BAB II LANDASAN TEORI. A. Tinjauan Pustaka

Transkripsi

1 BAB II LANDASAN TERI 1 A. Tinjauan Pustaka 1. Tumbuhan Mundu (G. dulcis) a. Deskripsi Tumbuhan G. dulcis Garcinia termasuk ke dalam suku/famili manggis-manggisan, Guttiferae atau Clusiaceae. Jenis ini banyak tumbuh di daerah tropis, banyak terdapat dikawasan Asia Tenggara misalnya di Indonesia, Malaysia, Thailand, Kamboja, Philipina, Burma dan Vietnam serta beberapa terdapat di negara Srilangka, India bagian selatan, Brasil dan Amerika Tengah. Tumbuhan genus Garcinia yang terdiri kurang lebih 500 spesies ini tersebar luas di kawasan tropis serta memiliki fisiognomi yang beragam, dari jumlah tersebut terdapat 91 spesies Garcinia yang terdapat di Indonesia dan 35 spesies dikoleksi di Kebun Raya Bogor (Heyne, 1987). Salah satu spesies dari genus Garcinia adalah mundu (G. dulcis) berupa pohon berbatang pendek dengan tinggi maksimal meter dengan tajuk yang mengerucut ke atas. Tumbuhan G. dulcis mempunyai tangkai bunga pendek ± 1 cm, ujung bunganya hampir tertutup. Batangnya mempunyai kulit berwarna coklat dan mempunyai semacam getah berwarna putih yang akan berubah menjadi coklat pucat saat kering. Batang mundu ditumbuhi banyak ranting berbentuk hampir persegi empat yang mudah patah dan berbulu halus. Daun mundu berbentuk bundar telur sampai lonjong jorong, panjang cm dan lebar 3,5 14 cm, mentah pucat bila muda, permukaan atas mentah gelap dan mengkilat, pada bagian bawah dengan tulang tengah yang menonjol dan keras, urat-urat daun banyak dan paralel, panjang tangkai daun sampai 2 cm. Bunga mundu muncul di dekat pangkal daun berwarna kuning keputihan dan berbau harum. Buah mundu berbentuk bulat dengan ujung atas dan bawah agak meruncing dengan diameter antara 5-8 cm. Buah berwarna hijau muda saat masih mentah dan berubah menjadi kuning cerah (mengkilat) ketika masak. Buah mundu (G. dulcis) memiliki 1-5 biji berukuran 2,5 cm berwarna coklat. Daging buah mundu berwarna kuning dan mengandung banyak air. Rasa buahnya manis agak masam. Pohon mundu tumbuh di Indonesia (Jawa dan sebagian Kalimantan) dan telah ditanam di negara-negara di Asia Tenggara seperti Thailand dan Filipina. Habitatnya adalah daerah dataran rendah hingga ketinggian 500 meter (Maheswari, 1964).

2 2 Gambar 1. Buah Mundu (G. dulcis) berikut: Secara taksonomi tumbuhan G. dulcis ini diklasifikasikan (Heyne, 1987) sebagai Divisio : Spermatophyta Sub divisio : Angiospermae Kelas : Dicotyledoneae Sub kelas : Archichlamydae rdo : Parietales Famili : Clusiaceae (Guttiferae) Genus : Garcinia Spesies : Garcinia dulcis (Roxb.) Kurz b. Manfaat G. dulcis Sebagian besar bagian dari tumbuhan Garcinia dapat dimanfaatkan. Buah dari spesies tumbuhan ini dapat dimakan seperti buah manggis (G. mangostana), mundu (G. dulcis) dan asam kandis (G. parvifolia). Mundu selain dapat dimakan buahnya, dalam bentuk jus buah bermanfaat sebagai ekspektoran (Deachathai dkk., 2005). G. dulcis mempunyai aktivitas biologis dan farmakologis yang beragam dan sangat menarik seperti: antioksidan, antimalaria, antiinflamasi (Merza dkk., 2004; Lannang dkk., 2005), antibakteri (Deachathai dkk., 2005), agen hipokolesterolemik (Tuansulong dkk., 2009), antijamur, anti HIV (Kosela dkk., 2000), penanganan penyakit limfatitis, parotitis dan struma (Kasahara dan Henmi, 1986). c. Kandungan Senyawa Kimia G. dulcis Studi literatur mengenai kandungan kimia dalam G. dulcis yang telah dilaporkan, diantaranya senyawa-senyawa xanton yang telah diisolasi dari kulit batang mundu G. dulcis adalah 1,3,4,5,8-pentahidroksixanton, 1,5,8-trihidroksi-6,6-dimetilpirano (2,3:6,7)-6,6 -

3 3 dimetilpirano (2,3 :2,3) xanton, 1,8-dihidroksi-6,6-dimetilpirano (2,3:6,7)-6,6 - dimetilpirano (2,3 :3,4) xanton (Ainiyah dan Ersam, 2006). Senyawa yang berhasil diisolasi dari bunga mundu G. dulcis yang berasal dari Songkhla, Thailand adalah dulcisxanton C, dulcisxanton D, dulcisxanton E, dulcinon, dulcisxanton F (Deachathai dkk., 2006). Isolasi senyawa yang diperoleh dari akar G. dulcis antara lain: garciduols A, garciduols B, garciduols C, 1,3,6-trihidoksi-7-metoksixanton, 2,5-dihidroksi-1-metoksixanton, 1,4,5-trihidroksixanton, 1,3,5-trihidroksixanton, 1,3,6-trihidoksi-5-metoksixanton (Iinuma dkk., 1996). Senyawa yang telah diisolasi dari daun G. dulcis adalah dulxanton E, dulxanton F, dulxanton G, dulxanton H (Kosela dkk., 2000). Komponen senyawa yang pernah dilaporkan dalam mundu, sebagian besar didominasi dari senyawa fenolik dari golongan xanton dan beberapa komponen non fenolik yakni triterpenoid serta steroid (Hesturini dkk., 2011). d. Senyawa yang Pernah Dilaporkan dalam Buah G. dulcis Senyawa yang telah dilaporkan dari buah mentah dan matang dalam G. dulcis didominasi dari golongan xanton. Selain golongan xanton, juga terdapat beberapa senyawa lain seperti flavonoid, benzofonen dan asam lemak dalam jumlah yang minor (Deachathai dkk., 2005). Senyawa yang berhasil diisolasi dari buah mentah G. dulcis antara lain: dulcinoside (1), dulcisisoflavone (2), dulcisxanthone A (3), sphaerobioside acetate (4), cowanin (5), morelloflavone (6), mangostin (7a), mangostenol (7b), cratoxylone (7c), garcinone D (7d), cowaxanthone (8), l,6-dihydroxy-3,7-dimethoxy-2-(3-methyl-2-butenyl)xanthone (9), chandalone (10), camboginol (11), cambogin (12), octadenoic acid-2,3-dihydroxypropyl ester (13), lupalbigenin (14a), isolupalbigenin (14b), BR-xanthone A (15), l,7-dihydroxy-3- methoxy-2-(3-methyl-2-butenyl)xanthone (16), 2-hydroxy-l,2,3-propanetricarboxylic acid- 1,3-dimethylester (17), 1,5,8-trihydroxy-3-methoxy-2-(3-methyl-2-butenyl)xanthone (18) dan clusiaphenone B (19) (Deachathai dkk., 2005). Sedangkan senyawa yang diperoleh dalam buah matang G. dulcis diperoleh 8 komponen yang sama dengan senyawa dalam buah mentah G. dulcis antara lain: camboginol, cambogin, octadenoic acid-2,3-dihydroxypropyl ester, 1,5,8-trihydroxy-3-methoxy-2-(3- methyl-2-butenyl)xanthone, BR-xanthone A, mangostin, morelloflavone, mangostenol serta 17 komponen lain yaitu dulcisflavan (20), dulcisxanthone B (21), isonormangostin (22), gartanin (23), 1,6-dihydroxy-7-methoxy-8-(3,7-dimethyl-2,6-octadienyl)-2,2 dimethylpyrano[3,2,b]

4 4 xanthen-9-one, tovophyllin A (24), betulinic acid (25), kaemferol 3--β-glucopyranosyl-7-α-rhamnopyranoside (26a), kaemferol 3,7-di--α-rhamnopyranoside (26b), garcinone B (27), 1,3,6-trihydroxy-7-methoxy-2,5-bis(3-methyl-2-butenyl)xanthone (28), 8-desoxygartanin (29), 1,6-dihydroxy-7-methoxy-8-(3-methyl-2-butenyl)- 2,2 dimethylchromeno[5,6 :2,3]xanthone (30), apigenin (31), morusignin J (32) dan (-) epicatechin (33) (Deachathai dkk., 2005). H H H 3 C H H H H H H (1) H H H H (2) (3) Ac Ac H 3 C Ac Ac Ac R 1 H Ac H 3 C R 1 H Ac H H (4) (5) H H H H H H R 1 H H 3 C R 2 H H (6) (7) H

5 5 Keterangan: (5) R1 =, R2 = (7a) R1 = R2 = H (7b) R1 =, R2 = H (7c) R1 =, R2 = (7d) R1 =, R2 = H H H 3 C H (8) H H H H (9) (10) H H H H H H H H H H (11) (12)

6 6 H R 2 (13) H H H H R 1 H H H (14) (15) Keterangan: (14a) R1 =, R2 = H (14b) R1 = H, R2 = H H H H H H (16) (17) H H H H H (18) (19)

7 H 7 H H H H H H H H H CH 3 (20) (21) H H H H H CH 3 (22) (23) H H H H H H H H H (24) (25) H R 2 H R 1 H H H (26) (27) Keterangan: (26a) R1 = β-d-glucose, R2 = α-r-rhamnose (26b) R1 = R2 = α-l-rhamnose

8 H H 8 H 3 C H H H H (28) (29) H H H H 3 C H H (30) (31) H H H H H H H (32) (33) H Gambar 2. Senyawa yang Telah Diisolasi dari Buah G. dulcis 2. Faktor yang Mempengaruhi Kadar Xanton dan Flavonoid Biosintesis senyawa xanton belum diketahui secara jelas namun diduga masih berhubungan dekat dengan biosintesis senyawa flavonoid dan stilbenoid. Xanton berasal dari lintasan fenilalanin melalui jalur hidroksinamat (metabolisme fenil propanoid secara umum). Hidroksinamat merupakan pusat pembentukan berbagai fenil propanoid dan unit awal dalam pembentukan benzofenon (produk antara) yang selanjutnya mengalami siklisasi menjadi xanton. Salah satu enzim yang berperan dalam metabolisme fenilalanin dan fenil propanoid adalah Phenyl Alanine Lyase (PAL). PAL disintesis sebagai respon dari ultraviolet, serangan mikroba dan pelukaan (Kurniawati, 2011). Faktor yang dapat mempengaruhi kadar xanton dan flavonoid dalam tumbuhan maupun bagian tumbuhan antara lain (Kurniawati, 2011):

9 9 a. Kandungan xanton yang sama sejak buah muda hingga siap panen karena xanton terdapat pada berbagai umur buah, begitu pula pemanfaatan kulit tidak hanya terbatas pada kulit buah yang telah matang tapi dapat pula berasal dari kulit buah yang masih hijau. b. Total flavonoid, konsentrasi fenol dan total aktivitas antioksidan lebih tinggi pada buah yang dipanen. Karakter kimiawi dan kapasitas antioksidan buah cranberry juga dipengaruhi oleh stadia kemasakan, total fenol dan antosianin berpengaruh terhadap kapasitas antioksidan, stadia hijau mengandung kapasitas antioksidan tertinggi. c. Kadar fenol dan potensi antioksidan dipengaruhi oleh lingkungan, kontribusi utama dari faktor lingkungan adalah suhu udara, sinar ultraviolet, suhu tanah pada kedalaman 25 cm dan kadar C2. Penelitian melaporkan bahwa akumulasi flavonoid diinduksi oleh cekaman lingkungan, karena peranan flavonoid sebagai senyawa pertahanan. Radiasi sinar UV dilaporkan dapat menginduksi akumulasi flavonoid pada gandum (Rathore dkk., 2003). Kadar C2 udara juga dilaporkan mempengaruhi sintesis flavonoid. Pengayaan udara dengan C2 akan meningkatkan konsentrasi senyawa sekunder yang berdasar karbon (Carbon Based Secondary Compound/ CBSC) (Kurniawati, 2011). 3. Perbandingan Kondisi Geografi dan Ekologi Indonesia dengan Thailand a. Letak Lintang dan Iklim Letak garis lintang berpengaruh pada lamanya penyinaran matahari (UV) pada suatu tempat. Semakin rendah letak garis lintangnya maka semakin lama daerah tersebut mendapatkan sinar matahari dan suhu udaranya semakin tinggi. Sebaliknya, semakin tinggi letak garis lintang maka intensitas penyinaran matahari semakin kecil sehingga suhu udaranya semakin rendah. Semakin mendekati garis khatulistiwa, semakin tinggi pula paparan matahari di sepanjang tahun. Hal ini menyebabkan indeks matahari rata-rata di Indonesia berada pada level 9 sampai 11+ atau kekuatan matahari yang terbilang sangat kuat. leh karena itu, hal ini menjadikan Indonesia sebagai salah satu negara dengan indeks UV tertinggi di dunia (Setiawan, 2015). Indonesia terletak di daerah lintang rendah (6 LU 11 LS) mendapatkan penyinaran matahari jam. Suhu udara rata-rata tinggi, karena matahari selalu vertikal, bahkan di beberapa tempat rata-rata suhu tahunannya mencapai 30 C. Kondisi ekologi Indonesia memiliki dua musim yakni musim hujan dan musim kemarau. Musim hujan pada bulan ktober-april, sedangkan musim kemarau pada bulan Mei-September (Khoir, 2012).

10 10 Letak lintang Thailand 15 LU, maka Thailand beriklim tropis dengan lama penyinaran matahari jam dengan perbedaan suhu antara siang dan malam rendah. Ratarata suhu tahunan adalah 28 C. Thailand memiliki iklim tropis, dengan musim semi dari Maret- Mei, musim hujan di Juni-September dan musim dingin dari ktober-februari. Sedangkan khusus untuk Thailand selatan (Songkhla) hanya memiliki dua musim yakni musim kemarau yang relatif singkat pada bulan Februari-Mei dan musim hujan pada Mei-Januari. Fenomena ini berbeda dengan di Indonesia, padahal masih dalam satu lintang rendah. Indonesia pada bulan Mei-September mengalami musim kemarau, sedangkan Thailand mengalami musim hujan yang cukup tinggi. Ini disebabkan karena negara Thailand di lewati angin pasat timur laut yang membawa uap air menuju ekuator, sehingga terjadi pertemuan angin pasat di ekuator. Akibatnya di Thailand terjadi hujan dengan intensitas tinggi, sedangkan di Indonesia mengalami kemarau (Khoir, 2012). b. Kadar C2 World Resources Institute (WRI) membuat laporan tentang emisi karbon dioksida (C2) negara-negara di dunia sejak 1850 hingga 2011 melalui sebuah peta interaktif. Berdasarkan peta interaktif tersebut, terlihat emisi gas rumah kaca di dunia mengalami perubahan drastis selama 160 tahun terakhir. Jika pada tahun 1990-an sekitar dua pertiga dari emisi C2 berasal dari negara-negara maju, pada tahun 2011, emisi karbon yang dihasilkan oleh negara-negara berkembang meningkat drastis, termasuk Indonesia. Daftar 10 negara penghasil emisi karbon terbesar di dunia berdasarkan studi WRI sebagai berikut: Cina (10,26 miliar ton), Amerika Serikat (6,135 miliar ton), Uni Eropa (4,263 miliar ton), India (2,358 miliar ton), Rusia (2,217 miliar ton), Indonesia (2,053 miliar ton), Brazil (1,419 miliar ton), Jepang (1,170 miliar ton), Kanada (847 million ton) dan Jerman (806 million ton) (Alamendah, 2014). 4. Metode Isolasi dan Pemurnian Senyawa a. Ekstraksi Metode ekstraksi berguna untuk melarutkan senyawa-senyawa yang terdapat dalam jaringan tumbuhan ke dalam pelarut yang dipakai untuk ekstraksi tersebut. Untuk mengisolasi suatu senyawa dari bahan tumbuhan segar, keberhasilan ekstraksi dengan alkohol berkaitan langsung dengan seberapa jauh klorofil tertarik oleh pelarut tersebut sedangkan prosedur klasik untuk mengekstraksi berkesinambungan menggunakan alat soxhlet (Kristanti dkk., 2008).

11 11 Pelarut n-heksana, eter, petroleum eter, dan kloroform digunakan untuk mengambil senyawa dengan kepolaran rendah sedangkan pelarut yang lebih polar misalnya alkohol dan etil asetat digunakan untuk mengambil senyawa yang lebih polar (Rusdi, 1990). Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian Deachathai (2005) adalah metode ekstraksi maserasi buah mentah dan matang G. dulcis dengan lama perendaman 5 hari menggunakan pelarut aseton. b. Kromatografi Jika campuran yang akan dipisahkan (A dan B) dimasukkan ke dalam sistem, kedua senyawa akan terdistribusi di antara kedua fase menurut sifat masing-masing. Karena salah satu fase bergerak, senyawa dalam campuran tentunya juga bergerak. Senyawa yang mempunyai afinitas lebih besar terhadap fase gerak akan bergerak lebih cepat daripada senyawa yang sifatnya sebaliknya. Hal yang lebih umum ialah A dan B mempunyai sifat yang serupa dan keduanya bergerak tetapi lajunya berbeda. Perbedaan laju perpindahan ini merupakan dasar dari semua pemisahan secara kromatografi (Gritter dkk., 1991). Pemilihan pelarut tergantung pada sifat kelarutan komponen terhadap pelarut yang digunakan. Kekuatan elusi suatu pelarut terhadap senyawa dalam kromatografi dengan menggunakan silika gel akan turun dengan urutan sebagai berikut: air murni > metanol > etanol > propanol > aseton > etil asetat > kloroform > metil klorida > benzena > toluen > triklo roetilena > tetraklorida > sikloheksana > heksana. Fasa gerak yang bersifat lebih polar digunakan untuk mengelusi senyawa-senyawa yang adsorbsinya kuat, sedangkan fasa gerak yang kurang polar digunakan untuk mengelusi senyawa yang adsorbsinya lemah (Sastrohamidjojo, 2005). 1) Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Pada hakikatnya KLT melibatkan dua peubah yakni sifat fase diam dan fase gerak. Fase diam dapat berupa serbuk halus yang berfungsi sebagai permukaan penjerap. Penjerap pada KLT yang paling umum dipakai adalah silika gel, alumina, kiselgur dan selulosa. Fase gerak dapat berupa segala macam pelarut atau campuran pelarut. Lapisan tipis sering mengandung indikator fluorosensi yang ditambahkan untuk membantu penampakan bercak warna pada lapisan yang telah dikembangkan. Indikator fluoresensi ialah senyawa yang memancarkan sinar tampak jika disinari dengan sinar berpanjang gelombang lain, biasanya sinar ultraviolet sehingga lapisan yang mengandung indikator fluoresensi akan bersinar jika disinari pada panjang gelombang yang tepat (Gritter dkk., 1991).

12 12 2) Kromatografi Vakum Cair (KVC) Kromatografi vakum cair merupakan salah satu kromatografi kolom khusus yang biasanya juga menggunakan silika gel sebagai adsorben (Kristanti dkk., 2008). Kolom kromatografi dikemas kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT µm) dalam keadaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum, vakum dihentikan, pelarut yang kepolarannya rendah dituangkan kepermukaan penjerap lalu divakum lagi. Kolom dihisap sampai kering dan siap dipakai. Cuplikan dilarutkan dalam pelarut yang cocok, dimasukkan langsung pada bagian atas kolom dan dihisap perlahan-lahan ke dalam kemasan dengan memvakumkannya. Kolom dielusi dengan campuran pelarut yang cocok, mulai dengan pelarut yang kepolarannya rendah lalu kepolarannya ditingkatkan perlahan-lahan, kolom dihisap sampai kering pada setiap pengumpulan fraksi (Hostettmann dkk., 1986). Metode KVC dipilih karena memiliki keunggulan yaitu dapat memisahkan bahan sampel dalam jumlah yang cukup besar dalam waktu yang singkat. Penelitian yang menggunakan metode ini antara lain: isolasi biflavonoid dari kulit batang G. xanthochymus dengan elusi gradien menggunakan n-heksana:etil asetat serta etil asetat 100% (Muharni dkk., 2011), isolasi tiga turunan xanton dari kulit batang G. dulcis dengan eluen n-heksana dan diklometana yang ditingkatkan kepolarannya (Ainiyah dan Ersam, 2006). 3) Kromatografi Kolom dengan Fase Diam Sphadex Sephadex LH-20 merupakan media kromatografi cair yang didesain berdasarkan ukuran molekul dari produk bahan alam seperti flavonoid, glikosida, steroid, dan peptida berberat molekul rendah. Prinsip pemisahan kromatografi sephadex LH-20 adalah molekul yang berat molekul kecil akan melewati dan terjebak dalam gel sephadex terlebih dahulu sebelum turun keluar kolom, sedangkan molekul yang berat molekul besar akan langsung terelusi keluar kolom karena tidak dapat menembus gel. leh karena itu, molekul yang akan keluar dari kolom terlebih dahulu adalah molekul yang ukurannya lebih besar setelah itu disusul oleh molekul yang ukurannya lebih kecil (Day dan Underwood, 2002). Gel sephadex (LH-20) dirancang untuk digunakan memakai eluen organik. Biasanya yang digunakan adalah metanol. Sebelum digunakan sebaiknya gel sephadex digembungkan terlebih dahulu dalam eluen selama 12 jam. (Kristanti dkk., 2008) Penelitian yang pernah menggunakan metode kolom dengan fase diam sephadex antara lain: kromatografi sephadex memberikan hasil pemisahan tanin yang bagus pada ekstrak daun bearberry (Pegg dkk., 2008) dan isolasi biflavonoid dari G. preussii dengan eluen metanol (Messi dkk., 2012).

13 13 4) Kromatografi Flash Kromatografi flash merupakan kromatografi dengan tekanan rendah (pada umumnya <20 psi) yang digunakan sebagai kekuatan bagi elusi bahan pelarut melalui suatu ruangan atau kolom yang lebih cepat. Kualitas pemisahan sedang, tetapi dapat berlangsung cepat (10 15 menit). Fasa diam yang sering digunakan adalah silika gel G60 ukuran µm dan silika gel G60 ukuran 40 43µm dengan ukuran partikel mess. Sistem pelarut biner dengan salah satu pelarut mempunyai kepolaran yang lebih tinggi, sering digunakan dalam kromatografi ini. Sistem pelarut biner yang sering digunakan diantaranya n-heksana/etac, eter/n-heksana, CH2Cl2/EtAc dan CH2Cl2/MeH (Still dkk., 1978). Penelitian yang menggunakan metode kromatografi flash adalah isolasi biflavonoid dari kulit batang G. xanthochymus dengan elusi gradien menggunakan n-heksana:etil asetat dan etil asetat 100% (Muharni dkk., 2011). 5. Identifikasi Struktur Senyawa Spektroskopi Magnetik Inti Spektrosopi yang telah membawa dampak terbesar dalam penetapan struktur organik ialah spektroskopi resonansi magnetik inti (NMR, Nuclear Magnetic Resonance). Inti tertentu menunjukkan perilaku seolah-olah mereka berputar (spin). Berhubung inti bermuatan dan muatan putaran menciptakan medan magnetik, maka inti yang berputar ini berperilaku sebagai magnet kecil. Inti yang paling penting untuk penetapan struktur organik ialah 1 H (hidrogen biasa) dan 13 C, yaitu isotop nonradioaktif yang stabil dari karbon biasa (Hart dkk., 2003). 1) Spektroskopi 1 H NMR Spektrum 1 H NMR biasanya diperoleh dengan cara berikut: sampel senyawa yang sedang dikaji (biasanya hanya beberapa miligram) dilarutkan dalam sejenis pelarut lembam yang tidak memiliki inti 1 H. Contoh pelarut seperti itu ialah CCl4 atau pelarut dengan hidrogen yang digantikan oleh deuterium seperti CDCl3 (deuteriokloroform) dan CD3CCD3 (heksadeuterioaseton). Kebanyakan senyawa organik memiliki puncak bawah medan (di medan rendah) dari TMS dan diberi nilai δ positif. Nilai δ 1,00 berarti bahwa puncak muncul 1 ppm di bawah medan puncak dari puncak TMS. Pergeseran kimia (chemical shift) dari jenis sinyal 1 H tertentu ialah nilai δ-nya terhadap TMS disebut pergeseran kimia karena nilainya bergantung pada lingkungan kimia dari hidrogen, tidak bergantung pada instrumen yang digunakan untuk mengukur. Tabel 1 memuat pergeseran kimia untuk beberapa jenis inti 1 H yang lazim (Hart dkk., 2003).

14 Tabel 1. Pergeseran Kimia Proton 1 H yang Khas (Relatif terhadap Tetrametilsilana/TMS) Jenis 1 H δ (ppm) Jenis 1 H δ (ppm) C CH3 0,85 0,95 CH2=C 4,6 5,0 C CH2 C 1,20 1,35 CH=C 5,2 5,7 C Ar H 6,0 8,0 C CH C 1,40 1,65 CH3 C=C 1,6 1,9 9,5 9,7 C H CH3 Ar 2,2 2, C H CH3 C= 2,1 2,6 R H 0,5 5,5 C CH3 3,5 3,8 Ar H ) Spektroskopi 13 C NMR Spektroskopi 13 C NMR memberikan informasi tentang kerangka karbon. Spektrum karbon-13 berbeda dari spektrum 1 H dalam beberapa hal. Pergeseran kimia karbon-13 terjadi pada kisaran yang lebih lebar dibandingkan kisaran pergeseran kimia inti 1 H. Keduanya diukur terhadap senyawa rujukan yang sama yaitu TMS, yang semua karbon metilnya ekuivalen dan memberikan sinyal yang tajam (Hart dkk., 2003). Absorpsi karbon-13 dijumpai dengan angka ppm di bawah medan TMS. Posisi relatif absorpsi 13 C NMR seperti ditunjukkan pada Gambar 3 (Fessenden dan Fessenden, 1982). C ester, amida dan karboksil C dan C N C alkena dan aromatik C aldehida C alkunil dan keton C alkil ppm Gambar 3. Posisi Relatif Absorpsi 13 C NMR 3) HSQC (Heteronuclear Single Quantum Correlation)

15 15 HSQC merupakan salah satu jenis NMR dua dimensi. Teknik HSQC pada dasarnya sama dengan teknik HMBC yaitu inti yang dideteksi adalah proton (Rumampuk, 2005). Eksperimen HSQC mengukur konstanta coupling 13 C- 1 H dan mengidentifikasi proton mana yang membentuk coupling dengan karbon tertentu pada konstanta coupling tertentu, dengan kata lain data hasil HSQC adalah hubungan CH dua dimensi yang ditunjukkan sebagai sinyal silang dalam diagram δc vs δh (Williams dan Fleming, 2008). 4) HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation) HMBC merupakan salah satu jenis NMR dua dimensi yang dapat digunakan untuk mengetahui hubungan antara proton dengan karbon yang berjarak 2-3 ikatan. Kemiripan nilai coupling dua- dan tiga- ikatan merupakan keterbatasan yang tidak menguntungkan sehingga identifikasi apakah sebuah interaksi yang dimunculkan pada spektrum HMBC merupakan interaksi dua- dan tiga-ikatan atau bukan tidak mungkin dilakukan. Teknik ini tetap potensial karena sering kali memungkinkan untuk mengidentifikasi hubungan antara satu sistem spin dengan sistem spin lainnya (Williams dan Fleming, 2008). B. Kerangka Pemikiran Komponen senyawa yang pernah dilaporkan dalam G. dulcis, sebagian besar didominasi dari senyawa fenolik dari golongan xanton serta komponen non fenolik yakni triterpenoid dan steroid (Hesturini dkk., 2011). Sedangkan senyawa yang pernah dilaporkan dalam buah matang dan mentah G. dulcis, didominasi oleh senyawa golongan xanton serta komponen lain dalam jumlah minor seperti benzofenon, flavonoid dan asam lemak (Deachathai dkk, 2005). Adanya perbedaan geografi, ekologi dan tantangan ekosistem tumbuhan menyebabkan perbedaan kandungan senyawa dan/atau kuantitas senyawa yang terkandung di dalamnya (Ainiyah dan Ersam, 2006). Kadar fenol dan potensi antioksidan dipengaruhi oleh lingkungan, kontribusi utama adalah suhu udara, sinar UV, suhu tanah pada kedalaman 25 cm dan kadar C2. Radiasi sinar UV dilaporkan dapat menginduksi akumulasi flavonoid pada gandum (Rathore dkk., 2003). Kadar C2 udara juga dilaporkan mempengaruhi sintesis flavonoid, pengayaan udara dengan C2 akan meningkatkan konsentrasi senyawa sekunder yang berdasar karbon (Kurniawati, 2011). Intensitas radiasi sinar UV terhadap tumbuhan G. dulcis lebih intens dan tinggi di Indonesia karena Indonesia memiliki periode musim kemarau lebih lama dan rata-rata suhu tahunan lebih tinggi dibandingkan dengan Thailand (Khoir, 2012). Selain itu, Indonesia juga

16 16 termasuk 10 negara penghasil emisi karbondioksida terbesar di dunia, sedangkan Thailand tidak termasuk di dalamnya (Setiawan, 2015). Berdasarkan perbedaan tersebut, dimungkinkan kuantitas xanton dan/atau flavonoid yang terkandung dalam spesies yang sama akan berbeda signifikan. Penelitian ini menggunakan buah mentah G. dulcis yang berasal dari Sukoharjo, Jawa Tengah. Senyawa xanton dan/atau flavonoid dalam buah mentah G. dulcis dapat diisolasi dengan metode ekstraksi menggunakan alat soxhlet dengan pelarut aseton. Isolasi senyawa fenolik pada buah mentah G. dulcis dengan menggunakan pelarut aseton pada proses ekstraksi sampel (Deachathai dkk., 2005). Fraksinasi menggunakan kromatografi vakum cair untuk memisahkan komponen polar dan non polar. Sistem elusi yang digunakan adalah elusi gradien yakni eluen pertama yang ditambahkan lebih bersifat non polar kemudian ditambahkan eluen dengan bertambahnya kepolaran secara bertingkat agar dihasilkan resolusi pemisahan yang baik (Hostettmann dkk., 1986). Fraksi yang cenderung polar dimungkinkan mengandung senyawa target. Pemurnian senyawa dengan menggunakan kromatografi kolom dengan fase diam sephadex LH-20 dengan pelarut metanol (Messi dkk.,2012) dan kromatografi flash dengan fase diam silika gel dan sistem elusi yang digunakan adalah elusi gradien (Muharni dkk., 2011). Kromatografi kolom dengan fase diam sephadex memberikan hasil pemisahan tanin yang bagus pada ekstrak daun bearberry (Pegg dkk., 2008). Senyawa tunggal yang diperoleh selanjutnya diidentifikasi struktur dengan menggunakan spektroskopi ( 1 H NMR, 13 C NMR, HSQC dan HMBC) dan dibandingkan dengan data literatur. C. Hipotesis 1. Senyawa metabolit sekunder yang berhasil diisolasi dari ekstrak buah mentah G. dulcis adalah senyawa xanton. 2. Untuk senyawa xanton dan/atau flavonoid yang pernah dilaporkan sebelumnya, senyawa yang berhasil diisolasi dari penelitian ini memiliki kadar berbeda signifikan.