu 4 jam setelah penyuntikan, nilai penimbunan falerin bertanda 131 I pada paha kanan mencit radang lebih besar 4,7% dibandingkan dengan penimbunan pada paha kanan mencit sehat pada waktu yang sama. Data tersebut menunjukkan bahwa terjadi penimbunan falerin bertanda 131 I pada lokasi radang dan penimbunan tersebut dapat diamati dengan jelas pada biodistribusi pada waktu satu jam setelah penyuntikan. Falerin bertanda 131 I digunakan sebagai perunut radioaktif untuk mengetahui dampak penandaan falerin dengan isotop radioaktif 131 I pada lokasi radang. leh karena itu dilakukan pula pengamatan biodistribusi pada mencit yang telah diinduksi radang pada paha kanan kemudian disuntik falerin tidak bertanda dengan dosis yang terbukti menghambat radang 36,7% pada jam kedua dan 3,4% pada jam kelima. Pengamatan biodistribusi ini dilakukan pada waktu satu jam setelah penyuntikan karena pada waktu tersebut menunjukkan perbedaan yang bermakna antara penimbunan relatif falerin bertanda 131 I pada paha kanan mencit radang dan pada paha kanan mencit sehat. Hasil pengamatan biodistribusi pada paha kanan menunjukkan bahwa nilai penimbunan falerin bertanda 131 I lebih besar 51,9% dibandingkan dengan nilai penimbunan pada paha kanan mencit sehat. Data ini menunjukkan bahwa masih terjadi penimbunan di lokasi radang pada hewan yang telah disuntik dengan falerin tidak bertanda pada dosis yang telah terbukti menghambat radang.