METODOLOGI. Waktu dan Tempat

Transkripsi

1 17 METODOLOGI Waktu dan Tempat Seluruh tahap penelitian dilakukan di perusahaan mulai bulan Pebruari 2011 hingga Mei Analisa kimia dan mikrobologi dilakukan di Laboratorium perusahaan, dan Laboratorium Saraswanti Indogenetech, Bogor. Bahan dan Alat Bahan yang akan digunakan adalah produk nata de coco yang dikemas dalam plastik fleksibel polietilen-nilon. Karakteristik produk nata de coco yang disajikan pada Tabel 4. Tabel 4. Karakteristik produk nata de coco Parameter Nilai Ukuran Potongan Nata (mm) 15 x 15 x Berat Bersih (g) 2000 Berat Tuntas (g) 1500 ph Brix 14 ( light syrup) Flavour Tanpa Flavour Pengawet Tanpa Pengawet Jenis Kemasan Plastik Poietilen dilapis Nilon Ukuran Kemasan (mm) 320 x 230 x 0.16 Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari alat yang digunakan untuk memproduksi nata de coco seperti tangki perebusan, tangki pencampuran, mesin pengisian, mesin sealer dan bak konveyor pasteurisasi (pasteurizer). Alat ukur yang digunakan adalah termokopel/termometer, stop-watch, ph meter, dan refraktometer. Alat analisis yang digunakan meliputi alat untuk analisis mikrobiologi seperti autoklaf, pipet mikro, cawan petri, dan oven.

2 Rancangan Penelitian Penelitian dirancang dalam tiga tahap. Tahap pertama bertujuan mengidentifikasi mikroba target dan menentukan nilai pasteurisasi standar. Tahap kedua untuk mengukur distribusi panas dan pengukuran penetrasi panas. Kondisi yang diukur termasuk mengukur kondisi sebelum penahanan (holding) yang meliputi suhu awal setelah pengemasan, mengukur kondisi penahanan meliputi waktu penahanan dan perubahan suhu selama penahanan. Selanjutnya kondisi yang diukur selama pasteurisasi meliputi waktu pasteurisasi dan perubahan suhu selama pasteurisasi yang diukur setiap menit. Tahap ketiga adalah menentukan kecukupan proses pasteurisasi berdasarkan data penetrasi panas. Data yang diperoleh dari pengukuran suhu selama penahanan dan pasteurisasi dijadikan data untuk menghitung nilai pasteurisasi (nilai P). Nilai pasteurisasi yang diperoleh dijadikan bahan evaluasi kecukupan proses pasteurisasi yang dilakukan. Tahap I Penentuan Nilai Pasteurisasi Standar Penentuan nilai pasterisasi standar dilakukan dalam dua tahapan, yaitu (1) identifikasi mikroba target dan (2) penentuan nilai pasteurisasi standar. Identifikasi mikroba target dilakukan dengan cara menganalisis cemaran mikroba yaitu angka lempeng total, kapang, khamir dan koliform. Analisis dilakukan untuk contoh nata de coco sebelum proses (potongan nata de coco ketika perendaman/over flow ), nata de coco ketika proses yang terdiri dari (1) Nata de coco sebelum perebusan II (perebusan dengan asam sitrat), (2) Produk nata de coco setengah jadi (setelah pencampuran sirup dan penutupan/sealing, sebelum dipasteurisasi) dan nata de coco setelah proses (produk nata de coco). Data-data identifikasi morfologis mikroba juga dikumpulkan sebagai dasar penentuan jenis mikroba yang terdapat pada nata de coco. Nilai D pada suhu standar dan nilai Z mikroba patogen/merusak produk yang berpotensi/teridentifikasi dalam produk dikumpulkan dari studi literatur. Berdasarkan data yang terkumpul ditentukan mikroba yang menjadi target proses pasteurisasi dan menghitung nilai pasteurisasinya. Studi literatur juga untuk 18

3 19 menentukan mikroba lain yang tahan panas pada lingkungan ph sebagai antisipasi permintaan produk pada karakteristik ph tersebut. Mikroba yang dipilih adalah mikroba pembusuk dan mikroba patogen yang berpotensi tumbuh di dalam nata de coco. Penentuan nilai pasteurisasi standar dilakukan dengan menentukan nilai D pada suhu referensi mikroba target dan mengalikan nilai D tersebut dengan siklus D yang dibutuhkan, dalam hal ini menggunakan konsep 6D, 3D dan 2D (Fellow 2000, Holdsworth 1997 dan Silva dan Gibbs 2001). Nilai P standar (Po) adalah hasil kali nilai D dengan siklus yang dibutuhkan pada suhu referensinya. Nilai D yang digunakan akan dihitung sebagai nilai D 80 (Shapton 1971 didalam Holdsworth 1997) untuk menyeragamkan dan memudahkan evaluasi. Nilai D 80 dihitung dengan persamaan: D 80 = Ds.10 (Ts-80)/z (7) Tahap 2 Pengukuran Distribusi Panas dan Penetrasi Panas Pengukuran Distribusi Panas Pengukuran distribusi panas dan penetrasi panas dilakukan pada bak konveyor pasteurisasi. Alat ini merupakan bak berisi air yang dilengkapi dengan wiremesh konveyor yang berjalan dengan tarikan motor. Bak konveyor pasteurisasi terdiri dari dua bagian, yaitu (1) bagian pasteurisasi dan (2) bagian pendinginan. Wiremesh konveyor untuk kedua bagian ini terpisah dan ditarik oleh motor yang berbeda, sehingga kecepatan konveyor yang juga merupakan waktu pasteurisasi dan waktu pendinginan dapat diset berbeda. Kecepatan konveyor yang menjadi dasar penyetelan waktu pasteurisasi dan pendinginan diatur dengan menyetel kecepatan putaran motor. Untuk 20 menit pasteurisasi kecepatan konveyor yang dibutuhkan adalah 184 detik untuk 1 meter panjang konveyor. Pengaturan suhu bak pasteurisasi dilakukan secara manual dengan membuka dan menutup kran pipa uap. Untuk pemanasan awal, dilakukan selama satu jam dengan tekanan uap minimal 2 bar. Pada kondisi ini suhu yang dikehendaki telah tercapai ditandai dengan tidak berubahnya suhu media secara signifikan (stabil). Setelah suhu stabil kran uap diatur agar uap yang masuk cukup untuk memper-

4 tahankan suhu yang dikehendaki. Pengawasan suhu dilakukan dengan ditempatkannya termokopel yang dilengkapi dengan tampilan suhu dan pengukuran berkala oleh operator. Untuk penelitian ini suhu yang dikehendaki adalah suhu maksimal, yaitu 100 o C. Proses pasteurisasi dilakukan dengan merendam produk di dalam air panas. Untuk penelitian ini pengamatan proses pasteurisasi diawali dengan pemeriksaan suhu media (air panas) di bak konveyor pasteurisasi. Walaupun data-data perbedaan suhu media di bak konveyor pasteurisasi telah diketahui, pengamatan suhu media di beberapa posisi bak konveyor, dilakukan ulang untuk memastikan tidak ada perubahan. Pengamatan suhu media atas beberapa posisi di bak konveyor pasteurisasi dimaksudkan untuk mengetahui situasi terburuk dalam hal ini suhu terendah yang terjadi pada bak konveyor pasteurisasi. Pengamatan suhu media pada beberapa posisi di bak konveyor pasteurisasi meliputi pemeriksaan pada 9 titik, yaitu 3 titik di sisi kiri pasteurisasi, 3 titik di bagian tengah pasteurisasi dan 3 titik di sisi kanan. Dari pengalaman terdahulu 9 titik ini cukup mewakili penyebaran suhu di area pasteurisasi (Gambar 3). Pengukuran distribusi panas media pada bak pasteurisasi dilakukan dengan menggunakan termokopel sebelum sampel produk penetrasi panas dimasukkan kedalam bak pasteurizer dalam keadaan berisi produk. Pengukuran dilakukan di sembilan titik posisi bak pasteurisasi, yaitu di titik A, B dan C dilakukan pengukuran secara bersamaan, kemudian titik D, E dan F, selanjutnya titik G, H dan I. Pengukuran distribusi panas dilakukan sebanyak 10 kali pengamatan disetiap sebelum pengamatan penetrasi panas dilakukan. Data yang diperoleh dari pengamatan suhu media pada beberapa posisi bak konveyor pasteurisasi ditabulasi antara titik lokasi dan nilai suhunya kemudian titik yang memiliki suhu terendah digunakan sebagai titik pengambilan sampel ketika penetrasi panas Pengukuran Penetrasi Panas Produk yang akan diukur penetrasi panasnya disiapkan sesuai dengan alur proses yang biasa dilakukan dan dengan karakteristik produk; bentuk potongan 20

5 21 nata de coco berbentuk kubus berukuran 1.5 cm, berat bersih 2000 gram, yang merupakan produk terberat yang diproduksi dengan rasio nata de coco terhadap berat bersih 75% (berat tuntas 1500 gram), ph dan derajat kemanisan 14 o brix (lightsyrup). I C F I II III B IV E IV H III A D G I I Gambar 3 Posisi pengamatan titik distribusi panas media (air panas) pada bak konveyor pasteurisasi. Bak pasteurisasi (I), sumber panas masuk (II), wiremesh konveyor (III), media air panas (IV), titik pengamatan distribusi panas media air panas (A, B, C, D, E, F, G, H, I) Berat bersih dan berat tuntas dirancang tetap untuk menghindari terjadinya perbedaan penetrasi panas akibat perubahan volume/berat. Pengaturan berat bersih dan berat tuntas dilakukan dengan cara menimbang produk selama pengisian. Penimbangan dilakukan ketika mengisi nata de coco dan ketika mengisi media (sirup), sehingga berat total produk untuk semua contoh uji adalah sama. Hal yang penting dari persiapan produk adalah pengukuran ph (keasaman). Nilai ph mempengaruhi kebutuhan panas untuk menginaktifasi mikroba dan jenis mikroba target yang akan dihilangkan. Pengukuran ph dilakukan dengan cara mengukur ph nata de coco dan larutan asam sitrat ketika perebusan II, mengukur ph media produk (sirup), mengukur ph ketika pengisian (campuran nata de coco dan media) dan pengukuran ph produk. Pengukuran ph dilakukan tiga kali untuk setiap tangki perebusan II dan pembuatan sirup, yakni awal, pertengahan dan akhir selama proses pengisian ke dalam kemasan dilakukan. Proses produksi Nata de coco dilakukan sesuai dengan proses yang biasanya, seperti dijelaskan pada Gambar 4. Proses produksi mengikuti standar-standar yang telah ditetapkan sesuai kondisi aktual produksi. Hal lain yang dapat mempe-

6 ngaruhi penetrasi panas pada proses pasteurisasi adalah kapasitas atau beban produk yang dipasteurisasi. Beban pasteurisasi yang digunakan minimal harus Kelapa Gula Air Ekstrak + Saring Saring Santan + Sirup + Asam Asetat Media QC: ph Starter Kultur Acetobacter Xylinum Fermentasi o C, 8-9 hari Panen Nata de coco Lembaran QC : ph Tekstur & Ketebalan Pemotongan Pembilasan menggunakan Air selama 7-10 Jam Perebusan (I) untuk menghilangkan Asam 100 o C 45 menit QC : ph Cek Sensori Potongan Nata de coco Netral Gambar 4. Diagram alir proses produksi Nata de coco dalam kemasan 22

7 23 Potongan Nata de coco Netral Asam sitrat & BTP lainnya Air Panas Gula Sortir: Ukuran & Benda asing Pencampuran Perebusan (II) (100 0 C, 15 menit) QC: ph Brix: QC: ph Pemanasan ( C) Pengisian Min 80 o C Sealing/Penutupan Pasteurisasi dalam air ( C, 20 menit) Pendinginan dalam air O C, 20 menit Pengeringan Inspeksi: Benda asing & Kebocoran Pengkodean Pengartonan Nata de coco Dalam Kemasan Gambar 4. Diagram alir proses produksi Nata de coco dalam kemasan (lanjutan)

8 sama atau melebihi kapasitas yang biasa digunakan, dalam hal ini penelitian dilakukan dengan merancang beban pasteurisasi maksimum yang memungkinkan dilaksanakan baik itu dilihat dari kecepatan pengisian dan penutupan (sealing), beban di pasteurizer sendiri maupun beban/kecepatan selama proses pengartonan, dan beban ini dirancang tetap selama pengamatan dilakukan. Penyusunan produk dalam bak konveyor pasteurisasi diatur serapih mungkin mengikuti penyusunan yang biasa dilakukan, yaitu 2 tumpukan produk, hal ini bertujuan agar media air panas dapat kontak langsung dengan permukaan produk. Pengukuran penetrasi panas dilakukan dengan menggunakan termokopel. Pengamatan penetrasi panas selama pasteurisasi dilakukan dengan mengamati perubahan suhu yang terjadi di dalam kemasan nata de coco selama proses pasteurisasi. Proses pengamatan suhu dilakukan dengan mengambil sampel setiap menit. Pengambilan sampel meyebabkan terjadinya perubahan beban, sehingga memungkinkan terjadinya perubahan kemampuan penetrasi media. Penempatan produk lain dalam bak konveyor pasteurisasi dilakukan untuk menggantikan sampel agar beban selalu tetap. Sebelum dilakukan pasteurisasi, pada penelitian ini produk ditahan dulu selama 3 menit untuk memperhitungkan resiko tertahannya produk setelah pengisian dan penutupan namun tidak langsung masuk ke konveyor pasteurisasi yang memungkinkan terjadinya penurunan suhu awal produk sebelum masuk ke bak konveyor pasteurisasi. Walaupun dalam prakteknya waktu yang dibutuhkan untuk mencapai konveyor pasteurizer adalah 1 menit setelah penutupan produk, dengan penahanan ini resiko terburuk turunnya suhu turut diperhitungkan. Pengamatan suhu proses pasteurisasi dimaksudkan untuk mengumpulkan data penetrasi panas proses pasteurisasi pada produk. Pengamatan dilakukan dengan mengukur suhu setiap menit selama proses pasteurisasi berlangsung. Pengukuran dilakukan seperti pengukuran yang dilakukan ketika produksi, yaitu mengambil sampel produk dari bak konveyor pasteurizer, menyobeknya dan mencelupkan termokopel pada produk. Bagian yang diukur adalah bagian tengah produk (centre point) yang merupakan bagian terjauh dipenetrasi oleh media pasteurisasi, air panas. Pengukuran dilakukan setiap menit terhadap contoh yang disiapkan. Pengukuran dilakukan dalam 10 kali pengamatan. 24

9 25 Data suhu yang diperoleh setiap menit dibuat menjadi tabel tabulasi antara suhu produk terhadap waktu (setiap menit). Tahap 3. Penentuan Kecukupan Proses Pasteurisasi Pengolahan data dilakukan dengan menyusun data penetrasi suhu produk setiap menit kemudian dihitung terhadap suhu standar dan nilai Z berdasarkan jenis mikroba target. Kemudian dihitung nilai Lr dengan persamaan: Lr = 10 (T-Tr)/z (8) selanjutnya dihitung nilai Po parsial-nya dengan persamaan: Po = (Lr o + Lr t ) / 2 (9) dan dihitung nilai P dengan persamaan: n=1 P = Pn (10) 20 Penentuan kecukupan panas ditentukan dengan cara membandingkan P total dengan P standar (Po) untuk setiap mikroba target. Bila P total lebih kecil P standar, berarti kecukupan panas kurang terhadap mikroba bersangkutan dan bila lebih besar dari P standar berarti proses pasteurisasi mencukupi. Kecukupan panas didasarkan pada nilai P yang terkecil. Evaluasi nilai P dihitung sebagai nilai P 80 untuk memudahkan perbandingan. Metode Analisis Pengukuran ph dengan ph meter Sebelum digunakan elektrode selalu dibilas dulu dengan air destilata dan dikeringkan. Kalibrasi ph meter dilakukan dengan buffer ph 4 dan ph 7. Setelah ph meter siap digunakan, elektrode dimasukkan ke dalam sampel hingga elektroda terendam. Hasil pengukuran ph sampel dibaca setelah tampilan ph meter

10 stabil. Elektrode dibilas dengan air destilata, dikeringkan kemudian disimpan kembali ketempat semula. Pengukuran Kadar Gula dengan Refraktometer Sebelum digunakan lensa refraktometer selalu dibilas dulu dengan air destilata dan dikeringkan. Kalibrasi refraktometer dilakukan dengan air destilata. Setelah refraktometer digunakan, lensa refraktometer diteteskan dengan sampel Hasil pengukuran sampel dibaca dengan melihat tampilan skala refraktometer. Lensa refraktometer dibilas dengan air destilata, dikeringkan kemudian disimpan kembali ketempat semula. Pengujian Angka Lempeng Total Analisis angka lempeng total menggunakan metode agar tuang (Pour Plate) berdasarkan Compendium of Methods for Microbiological Examination of Foods). Contoh yang akan diuji di steril permukaan plastiknya dengan etanol, disobek menggunakan pisau yang telah disteril kemudian dipipet bagian cairannya. Dilakukan homogenisasi dan pengenceran contoh dengan pengenceran yang dibutuhkan seperti 10-1, 10-2, 10-3, Dengan mikropipet, diambil sebanyak 1 ml contoh dari masing-masing pengenceran dan dimasukkan ke dalam cawan Petri. Dilakukan pengocokkan ulang jika larutan melebihi 3 menit sebelum di pipet ke dalam cawan Petri. Ditambahkan sebanyak ml media plate count agar yang telah diatur pada suhu o C ke dalam tiap cawan Petri dan tidak boleh melebihi 15 menit sejak dari pengenceran awal. Dicampurkan pengenceran contoh dengan segera, dan agar dengan baik dengan cara memutar ke depan, belakang kiri dan kanan, agar dibiarkan menjadi padat. Cawan Petri diinkubasikan dengan posisi terbalik ke dalam inkubator pada suhu 30 o C selama jam. Penyusunan cawan petri dihindari pada saat agar dituang atau ketika agar sedang memadat. Pertumbuhan koloni aerobik dalam cawan yang mengandung koloni dihitung. Hasil dinyatakan dalam 1 ml contoh dan mengalikan jumlah koloni dengan factor pengencerannya. Cara perhitungan dilakukan dengan cara sebagai berikut: (1) Cawan petri normal ( koloni). Dipilih cawan petri yang tidak ada penyebaran atau 26

11 27 adanya kesalahan analisa. Dihitung semua pertumbuhan koloni, termasuk ukuran yang tepat pada cawan petri yang diseleksi. Pengenceran yang digunakan dan jumlah keseluruhan koloni dihitung; misalkan pengenceran 1: 100 terdapat 234 koloni, pengenceran 1:1000 terdapat 23 koloni, maka hasil pembacaan kooni/ml. (2) Cawan petri yang melebih 250 koloni. Jika jumlah pertumbuhan koloni tiap cawan petri melebihi 250 koloni, maka dihitung koloni didalam bagian dari cawan petri yang mewakili distribusi koloni. (3) Cawan petri yang menyebar. Penyebaran koloni ada 3 jenis; (a) merupakan rantai yang terpisah-pisah, (b) penyebaran yang terjadi diantara lapisan perbenihan dan (c) dasar cawan petri, penyebaran yang terjadi pada tepi atau permukaan perbenihan. Jika terjadi hanya satu perambatan (seperti rantai) maka koloni dianggap satu. Tetapi bila satu atau lebih rantai terbentuk dan yang berasal dari sumber yang berpisah-pisah, maka tiap sumber dihitung sebagai satu koloni. Bila kondisi (b) dan (c) terjadi sebaiknya pemeriksaan diulangi karena koloni dalam keadaan semacam ini agak sukar dihitung. Misalnya; pengenceran 1:100 terdapat 27 koloni menyebar, pengenceran 1:1000 terdapat 215 koloni menyebar, hasil pembacaan: kesalahan pemeriksaan. Jika cawan petri contoh diketahui kontaminasi atau tidak memuaskan, maka dicatat sebgai kegagalan atau kesalahan pemeriksaan. (4) Cawan petri tanpa pertumbuhan koloni. Jika cawan petri dari semua pengenceran tidak ada pertumbuhan koloni, hasil total plate count dilaporkan lebih kecil dari 1 (satu) dikalikan pengenceran terendah yang digunakan. Misalkan pengenceran 1:100 tidak terdapat koloni, pengenceran 1:1000 tidak terdapat koloni, maka hasil pembacaan: < 100 kol/ml. Pada pengenceran 1:10 tidak terdapat koloni, pengenceran 1:100 tidak terdapat koloni, hasil pembacaan: < 10 kol/ml. Ketika melaporkan jumlah koloni atau koloni perkiraan hanya 2 angka penting yang digunakan yaitu angka yang pertama dan kedua (dimulai dari kiri), sedangkan angka yang ketiga diganti dengan angka 0 (nol) apabila angka ketiga menunjukkan angka 6, 7, 8, atau 9. Pembulatan angka dilakukan kebawah apabila angka ketiga menunjukkan angka 1, 2, 3 atau 4. Jika angka ketiga adalah 5, maka nilai dinaikkan bila angka kedua merupakan bilangan ganjil, dan diturunkan jika angka kedua merupakan bilangan genap.

12 Perhitungan Khamir dan Kapang Analisis khamir dan kapang mengikuti prosedur SNI tentang Cara Uji Cemaran Mikroba (BSN 1992). Contoh yang akan dianalisis dilakukan penyiapan sampel yang sama dengan yang dilakukan pada analisis angka lempeng total. Dilakukan homogenisasi dan pengenceran contoh jika diperlukan. Sebanyak 1 ml diambil contoh dengan mikropipet dari masing-masing pengenceran dan dimasukkan ke dalam cawan petri. Dilakukan pengocokan ulang jika larutan melebihi 3 menit sebelum di pipet kedalam cawan petri. Ditambahkan sebanyak ml media Potato Dextrose Agar ph 3.5 yang telah ditambahkan larutan tartaric acid 10% dan suhu yang diatur pada o C ke dalam tiap cawan petri dan penuangan media tidak boleh melebihi 15 menit sejak dari pengenceran awal. Dengan segera dicampurkan pengenceran contoh dan agar dengan baik, dengan cara memutar ke depan, ke belakang, ke kiri dan ke kanan. Media agar dibiarkan beberapa waktu hingga agar menjadi padat. Cawan petri diinkubasikan dengan posisi menghadap ke atas di dalam inkubator bersuhu o C selama 5 hari. Jumlah koloni yang dibaca/dihitung pada cawan petri berkisar koloni. Hasil perhitungan dicatat dan dilaporkan sebagai jumlah kapang dan khamir per gram atau ml contoh, dikalikan factor pengencerannya. Pembulatan perhitungan dilakukan sebagai berikut; jika angka ketiga adalah angka 6 atau diatasnya, pembulatan dilakukan keatas, misalnya 456 menjadi 460. Jika angka ketiga adalah angka 4 atau dibawahnya, pembulatan dilakukan ke bawah, misalnya 454 menjadi 450. Jika angka ketiga adalah 5; pembulatan dilakukan ke bawah jika angka kedua merupakan angka genap (445 = 440), pembulatan dilakukan ke atas jika angka kedua angka ganjil (455 = 460). Koloni kapang biasanya berbentuk buram dan berbenang, koloni khamir berwarna putih dan licin berbau asam. Perhitungan Koliform Analisis koliform menggunakan metode agar tuang menurut Compendium of Methods for The Microbiological Examination of Foods. Contoh yang akan 28

13 29 dianalisis dilakukan penyiapan sampel yang sama dengan yang dilakukan pada analisis angka lempeng total. Dilakukan homogenisasi dan pengenceran contoh bila diperlukan. Sebanyak 1 ml contoh diambil dengan mikropipet, dari masing-masing pengenceran dimasukkan kedalam cawan petri. Dilakukan pengocokan ulang jika larutan melebihi 3 menit sebelum dipipet ke dalam cawan petri. Sebanyak ml media Violet Red Bile Agar bersuhu o C ditambahkan ke dalam cawan petri dan tidak boleh melebihi 15 menit sejak pengenceran awal. Dengan segera pengenceran contoh dan agar dicampur dengan baik dengan memutar ke depan, ke belakang, ke kiri dan ke kanan. Media agar dibiarkan beberapa waktu hingga memapadat. Cawan petri diinkubasikan dengan posisi terbalik dalam inkubator bersuhu 35 o C selama jam. Koloni yang dihitung berbentuk bulat, berwarna merah keunguan, ukuran diameter lebih kecil dari 0.5 mm atau lebih besar dan kadang terbentuk lingkaran kemerahan disekitar koloni yang merupakan presipitasi dari asam empedu (bile acid). Jumlah bakteri coliform per gram atau milliliter contoh dihitung dengan mengalikan jumlah koloni dalam cawan petri dengan faktor pengenceran yang digunakan. Koloni yang dihitung adalah yang mengandung koloni pada cawan petri.