PEMERIKSAAN DARAH RUTIN

Transkripsi

1 Makalah PEMERIKSAAN DARAH RUTIN Oleh : Bima Kusuma Jati G Pembimbing : drg. Shinta Kartikasari. KEPANITERAAN KLINIK BAGIAN ILMU GIGI DAN MULUT FAKULTAS KEDOKTERAN UNS / RSUD DR MOEWARDI SURAKARTA 2016

2 BAB I PENDAHULUAN Sebagai seorang dokter, perlu keterampilan dalam melakukan pemeriksaan dan menentukan diagnosa. Pemeriksaan fisik kadang dirasa kurang mampu menegakkan diagnosa atau menyingkirkan diagnosa banding, untuk itu diperlukan pemeriksaan penunjang. Salah satu pemeriksaan penunjang yang perlu dilakukan seorang dokter adalah pemeriksaan darah (Brown, 1993). Darah mempunyai peran penting dalam tubuh manusia. Hasil pemeriksaan darah secara tidak langsung dapat memantau keadaan dalam tubuh. Darah merupakan suatu suspensi partikel dalam suatu larutan kolid cair yang mengandung elektrolit dan merupakan suatu medium pertukaran antar sel yang terfikasi dalam tubuh dan lingkaran luar (Silvia A. Price & Lorraine M. Wilson, 2005). Pemeriksaan darah yang dilakukan dapat berupa pemeriksaan darah rutin dan darah lengkap. Pemeriksaan darah rutin/hematologi rutin adalah pemeriksaan rutin dan yang mencakup sel-sel darah dan bagian-bagian lain dari darah, yang meliputi pemeriksaan haemoglobin, hematokrit, jumlah eritrosit, leukosit, dan trombosit (Niki Diagnostic Center, 2011). Pemeriksaan hematologi lengkap (complete blood count) terdiri dari pemeriksaan darah rutin ditambah pemeriksaan morfologi sel (ukuran, kandungan hemoglobin, anisositosis, poikilositosis, polikromasi). Pemeriksaan hematologi lengkap penting untuk mengetahui morfologi dan fungsi dari berbagai sel yang ada di dalam darah, contohnya sel darah putih yang berperan dalam imunitas tubuh dan sel darah merah yang berperan dalam oksigenasi tubuh (Brown, 1993, Perkins 2003; Adamson, Longo, 2005). Pada makalah ini akan dijelaskan mengenai pemeriksaan darah rutin yang sering dilakukan oleh seorang dokter dalam pemeriksaan penunjang untuk membantu menegakkan diagnosa maupun menyingkirkan diagnosa banding. 2

3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Pengertian Darah adalah suatu suspensi partikel dalam suatu larutan kolid cair yang mengandung elektrolit dan merupakan suatu medium pertukaran antar sel yang terfikasi dalam tubuh dan lingkaran luar (Silvia A. Price & Lorraine M. Wilson : 2005). Spesimen darah sering digunakan untuk pemriksaan hematologi rutin. Hematologi rutin adalah pemeriksaan rutin dan lengkap yang mencakup sel-sel darah dan bagian-bagian lain dari darah, yang meliputi pemeriksaan haemoglobin, jumlah eritrosit, hematokrit, MCV, MCH, MCHC, RDW, leukosit, hitung jenis dan trombosit (Niki Diagnostic Center, 2011). Pada pemeriksaan hematologi rutin (darah lengkap) selalu menggunakan sampel darah segar. Darah segar ( fresh whole blood ) merupakan kontrol yang ideal untuk pemeriksaan darah lengkap karena secara fsik dan biologi identik dengan material yang akan diperiksa (Van Dun, 2007). Pemeriksaan laboratorium merupakan pemeriksaan penunjang yang diperlukan oleh dokter untuk membantu menegakkan diagnosis. Salah satu pemeriksaan laboratorium yang sering dilakukan adalah pemeriksaan darah. Darah mempunyai peran penting dalam tubuh manusia. Hasil pemeriksaan darah secara tidak langsung dapat memantau keadaan dalam tubuh. Pemeriksaan darah atau pemeriksaan hematologi secara umum dapat dibedakan menjadi dua yaitu pemeriksaan hematologi rutin dan hematologi lengkap (Brown,1993). Pemeriksaan hematologi rutin terdiri dari hemoglobin, 3

4 hematokrit, hitung jumlah eritrosit, hitung jumlah leukosit, hitung jenis leukosit, hitung jumlah trombosit dan nilai-nilai ratarata eritrosit. Pemeriksaan hematologi lengkap (complete blood count) terdiri dari pemeriksaan darah rutin ditambah pemeriksaan morfologi sel (ukuran, kandungan hemoglobin, anisositosis, poikilositosis, polikromasi). Pemeriksaan hematologi lengkap penting untuk mengetahui morfologi dan fungsi dari berbagai sel yang ada di dalam darah, contohnya sel darah putih yang berperan dalam imunitas tubuh dan sel darah merah yang berperan dalam oksigenasi tubuh (Brown, 1993, Perkins 2003; Adamson, Longo, 2005). Pemeriksaan darah hematologi lengkap (biasanya dirujuk sebagai hitung darah lengkap), mencakup indeks sel darah merah, hitung leukosit dan jenis hitung trombosit, pemeriksaan apus darah, dan Laju Endap Darah (LED) (Niki Diagnostic center, 2013). Hasil normal lengkap pada pemeriksaan darah lengkap dan profil biokimia, menunjukkan tampaknya tidak ada penyakit infeksi atau peradangan. Adanya penyakit keganasan yang samar-samar, yang menyebabkan gejala sistemik, hampir selalu menghasilkan perubahan hematologi reaktif. Seiring dengan kemajuan teknologi, alat-alat yang dipakai dalam pemeriksaan hematologi juga semakin berkembang. Para peneliti mengembangkan alat untuk menganalisa populasi sel darah secara otomatik. Alat ini dapat digunakan untuk pemeriksaan hitung eritrosit, hitung leukosit, Hb, Ht, platelet dan nilai-nilai rata- rata eritrosit. Metode yang banyak dipakai pada alat-alat untuk pemeriksaan hematologi adalah metode flow cytometri (Kearns & LaMonica, 2001; Koeswardani dkk., 2001). Pemeriksaan hematologi dengan metode flow cytometri 4

5 sekarang sudah popular dilakukan. Metode flow cytometri memiliki prosedur yang relatif mudah dan hasilnya dapat diperoleh dalam waktu yang singkat. Namun, menurut Perkins metode ini mempunyai tingkat false positive yang cukup tinggi, yaitu 10-25%. Pemeriksaan hematologi lain yang cukup sering dilakukan adalah pembuatan Sediaan Apus Darah Tepi (SADT). SADT atau blood smear adalah salah satu pemeriksaan untuk mengetahui keadaan populasi sel-sel darah atau kelainan darah lainnya. Pada SADT dapat diketahui morfologi sel-sel darah yaitu ukuran, bentuk, kesan jumlah, apakah ada sel-sel muda dan sebagainya. SADT dapat digunakan sebagai kontrol terhadap pemeriksaan hematologi lain seperti nilai rata-rata eritrosit, Hb, dan lain-lain (Kearns & LaMonica, 2001; Wyrick-Glatzel, Hughes, 2001) B. Pemeriksaan Darah Rutin 1. Hemoglobin a. Definisi hemoglobin Hemoglobin adalah molekul protein pada sel darah merah yang berfungsi sebagai media transport oksigen dari paru-paru keseluruh jaringan tubuh dan membawa karbondioksida dari jaringan tubuh ke paru-paru. Kandungan zat besi yang terdapat dalam hemoglobin membuat darah berwarna merah. Saat ini pengukuran kadar hemoglobin dalam darah sudah menggunakan mesin otomatis selain mengukur hemoglobin mesin pengukur akan memecah hemoglobin menjadi sebuah larutan. Hemoglobin dalam larutan ini 5

6 kemudian dipisahkan zat lain dengan menggunakan zat kimia bernama nilai sinar yang berhasil diserap oleh hemoglobin. Hemoglobin adalah metaloprotein pengangkut oksigen yang mengandung besi dalam sel darah merah mamalia dan hewan lainnya. Molekul hemoglobin terdiri dari : globin, apoprotein, dan empat gugus heme, suatu molekul organik dengan satu atom besi. b. Fungsi hemoglobin Fungsi hemoglobin dalam darah adalah : 1) Mengatur pertukaran oksigen dengan karbondioksida di dalam jaringan tubuh. 2) Mengambil oksigen dari paru-paru kemudian dibawa keseluruh jaringan tubuh untuk dipakai sebagai bahan baku. 3) Membawa carbondioksida dari jaringan tubuh sebagai hasil metabolisme ke paru-paru untuk dibuang. Satu gram hemoglobin mengangkut 1,34 ml oksigen. Kapasitas angkut ini berhubungan dengan kadar Hb bukan jumlah sel darah merah. Penurunan protein Hb normal tipe A1, A2, F (fetal) dan S berhubungan dengan anemia sel sabit. Hb juga berfungsi sebagai dapar melalui perpindahan klorida kedalam dan keluar sel darah merah berdasarkan kadar O 2 dalam plasma (untuk tiap klorida yang masuk kedalam sel darah merah, dikeluarkan satu anion HCO3). Untuk mengetahui apakah seseorang kekurangan darah atau tidak dapat diketahui dengan pengukuran kadar Hb. Penurunan kadar Hb dari normal berarti kekurangan 6

7 darah. Kekurangan darah berarti anemia. Selain kekurangan Hb juga disertai dengan eritrosit yang berkurang serta nilai hematokrit dibawah normal (Kresno, 1988). c. Jenis - jenis hemoglobin (Hb) Pada manusia telah dikenal kurang dari 14 macam Hb yang dipelajari secara mendalam dengan bantuan elektrokoresis. Hb diberi nama dengan simbol alfabeta misalnya ; Hb A, Hb C, Hb D, Hb E, Hb F, Hb G, Hb I, Hb M, Hb S, dan sebagainya (Joice, 2008). Kadang-kadang Hb diberi nama menurut kota tempat ditemukan jenis Hb atau orang yang menemukannya, misalnya ; Hb New York, Hb Sydney, Hb Bart, Hb Gower, dan lain-lain. Hb A (Adult Dewasa) mulai diproduksi pada usia 5-6 bulan kehidupan intrauterine janin, pada usia 6 bulan postnatal kosentrasi Hb A 99%. Hb A terdiri dari 2 rantai α dan 2 rantai β. Hb F (Foetus janin) mulai ditemukan dalam darah pada minggu ke dua puluh usia kehamilan. Pada bayi Hb F dan sebelum usia 2 tahun jumlah tinggal sedikit, diganti oleh Hb A. Karena sifatnya yang resisten terhadap alkali, Hb F ini mudah dipisahkan dari Hb A. Hb F terdiri dari 2 rantai α dan 2 rantai T. d. Sintesis hemoglobin Fungsi utama sel darah merah adalah mengangkut O2 ke jaringan dan mengembalikan CO2 dari jaringan ke paru-paru. Untuk mencapai pertukaran gas ini, sel darah merah mengandung protein khusus, yaitu hemoglobin dan setiap hemoglobin dewasa normal (Hb A) terdiri atas empat rantai polipeptida α2 β2, masing-masing dengan gugus 7

8 haemnya sendiri. Berat molekul Hb A adalah darah dewasa normal juga berisi jumlah kecil dua hemoglobin lain, Hb F dan Hb A2 yang juga mengandung rantai y dan rantai s masing-masing sebagai pengganti β. 65% hemoglobin disintesis dalam eritroblas dan tiga puluh lima persen hemoglobin disintesis pada stadium retikulosit. Sintesis haem, terjadi banyak dalam mitokondria oleh sederet reaksi biokimia yang dimulai dengan kondensasi glisin dan suksinil. Koenzim A dibawah aksi enzim kunci data-amino laevulinic acid (Ala) sintase yang membatasi kecepatan. Pridoksal fosfat (Vitamin B) adalah koenzim untuk reaksi ini yang diransang oleh eritro protein dan dihambat oleh hacm. Akhirnya protoporfrin bergabung dengan besi untuk membentuk hacm yang masing-masing molekulnya bergabung dengan rantai globin yang terbuat pada poliribosom. Kemudian tetramer empat rantai globin dengan masing-masing gugus hacmnya sendiri terbentuk dalam kantong untuk membangun molekul hemoglobin. (Hoffbrand, 2005) e. Struktur hemoglobin Pada pusat molekul terdapat cincin heterosiklik yang dikenal dengan porifn yang menahan satu atom besi. Atom besi ini merupakan situs/lokal ikatan oksigen. Hb tersusun dari globin (empat rantai protein yang terdiri dari dua unit alfa dan dua unit beta) dan heme (mengandung atom besi dan porphyrin: suatu pigmen merah). Pigmen besi hemoglobin bergabung dengan oksigen. Hemoglobin yang mengangkut oksigen darah (dalam arteri) berwarna merah terang sedangkan hemoglobin yang kehilangan oksigen 8

9 (dalam vena) berwarna merah tua. Porifn yang mengandung besi disebut heme. Nama hemoglobin merupakan gabungan dari heme dan globin. Globin sebagai istilah generik untuk protein globural. Ada beberapa protein mengandung heme, dan hemoglobin adalah yang paling dikenal dan paling banyak dipelajari. Setiap molekul hemoglobin memiliki 4 gugus hem identik yang melekat pada 4 rantai globin. Keempat rantai globin itu merupakan rantai polipeptida yang terdiri atas dua buah rantai alfa (α) dan dua buah rantai beta (β). Selain itu, hemoglobin uga memiliki 4 molekul nitrogen protoporphyrin IX, dan 4 atom besi dalam bentuk ferro (Fe 2+ ) yang berpasangan dengan protoporphyrin IX untuk membentuk 4 molekul hem. Hem disintesis di mitokondria eritrosit. Hem terdiri dari 4 struktur 4-karbon berbentuk cincin simetris yang disebut cincin pirol, yang membentuk satu molekul porfrin. Gugus karbon tersebut berasal dari asam amino glisin dan suknisil koenzim A. perbentuka hem teradi secara bertahap, dimulai dari pembentukan kerangka porfrin, disusul dengan insersi atau pelekatan besi (Fe) ke masing-masing gugus hem. Ugus hem selanutnya akan melekat ke gugus globin, penggabungan ini teradi di sitoplasma eritrosit. Pembentuka hemoglobin memerlukan bahan-bahan penting, yaitu besi (Fe), vitamin B12 (siano-kobalamin), dan asam folat (asa pteroilglutamat). Pada manusia dewasa, hemoglobin berupa tetramer (mengandung 4 subunit protein), yang terdiri dari masingmasing dua sub unit mirip secara struktural dan berukuran hampir sama. Tiap sub unit memiliki berat molekul ± 16,000 9

10 Dalton, sehingga berat molekul total tetramernya menjadi sekitar 64,000 Dalton. Tiap sub unit hemoglobin mengandung satu heme, sehingga secara keseluruhan hemoglobin memilki kapasitas empat molekul oksigen. (Hariono, 2006 ) Gambar 2.1, Struktur Hemoglobin (Sumber : Hoffbrand, 1995) f. Pemeriksaan Hemoglobin Penetapan kadar hemoglobin ditentukan dengan bermacam-macam cara dan yang banyak dipakai di laboratorium klinik ialah cara fotoelektrit dan kolorimetrik visual. 1) Cara sahli Prinsip hemoglobin diubah mejadi asam hematin, kemudian warna yang terjadi dibandingkan secara visual dengan standar dalam alat itu. Cara Sahli banyak dipakai di Indonesia, walau cara ini tidak tepat 100%, mengalami kurang darah atau darahnya masih normal, pada pemeriksaan ini factor kesalahan kira-kira 10%, kelemahan cara ini berdasarkan kenyataan bahwa asam hematin itu bukanlah merupakan larutan sejati dan juga alat hemoglobimeter itu sukar distandarkan, selain itu 10

11 tidak semua macam hemoglobin dapat diubah hematin misalnya ; karboxyhemoglobin, methemoglobin, sulfahemoglobin. 2) Cara cyanmethemoglobin Prinsipnya adalah hemoglobin diubah menjadi cyanmethemoglobin dalam larutan drabkin yang berisi kalium sianida dan kalium ferisianida. Absorbensi larutan diukur pada panjang gelombang 540 nm. Larutan drabkin yang dipakai untuk mengubah hemoglobin, oxyhemoglobin, methemoglobin, dan karboxymoglobin menjadi cyanmethemoglobin, sedang sulfhemoglobin tidak berubah karena tidak diukur. Cara ini sangat bagus untuk laboratorium rutin dan sangat dianjurkan untuk penetapan kadar hemoglobin dengan teliti karena standar cyanmethemoglobin yang ditanggungkan kadarnya stabil dan dapat dibeli. Larutan drabkin teridri atas natrium bikarbonat 1 gram, kalium sianida 50 mg, kalium ferisianida 200 mg, aqudest 100 ml. (Gandasoebrata, 2001) 3) Cara tallquist Prinsipnya adalah membandingkan darah asli dengan suatu skala warna yang bertingkat-tingkat mulai dari warna merah muda sampai warna merah tua. Cara ini hanya mendapatkan kesan dari kadar hemoglobin saja, sebagai dasar diambil darah = 100% = 15,8 gr hemoglobin per 100 ml darah. Tallquist mempergunakan skala warna dalam satu buku mulai dari 11

12 merah muda 10% di tengah-tengah ada lowong dimana darah dibandingkan dapat dilihat menjadi darah dibandingkan secara langsung sehingga kesalahan dalam melakukan pemeriksaan antara 25-50%. 4) Cara sulfat Cara ini dipakai untuk menetapkan kadar hemoglobin dari donor yang diperlukan untuk transfuse darah. Hasil dari metode ini adalah persen dari hemoglobin. Perlu diketahui bahwa kadar hemoglobin cukup kira-kira 80% hemoglobin. Kadar minuman ini ditentukan dengan setetes darah yang tenggelam dalam larutan kufrisulfat dengan berat jenis. (Bakri S, 1989) g. Kesalahan dalam pemeriksaan Hb 1) Hemolisis darah. 2) Obat dapat meningkatkan dan menurunkan kadar hemoglobin. 3) Mengambil darah dari lengan yang terpasang cairan invus dapat mengencerkan sampel darah. 4) Membiarkan turniket terpasang terlebih dahulu lebih dari satu menit akan menyebakan hemokosentrasi. 5) Tinggal di daratan tinggi dapat menyebakan peningkatan kadar hemoglobin. 6) Penurunan asupan cairan atau kehilangan cairan akan meningkatkan kadar Hb dan kelebihan asupan cairan akan mengurangi kadar Hb. (Kee, 2007) h. Nilai Rujukan Hb Nilai normal : Pria : g/dl SI unit : 8,1-11,2 mmol/l Wanita : g/dl SI unit : 7,4 9,9 mmol/l 12

13 Penetapan anemia didasarkan pada nilai hemoglobin yang berbeda secara individual karena berbagai adaptasi tubuh (misalnya ketinggian, penyakit paru-paru, olahraga). Secara umum, jumlah hemoglobin kurang dari 12 gm/dl menunjukkan anemia. Pada penentuan status anemia, jumlah total hemoglobin lebih penting daripada jumlah eritrosit. i. Implikasi Klinik 1) Penurunan nilai Hb dapat terjadi pada anemia (terutama anemia karena kekurangan zat besi), sirosis, hipertiroidisme, perdarahan, peningkatan asupan cairan dan kehamilan. 2) Peningkatan nilai Hb dapat terjadi pada hemokonsentrasi (polisitemia, luka bakar), penyakit paru-paru kronik, gagal jantung kongestif dan pada orang yang hidup di daerah dataran tinggi. 3) Konsentrasi Hb berfl uktuasi pada pasien yang mengalami perdarahan dan luka bakar. 4) Konsentrasi Hb dapat digunakan untuk menilai tingkat keparahan anemia, respons terhadap terapi anemia, atau perkembangan penyakit yang berhubungan dengan anemia. j. Faktor pengganggu 1) Orang yang tinggal di dataran tinggi mengalami peningkatan nilai Hb demikian juga Hct dan sel darah merah. 2) Asupan cairan yang berlebihan menyebabkan penurunan Hb 13

14 3) Umumnya nilai Hb pada bayi lebih tinggi (sebelum eritropoesis mulai aktif) 4) Nilai Hb umumnya menurun pada kehamilan sebagai akibat peningkatan volume plasma 5) Ada banyak obat yang dapat menyebabkan penurunan Hb. Obat yang dapat meningkatkan Hb termasuk gentamisin dan metildopa 6) Olahraga ekstrim menyebabkan peningkatan Hb k. Hal yang harus diwaspadai 1) Implikasi klinik akibat kombinasi dari penurunan Hb, Hct dan sel darah merah. Kondisi gangguan produksi eritrosit dapat menyebabkan penurunan nilai ketiganya. 2) Nilai Hb <5,0g/dL adalah kondisi yang dapat memicu gagal jantungdan kematian. Nilai >20g/dL memicu kapiler clogging sebagai akibat hemokonsenstrasi l. Tatalaksana Manajemen anemia bertujuan untuk mengatasi penyebab rendahnya nilai hemoglobin. Dalam situasi terjadi penurunan darah yang akut, transfusi merupakan terapi pilihan. Dalam situasi terjadi kekurangan atau penurunan nutrisi maka diperlukan penggantian besi, vitamin B12 atau asam folat. Pada penurunan fungsi ginjal dan penggunaan sitostatika, anemia biasanya terjadi karena menurunnya produksi eritropoetin sehingga terapi yang tepat adalah pemberian eritropoetin, namun apabila ada kendala biaya yang mahal, dapat diganti dengan tranfusi darah. Jika anemia terjadi akibat menurunnya produksi eritropoetin 14

15 maka terapi penggantian eritropoetin dapat mengurangi kebutuhan tranfusi. 2. Hematokrit a. Definisi Hematokrit berasal dari kata haimat yang artinya darah dan krinein yang berarti pemisahan (Dep Kes RI, 1989). Hematokrit adalah nilai yang menunjukan persentase zat padat dalam darah terhadap cairan darah. Hematokrit menunjukan persentase sel darah merah tehadap volume darah total. Dengan demikian, bila terjadi perembesan cairan darah keluar dan pembuluh darah, sementara bagian padatnya tetap dalam pembuluh darah, akan membuat persentase zat padat darah terhadap cairannya naik sehingga kadar hematokritnya juga meningkat (Hardjoeno, H. 2007). b. Manfaat pemeriksaan hematokrit Mafaat pemeriksaan hematokrit untuk mengukur derajat anemi dan polisetemia. Untuk mengetahui adanya ikterus yang dapat diamati dari warna plasma. Di mana plasma terbentuk warna kuning atau kuning tua (R. Ganda S, 1989). Pemeriksaan hematokrit juga dapat digunakan untuk menentukan rata-rata volume eritrosit, merupakan tes screening dalam mendeteksi adanya hiperbilirubinemia. (Maxwell M. Wintrobe, 1974). Warna plasma yang diperoleh dari pemusingan yang berwarna kuning atau kuning tua baik dalam keadaan 15

16 fisiologi atau patologi merupakan indikasi naiknya bilirubin dalam darah, misalnya pada infeksi hepatitis. Naiknya kolesterol juga dapat diketahui dari warna plasma yang berwarna seperti susu, misalnya pada penderita Diabetes Militus. Plasma yang berwarna merah merupakan indikasi adanya hemolisis dari eritrosit seperti penggunaan spuit yang belum kering, pada pengambilan darah atau hemolisis intravascular. Serta untuk mengetahui volume rata-rata eritrosit dan konsentrasi hemoglobin rata-rata di dalam eritrosit. (Dep Kes RI, 1989). c. Metode Pemeriksaan Hematokrit Proses pemisahan darah melalui uji hematokrit dilakukan dengan cara mengambil beberapa mili volume darah baik darah vena ataupun darah kapiler, lalu memasukannya kedalam suatu tabung khusus, dan memutarnya didalam alat centrifuge dalam waktu dan kecepatan tertentu. Untuk pemeriksaan hematokrit darah tidak boleh dibiarkan menggumpal sehingga harus diberi antikoagulan. Setelah tabung tersebut diputar dengan kecepatan dan waktu tertentu, maka eritrosit akan mengendap (Sadikin, M. 2002). Tabung khusus yang di gunakan untuk proses hematokrit disebut tabung Wintrobe. Tabung ini mempunyai skala khusus pula yang di sebut dengan skala hematokrit. Karena menggunakan tabung wintrobe, maka hematokrit dengan cara ini sering di sebut dengan istilah hematokrit metode wintrobe atau metode mikro. 1) Pemeriksaan Hematokrit Secara Manual 16

17 Metode pengukuran hematokrit secara manual dikenal ada 2, yaitu : a) Metode makrohematokrit Pada metode makro, sebanyak 1 ml sampel darah (darah EDTA atau heparin) dimasukkan dalam tabung Wintrobe yang berukuran panjang 110 mm dengan diameter mm dan berskala 0-10 mm. Tabung kemudian disentrifus selama 30 menit dengan kecepatan rpm. Tinggi kolom eritrosit adalah nilai hematokrit yang dinyatakan dalam %. Prinsip : Sampel darah yang di sentrifusdalam waktu tertentu kemudian dibaca volume dari masa erirosit yan telah dipadatkan didasar tabung dan dinyatakan dalam sekian % dari volume semula (volume %) b) Metode mikrohematokrit Pada metode mikro, sampel darah (darah kapiler, darah EDTA, darah heparin atau darah amonium-kalium-oksalat) dimasukkan dalam tabung kapiler yang mempunyai ukuran panjang 75 mm dengan diameter 1 mm. Tabung kapiler yang digunakan ada 2 macam, yaitu yang berisi heparin (bertanda merah) untuk sampel darah kapiler (langsung), dan yang tanpa antikoagulan (bertanda biru) untuk darah EDTA/heparin/amonium-kalium-oksalat. Prosedur pemeriksaannya adalah : sampel darah dimasukkan ke dalam tabung kapiler sampai 2/3 volume tabung. Salah satu ujung tabung ditutup dengan dempul (clay) lalu disentrifus selama 5 menit dengan kecepatan rpm. Tinggi kolom eritrosit 17

18 diukur dengan alat pembaca hematokrit, nilainya dinyatakan dalam vol %. Prinsip : Sejumlah darah dimasukkan kedalam tabung kapiler lalu dilkukan sentrifugasi untuk mendapatkan nilai hematokrit yang diukur menggunakan Ht Reader. Prinsip pengukuran hematokrit cara manual (metode mikro) adalah darah vena dengan menggunakan antikoagulan, kemudian dimasukkan ke dalam tabung kapiler yang salah satu ujungnya ditutup dengan bahan khusus (malam) dan dipusingkan dengan kecepatan tertentu sehingga terjadi pemadatan sel-sel darah merah. Tingginya sel darah merah diukur dengan menggunakan skala hematokrit yang dinyatakan dalam persen terhadap seluruh darah. (Dep Kes RI, 1989). Alat yang dipakai untuk pemeriksaan hematokrit sendiri adalah tabung mikrokapiler, tabung tersebut dibuat khusus untuk mikro hematokrit dengan panjangnya 75 mm dan diameter dalamnya 1,2 sampai 1,5 mm. Ada pula tabung yang sudah dilapisi heparin, tabung tersebut dapat dipakai untuk darah kapiler dan terdapat juga tabung kapiler tanpa heparin yang dipergunakan untuk darah oxalat atau darah EDTA dari vena. (Gandasoebrata, 2007). Cara mikro ini cepat dan mudah tetapi daya sentrifugal harus dikontrol dan posisi tabung saat membaca dengan skala harus tepat. Metode tersebut memungkinkan untuk memperkirakan volume lekosit dan trombosit yang menyusun buffy coat diantara eritrosit dan plasma, 18

19 plasma harus pula diamati terhadap adannya ikterus atau hemolisis. (Frances K. Widmann, 1989). Keuntungan pengukuran hematokrit dengan metoda mikro antara lain volume sampel darah yang digunakan sedikit, waktu pemusingan untuk mendapatkan endapan sel darah merah singkat sehingga sesuai untuk kepentingan rutin, serta dapat digunakan sampel darah kapiler yang lebih mudah. 2) Pemeriksaan Hematokrit Secara Automatik Pemeriksaan hematokrit secara automatik menggunakan alat analisis sel darah automatik. BC-2600 Auto Hematology Analyzer merupakan suatu penganalisis hematologi multi parameter untuk pemeriksaan kuantitatif maksimum 19 parameter dan 3 histogram yang meliputi WBC (White Blood Cell), Lymphocyte, Mid sized cell, Granulocyte, Limphocyte persentage, Mid-sized cell persentage, granulocyte persentage, RBC (Red Blood Cell), HGB (Hemoglobin), MCV (Mean Cospuscular Volume), MCH (Mean Cospuscular Hemoglobin), MCHC (Mean Cospuscular Hemoglobin Concentration), RDW-CV (Red Blood Cell Distribution Width Coeffcient of Variation), RDW-SD (Red Blood Cell Distribution Width Standard Deviation), HCT (Hematocrit), PLT (Platelet), MPV (Mean Platelet Volume), PDW (Platelet Distribution Width), PCT (Plateletcrit), WBC Histogram (White Blood Cell Histogram), RBC Histogram (Red Blood Cell Histogram), PLT Histogram (Platelet Histogram). Pengukuran RBC (Red Blood Cell) dihitung dan diukur dengan metode impedansi, metode ini berdasarkan pada pengukuran perubahan daya tahan 19

20 elektris yang di produksi sebuah partikel, dalam hal ini partikelnya adalah sel darah. Setiap partikel yang melewati celah akan mengalami perubahan pada daya tahannya diantara elektroda-elekrtoda yang di produksi. Perubahan yang dihasilkan dapat diukur getaran elektrisnya. Setiap getaran diperkuat dan di bandingkan dengan saluran voltasi yang diterima oleh getaran dengan amplitude tertentu. Jika getaran yang di bandingkan melebihi range terendah RBC, maka dihitung sebagai RBC. Analyzer dalam penghitungan RBC menggunakan unit penghitungan volumetrik yang terdiri dari tabung pengukuran dengan 2 sensor optik yang terpasang diatas tabung yaitu sensor atas dan sensor bawah, penghitungan dimulai saat cairan melewati miniskus sensor yang tinggi dan berhenti ketika mencapai sensor yang rendah, waktu yang dibutuhkan untuk melewati sensor tinggi ke sensor rendah disebut jumlah waktu RBC. Ini diukur dalam detik, jumlah waktu yang terukur dibandingkan dengan referensi jumlah waktu. Jika hasil waktunya kurang dari atau lebih dari 2 detik maka analyzer akan melaporkan RBC bergelembung atau error. Reagen yang diperlukan dalam pemeriksaan hematokrit cara automatik dengan menggunakan analyzer BC-2600 antara lain diluent sebagai larutan pengencer dan sebagai medium penghantar. BC-2600 adalah suatu penganalisis spesimen yang berisi perangkat keras untuk menganalisis setiap spesimen darah secara keseluruhan serta bagian data yang meliputi komputer, monitor, keyboard, printer. 20

21 Keuntungan pemeriksaan hematokrit secara automatik antara lain : waktu pemeriksaan yang singkat, penggunaan sampel yang sedikit, data hasil pemeriksaan segera diperoleh tetapi harga alat yang mahal. Hasilpemeriksaan bisa menunjukkan 19 parameter pemeriksaan sekaligus, dalam 1 jam dapat melakukan 30 kali pemeriksaan. d. Nilai Rujukan Nilai normal: Pria : 40% - 50 % SI unit : 0,4-0,5 Wanita : 35% - 45% SI unit : ,45 (Kemenkes, 2011) e. Implikasi Klinik: 1) Penurunan nilai Hct merupakan indikator anemia (karena berbagai sebab), reaksi hemolitik, leukemia, sirosis, kehilangan banyak darah dan hipertiroid. Penurunan Hct sebesar 30% menunjukkan pasien mengalami anemia sedang hingga parah. 2) Peningkatan nilai Hct dapat terjadi pada eritrositosis, dehidrasi, kerusakan paru-paru kronik, polisitemia dan syok. 3) Nilai Hct biasanya sebanding dengan jumlah sel darah merah pada ukuran eritrosit normal, kecuali pada kasus anemia makrositik atau mikrositik. 4) Pada pasien anemia karena kekurangan besi (ukuran sel darah merah lebih kecil), nilai Hct akan terukur lebih rendah karena sel mikrositik terkumpul pada volume yang lebih kecil, walaupun jumlah sel darah merah terlihat normal. 21

22 5) Nilai normal Hct adalah sekitar 3 kali nilai hemoglobin. 6) Satu unit darah akan meningkatkan Hct 2% - 4%. f. Faktor Pengganggu 1) Individu yang tinggal pada dataran tinggi memiliki nilai Hct yang tinggi demikian juga Hb dan sel darah merahnya. 2) Normalnya, Hct akan sedikit menurun pada hidremia f siologis pada Kehamilan 3) Nilai Hct normal bervariasi sesuai umur dan jender. Nilai normal untuk bayi lebih tinggi karena bayi baru lahir memiliki banyak sel makrositik. 4) Nilai Hct pada wanita biasanya sedikit lebih rendah dibandingkan laki-laki. 5) Juga terdapat kecenderungan nilai Hct yang lebih rendah pada kelompok umur lebih dari 60 tahun, terkait dengan nilai sel darah merah yang lebih rendah pada kelompok umur ini. 6) Dehidrasi parah karena berbagai sebab meningkatkan nilai Hct. g. Hal yang harus diwaspadai Nilai Hct <20% dapat menyebabkan gagal jantung dan kematian; Hct >60% terkait dengan pembekuan darah spontan. 3. Eritrosit a. Definisi Sel darah merah atau eritrosit merupakan sel yang paling sederhana yang ada di dalam tubuh. Eritrosit tidak 22

23 memiliki nukleus dan merupakan sel terbanyak dalam darah (Komariah, 2009). b. Struktur Eritrosit Sel darah merah normal, berbentuk lempeng bikonkaf dengan diameter kira- kira 7,8 mikrometer dan dengan ketebalan pada bagian yang paling tebal 2,5 mikrometer dan pada bagian tengah 1 mikrometer atau kurang. Volume rata-rata sel darah merah adalah 90 sampai 95 mikrometer kubik. Eritrosit yang berbentuk cakram bikonkaf mempunyai area permukaan yang luas sehingga jumlah oksigen yang terikat dengan Hb dapat lebih banyak. Bentuk bikonkaf juga memungkinkan sel berubah bentuk agar lebih mudah melewati kapiler yang kecil. Sel darah merah merupakan suatu kantung yang dapat diubah menjadi berbagai bentuk. Selanjutnya, karena sel normal mempunyai membran yang sangat kuat untuk menampung banyak bahan material di dalamnya, maka perubahan bentuk tadi tidak akan meregangkan membran secara hebat, dan sebagai akibatnya, tidak akan memecahkan sel, seperti yang akan terjadi pada sel lainnya (Komariah, 2009). c. Fungsi Eritrosit Fungsi utama eritrosit adalah untuk mengangkut oksigen dari paru-paru ke jaringan tubuh dan mengangkut CO2 dari jaringan tubuh ke paru-paru oleh Hb. Oleh karena itu eritrosit sangat diperlukan dalam proses oksigenasi organ tubuh. Selain mengangkut hemoglobin, sel-sel darah merah juga mempunyai fungsi lain. Contohnya, ia mengandung banyak sekali karbonik anhidrase, yang mengkatalisis reaksi antara karbon dioksida dan air, sehingga meningkatkan kecepatan reaksi bolak-balik ini beberapa ribu kali lipat. Cepatnya reaksi ini membuat air dalam darah bereaksi dengan banyak 23

24 sekali karbon dioksida, dan dengan demikian mengangkutnya dari jaringan menuju paru-paru dalam bentuk ion bikarbonat (HCO3-). d. Metabolisme Eritrosit Jika kadar oksigen menurun hormon eritropoetin akan menstimulasi produksi eritrosit. Eritrosit, dengan umur 120 hari, adalah sel utama yang dilepaskan dalam sirkulasi. Bila kebutuhan eritrosit tinggi, sel yang belum dewasa akan dilepaskan kedalam sirkulasi. Pada akhir masa hidupnya, eritrosit yang lebih tua keluar dari sirkulasi melalui fagositosis di limfa, hati dan sumsum tulang (sistem retikuloendotelial). Proses eritropoiesis pada sumsum tulang melalui beberapa tahap, yaitu: 1.Hemocytoblast (prekursor dari seluruh sel darah); 2. Prorubrisit (sintesis Hb); 3.Rubrisit (inti menyusut, sintesa Hb meningkat); 4. Metarubrisit (disintegrasi inti, sintesa Hb meningkat; 5. Retikulosit (inti diabsorbsi); 6. Eritrosit (sel dewasa tanpa inti). e. Pemeriksaan Eritrosit Dengan mengetahui keadaan eritrosit, secara tidak langsung dapat diketahui juga keadaan organ tubuh seseorang (Brown, 1993; Hoffbrand, Petit; 1996; Gaspard, 1998; Uthman, 2000; Perkins, 2003). Beberapa pemeriksaan yang dapat menggambarkan parameter penting dari fungsi dan struktur eritrosit di dalam tubuh antara lain hitung eritrosit, hemoglobin dan hematokrit. Hitung eritrosit atau red blood cell count (RBC) adalah menghitung jumlah total eritrosit dalam darah.. Hemoglobin (Hb) adalah protein dalam eritrosit yang 24

25 bertugas mengangkut oksigen. Hematokrit (Ht) adalah jumlah eritrosit dalam 100 ml darah (Perkins, 2003). Ketiga parameter di atas biasa digunakan untuk menegakkan adanya anemia (Glader, 2003). Anemia secara fungsional didefinisikan sebagai penurunan massa eritrosit dengan akibat oksigenasi jaringan tidak dapat terpenuhi (Evatt et al, 1992; Gaspard, 1998; Glader, 2003; Perkins, 2003; Syafrizal Syafei, 2004). Secara praktis ada 3 parameter untuk menegakkan adanya anemia yaitu: kadar hemoglobin, hematokrit dan jumlah eritrosit. Dari perhitungan ketiga parameter tersebut dapat diperoleh nilai rata-rata eritrosit. Nilai rata-rata eritrosit terdiri dari Mean Corpuscular Volume (MCV), Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH) dan Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC) (Evatt et al, 1992; Desai, Isa-Pratt, 2000; Davey & Elghetany, 2001; Glader, 2003; Perkins, 2003; Rachmawati dkk., 2003). f. Nilai Rujukan Nilai normal: Pria: 4,4-5,6 x 10 6 sel/mm3 SI unit: 4,4-5,6 x sel/l Wanita: 3,8-5,0 x 10 6 sel/mm3 SI unit: 3,5-5,0 x sel/l g. Implikasi klinik : 1) Secara umum nilai Hb dan Hct digunakan untuk memantau derajat anemia, serta respon terhadap terapi anemia 2) Jumlah sel darah merah menurun pada pasien anemia leukemia, penurunan fungsi ginjal, talasemin, hemolisis dan lupus eritematosus sistemik. Dapat juga terjadi 25

26 karena obat (drug induced anemia). Misalnya: sitostatika, antiretroviral. 3) Sel darah merah meningkat pada polisitemia vera, polisitemia sekunder, diare/dehidrasi, olahraga berat, luka bakar, orang yang tinggal di dataran tinggi. 4. Leukosit a. Definisi Sel darah putih, leukosit (bahasa Inggris: white blood cell, WBC, leukocyte) adalah sel yang membentuk komponen darah. Sel darah putih ini berfungsi untuk membantu tubuh melawan berbagai penyakit infeksi sebagai bagian dari sistem kekebalan tubuh. Sel darah putih tidak berwarna, memiliki inti, dapat bergerak secara amoebeid, dan dapat menembus dinding kapiler/diapedesis. Dalam keadaan normalnya terkandung 4x10 9 hingga 11x10 9 sel darah putih di dalam seliter darah manusia dewasa yang sehat - sekitar sel per tetes. Pada setiap milimeter kubil darah terdapat 6000 sampai 10000(rata-rata 8000) sel darah putih. Pada kasus leukemia, jumlahnya dapat meningkat hingga sel per tetes. b. Fungsi Leukosit Fungsi utama leukosit adalah melawan infeksi, melindungi tubuh dengan memfagosit organisme asing dan memproduksi atau mengangkut/mendistribusikan antibodi. c. Metabolisme Leukosit Di dalam tubuh, leukosit tidak berasosiasi secara ketat dengan organ atau jaringan tertentu, mereka bekerja secara independen seperti organisme sel tunggal. Leukosit mampu bergerak secara bebas dan 26

27 berinteraksi dan menangkap serpihan seluler, partikel asing, atau mikroorganisme penyusup. Selain itu, leukosit tidak bisa membelah diri atau bereproduksi dengan cara mereka sendiri, melainkan mereka adalah produk dari sel punca hematopoietic pluripotent yang ada pada sumsum tulang. Bentuk dan sifat leukosit berlainan dengan sifat eritrosit apabila kita lihat di bawah mikroskop maka akan terlihat bentuknya yang dapat berubah-ubah dan dapat bergerak dengan perantaraan kaki palsu (pseudopodia), mempunyai bermacam- macam inti sel sehingga ia dapat dibedakan menurut inti selnya, warnanya bening (tidak berwarna). Leukosit terbentuk di sumsum tulang (myelogenous), disimpan dalam jaringan limfatikus (limfa, timus, dan tonsil) dan diangkut oleh darah ke organ dan jaringan. Umur leukosit adalah hari. Vitamin, asam folat dan asam amino dibutuhkan dalam pembentukan leukosit. Sistem endokrin mengatur produksi, penyimpanan dan pelepasan leukosit. Lekosit berasal dari sel bakal (stem cell) dan kemudian mengalami diferensiasi (mengalami pematangan). Lekosit di angkut oleh darah ke berbagai jaringan tubuh tempat sel-sel tersebut melakukan fungsi fisiologiknya. Perkembangan granulosit dimulai dengan myeloblast (sel yang belum dewasa di sumsum tulang), kemudian berkembang menjadi promyelosit, myelosit (ditemukan di sumsum tulang), metamyelosit dan bands (neutrof l pada tahap awal kedewasaan), dan akhirnya, neutrof l. Perkembangan limfosit dimulai dengan limfoblast (belum dewasa) kemudian berkembang menjadi prolimfoblast dan akhirnya menjadi limfosit (sel dewasa). Perkembangan monosit dimulai dengan monoblast (belum dewasa) kemudian tumbuh menjadi promonosit dan selanjutnya menjadi monosit (sel dewasa). 27

28 d. Macam-macam Leukosit Ada dua tipe utama sel darah putih: Granulosit: neutrofl, eosinofl dan basofl; Agranulosit: limfosit dan monosit 1) Limfosit Limfosit merupakan sel utama pada sistem getah bening yang berbentuk sferis, berukuran yang relatif lebih kecil daripada makrofag dan neutrofil. Selain itu, limfosit bergaris tengah 6-8 µm, 20-30% dari leukosit darah, memiliki inti yang relatif besar, bulat sedikit cekung pada satu sisi. Sitoplasmanya sedikit dan kandungan basofilik dan azurofiliknya sedikit. Limfosit-limfosit dapat digolongkan berdasarkan asal, struktur halus, surface markers yang berkaitan dengan sifat imunologisnya, siklus hidup dan fungsi. Limfosit dibagi ke dalam 2 kelompok utama yakni Limfosit B dan Limfosit T. Limfosit B berasal dari sel stem di dalam sumsum tulang dan tumbuh menjadi sel plasma, yang menghasilkan antibody sedangkan Limfosit T terbentuk jika sel stem dari sumsum tulang pindah ke kelenjar thymus, dimana mereka mengalami pembelahan dan pematangan. Di dalam kelenjar thymus, limfosit T belajar membedakan mana benda asing dan mana bukan benda asing. Limfosit T dewasa meninggalkan kelenjar thymus dan masuk ke dalam pembuluh getah bening dan berfungsi sebagai bagian dari sistem pengawasan kekebalan. 2) Monosit Monosit merupakan sel leukosit yang besar 3-8% dari jumlah leukosit normal, diameter 9-10 um tapi pada sediaan darah kering diameter mencapai 20 µm atau lebih. Inti biasanya eksentris, adanya lekukan yang dalam berbentuk tapal kuda. Sitoplasma relatif banyak dengan pulasan wrigh berupa bim abu-abu pada sajian kering. Granula azurofil, merupakan lisosom primer, lebih banyak tapi lebih kecil. 28

29 Ditemui retikulim endoplasma sedikit. Juga ribosom, pliribosom sedikit, banyak mitokondria. Aparatus Golgi berkembang dengan baik, ditemukan mikrofilamen dan mikrotubulus pada daerah identasi inti. Monosit terdapat dalam darah, jaringan ikat dan rongga tubuh. Monosit tergolong fagositik mononuclear (system retikuloendotel) dan mempunyai tempat-tempat reseptor pada permukaan membrannya. Untuk imunoglobulin dan komplemen. 3) Eosinofil Eosinofil (eosinophil, acidophil) adalah sel darah putih dari kategori granulosit yang berperan dalam sistem kekebalan dengan melawan parasit multiselular dan beberap infeksi pada makhluk vertebrata. Bersama-sama dengan sel biang, eosinofil juga ikut mengendalikan mekanisme alergi. Eosinofil terbentuk pada proses haematopoiesis yang terjadi pada sumsum tulang sebelum bermigrasi ke dalam sirkulasi darah. Eosinofil mengandung sejumlah zat kimiawi antara lain histamin, eosinofil peroksidase, ribonuklease, deoksiribonuklease, lipase, [plasminogen] dan beberapa asam amino yang dirilis melalui proses degranulasi setelah eosinofil teraktivasi. Zat-zat ini bersifat toksin terhadap parasit dan jaringan tubuh. Eosinofil merupakan sel substrat peradangan dalam reaksi alergi. Aktivasi dan pelepasan racun oleh eosinofil diatur dengan ketat untuk mencegah penghancuran jaringan yang tidak diperlukan. Individu normal mempunyai rasio eosinofil sekitar 1 hingga 6% terhadap sel darah putih dengan ukuran sekitar mikrometer. Eosinofil dapat ditemukan pada medulla oblongata dan sambungan antara korteks otak besar dan timus, dan di dalam saluran pencernaan, ovarium, uterus, limpa dan lymph nodes. Tetapi tidak dijumpai di paru, kulit, esofagus dan organ dalam lainnya, pada kondisi normal, keberadaan eosinofil pada area ini sering merupakan pertanda 29

30 adanya suatu penyakit. Eosinofil dapat bertahan dalam sirkulasi darah selama 8-12 jam, dan bertahan lebih lama sekitar 8-12 hari di dalam jaringan apabila tidak terdapat stimulasi 4) Neutrofil Neutrofil (neutrophil, polymorphonuclear neutrophilic leukocyte, PMN) adalah bagian sel darah putih dari kelompok granulosit. Bersama dengan dua sel granulosit lain: eosinofil dan basofil yang mempunyai granula pada sitoplasma, disebut juga polymorphonuclear karena bentuk inti sel mereka yang aneh. Granula neutrofil berwarna merah kebiruan dengan 3 inti sel. Neutrofil berhubungan dengan pertahanan tubuh terhadap infeksi bakteri dan proses peradangan kecil lainnya, serta menjadi sel yang pertama hadir ketika terjadi infeksi di suatu tempat. Dengan sifat fagositik yang mirip dengan makrofaga, neutrofil menyerang patogen dengan serangan respiratori menggunakan berbagai macam substansi beracun yang mengandung bahan pengoksidasi kuat, termasuk hidrogen peroksida, oksigen radikal bebas, dan hipoklorit. Rasio sel darah putih dari neutrofil umumnya mencapai 50-60%. Sumsum tulang normal orang dewasa memproduksi setidaknya 100 miliar neutrofil sehari, dan meningkat menjadi sepuluh kali lipatnya juga terjadi inflamasi akut. Setelah lepas dari sumsum tulang, neutrofil akan mengalami 6 tahap morfologis: mielocit, metamielocit, neutrofil non segmen (band), neutrofil segmen.neutrofil segmen merupakan sel aktif dengan kapasitas penuh, yang mengandung granula sitoplasmik (primer atau azurofil, sekunder, atau spesifik) dan inti sel berongga yang kaya kromatin. Sel neutrofil yang rusak terlihat sebagai nanah. 5) Basofil Basofil adalah granulosit dengan populasi paling minim, yaitu sekitar 0,01 0,3% dari sirkulasi sel darah putih. Basofil mengandung banyak granula sitoplasmik dengan dua lobus. Seperti granulosit lain, 30

31 basofil dapat tertarik keluar menuju jaringan tubuh dalam kondisi tertentu. Saat teraktivasi, basofil mengeluarkan antara lain histamin, heparin, kondroitin, elastase dan lisofosfolipase, leukotriena dan beberapa macam sitokina. Basofil memainkan peran dalam reaksi alergi (seperti asma). e. Pemeriksaan Leukosit Indikasi di lakukannya pemeriksaan hitung lekosit adalah tes rutin sebagai bagian dari tes darah lengkap (full blood count), untuk menentukan lekositosis atau leukopenia, dan pemantauan penyakit atau pengobatan. Hitung lekosit menyatakan jumlah lekosit perliter darah (lesysteme international d Unites = SI Unit) atau per millimeter kubik atau mikroliter (unit konvensional). Lekosit atau sel darah putih adalah sel yang bulat berinti dengan ukuran 9 20 µm. Spesimen yang digunakan pada pemeriksaan hitung jumlah lekosit, yaitu: 1) Darah kapiler atau darah vena EDTA; 2) Tidak ada pembatasan asupan makanan dan minuman pada penderita; 3) Darah tidak boleh diambil pada lengan yang terpasang jalur intra-vena. Metode pemeriksaan hitung lekosit ada dua, yaitu cara manual dan cara elektronik/otomik. 1) Cara Manual Cara manual dilakukan dengan menghitung lekosit secara visual dengan mikroskop. Darah terlebih dahulu diencerkan dengan larutan asam lemah dan perhitungan dilakukan menggunakan bilik hitung (counting chamber). Kesalahan cara ini adalah sebesar 15%. Prinsip dasar pemeriksaan manual, yaitu: darah diencerkan dengan asam lemah, sel-sel selain lekosit akan dilisiskan dan darah menjadi encer sehingga lekosit lebih mudah dihitung. Jumlah lekosit per 31

32 mikroliter darah ditentukan dengan menghitung sel-sel di bawah mikroskop dan kemudian mengalikannya dengan menggunakan faktor pengali tertentu. 2) Cara Elektronik Cara elektronik dewasa ini telah banyak dilakukan dengan menggunakan sebuah mesin penghitung sel darah (hematology analyzer). Prinsip dasar digunakan yaitu impedansi (resistensi elektrik) dan pembauran cahaya (light scattering/optical scatter). Prinsip impedansi didasarkan pada deteksi dan pengukuran perubahan hambatan listrik yang dihasilkan oleh sel-sel darah saat mereka melintasi sebuah flow cell yang dilalui cahaya. Hasil hitung lekosit dengan analyzer ditampilkan pada lembar hasil sebagai WBC (White Blood Cell). Penggunaan cara elektronik dengan alat penghitung sel darah lebih menguntungkan karena mampu menghitung sel dalam jumlah yang jauh lebih besar, menghemat waktu dan tenaga serta hasil cepat diterima oleh klinisi untuk kepentingan terapi pada pasien. Namun harga tersebut mahal, prosedur pemakaian dan pemeliharaannya harus dilakukan dengan sangat cermat. Disamping itu upaya penjaminan mutu juga harus selalu dilakukan. f. Nilai Rujukan Nilai normal : /mm 3 SI : 3,2 10,0 x 10 9 /L Neutrofil Nilai normal: Segment : 36% - 73% SI unit : 0,36 0,73 Jumlah absolute /mm 3 Bands : 0% - 12% SI unit : 0,00 0,12 Jumlah absolute /mm 3 Eosinofil Nilai normal : 0% - 6% Jumlah absolute 0-500/mm 3 32

33 Basofil Nilai normal : 0% - 2% Jumlah absolute 0-150/mm 3 Monosit Nilai normal : 0%-11% Jumlah absolute /mm 3 Limfosit Nilai normal : 15% - 45% Jumlah absolute /mm 3 (Kemenkes, 2011) g. Implikasi klinik 1) Nilai krisis leukositosis: /mm 3. 2) Lekositosis hingga /mm mengindikasikan gangguan di luar sumsum tulang (bone marrow). Nilai leukosit yang sangat tinggi (di atas /mm 3 ) dapat disebabkan oleh leukemia. Penderita kanker post-operasi (setelah menjalani operasi) menunjukkan pula peningkatan leukosit walaupun tidak dapat dikatakan infeksi. 3) Biasanya terjadi akibat peningkatan 1 tipe saja (neutrof l). Bila tidak ditemukan anemia dapat digunakan untuk membedakan antara infeksi dengan leukemia 4) Waspada terhadap kemungkinan leukositosis akibat pemberian obat. 5) Perdarahan, trauma, obat (mis: merkuri, epinefrin, kortikosteroid), nekrosis, toksin, leukemia dan keganasan adalah penyebab lain leukositosis. 6) Makanan, olahraga, emosi, menstruasi, stres, mandi air dingin dapat meningkatkan jumlah sel darah putih 7) Leukopenia, adalah penurunan jumlah leukosit <4000/mm 3. Penyebab leukopenia antara lain: 33

34 a) Infeksi virus, hiperplenism, leukemia. b) obat (antimetabolit, antibiotik, antikonvulsan, kemoterapi) c) Anemia aplastik/pernisiosa d) Multipel mieloma 8) Prosedur pewarnaan: Reaksi netral untuk netrof l; Pewarnaan asam untuk eosinof l; Pewarnaan basa untuk basof l 9) Konsentrasi leukosit mengikuti ritme harian, pada pagi hari jumlahnya sedikit, jumlah tertinggi adalah pada sore hari 10) Umur, konsentrasi leukosit normal pada bayi adalah (6 bulan-1 tahun) /mm 3 dan terus meningkat sampai umur 21 tahun 11) Manajemen neutropenia disesuaikan dengan penyebab rendahnya nilai leukosit 5. Trombosit a. Definisi Trombosit (keping-keping darah) adalah fragmen sitoplasmik tanpa inti berdiameter 2-4 mm yang berasal dari megakariosit. Trombosit adalah elemen terkecil dalam pembuluh darah. Trombosit diaktivasi setelah kontak dengan permukaan dinding endotelia. Trombosit terbentuk dalam sumsum tulang. Masa hidup trombosit sekitar 7,5 hari. Sebesar 2/3 dari seluruh trombosit terdapat disirkulasi dan 1/3 nya terdapat di limfa. b. Fungsi Trombosit 34

35 Trombosit berperan penting dalam mengontrol perdarahan. Apabila terjadi cedera vaskuler, trombosit mengumpul pada tempat cedera tersebut. Fungsi utama trombosit adalah pembentuk sumbatan mekanis selama respon haemostati normal terhadap luka vaskular. Tanpa trombosit, dapat terjadi kebocoran darah spontan melalui pembuluh darah kecil. Trombosit memiliki banyak fungsi, khususnya dalam mekanisme hemostasis. Berikut fungsi dari trombosit (Hoffbrand et al, 2005): mencegah kebocoran darah spontan pada pembuluh darah kecil dengan cara adhesi, sekresi, agregasi, dan fusi (hemostasis). Cara kerja trombosit dalam hemostasis dapat dijelaskan sebagai berikut : Adanya pembuluh darah yang mengalami trauma maka akan menyebabkan sel endotelnya rusak dan terpaparnya jaringan ikat kolagen (subendotel). Secara alamiah, pembuluh darah yang mengalami trauma akan mengerut (vasokontriksi). Kemudian trombosit melekat pada jaringan ikat subendotel yang terbuka atas peranan faktor von Willebrand dan reseptor glikoprotein Ib/IX (proses adhesi). Setelah itu terjadilah pelepasan isi granula trombosit mencakup ADP, serotonin, tromboksan A2, heparin, fbrinogen, lisosom (degranulasi). Trombosit membengkak dan melekat satu sama lain atas bantuan ADP dan tromboksan A2 (proses agregasi). Kemudian dilanjutkan pembentukan kompleks protein pembekuan (prokoagulan). Sampai tahap ini terbentuklah hemostasis yang permanen. Pada suatu saat bekuan ini akan dilisiskan jika jaringan yang 35

36 rusak telah mengalami perbaikan oleh jaringan yang baru. (Candrasoma,2005; Guyton,1997; Hoffbrand et al, 2005). c. Struktur Trombosit Trombosit adalah elemen terkecil dalam pembuluh darah dengan diameter 2-4 µm. Trombosit memiliki zona luar yang jernih dan zona dalam yang berisi organel-organel sitoplasmik. Permukaan diselubungi reseptor glikoprotein yang digunakan untuk reaksi adhesi & agregasi yang mengawali pembentukan sumbat hemostasis. Membran plasma dilapisi fosfolipid yang dapat mengalami invaginasi membentuk sistem kanalikuler. Membran plasma ini memberikan permukaan reaktif luas sehingga protein koagulasi dapat diabsorpsi secara selektif. Area submembran, suatu mikrofilamen pembentuk sistem skeleton, yaitu protein kontraktil yang bersifat lentur dan berubah bentuk. Sitoplasma mengandung beberapa granula, yaitu: granula densa, granula a, lisosome yang berperan selama reaksi pelepasan yang kemudian isi granula disekresikan melalui sistem kanalikuler. Energi yang diperoleh trombosit untuk kelangsungan hidupnya berasal dari fosforilasi oksidatif (dalam mitokondria) dan glikolisis anaerob. d. Metabolisme Trombosit Trombosit diaktivasi setelah kontak dengan permukaan dinding endotelia. Trombosit terbentuk dalam sumsum tulang. Masa hidup trombosit sekitar 7,5 hari. Sebesar 2/3 dari seluruh trombosit terdapat disirkulasi dan 1/3 nya terdapat di limfa. Trombosit dibentuk oleh fragmentasi sel raksasa sumsum tulang, yang disebut megakariosit. Megakariosit ini melakukan reflikasi inti endomitotiknya kemudian volume sitoplasma membesar seiring dengan penambahan lobus inti menjadi 36

37 kelipatannya, kemudian sitoplasma menjadi granula dan trombosit dilepaskan dalam bentuk platelet/keping-keping. Enzim pengatur utama produksi trombosit adalah trombopoetin yang dihasilkan di hati dan ginjal, dengan reseptor C-MPL serta suatu reseptor lain, yaitu interleukin- 11. Trombosit berperan penting dalam hemopoesis, penghentian perdarahan dari cedera pembuluh darah. Trombosit atau platelet sangat penting untuk menjaga hemostasis tubuh. Adanya abnormalitas pada vaskuler, trombosit, koagulasi, atau fbrinolisis akan menggangu hemostasis sistem vaskuler yang mengakibatkan perdarahan abnormal/gangguan perdarahan (Sheerwood, 2001). Produksi trombosit diatur oleh trombopoetin (Brunner & Suddarth, 2002). Produksi trombosit mengikuti pembentukan mikrovesikulus dalam sitoplasma sel yang bersatu (koalesensi) membentuk membrane batas pemisah (demarkasi) trombosit. Produksi trombosit berada dibawah kontrol zat humoral yang dikenal sebagai trombopoietin. e. Pembekuan darah Darah yang sudah tersimpan lebih dari 24 jam tidak lagi mengandung trombosit yang masih berfungsi atau faktor koagulan V dan VIII. Reaksi trombosit berupa adhesi, sekresi, agregasi, dan fusi serta aktivitas prokoagulannya sangat penting untuk fungsinya. (Brunner & Suddarth, 2002). Setelah terjadi adhesi trombosit, selanjutnya akan dilepas ADP. Proses ini bersifat reversibel, yang terlihat sebagai gelombang pertama pada tes agregasi trombosit. 37

38 Bila konsentrasi ADP makin meningkat, terjadilah agregasi trombosit. Selain ADP, juga dilepas serotonin, yang menyebabkan vasokonstriksi, sehingga memberi kesempatan untuk menyiapkan pembentukan sumbat hemostatik primer, yang terdiri atas trombosit dan fibrin. Pada kondisi dimana kadar ADP mencapai titik kritis, terjadilah pengaktifan membran fosfolipid (PF3), yang bersifat ireversibel dan tampak sebagai gelombang kedua dalam grafik tes agregasi trombosit. Membran fosfolipid ini memfasilitasi pembentukan kompleks protein koagulasi yang terjadi secara berurutan. Gambar 2.2. Fungsi Trombosit f. Pemeriksaan Trombosit Beberapa uji laboratorium yang digunakan untuk menilai kualitas trombosit adalah agregasi trombosit, retensi trombosit, retraksi bekuan, dan 38