Perbaikan Galur Mandul Jantan dan Pemulih Kesuburan melalui Kultur Antera

Transkripsi

1 Perbaikan Galur Mandul Jantan dan Pemulih Kesuburan melalui Kultur Antera Iswari S. Dewi, Aniversari Apriana, Ida H. Somantri, A. Dinar Ambarwati, Suwarno, dan Minantyorini Balai Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian ABSTRAK Kultur antera merupakan suatu teknik in vitro yang dapat menghasilkan tanaman haploid ganda homozigot (galur murni) langsung dari tanaman F1 atau generasi bersegregasi lainnya yang telah diseleksi, sehingga dapat mempercepat siklus pemuliaan. Pada penelitian ini kultur antera tanaman F1 hasil persilangan galur pelestari atau galur pemulih kesuburan dengan varietas unggul dilakukan pada dua media induksi/regenerasi, yaitu media A1A1R (N6/MS mengandung 10 3 M putresin) dan media A2A2R (N6/MS mengandung 2 mg 2,4D/l). Tujuan penelitian adalah (1) mendapatkan benih dari hasil persilangan galur pelestari atau pemulih kesuburan dengan varietas unggul yang mempunyai sifatsifat yang diinginkan, yaitu berdaya hasil tinggi serta tahan HPT utama; (2) mendapatkan calon galur pelestari dan pemulih kesuburan yang mempunyai sifatsifat yang diinginkan tersebut melalui kultur antera. Telah diperoleh benih dari 8 persilangan galur pelestari dengan varietas unggul, yaitu 218 benih asal IR62829B x Sintanur, 66 benih asal IR58025B x Sintanur, 643 benih asal IR62829B x Ciherang, 165 benih asal IR58025B x Ciherang, 528 benih asal IR62829B x IR64, 64 benih asal IR58025B x IR64, 360 benih asal IR62829B x Memberamo, dan 74 benih asal IR58025B x Memberamo, sedangkan dari 8 persilangan galur pemulih kesuburan dengan varietas unggul, yaitu IR53942R x Ciherang diperoleh 52 benih, IR53942R x IR64 diperoleh 316 benih, IR53942R x Sintanur diperoleh 56 benih, IR53942R x Memberamo diperoleh 297 benih, BR827 35R x Ciherang diperoleh 177 benih, BR82735R x IR64 diperoleh 308 benih, BR827 35R x Sintanur diperoleh 91 benih, BR82735R x Memberamo diperoleh 273 benih. Media A1A1R lebih efisien dalam menghasilkan jumlah kalus, jumlah tanaman hijau, jumlah tanaman albino, dan jumlah tanaman total dibandingkan dengan media A2 A2R. Diperoleh 43 galur Maintainer asal kultur antera tanaman F1 (IR58025B x Sintanur dan IR62829B x Ciherang) dan 55 galur Restorer asal kultur antera tanaman F1 (IR53942R x Ciherang dan BR82735R x Sintanur). Kata kunci: Padi hibrida, mandul jantan, pemulih kesuburan, kultur antera ABSTRACT Anther culture technique was conducted to regenerate doubled haploid plants directly from F1 plants or other selected segregate plant materials. Therefore, this technique can be used to accelerate breeding cycle. In this research, anther culture of F1 from maintainer or restorer lines x varieties were conducted on two induction/regeneration media, namely A1A1R (induction medium N6/regeneration medium MS supplemented with 10 3 M putresin) and A2A2R (induction medium N6 supplemented with 2 mg/l 2,4D). The purpose of this research was: (1) to obtain seeds from crossing of maintainer and restorer lines with high yielding varieties having interest good traits, such as high yield, tolerance to biotic and abiotic stresses and good eating quality; (2) to obtain maintainer and restorer lines having the interest traits through anther culture. The results from 8 crosses of maintainer lines x released varieties were 218 seeds from IR62829B x Sintanur, 66 seeds from IR58025B x Sintanur, 643 seeds from IR62829B x Ciherang, 165 seeds from IR58025B x Ciherang, 528 seeds from IR62829B x IR64, 64 seeds from IR58025B x IR64, 360 seeds from IR62829B x Memberamo, and 74 seeds from IR58025B x Memberamo, while from restorer lines x released varieties were 52 seeds from IR53942R x Ciherang, 316 seeds from IR53942R x IR64, 56 seeds from IR53942R x Sintanur, 297 seeds from IR53942R x Memberamo, 177 seeds from BR82735R x Ciherang, 308 seeds from BR82735R x 226 Dewi et al.: Perbaikan Galur Mandul Jantan

2 IR64, 91 seeds from BR82735R x Sintanur, and 273 seeds from BR82735R x Memberamo. A1A1R medium was more efficient in the production of calli, plantlet formation from calli, green and albino plantlet and total number of plantlet than A2 A2R medium. We obtained 43 maintainer lines originated from anther culture of F1 (IR58025B x Sintanur and IR62829B x Ciherang) and 55 restorer lines originated from anther culture F1 (IR53942R x Ciherang and BR82735R x Sintanur). Key words: Hybrid rice, male sterile, restorer, anther culture PENDAHULUAN Indonesia, yang mempunyai lahan sawah irigasi sekitar 5 juta hektar, sangat potensial untuk penerapan teknologi padi hibrida. Potensi hasil padi hibrida yang lebih besar dibandingkan padi nonhibrida (>1520%) akan membantu di dalam memecahkan permasalahan dalam peningkatan produksi padi (Suprihatno et al., 1994; Yuan, 1994). Saat ini, melalui kerja sama internasional telah diperoleh beberapa galur mandul jantan, yaitu IR58025A, IR62829A, IR68885A, dan IR68889A, galur pemulih kesuburan, yaitu IR53942R dan BR82735R serta tiga hibrida harapan, yaitu IR56025A/BR82735, IR58025A/IR53942, dan IR62829A.BR Pada umumnya, kelemahan yang dimiliki padi hibrida tersebut adalah daya hasil yang tidak stabil serta kerentanannya terhadap hama dan penyakit utama seperti wereng coklat, bakteri hawar daun, blas, dan virus tungro (Suprihatno dan Satoto, 1986; Satoto et al., 1994; Suprihatno et al., 1994; 1998). Padi hibrida merupakan generasi F1 dari persilangan antara galur mandul jantan (cytoplasmic male sterile/cms line) sebagai tetua betina dengan galur pemulih kesuburan (restorer line) sebagai tetua jantan. Dengan demikian, sifatsifat dari varietas padi hibrida ditentukan oleh sifatsifat kedua tetuanya. Oleh karena itu, untuk mendapatkan varietas padi hibrida yang baik, yaitu sesuai dengan kondisi agroekologi Indonesia dan mempunyai sifatsifat yang diinginkan, seperti berdaya hasil tinggi dan stabil serta tahan terhadap hama dan penyakit utama, perlu dilakukan perbaikan terhadap galur tetuanya, yaitu galur mandul jantan dan galur pemulih kesuburan. Beberapa varietas unggul dan galur harapan padi, yang merupakan plasma nutfah sumber ketahanan terhadap hama dan penyakit utama, misalnya tahan terhadap wereng coklat dan bakteri hawar daun selain mempunyai daya hasil tinggi dengan mutu beras baik, antara lain Memberamo, Sintanur, Ciherang, dan IR64. Varietas unggul tersebut dapat digunakan dalam merakit varietas hibrida yang berdaya hasil tinggi dan tahan hama penyakit utama. Galur yang potensial untuk dibuat mandul jantan mempunyai gen yang mengendalikan sterilitas jantan tetapi sitoplasmanya normal sehingga tanaman menjadi fertil. Galur seperti itu disebut sebagai galur pelestari (maintainer line). Persilangan galur pelestari dengan galur/varietas unggul yang mempunyai sifatsifat yang diinginkan merupakan tahapan pertama yang harus dilakukan untuk memperoleh galur pelestari yang mempunyai sifatsifat yang diinginkan tersebut. Selanjutnya dengan melakukan silang balik dapat diperoleh galur mandul jantan baru dengan kemandulan stabil dan sifatsifat yang unggul. Sementara itu, galurgalur pemulih kesuburan yang mempunyai sifatsifat yang diinginkan dapat dipilih Prosiding Seminar Hasil Penelitian Rintisan dan Bioteknologi Tanaman 227

3 dari hasil persilangan antara galur pemulih kesuburan yang tersedia dengan varietas yang mempunyai ketahanan terhadap hama atau penyakit utama. Untuk mendapatkan galurgalur tetua hibrida dalam waktu relatif singkat dapat digunakan teknologi kultur antera. Kultur antera merupakan suatu teknik in vitro yang dapat menghasilkan tanaman haploid ganda homozigot (galur murni) langsung dari tanaman heterozigos (tanaman F1 atau generasi bersegregasi lainnya yang telah diseleksi). Hal ini tanpa disukarkan oleh hubungan dominanresesif sehingga dapat mempercepat siklus pemuliaan, karena dapat menghilangkan sebagian besar dari kegiatan seleksi pada setiap generasi yang umum dilakukan pada pemuliaan konvensional (Zapata, 1985; Fehr, 1987; Dewi et al., 1996). Kultur antera sudah diakui sebagai teknologi yang cepat dan sangat efisien dalam perbaikan tanaman. Penggunaan teknik kultur antera di dalam program pemuliaan padi sudah menghasilkan beberapa varietas unggul baru, terutama di Cina (Hu, 1985; Li, 1992) dan Korea (Chung, 1992). Saat ini, teknik kultur antera telah digunakan oleh pemulia tanaman padi di Indonesia pada perbaikan tanaman dalam menghadapi cekaman biotik maupun abiotik (Dewi et al., 1996). Teknik kultur antera ini juga telah terbukti berhasil digunakan dalam perakitan padi hibrida hasil silangan antar subspesies (Yan et al., 1996). Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan benih tanaman F1 dari hasil persilangan galur pelestari atau pemulih kesuburan dengan varietas unggul yang mempunyai sifatsifat yang diinginkan, yaitu berdaya hasil tinggi serta tahan HPT utama; serta mendapatkan calon galur pelestari dan pemulih kesuburan yang mempunyai sifatsifat yang diinginkan tersebut melalui kultur antera tanaman F1. BAHAN DAN METODE Penelitian dilakukan di rumah kaca dan laboratorium kultur jaringan Balai Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian di Bogor mulai Januari 2002 sampai Desember Bahan tanaman yang digunakan adalah galurgalur pelestari IR62629B dan IR58025B, galurgalur pemulih kesuburan IR53942R dan BR82735R serta varietas unggul IR64, Ciherang, Memberamo, dan Sintanur sebagai donor untuk ketahanan terhadap hawar daun bakteri, wereng coklat, dan mutu beras baik (rasa nasi pulen). Untuk perbaikan galur mandul jantan, persilangan dibuat antara galur pelestari dengan varietas unggul untuk menghasilkan tanaman F1. Untuk perbaikan galur pemulih kesuburan, persilangan dibuat antara galur pemulih kesuburan dengan varietas unggul yang dipilih untuk menghasilkan tanaman F1. Biji F1 (kode M1 dan M2 untuk calon galur pelestari serta kode R1 dan R2 untuk calon galur pemulih kesuburan) disemai dan ditanam dalam ember plastik di rumah kaca untuk mendapatkan antera. Prosedur kultur antera dilakukan dengan metode Dewi et al. (1994). Kultur antera dilakukan dengan menggunakan 2 macam media induksi kalus dan 2 macam media regenerasi, yaitu (a) media A1A1R: media induksi N6 (Chu, 1978) yang diberi tambahan zat pengatur tumbuh auksin (2,0 mg NAA/l), sitokinin (0,5 mg kinetin/l), poliamin (10 3 M putresin), dan 60,0 g sukrosa/l dengan media regenerasi MS (Murashige dan Skoog, 1962) yang diberi tambahan zat pengatur tumbuh auksin (0,5 mg NAA/l), sitokinin (2,0 mg kinetin/l), poliamin (10 3 M 228 Dewi et al.: Perbaikan Galur Mandul Jantan

4 putresin), dan 40,0 g sukrosa/l (Purwoko, 2000; Dewi et al. 2001) dan (b) media A2 A2R: media induksi N6 yang diberi tambahan zat pengatur tumbuh auksin (2,0 mg 2,4D/l), dan 50,0 g sukrosa/l dengan media regenerasi MS yang diberi tambahan zat pengatur tumbuh auksin (1,0 mg NAA/l), sitokinin (2,0 mg kinetin/l) dan 30,0 g sukrosa/l (Yan et al., 1996). Pengamatan dilakukan terhadap jumlah benih yang dihasilkan dari setiap hasil persilangan, serta dari hasil kultur antera, yaitu jumlah kalus, jumlah kalus yang menghasilkan tanaman, jumlah tanaman hijau dan albino, jumlah tanaman haploid, dan haploid ganda spontan yang dihasilkan. HASIL DAN PEMBAHASAN Persilangan Galur Pelestari atau Galur Pemulih Kesuburan dengan Varietas Unggul Persilangan galur pelestari atau galur pemulih kesuburan dengan varietas unggul dapat menghasilkan benih, walaupun keberhasilannya tidak sama (Tabel 1). Dari 16 persilangan, hasil benih terendah, yaitu kurang dari 100 butir dicapai oleh persilangan IR58025B x Sintanur (48 butir), IR58025B x IR64 (64 butir), IR58025B x Memberamo (74 butir), IR53942R x Ciherang (52 butir), IR53942R x Sintanur (56 butir), BR82735R x Sintanur (91 butir). Kesepuluh persilangan lainnya menghasilkan benih antara butir, dengan jumlah benih terbanyak dicapai oleh IR62829B x Ciherang (643 butir). Menurut Watanabe (1997), derajat fertilitas hibrida yang berlainan tersebut ditentukan oleh kesesuaian genetik antar kedua tetuanya. Selanjutnya dipilih dua persilangan saja untuk ditanam dan anteranya digunakan sebagai eksplan dalam penelitian kultur antera, yaitu persilangan IR58025B x Sintanur dan IR62829B x Ciherang untuk pembentukan galur pelestari, serta persilangan IR53942R x Ciherang dan BR82735R x Sintanur untuk pembentukan galur pemulih kesuburan. Kultur Antera F1 Hasil Silangan Galur Pelestari atau Galur Pemulih Kesuburan dengan Varietas Unggul Pengaruh media terhadap induksi kalus dan regenerasi tanaman disajikan pada Tabel 2 dan 3. Menurut Razdan (1993) frekuensi induksi kalus dan regenerasinya menjadi tanaman dikendalikan oleh banyak gen (gen minor/poligenik). Pada penelitian ini, jumlah kalus dan kalus menghasilkan tanaman yang dihasilkan oleh setiap genotipe berbedabeda (Tabel 2). Jumlah kalus terbanyak dicapai oleh genotipe R2 (tanaman F1 hasil persilangan BR82735 R x Sintanur) baik pada media yang diberi putresin (A1A1R) maupun yang tanpa putresin (A2A2R). Total kalus menghasilkan tanaman terbanyak juga dicapai oleh genotipe R2. Genotipe tanaman donor memang mempunyai peran penting dalam menentukan frekuensi produksi tanaman melalui kultur antera (Masyhudi et al., 1997; Razdan, 1993; Chung, 1992). Prosiding Seminar Hasil Penelitian Rintisan dan Bioteknologi Tanaman 229

5 Tabel 1. Hasil benih pada persilangan galur tetua dengan varietas unggul Persilangan Kode silangan Jumlah benih (butir) Galur pelestari x varietas unggul IR58025B x Memberamo 74 IR58025B x Sintanur M1 48 IR58025B x Ciherang 165 IR58025B x IR64 64 IR62829B x Memberamo 613 IR62829B x Sintanur 218 IR62829B x Ciherang M2 643 IR62829B x IR Galur pemulih kesuburan x varietas unggul IR53942 R x Ciherang BR R x Ciherang IR53942 R x Sintanur BR R x Sintanur IR53942 R x IR64 BR82735 R x IR64 IR53942 R x Memberamo BR82735 R x Memberamo R1 R = belum diberi kode silangan karena belum digunakan untuk kultur antera Rasio auksinsitokinin yang lebih tinggi diperlukan saat menginduksi kalus dan sebaliknya saat meregenerasikan kalus menjadi tanaman. Kombinasi 2,4D atau NAA dan kinetin sering digunakan untuk meregenerasikan tanaman dari kalus pada kultur mikrospora padi indica (Cho dan Zapata, 1990). Dari penelitian ini, media yang diberi NAA dikombinasikan dengan kinetin dan ditambah putresin (A1A1R) menghasilkan jumlah kalus yang lebih tinggi (4418 butir) dibandingkan dengan media A2A2R (mengandung 2,4D) yang tanpa putresin (2641 butir). Demikian pula total kalus menghasilkan tanaman pada media A1A1R (554 butir) lebih tinggi dibandingkan dengan media A2A2R (200 butir). Penelitian Purwoko (2000) dan Dewi et al. (2001) menunjukkan bahwa penambahan putresin pada media N6 dan MS menghasilkan induksi kalus dan regenerasi tanaman hijau yang lebih baik dibandingkan dengan jenis poliamin lainnya. Jumlah kalus yang dapat menghasilkan tanaman lebih sedikit dibandingkan jumlah kalus yang dihasilkan (Tabel 2), yaitu berkisar antara 5,9716,46% (Tabel 3). Hal ini diduga karena tahap perkembangan butir tepung sari tidak seragam, walaupun praperlakuan dingin pada malai telah dilakukan. Suhu rendah (5+2 o C) selama 811 hari dapat menyeragamkan stadia perkembangan butir tepung sari (Dewi et al., 1994). Tahap perkembangan butir tepung sari yang optimum untuk kultur antera adalah pada tahap pertengahan sampai akhir uninukleat (Chung, 1992). Pada kultur antera padi, praperlakuan pada malai sebelum antera dikulturkan terbukti dapat meningkatkan perubahan mikrospora yang semula pada lintasan gametofitik menjadi sporofitik atau androgenesis (Zapata et al., 1983) Pada penggunaan kultur antera untuk perbaikan tanaman, banyaknya tanaman hijau yang dapat diregenerasikan amat penting, karena jumlah tanaman hijau yang banyak akan mempercepat atau memperbesar kemungkinan bagi pemulia tanaman untuk memperoleh galur murni yang diinginkan (Purwoko, 2000). 230 Dewi et al.: Perbaikan Galur Mandul Jantan

6 Efisiensi penggunaan kultur antera dalam program pemuliaan menjadi rendah bila tanaman hijau yang dapat diregenerasikan hanya sedikit, karena setiap individu tanaman hijau yang berasal dari butir sari yang berbeda akan merupakan individu/ genotipe yang unik (Zhou, 1996). Pada penelitian ini, jumlah tanaman hijau terbanyak dicapai oleh genotipe R2 (249 tanaman), sedangkan jumlah tanaman albino terbanyak dihasilkan oleh genotipe R1 (630 tanaman). Baik tanaman hijau maupun albino tampak lebih banyak dihasilkan oleh genotipe yang dikulturkan dalam media A1A1R, yaitu media induksi dan regenerasi yang diberi putresin (Tabel 2). Tanaman albino, baik jumlah maupun persentasenya, tampak selalu lebih banyak dibandingkan tanaman hijau (Tabel 2 dan 3). Seperti penelitian sebelumnya, ternyata penambahan putresin pada media selain meningkatkan regeneran tanaman hijau juga meningkatkan regeneran tanaman albino, sehingga secara keseluruhan meningkatkan jumlah tanaman total (Dewi et al., 2001). Hal ini juga ditunjukkan oleh efisiensi penggunaan media, yaitu media A1A1R yang mengandung 10 3 M putresin umumnya meng Tabel 2. Pengaruh media terhadap induksi kalus dan regenerasi tanaman Donor Media Jumlah antera Jumlah kalus Jumlah KMT TH TA TKMT Jumlah tanaman TH TA Total tanaman M1 A1A1R A2A2R Total M2 A1A1R A2A2R Total R1 A1A1R A2A2R Total R2 A1A1R A2A2R Total TH = tanaman hijau; TA = tanaman albino; TT = tanaman total; KMT = kalus menghasilkan tanaman; TKMT = total kalus menghasilkan tanaman Tabel 3. Persentase keberhasilan kultur antera pada pembentukan galur pelestari dan pemulih kesuburan Donor Media Persentase KMT Persentase TH Persentase TA Rasio TH/TKMT Efisiensi Media (%) M1 A1A1R 14,25 29,74 70,26 0,95 0,66 A2A2R 5,97 35,48 64,52 1,74 0,51 M2 A1A1R 10,77 44,66 55,34 0,76 0,39 A2A2R 11,87 27,47 72,53 0,56 0,13 R1 A1A1R 16,46 3,35 96,65 0,12 0,09 A2A2R 7,97 4,65 95,35 0,17 0,03 R2 A1A1R 10,31 30,95 69,05 0,91 0,66 A2A2R 7,02 46,37 53,63 1,24 0,79 KMT = kalus menjadi tanaman; TH = tanaman hijau; TA = tanaman albino; TH/TKMT = tanaman hijau per total kalus menjadi tanaman. Effisiensi media = jumlah TH/jumlah antera x 100% Prosiding Seminar Hasil Penelitian Rintisan dan Bioteknologi Tanaman 231

7 hasilkan jumlah regeneran tanaman hijau yang lebih banyak dibandingkan dengan media A2A2R (Tabel 2). Jumlah tanaman hijau yang dihasilkan oleh kalus yang menghasilkan tanaman berkisar antara 0,12 sampai 1,74 tanaman (Tabel 2). Hal ini hanya menunjukkan bahwa jumlah tanaman hijau yang dihasilkan per kalus dapat lebih dari satu. Tanaman hijau yang dihasilkan dari kalus yang sama pada umumnya menunjukkan karakter yang sama, kecuali jika terjadi mutasi, sehingga tanaman yang dihasilkan dari kalus yang sama dianggap satu galur yang sama (Zhou, 1996). Dari penelitian ini dapat dihasilkan 98 galur yang berasal dari tanaman haploid ganda spontan yang dihasilkan (Tabel 4). Tabel 4. Galur haploid ganda spontan yang dihasilkan melalui kultur antera untuk galur pelestari dan galur pemulih kesuburan Galur Kode nomor galur Jumlah Maintainer M11 s/d M M211 s/d M Subtotal 43 Restorer R11 s/d R14 5 R21 s/d R Subtotal 55 Total Dewi et al.: Perbaikan Galur Mandul Jantan

8 KESIMPULAN Dari persilangan galur pelestari atau galur pemulih kesuburan dengan varietas unggul, telah diperoleh benih dengan jumlah yang berbedabeda tergantung pada genotipe yang disilangkan. Media A1A1R, yaitu media induksi dan regenerasi yang diberi 10 3 M putresin, lebih efisien dalam menghasilkan jumlah kalus, jumlah tanaman hijau, jumlah tanaman albino, dan jumlah tanaman total dibandingkan dengan media A2A2R, yaitu media induksi yang diberi 2 mg 2,4D/l. Dari hasil kultur antera tanaman F1 tersebut telah diperoleh tanaman haploid ganda spontan yang terdiri dari 43 galur pelestari/maintainer dan 55 galur pemulih kesuburan/ Restorer. SARAN Galur haploid ganda yang dihasilkan dianjurkan untuk dikarakterisasi lebih lanjut baik karakter agronominya maupun ketahanannya terhadap hama (wereng coklat) dan penyakit (bakteri hawar daun). DAFTAR PUSTAKA Chu, C.C The N6 media and its application to anther culture of cereal crops. Proc. Symp. Plant Tissue Culture. Peking, May Science Press. Peking. p Chung, G.S Anther culture for rice improvement in Korea. In K. Zheng and T. Murashige (Eds.). Anther Culture for Rice Breeders. Seminar and Training for Rice anther Cultur at Hangzhou, China. October p Cho, M.S. and F.J. Zapata Plant regeneration from isolated microspore of indica rice. Plant Cell Physiol. 31: Dewi, I.S., A.D. Ambarwati, M.F. Masyhudi, T. Soewito, dan Suwarno Induksi kalus dan regenerasi kultur antera padi (Oryza sativa L.). Risalah Hasil Penelitian Tanaman Pangan 2: Dewi, I.S., I. Hanarida, and S. Rianawati Anther culture and its application for rice improvement program in Indonesia. Indon. Agric. Res. and Dev. J. 18(3):5156. Dewi, I.S., B.S. Purwoko, H. Aswidinnoor, dan I. Hanarida Peningkatan regenerasi tanaman hijau pada kultur antera padi Taipei309 dan persilangan Taipei309 x Asemandi dengan poliamin. Prosiding Kongres IV dan Simposium Nasional Perhimpunan Ilmu Pemuliaan Indonesia, 2324 Oktober PERIPI Komda Yogyakarta dan Faperta UGM, Yogyakarta. Fehr, W.R Principles of cultivar development. Vol. I. McGrawHill, inc, NY. 536 p. Hu, H Use of haploids in crop improvement. In Biotechnology in International Agricultural Research. Proceedings of The InterCenter Seminar on Prosiding Seminar Hasil Penelitian Rintisan dan Bioteknologi Tanaman 233

9 International Agricultural Research Centers (IARCs) and Biotechnology, IRRI, Philippines, 2327 April IRRI, Manila, Philippines. p Li, M.F Anther culture breeding of rice at the CAAS. In K. Zheng and T. Murashige (Eds.). Anther Culture for Rice Breeders. Proceedings of Seminar and Training for Rice Anther Culture at Hangzhou, China. October p Masyhudi, M.F., S. Tjokrowidjoyo, S. Rianawati, dan I.S. Dewi Regenerasi kultur antera beberapa tanaman padi sawah di Indonesia. Jurnal Penelitian Pertanian 16:7785. Murashige, T. and F. Skoog A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Plant Physiol 15: Purwoko, B.S Penggunaan poliamin untuk meningkatkan regenerasi tanaman hijau pada kultur antera padi dan aplikasinya dalam program pemuliaan padi. Laporan Penelitian, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Razdan, M.K An introduction to plant tissue culture. Oxford & IBH Publishing Co., Ltd. New Delhi. Satoto, B. Suprihatno, dan B. Sutaryo Heterosis dan variasi genetik berbagai karakter hibrida padi. Media Penelitian Sukamandi 15:611. Suprihatno, B. dan Satoto Vigor hibrida untuk hasil dan komponen hasil beberapa kombinasi F1 hibrida. Media Penelitian Sukamandi 3:512. Suprihatno, B., B. Sutaryo, and T.S. Silitonga Hybrid rice research in Indonesia. Hybrid rice technology: New development and future prospect. In Selected papers from the International Rice Research Conference. IRRI, Manila, Philippines. p Suprihatno, B., B. Sutaryo, Satoto, P.M. Yuniati, dan S.T.W. Utomo Hasilhasil penelitian padi hibrida di Indonesia. Makalah disampaikan pada Seminar Program Produksi Benih Padi Hibrida. Jakarta, 29 Desember hlm. Watanabe, K Phylogeny and geographical distribution of genus Oryza. Genomic constitution of genus Oryza in Div. I. Origin and differentiation of rice. In T. Matsuo, Y. Futsuhara, F. Kikuchi, and H. Yamaguchi (Eds.). Science of The Rice Plant. Vol. 3. Genetics. Food and Agriculture Policy Research Center. Tokyo. Japan. p Chapt. I. Yan, J.G., Q.Z. Xue, and Y.X. Wang Use of androgenesis in intersubspecific hybrid rice breeding. Plant Breeding 115: Yuan, L.P Increasing yield potential in rice by exploitation of heterosis. In Virmani, S.S. (Ed.). Hybrid Rice Technology New Development and Future Prospects. Selected papers from the Internat. Rice Res. Conf. IRRI. Los Banos, Philippines. p. 16. Zapata, F.J Rice anther culture at IRRI. In Biotechnology in Internat. Agric. Res. IRRI, Los Banos, Philippines. p Dewi et al.: Perbaikan Galur Mandul Jantan

10 Zapata, F.J., G.S. Khush, J.P. Crill, M.H. Neu, R.O. Romero, L.B. Torrizo, and M. Alejar Rice anther culture at IRRI. In Cell and Tissue Culture Techniques for Cereal Crop Improvement. Proceedings of a Workshop cosponsored by The Institute of Genetics, Acad. Sinica and The Internat. Rice Res. Inst. Science Press, Beijing, China. p Zhou, H Genetics of green plantlet regeneration from anther culture of cereals. In Jain, S.M., S.K. Sopory, and R.E. Veilleux (Eds.). In Vitro Haploid Production in Higher Plants. Vol. 2. Applications. Kluwer Acad. Publ. Netherlands. p Prosiding Seminar Hasil Penelitian Rintisan dan Bioteknologi Tanaman 235