OLEH : ARDIAN PRASETYA ( ) Dosen Pembimbing Nengah Dwianita Kuswytasari, S.Si., M.Si Kristanti Indah Purwani, S.Si., M.

Transkripsi

1 SIDANG TUGAS AKHIR TUGAS AKHIR - SB 1510 Dosen Pembimbing Nengah Dwianita Kuswytasari, S.Si., M.Si Kristanti Indah Purwani, S.Si., M.Si OLEH : ARDIAN PRASETYA ( )

2 LATAR BELAKANG Gracillaria selulosa Bakteri selulolitik Molekul dimer dan monomer

3 PERMASALAHAN bakteri selulolitik aerob apa saja yang terdapat dari Gracillaria di pertambakan Jabon, Sidoarjo TUJUAN mengisolasi dan mengkarakterisasi bakteri selulolitik aerob yang terdapat dari Gracillaria di pertambakan Jabon, Sidoarjo.

4 BATASAN MASALAH mengisolasi dan mengkarakterisasi bakteri selulolitik pada Gracillaria di pertambakan Jabon, Sidoarjo MANFAAT PENELITIAN memberikan informasi tentang keberadaan bakteri selulolitik aerob dari Gracillaria di pertambakan Jabon, Sidoarjo dan karakterisasinya

5 METODOLOGI Sampling Pembuatan medium Isolasi Enrichment Purifikasi Pengamatan makroskopis Pengamatan mikroskopis Uji biokimia Uji HC (Hydrolysis Cellulose) Uji degradasi selulosa alami (berat kering) Kurva pertumbuhan

6 HASIL DAN PEMBAHASAN Sampling dilakukan 5 km dari arah laut Lokasi sampling memiliki karakteristik : >> Salinitas air 20 >> temperatur 35 o C >> ph 7 >> substrat berlumpur Sampel diambil dari 5 titik yang berbeda pada 2 petak tambak yang masih berhubungan

7 Denah tambak lokasi sampling Petak 1 Petak 2 Keterangan : : titik sampling Gracillaria

8 Hasil pengamatan makroskopis No. Kode Isolat Bentuk Tepi Elevasi Warna 1. 5I 1 II II bundar rata melengkung merah 2. 5H 1 bundar rata melengkung merah 3. 5B 2 bundar rata datar merah 4. 5E 2 I bundar rata melengkung putih 5. 5B 1 I II bundar rata datar merah 6. 5C 1 III bundar rata melengkung merah 7. 5D 1 II II bundar rata datar putih 8. 5D 2 bundar rata datar putih 9. 6F 2 IV bundar rata datar merah

9 Gram katalas spora glukosa laktosa sukrosa oksidas e motil Hasil pengamatan mikroskopis dan uji biokimia No. Kode isolat Bentuk sel Starch hydrolisis Pendugaan genus 1. 5I 1 II II Kokus * * * * Micrococcus 2. 5H 1 Kokus * * * * Micrococcus 3. 5B 2 Kokus * * * * Micrococcus 4. 5E 2 I Kokus * * * + - Sporosarcina 5. 5B 1 I II Kokus * * * + - Sporosarcina 6. 5C 1 III Basil * * * * * - Nocardia 7. 5D 1 II II Kokus * * Neisseria 8. 5D 2 Kokus * * Neisseria 9. 6F 2 IV Kokus * * Neisseria

10 Penampakan hasil uji biokimia Genus Nocardia

11 Genus Neisseria No. Kode isolat katalase glukosa laktosa sukrosa oksidase D 1 II II D F 2 IV 4. Kontrol

12 Genus Micrococcus No. Kode isolat katalase glukosa laktosa I 1 II II H B 2 4. Kontrol

13 Genus Sporosarcina No. Kode isolat katalase glukosa Starch hydrolisis Motilitas E 2 I B 1 I II 3. Kontrol

14 Genus Micrococcus kokus Gram positif katalase positif spora negatif laktosa negatif Halotoleran (Paul & Varma, 1993) dapat menghasilkan endoglukanase, xylanase, β- glukanase, dan β-xylanase merombak CMC optimum pada temperatur 40 o C dan aktivitas CMCase akan hilang pada temperatur 50 o C (Sharkar and Upadhyay, 1994)

15 a b c Gambar 4.2 sel isolat (a) 5I 1 II II, (b) 5H 1, (c) 5B 2

16 Yt = -0, , *t -0, *t**2 Yt = -0, , *t - 0, *t**2 a a b Gambar Kurva pertumbuhan (a) 5H 1, (b) 5I 1 II II

17 Genus Sporosarcina Gram positif spora positif katalase positif glukosa negatif Starch hydrolisis negatif Motil halofil (DasSarma and Arora, 2001) dapat menghasilkan enzim endoglukanase untuk mendegradasi crystalline cellulose (Paul and Varma, 1993) Dapat membentuk zona bening setelah ditambahkan congo red pada medium selektif yang mengandung 1% Whatman powdered cellulose, 0,5% CMC atau 0,5% cellobiose (Paul and Varma, 1993)

18 a b Gambar 4.4 Sel isolat (a) 5E 2 I dan (b) 5B 1 I II

19 Yt = -0, , *t - 0, *t**2 Gambar 4.5 Kurva pertumbuhan 5B 1 I II

20 Genus Nocardia basil Gram positif katalase positif starch hydrolysis negatif endospora positif Halofil (Freitas and Bhat, 1958) Mampu merombak selobiosa, dextrin, starch, selulosa, dan agar (Freitas and Bhat, 1958)

21 Gambar 4.6 Sel isolat 5C 1 III

22 Yt = -0, , *t - 0, *t**2 Gambar 4.7 Kurva pertumbuhan 5C 1 III

23 Genus Neisseria kokus Gram negatif katalase positif uji oksidase positif spora negatif memiliki aktivitas enzim hidrolitik pada substrat cellulose acetate, CMC, dan xylan (Moriyoshi et al., 2001) ph optimum enzim endo-1,4-β-glucanase 6,0-7,0 Temperatur optimum pada ph 6,0 adalah 60 o C Temperatur optimum pada pada ph 7,0 adalah 40 o C

24 a b c Gambar 4.8 Sel isolat (a) 5D 1 II II, (b) 5D 2, (c) 6F 2 IV

25 Yt = -0, , *t - 0, *t**2 Yt = -0, , *t - 0, *t**2 a b Gambar Kurva pertumbuhan (a) 5D2, (b) 6F2 IV Yt = -0, , *t - 0, *t**2 Gambar 4.10 Kurva pertumbuhan 5D1 II II

26 Uji degradasi selulosa Uji HC Rasio diameter koloni dan diameter zona bening Medium CCRA Uji degradasi selulosa Uji degradasi Selulosa alami Selisih berat kering Gracilaria sebelum dan sesudah degradasi Medium minimum (NaCl, MgSO4, K2HPO4

27 Isolat Nocardia 5C1 III memiliki kemampuan terbesar dalam mendegradasi selulosa berdasarkan uji berat kering (67,01%) Isolat Sporosarcina 5E2 I memiliki kemampuan terendah dalam mendegradasi selulosa berdasarkan uji berat kering (59,12%) Namun secara statistik (uji Anova one way) kemampuan seluruh isolat dalam mendegradasi selulosa (berat kering) tidak berbeda secara signifikan

28 Degradasi selulosa (%) Diagram Uji degradasi selulosa (berat kering) isolat isolat

29 isolat 5C1 III memiliki kemampuan degradasi CMC terkecil pada uji HC (1 : 1,53) isolat 6F2 IV memiliki kemampuan degradasi CMC tebesar pada uji HC (1 : 17,39) kode isolat Tabel Rasio HC (hydrolisis cellulose) Pendugaan genus rasio HC 5I1 II II Micrococcus 1 : 14 5H1 Micrococcus 1 : 6,49 Kemampuan degradasi CMC 5B2 Micrococcus 1 : 5,74 6F2 IV Neisseria 1 : 17,39 tertinggi 5C1 III Nocardia 1 : 1,53 terendah 5D1 II II Neisseria 1 : 10,87 5D2 Neisseria 1 : 9,13 5B1 I II Sporosarcina 1 : 11 5E2 I Sporosarcina 1 : 4,85

30 rasio HC ( 1 : y) Diagram 4.2 Rasio HC kode isolat

31 Semua isolat mampu membentuk zona bening pada uji HC semua isolat dapat memproduksi enzim selulase Namun hasil uji degradasi selulosa alami (berat kering) seluruh isolat tidak signifikan Terdapat perbedaan jenis selulosa pada pengujian HC dengan pengujian degradasi selulosa bakteri lebih mampu mendegradasi CMC daripada selulosa alami CMC memiliki panjang molekul yang lebih pendek dibanding dengan selulosa murni (Anugraha, 2008)

32 isolat Nocardia 5C1 III memiliki kemampuan degradasi selulosa (berat kering) yang terbesar, namun memiliki kemampuan degradasi CMC terkecil sinergisme antara enzim endo- 1,4-β-glukanase dan ekso-1,4-β-glukanase yang besar, namun memiliki jumlah enzim endo-1,4-βglukanase yang kecil Isolat Neisseria 6F2IV memiliki persentase degradasi selulosa (berat kering) yang kecil, namun memiliki kemampuan degradasi CMC terbesar memiliki sejumlah besar enzim endo-1,4-β-glukanase namun memiliki sinergisme antara enzim endo-1,4-β-glukanase dan ekso- 1,4-β-glukanase yang kecil

33 KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan didapatkan 9 isolat yang dapat dikelompokkan ke dalam 4 genus bakteri aerob pendegradasi selulosa yaitu Micrococcus, Neisseria, Nocardia, dan Sporosarcina Kemampuan degradasi selulosa alami (berat kering) yang terbesar pada isolat 5C 1 III (Nocardia), yang terendah pada isolat 5E 2 I (Sporosarcina) Kemampuan degradasi CMC yang terbesar pada isolat 6F 2 IV (Neisseria), yang terendah pada isolat 5C 1 III (Nocardia) Saran Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk mengkarakterisasi ke-9 isolat hingga tingkat spesies

34 TERIMA KASIH