AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN TUMBUHAN SALA

Transkripsi

1 AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN TUMBUHAN SALA (Cynometra ramiflora L.) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, DAN Klebsiella pneumoniae SERTA BIOAUTOGRAFINYA NASKAH PUBLIKASI Oleh : RACHMAT HANDOKO K FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2013

2 1

3 AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN TUMBUHAN SALA (Cynometra ramiflora L.) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, DAN Klebsiella pneumoniae SERTA BIOAUTOGRAFINYA ANTIBACTERIAL ACTIVITIES LEAF EXTRACT OF ETHANOL PLANTS SALA (Cynometra ramiflora L.) AGAINST BACTERIA Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, AND Klebsiella pneumoniae WITH BIOAUTOGRAPHY Rachmat Handoko, Haryoto dan Peni Indrayudha Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta Jl.Ahmad Yani Tromol Pos I, Pabelan Kartasura Surakarta handokorachmat@gmail.com ABSTRAK Salah satu tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebagai antibakteri adalah tumbuhan sala (Cynometra ramiflora L.). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun tumbuhan sala terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae serta bioautografinya. Daun tumbuhan sala diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan etanol 96%. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode disk difusi (Kirby Bauer). Seri konsentrasi yang digunakan dalam pengujian terhadap ketiga bakteri adalah 4 mg/disk, 6 mg/disk, 8 mg/disk dan 10 mg/disk. Uji KLT menggunakan fase diam silika gel GF 254 dan fase gerak n- heksan : etil asetat (7:3) v/v. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun tumbuhan sala menghasilkan zona irradikal dan zona hambat terbesar pada konsentrasi 10 mg/disk terhadap Staphylococcus epidermidis menghasilkan rata-rata zona hambat 11,43 mm, terhadap Pseudomonas aeruginosa menghasilkan rata-rata zona hambat 10 mm, dan pada Klebsiella pneumoniae menghasilkan rata-rata zona hambat 10,11 mm. Hasil KLT menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun tumbuhan sala diduga mengandung senyawa fenol. Bioautografi kontak yang dilakukan menunjukkan bahwa senyawa yang beraktivitas sebagai antibakteri adalah fenol. Kata kunci : Cynometra ramiflora L, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Antibakteri ABSTRACT One of the plants that can be used as an antibacterial is sala (Cynometra ramiflora L.). This study aims to determine the antibacterial activity of ethanol extract of leaves of sala against Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae and bioautography. leaves of sala extracted using maceration with 96% ethanol. Antibacterial activity test performed by disk diffusion method (Kirby Bauer). Series of concentrations used in the third test against bacteria is 4 mg / disk, 6 mg / disk, 8 mg / disk and 10 mg 1

4 / disk. Test phase TLC using silica gel GF 254 stationary and mobile phase n- hexane : ethyl acetate (7:3) v / v. Results of this study showed that the antibacterial activity of the ethanol extract of leaves of sala produced irradical zone and the largest inhibition zone at a concentration of 10 mg / disc against Staphylococcus epidermidis produces an average of mm inhibition zone, against Pseudomonas aeruginosa produces an average zone of inhibition of 10 mm, and the Klebsiella pneumoniae produces an average of mm zone of inhibition. TLC results showed that the ethanol extract of the leaves of sala allegedly contains phenolic compounds. Bioautografi contacts shown that the active compounds as antibacterial is phenol. Keywords: Cynometra ramiflora L, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Antibacterial PENDAHULUAN Kasus infeksi biasanya disebabkan oleh beberapa mikroorganisme seperti bakteri, parasit, virus, dan jamur. Di antara bakteri yang sering menimbulkan infeksi pada manusia adalah Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae (Jawetz et al., 2005). Bakteri Staphylococcus epidermidis adalah flora normal pada kulit dan diisolasi dari darah yang terkontaminasi (Motoyama dkk., 2009). Bakteri yang menyebabkan infeksi akut pada jaringan paru-paru adalah Klebsiella pneumoniae. Pada penderita penyakit kronik paru-paru sangat mudah terserang Klebsiella pneumoniae disebabkan lemahnya kekebalan tubuh (Brisse et al., 2009). Dalam mengatasi masalah infeksi tersebut sangat diperlukan penggunaan antibakteri atau antiinfeksi (Priyanto, 2008). Pengobatan penyakit infeksi dapat diatasi dengan beberapa tanaman yang berkhasiat sebagai antibakteri. Salah satu tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebagai antibakteri adalah Cynometra ramiflora L (Khan et al., 2006). Penelitian tentang kandungan kimia tumbuhan sala diketahui bahwa dari bagian kulit batang tumbuhan ini terindikasi adanya berbagai macam kelompok senyawa kimia antara lain: polisakarid, tanin, gum, dan saponin (Khan et al., 2006). Berdasarkan data yang didapatkan, ekstrak kulit batang tumbuhan sala menunjukkan aktivitas antibakteri pada konsentrasi 250 µg/disk dan 500 µg/disk adalah Escherichia coli dengan zona hambat 9 mm dan 12 mm, pada 2

5 Staphylococcus aureus sebesar 10 mm dan 15 mm, dan Staphylococcus epidermis memiliki zona hambat 10 mm dan 12 mm (Afjalus et al., 2013). Berdasarkan uraian tentang aktivitas ekstrak kulit batang tumbuhan sala maka penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antibakteri pada bagian lain tumbuhan sala yaitu pada daun terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae serta bioautografinya. METODE PENELITIAN Alat : Laminar Air Flow (Astari Niagara International), inkubator shaker (New Brunswick), autoklaf (My Life), inkubator (Memmert), bunsen, mikroskop (Olympus), cawan porselen, vacum rotary evaporator (Heidolph EH-B ), neraca analitik (Precisa ), bejana kromatografi, oven (MEMERT ), object glass, deck glass, blue tips, yellow tips, batang pengaduk, vorteks, speader glass, gelas ukur, kompor listrik, tabung reaksi, rak tabung, mikropipet (Socorex), pipet tetes, erlenmeyer, ose, beaker glass, pipa kapiler, pinset, cawan petri, UV 254 nm, dan UV 366 nm. Bahan : daun tumbuhan sala yang diambil dari Keraton Kasunanan Surakarta, etanol 96%, etanol 70%, aquades steril, disc blank, disc antibiotic, media Brain Heart Infusion (Oxoid ), media Mueller Hilton (Oxoid ), cat Gram A, cat Gram B, cat Gram C, cat Gram D, CMC Na, media KIA (Kligler Iron Agar), media LIA (Lysine Iron Agar), media MIO (Motility Indol Ornithine), NaCl (Merck ), uji kromatografi lapis tipis yaitu fase diam silika gel GF 254, fase gerak yang digunakan n-heksan : etil asetat (7:3 v/v). Pereaksi semprot menggunakan FeCl 3, anisaldehid - H 2 SO 4, dan sitroborat. Cara Penelitian : Pembuatan ekstrak Serbuk simplisia daun tumbuhan sala sebanyak 840 g direndam dengan 6300 ml etanol 96% didalam bejana maserasi yang terlindung oleh cahaya matahari dan didiamkan selama 3 hari sambil diaduk, kemudian dipekatkan dengan menggunakan vacum rotary evaporator dan waterbath. Hasil yang diperoleh ekstrak kental daun tumbuhan sala. 3

6 Sterilisasi Alat dan Bahan Alat-alat disterilkan menggunakan oven pada suhu 160º-180ºC selama 1-2 jam. Media-media disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121ºC selama 20 menit. Pengecatan Bakteri Bakteri yang diambil satu ose yang telah dibebas lemakkan diratakan pada object glass. Pada object glass diteteskan formalin 1%, ditunggu 5 menit, preparat digenangi dengan cat Gram A selama 1-3 menit, cat kemudian dibuang tanpa melakukan pencucian dengan air. Setelah itu preparat ditetesi dengan cat Gram B selama 0,5 1 menit, kemudian cat dibuang dan dicuci dengan air bersih. Preparat digenangi cat Gram D selama 1-2 menit, dicuci dan dikeringkan pada suhu kamar. Kemudian preparat diperiksa dibawah mikroskop perbesaran 1000 kali dan pada deck glass ditambahkan minyak imersi. Uji Biokimiawi Pada bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Klebsiella pneumoniae digoreskan pada media KIA, LIA dan MIO. Sedangkan Staphylococcus epidermidis digoreskan pada media MSA, diinkubasi selama jam pada suhu 37ºC. Uji Sensitivitas Bakteri Terhadap Antibiotik Sebanyak 200 µl suspensi bakteri dengan konsentrasi 10 8 CFU/mL diinokulasi pada media MH, disk antibiotik (eritromisin 15 µg, ampisilin 10 µg, tetrasiklin 30 µg, kloramfenikol 30 µg, dan vankomisin 30 µg) diletakkan diatasnya, diinkubasi selama jam pada suhu 37 C. Diameter zona hambat diukur pada disk antibiotik dan dibandingkan dengan standar resistensi bakteri terhadap antibiotik. Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Metode Kirby Bauer Uji aktivitas dengan metode Kirby Bauer dengan menggunakan paper disk. Media yang digunakan adalah Mueller Hinton. Media Mueller Hinton steril diambil sebanyak 20 ml pada tiap petri dibiarkan memadat. Suspensi bakteri diambil 200 µl kemudian digoreskan pada media Mueller Hinton (MH) dengan spreader glass steril. Paper disk diletakkan di atas media Mueller Hinton diisi 4

7 dengan ekstrak etanol daun tumbuhan sala sebanyak 20 µl dari seri konsentrasi 20%, 30%, 40%, dan 50%. Kemudian media diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Diameter zona hambat setiap konsentrasi ekstrak dihitung dan dibandingkan dengan kontrol. Kontrol negatif yang digunakan adalah CMC Na 0,5% sedangkan kontrol positif adalah disk antibiotik kloramfenikol 30 µg/disk. Uji kandungan senyawa dengan Kromatografi Lapis Tipis Penyiapan uji KLT : Larutan uji dibuat dalam konsentrasi 20% v/v dengan menimbang ekstrak daun tumbuhan sala sebanyak 200 mg dalam 1 ml pelarut metanol. Pemilihan dan optimasi fase gerak : Menggunakan fase gerak n-heksan : etil asetat (7 : 3) v/v. Elusi : Bejana kromatografi dijenuhkan terlebih dahulu dengan fase gerak yang akan dipakai dalam elusi. Plat silika GF 254 diaktifkan dengan oven pada suhu 110 o C selama 1 jam. Sampel yang berupa ekstrak etanol daun tumbuhan sala ditotolkan pada lempeng KLT dan dibiarkan mengering. Kemudian setelah kering dimasukkan plat pada bejana kromatografi yang telah jenuh dengan fase gerak. Mulut bejana diolesi dengan vaselin sebelum ditutup. Plat diambil setelah elusi selesai, kemudian dikeringkan sampai fase gerak yang ada pada plat menguap dan mengering. Plat dilihat dengan sinar UV 254 nm dan UV 366 nm, kemudian dideteksi dengan pereaksi semprot anisaldehid - H 2 SO 4, FeCl3, dan sitroborat. Uji Bioautografi Plat hasil elusi diletakkan media MH yang telah diinokulasi dengan bakteri Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae sebanyak 200 µl selama 30 menit. Kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Metode penyarian yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode maserasi. Penyari yang digunakan adalah alkohol 96% yang merupakan campuran hidroalkohol gabungan antara pelarut polar dan non polar, karena keduanya 5

8 mudah bercampur dan memungkinkan kombinasi yang fleksibel untuk mengekstraksi bahan aktif (Ansel, 1989). Filtrat yang diperoleh diuapkan dengan vacum rotary evaporator. Setelah diuapkan dengan waterbath suhunya <60 o C. Hasil ekstrak rendemen sebesar 7,783%, yaitu dari 840 g simplisia kering daun tumbuhan sala menghasilkan 65,38 g ekstrak. Identifikasii Bakteri Identifikasi ini dilakukan dengan cara pengecatan Gram terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis, Pseudomonass aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae. Bakteri Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri Gram positif yang dalam pewarnaann cat Gram akan menghasilkan warna ungu bila diamati menggunakan mikroskop dengan pembesaran 1000x. Warnaa ungu yang dihasilkan oleh Staphylococcus epidermidis karena sifatnya yang tahan terhadap cat Gram C. Hasil pengecatan yang dilakukan dibawah mikroskop menunjukkan bakteri Staphylococcus epidermidis berbentuk bulat dan berwarna ungu. Sedangkan bakteri Gram negatif yang digunakan adalah Pseudomonas aeruginosa dan Klebsiella pneumoniae. Bakteri Gram negatif ini tidak tahan terhadap alkohol sehingga warna ungu dari cat dilunturkan dan bakteri menjadi tidak berwarna lagi dan akan mengikat warna cat Gram D sehingga bakteri akan berwarna merah. Hasil pengecatan Gram setelah diamati di bawah mikroskop menunjukkan bahwa bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Klebsiella pneumoniae berbentuk batang, menyebar dan berwarna merah. A B C Gambar 1. Hasil pengecatan Gram bakteri Staphylococcus epidermidis (A), Pseudomonas aeruginosa (B), dan Klebsiella pneumoniae (C) 6

9 Identifikasi selanjutnya dilakukan uji biokimia Staphylococcus epidermidis dengan media MSA. Media MSA digunakan untuk melihat kemampuan memfermentasi laktosa pada bakteri jenis Staphylococci, salah satunya adalah Staphylococcus epidermidis. Hasil yang diperoleh pada uji biokimia Staphylococcus epidermidis tidak terjadi perubahan warna dari merah menjadi kuning, sebab Staphylococcus epidermidis tidak dapat memfermentasi manitol dalam keadaan anaerob (Sujudi et al., 1993). Pseudomonas aeruginosa dan Klebsiella pneumoniae diuji biokimia pada media KIA, LIA, dan MIO. Pada uji identifikasi biokimiawi bakteri Pseudomonas aeruginosa dalam percobaan terhadap media KIA bagian tegak bewarna kuning sedangkan miring berwarna merah karena bakteri Pseudomonas aeruginosa tidak mampu memfermentasi laktosa. Hasil uji biokimia media LIA bakteri Pseudomonas aeruginosa menunjukkan media tetap bewarna ungu karena bakteri ini mampu mendekarboksilasi lisin dan bersifat basa, selain itu tidak terbentuknya endapan berwarna hitam pada media LIA, hal ini menunjukkan bahwa tidak terbentuknya H 2 S. Hasil pengujian Pseudomonas aeruginosa media MIO didapatkan terjadi pergerakan yang ditandai dengan adanya kabut dan tetap bewarna ungu karena terjadi reaksi dekarboksilase ornitin. Hasil identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa sesuai teori, yang menunjukkan bahwa bakteri Pseudomonas aeruginosa tidak dapat memfermentasi laktosa (Jawetz et al., 2001), mampu memfermentasi lisin dan ornitin, tidak memproduksi H 2 S (Brisse et al., 2009), serta bersifat motil (Jawetz et al., 2001). Identifikasi uji biokimiawi bakteri Klebsiella pneumoniae pada media KIA menunjukkan perubahan warna pada bagian dasar berwarna merah, bagian miring berwarna kuning disebabkan terjadi pembentukan produk hasil fermentasi glukosa yang bersifat asam. Bakteri Klebsiella pneumoniae tidak memproduksi gas yang ditandai dengan tidak adanya gelembung pada media. Hasil uji biokimiawi media LIA yaitu media tetap berwarna ungu yang menunjukkan Klebsiella pneumoniae mampu mendekarboksilasi lisin (bersifat basa), selain itu tidak terbentuknya endapan berwarna hitam pada dasar media, hal ini menunjukkan bahwa tidak terbentuknya H 2 S. Hasil pengujian media MIO tidak menunjukkan motilitas yang 7

10 ditandai tidak adanya kabut pada bekas tusukan, Klebsiella pnemoniae pada media MIO mampu mendekarboksilasi ornitin dengan adanya warna ungu pada bagian atas, selain itu Klebsiella pneumoniae tidak memproduksi H 2 S. Hasil identifikasi bakteri Klebsiella pneumoniae sesuai teori, yang menunjukkan bahwa bakteri Klebsiella pneumoniae dapat memfermentasi laktosa, mampu memfermentasi lisin dan ornitin, tidak bersifat motil serta tidak memproduksi H 2 S (Lindquist, 2010). Uji Sensitivitas Bakteri terhadap Antibiotik Uji sensitivitas digunakan untuk melihat tingkat resistensi dan sensitivitas bakteri terhadap antibiotik. Uji sensitivitas bakteri Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae menggunakan antibiotik tetrasiklin, kloramfenikol, ampisilin, vankomisin, dan eritromisin. Hasil uji dari bakteri Staphylococcus epidermidis menunjukkan sensitif terhadap antibiotik tetrasiklin, vankomisin, dan kloramfenikol, resisten terhadap ampisilin, serta intermediet terhadap eritromisin. Hasil bakteri Pseudomonas aeruginosa menunjukkan sensitif terhadap antibiotik tetraksiklin, kloramfenikol, dan vankomisin, dan resisten terhadap ampisilin dan eritromisin. Hasil uji sensitif pada bakteri Klebsiella pneumoniae sensitif terhadap tetrasiklin, kloramfenikol, dan vankomisin, intermediet terhadap eritromisin, serta resisten terhadap ampisilin. Uji Aktivitas Antibakteri Uji aktivitas antibakteri bertujuan untuk mengetahui ekstrak etanol daun tumbuhan sala dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae. Pengujian dilakukan dengan metode Kirby Bauer menggunakan cakram kertas (disk), metode ini juga dilakukan oleh Afjalus et al., (2013) dan Khan et al., (2006). Diameter zona hambat yang terbentuk pada aktivitas antibakteri dengan metode difusi Kirby Bauer menunjukkan adanya pengaruh ekstrak etanol daun tumbuhan sala terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae (Tabel 3). 8

11 Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun tumbuhan sala terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae Konsentrasi Rata-rata diameter zona hambatan (mm) pada S.epidermidis Rata-rata diameter zona hambatan (mm) pada Pseudomonas aeruginosa Rata-rata diameter zona hambatan (mm) pada Klebsiella pneumoniae 4 mg/disk 9,33±0,58* 9±0* 8,33±0,58* 6 mg/disk 10±0* 9±0* 9±0* 8 mg/disk 10,67±0,58* 10±0* 9,67±0,58* 10 mg/disk 11,43±0,51* 11±0* 10,11±0,19* Kloramfenikol 30 µg (K+) 25±0 15,33±1,21 15,44±0,77 CMC-Na 0,5% (K-) Keterangan : diameter disk = 20 µl, * Zona irradikal Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun tumbuhan sala terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae menunjukkan pada rentang konsentrasi 4 mg/disk, 6 mg/disk, 8 mg/disk dan 10 mg/disk mampu menghasilkan diameter zona hambat. Hasil uji ekstrak etanol daun tumbuhan sala terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae menunjukkan zona irradikal. Ektrak etanol daun tumbuhan sala memiliki aktivitas antibakteri terbesar dengan diameter zona hambat 11,43±0,51 mm terhadap Staphylococcus epidermidis, zona hambat 11±0 mm terhadap Pseudomonas aeruginosa, dan zona hambat 10,11±0,19 mm terhadap Klebsiella pneumoniae. Semakin besar konsentrasi ekstrak etanol daun tumbuhan sala, maka semakin besar aktivitas antibakterinya. Hal ini disebabkan karena kuantitas senyawa aktif makin besar sehingga kemampuan ekstrak etanol daun tumbuhan sala dalam menghambat Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae juga semakin besar. Diameter zona hambat disk yang berisi ekstrak etanol daun tumbuhan sala dibandingkan dengan zona hambat yang terdapat pada kontrol positif yaitu kloramfenikol 30 µg/disk dan kontrol negatif CMC-Na 0,5%. Diameter zona hambat kloramfenikol terhadap Staphylococcus epidermidis adalah 25±0 mm, terhadap Pseudomonas aeruginosa 15,33±1,21 mm, dan Klebsiella pneumoniae 15,44±0,77 mm. Bila diameter zona hambat ekstrak etanol daun tumbuhan sala dibandingkan dengan zona hambat kontrol positif maka zona hambat ekstrak 9

12 etanol daun tumbuhan sala terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae lebih kecil. Meskipun demikian, ekstrak etanol daun tumbuhan sala memiliki potensi sebagai antibakteri karena mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae yang ditunjukkan dengan adanya zona hambat irradikal di sekitar disk. Kontrol negatif CMC-Na 0,5% tidak menghasilkan hambatan pada Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae menunjukkan bahwa zona hambat ekstrak etanol daun tumbuhan sala yang terbentuk tidak dipengaruhi oleh suspending agent yang digunakan. Penelitian Afjalus et al., (2013) menyatakan ekstrak metanol kulit batang tumbuhan sala dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus epidermidis pada konsentrasi 0,25 mg/disk dan 0,5 mg/disk dengan zona hambat 10 mm dan 15 mm sedangkan terhadap Pseudomonas aeruginosa dan Klebsiella pneumonia belum dilakukan penelitian. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun tumbuhan sala dibandingkan dengan penelitian Afjalus dkk. (2013) tidak poten. Hal ini kemungkinan disebabkan pada penelitian ini bagian tumbuhan sala yang digunakan adalah daun, asal tanaman dari Indonesia, penyari yang digunakan yaitu etanol 96%, sedangkan pada penelitian Afjalus et al., (2013) bagian tumbuhan sala yang digunakan adalah kulit batang, asal tanaman dari Bangladesh, dan penyari yang digunakan yaitu metanol 80%. Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi Lapis Tipis digunakan untuk mengetahui kandungan senyawa dalam ekstrak etanol daun tumbuhan sala. Bercak dideteksi dengan reagen semprot anisaldehida menghasilkan warna kuning dan hijau pada sinar tampak. Menurut Santosa dkk., (2005) deteksi senyawa terpenoid dari anisaldehid - H 2 SO 4 adalah warna biru. Ekstrak daun tumbuhan sala diduga tidak mengandung terpenoid. Deteksi dengan reagen semprot FeCl3 menunjukkan pembentukan warna hitam yang kuat, diduga adalah senyawa fenolik. Senyawa fenolik akan menghasilkan warna hitam, biru, hijau, merah, dan ungu dengan penambahan FeCl 3 (Wagner dan Bladt, 1995). Deteksi dengan reagen semprot sitroborat 10

13 menunjukkan tidak adanya fluoresensi pada UV 366 nm. Menurut Sa adah (2010) deteksi senyawa flavonoid dari sitroborat adalah warna kuning kehijauan pada fluoresensi UV 366 nm. Ekstrak daun tumbuhan sala diduga tidak mengandung senyawa flavonoid. Hasil uji KLT ekstrak etanol daun tumbuhan sala dimungkinkan mengandung senyawa fenolik yang ditandai warna hitam pada bercak. Pada penelitian Sari (2013) ekstrak etanol kulit batang tumbuhan sala diduga mengandung fenolik dengan ditandai warna hitam pada bercak. Penelitian Khan (2006) dan Afjalus (2013) ekstrak kulit batang tumbuhan sala mengandung senyawa tanin dari golongan fenolik. Pada penelitian ini tidak dilakukan uji lebih spesifik untuk mendeteksi senyawa tanin pada golongan fenolik. Gambar 2. Hasil uji Kromatografi Lapis Tipis ekstrak etanol daun tumbuhan sala Keterangan gambar: Fase diam : silika GF 254 nm Fase gerak : Heksan:Etil asetat (7:3 v/v) A : UV 254 nm B : UV 366 nm C : Anisaldehid D : FeCl3 E : Sitroborat 11

14 Uji Bioautografi Bioautografi merupakan metode spesifik yang digunakan untuk menentukan deteksi senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri dengan menggunakan plat KLT (Pratiwi, 2008). Kontrol S.epidermidis Pseudomonas aeruginosa Kontrol Klebsiella pneumoniae Kontrol Gambar 3. Hasil uji bioautografi ekstrak daun tumbuhan sala terhadap Staphylococcus epidermidis (A), Pseudomonas aeruginosaa (B), dan Klebsiella pneumoniae (C) Hasil uji bioautografi terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae didapatkan zona jernih pada daerah totolan yaitu zona radikal. Zona radikal merupakan suatu daerah di sekitar disk yang tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri. Senyawa fenolik ditunjukkan zona radikal dari hasil deteksi senyawa menggunakan reagen semprot FeCl 3. Senyawa dalam ekstrak etanol daun tumbuhan sala yang diduga memiliki aktivitas antibakteri adalah fenolik. Penelitian dari Khan et al., (2006) dan Afjalus et al.., (2013) menunjukkan bahwa ekstrak daun tumbuhan sala yang memiliki aktivitas antibakteri adalah senyawa tanin dari golongan fenolik. Menurut Tiwari et al.., (2011) yang memiliki aktivitas antibakteri dari golongan fenolik adalah tanin. Mekanisme antibakteri tanin adalah dengan bereaksi dengan membran sel, dekstruksi membran, membentuk kompleks dengan dinding sel, serta menginhibisi enzim (Cowan, 1999). Penelitian dari Akiyama et al., (2001) tanin dapat merusak membran sel bakteri, dan bersifat astringent yang menginduksi pembentukan ikatan senyawa terhadap substrat atau enzim mikroba. Berdasarkan penelitian tersebut menunjukkann adanya kesamaan yang memiliki aktivitas antibakteri yaitu kelompok senyawa fenolik. 12

15 KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka dapat diambil kesimpulan bahwa : 1. Ekstrak etanol daun tumbuhan sala memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae. 2. Senyawa yang mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, dan Klebsiella pneumoniae merupakan golongan fenolik. Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun tumbuhan sala menggunakan metode dilusi padat dengan melihat Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) 2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk melihat senyawa pada golongan fenol yang memiliki aktivitas antibakteri. DAFTAR ACUAN Afjalus, MD, Siraj., Malik, S., Emrul, H., Sanjana, S., 2013, Evaluation Of Neuropharmacological Antibacterial and Antinociceptiv Activity Of Methanolic Extract Of The Bark Of Cynometra Ramiflora, Int. J. Res. Ayurveda Pharm, 4(2), Akiyama, Hisanori, Fujii, K., Yamasaki, O., Oono, T., & Iwatsuki, K., 2001, Antibacterial Action of Several Tannins Against Staphylococcus aureus, Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 48, Ansel, H. C., 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi Edisi IV, diterjemahkan oleh Ibrahim, F., , Jakarta, UI Press. Aswal, B. S., Goel, A. K., Kulshrestha, D. K., Mehrotra, N., & Patnaik, G. K., 1996, Screening of Indian plants for biological activity, Indian Journal of Experimental Biology, 34, Brisse, S., Fevre, C., Passer, V., Jeanjeanz, S. I., Tournebize, R., & Diancourt, L., et al., 2009, Virulent Clones of Klebsiella pneumoniae Identification and 13

16 Evolutionary Scenario Based on Genomic and Phenotypic Charaterization, Plos One, 4. Cowan, M. M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology Reviews, 12 (4), Entjang, I., 2003, Mikrobiologi dan Parasitologi Untuk Akademi Perawatan, 52, 105, Bandung, PT. Citra Aditya Bakti. Handa, S. S., 2008, Extraction Technologies for Medicinal and Aromatic Plants, 22, Italy, UNIDO. Jawetz, E., Melnick, J. L., & Adelberg, E. A., 2005, Mikrobiologi Kedokteran Edisi XXII, diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih, N. M., Harsono, S., Alimsardjono, L., 49, 79-80, , , Jakarta, Salemba Medika. Jawetz, E., Melnick, J. L., & Adelberg, E. A., 2001, Mikrobiologi Kedokteran, Edisi XXII, diterjemahkan oleh Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Airlangga, , , Jakarta, Salemba Medika. Khan, M. A., Paul, P., & Islam, M. T., Phytochemical and pharmacological screening of Shingra (Cynometra ramiflora Linn., Family: Leguminosae) bark based on its traditional uses. Department of Pharmacy Southern University. Kusumaningtyas, E., Astuti, E. & Darmono., 2008, Sensitivitas Metode Bioautografi Kontak dan Agar Overlay dalam Penentuan Senyawa Antikapang, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 6 (2), Lakshmi, V., Goel, A.k., Srivastava, M.N., & Raghubir, R., 2010, Bioactivity of Marine Organism: Part XI Screening of some Marine Flora from the Indian Coasts, Central Drug Research Institute, Lucknow, , India. Lindquist, J., 2010, new homepage, complete site outside. Departement of Bacteriology, U. W. Madison, diakses tanggal 17 Oktober Motoyama, Y., Yamaguchi, N., Matsumoto, M., Ichijo, T., Nagumo, H., & Kagami, N., et al., 2009, Staphylococcus epidermidis Form Floating Micro-colonies in Platelet Concentrates at the Early Stage of Comtamination, Journal of Health Science, 55 (5), Pratiwi, S.T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, 174, 188, , Jakarta, Erlangga. 14

17 Priyanto, 2008, Farmakologi Dasar untuk Mahasiswa Keperawatan dan Farmasi, 83, Bandung, Leskonfi. Salle, A. J., 1961, Fundamental Principles of Bacteriology,5th Edition, 719, 738, New York, Mc. Graw Hill Company Inc. Santosa, C. M., & Hertiana, T., 2005, Phytochemichal Compounds and The Effect of bangun-bangun Leaves (Coleus amboinicus,l.) Water Extract on Phagocytosis Activity of Neutrophil Cell Rat (Rattus norveigus), Majalah Farmasi Indonesia, 16 (3), Sari, D. P., 2013, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Tumbuhan Sala (Cynometra ramiflora L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Klebsiella pneumoniae serta Bioautografinya, Skripsi, Universitas Muhammadiyah Surakarta. Sa adah, L., 2010, Isolasi dan Identifikasi Senyawa Tanin dari Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.), Skripsi, Universitas Islam Negeri Malang. Soerianegara, I. & R. H. M. J. Lemmens, eds Timber trees: Major commercial timbers. In: Plant Resources of South-East Asia. Prosea 5 (1), 155. Sujudi, Syahrurachman, A., Chatim, A., Soebandrio, A, W., Karuniawati, A., & Santoso, A. U. S., et al., 1993, Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran Edisi Revisi, Jakarta, Binarupa Aksara. Tiwari, P., Rahuja N., Kumar, R., Lakshmi.V., Srivastava, N. M., & Agarwal. C. S., et al., 2008, Search for antihyperglycemic activity in few marine flora and fauna. Indian Journal of Science and Technology. 1 (5), 1-5. Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur, G., & Kaur, H., 2011, Phytochemical Screening and Extraction: A Review, Internationale Pharmaceutica Sciencia, 1 (1), Todar s, K., Medison, P., & Wisconsin., 2004, Online Textbook of Bacteriology, Science Magazine, Vol. 304, (diakses pada tanggal 12 Juli 2013). Wagner, H., & Bladt, S., 1996, Plant Drug Analisys: A Thin Layer Chromatography Atlas, Second Ed., 350, New York, Springer. Windyasmorowati, W., Indrayudha, P., & Mayasari H. F., 2010, Buku Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Farmasi, Laboratorium Mikrobiologi Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. 15