Lampiran 1. Komposisi Media. 1. MH (Mueler Hinton) 2. Sabouraud Dextrose Agar. Komposisi: Komposisi : Mycological peptone. Beef Dehidrate Infusion

Transkripsi

1 48

2 49 Lampiran 1. Komposisi Media 1. MH (Mueler Hinton) Komposisi : 2. Sabouraud Dextrose Agar Komposisi: Beef Dehidrate Infusion 300,0 g Mycological peptone 10,0 g Casein Hydrolysate 17,5 g Glukosa 40,0 g Amilum 1,5 g Agar 15,0 g Agar-agar 17,0 g Akuades hingga 1 liter ph akhir 5,6 Akuades hingga 1 liter ph akhir 7,3 3. BHI (Brain Heart Infusion) Komposisi : Caft Brain Infusion Padat Beef Heart Infusion Padat 12,5 g 5,0 g Protease Pepton10,0 g Glukose Sodium Cloride Di-sodium Phosphate 2,0 g 5,0 g 2,5 g Akuades hingga 1 liter ph akhir 7,4

3 50 Lampiran 2. Komposisi Standar Mc Farland Bahan-bahan yang digunakan dalam standar McFarland antara lain: Larutan 1 : 1% Barium Klorida encer (1% wt/vol BaCl 2 ) Larutan 2 : 1% Asam Sulfat encer (1% wt/vol H 2 SOH 4 ) Tabel Berbagai Macam Standar McFarland Standar McFarland No. 1 No. 2 No. 3 No. 4 No. 5 No. 6 No. 7 No. 8 No. 9 No. 10 0,1 ml Barium Klorida dalam 9,9 ml Asam Sulfat 0,2 ml Barium Klorida dalam 9,8 ml Asam Sulfat 0,3 ml Barium Klorida dalam 9,7 ml Asam Sulfat 0,4 ml Barium Klorida dalam 9,6 ml Asam Sulfat 0,5 ml Barium Klorida dalam 9,5 ml Asam Sulfat 0,6 ml Barium Klorida dalam 9,4 ml Asam Sulfat 0,7 ml Barium Klorida dalam 9,3 ml Asam Sulfat 0,8 ml Barium Klorida dalam 9,2 ml Asam Sulfat 0,9 ml Barium Klorida dalam 9,1 ml Asam Sulfat 1,0 ml Barium Klorida dalam 9,0 ml Asam Sulfat Standar McFarland tersedia di pasaran (Whitman dan MacNair, 2010).

4 51 Lampiran 3. Komposisi Cat Gram 1. Cat Gram A (Warna ungu) Kristal violet Alkohol 96% : 2 g : 20 ml 2. Cat Gram B (Warna coklat) Iodium Kalium iodium Akuades : 1 g : 2 g : 300 ml 3. Cat Gram C (Tak berwarna) Aseton Alkohol : 30 ml : 70 ml 4. Cat Gram D (Warna merah) Safranin Alkohol 96% Akuades : 1 g : 10 ml : 90 ml

5 Lampiran 4. Tabel Interpretasi Diameter Zona Hambatan Standar Antibiotik (Harmita dan Radji, 2008) 52

6 53 Lampiran 5. Hasil Uji Sensitivitas Bakteri S. aureus dan E. coli terhadap Antibiotik Ampisilin (A), Kloramfenikol (C), Eritromisin (E), Tetrasiklin (TE) Tabel Hasil Uji Sensitivitas Bakteri S. aureus dan E. coli Potensi S. aureus E. coli disk Disk antibiotic Zona hambat Zona hambat antibiotik Keterangan (mm) (mm) (µg) Keterangan Tetrasiklin Intermediet 33 Sensitif Ampisillin 10 14,5 Sensitif 25 Sensitif Kloramfenikol Sensitif 22 Sensitif Eritromisin Sensitif 17 Sensitif S. aureus E. coli

7 54 Lampiran 6. Perhitungan 1. Pembuatan larutan stok 10% b/v. Satu gram ekstrak etanol rimpang lempuyang pahit disuspensikan dengan CMC Na 1% 10 ml. Seri konsentrasi akhir yang diinginkan adalah 4% b/v, 3% b/v, 2% b/v 1% b/v; 0,5% b/v; 0,25% b/v dan 0,125% b/v. 2. Pembuatan larutan stok 20% b/v. Dua gram ekstrak etanol rimpang lempuyang pahit disuspensikan dengan CMC Na 1% 10 ml. Seri konsentrasi akhir yang diinginkan adalah 8% b/v, 7% b/v, 6% b/v dan 5% b/v. 3. Perhitungan Konsentrasi Ekstrak Etanol Rimpang Lempuyang Pahit a. Konsentrasi 4 % b/v V 1 x 10% = 5 ml x 4% V 1 = 2 ml Untuk memperoleh seri konsentrasi 4 % dalam tabung yang telah di tambah media 3 ml media, maka dibutuhkan 2 ml larutan stok 10 %. b. Konsentrasi 3 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 3 % C 1 = 7,5 % Volume pengambilan larutan stok 10%: 7,5% x 2 ml= 1,5 ml 10% Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 3% dimasukkan 1,5 ml larutan stok 10% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml.

8 55 Lampiran 6. Lanjutan c. Konsentrasi 2 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 2 % C 1 = 5 % Volume pengambilan larutan stok 10%: 5% x 2 ml = 1 ml 10% Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 2% dimasukkan 1 ml larutan stok 10% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml. d. Konsentrasi 1 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 1 % C 1 = 2,5 % Volume pengambilan larutan stok 10%: 2,5% x 2 ml = 0,5 ml 10% Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 1% dimasukkan 0,5 ml larutan stok 10% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml. e. Konsentrasi 0,5 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 0,5 % C 1 = 1,25 % Volume pengambilan larutan stok 10%: 1,25% x 2 ml = 0,25 ml 10%

9 56 Lampiran 6. Lanjutan Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 0,5% dimasukkan 0,25 ml larutan stok 10% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml. f. Konsentrasi 0,25 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 0,25 % C 1 = 0,625 % Volume pengambilan larutan stok 10%: 0,625% x 2 ml= 0,125 ml 10% Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 0,25% dimasukkan 0,125 ml larutan stok 10% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml. g. Konsentrasi 0,125 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 0,125 % C 1 = 0,3125 % Volume pengambilan larutan stok 10%: 0,3125% x 2 ml= 0,0625 ml 10% Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 0,125% dimasukkan 0,0625 ml larutan stok 10% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml. h. Konsentrasi 8 % b/v V 1 x 20% = 5 ml x 8% V 1 = 2 ml

10 57 Lampiran 6. Lanjutan Untuk memperoleh seri konsentrasi 8 % dalam tabung yang telah ditambah media 3 ml media, maka dibutuhkan 2 ml larutan stok 20 %. i. Konsentrasi 7 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 7% C 1 = 17,5 % Volume pengambilan larutan stok 20%: 17,5% x 2 ml =1,75 ml 20% Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 7 % dimasukkan 1,75 ml larutan stok 20% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml. j. Konsentrasi 6 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 6 % C 1 = 15% Volume pengambilan larutan stok 20%: 15% x 2 ml =1, 5 ml 20% Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 6 % dimasukkan 1,5 ml larutan stok 20% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml. k. Konsentrasi 5 % b/v 2 ml x C 1 = 5 ml x 5 % C 1 = 12,5 % Volume pengambilan larutan stok 20%: 12,5% x 2 ml = 1,25 ml 20%

11 58 Lampiran 6. Lanjutan Untuk memperoleh konsentrasi ekstrak 5 % dimasukkan 1,25 ml larutan stok 20% dan ad 2 ml suspending agent kemudian di tambah media 3 ml media, sehingga volume akhir tabung 5 ml.

12 59 Lampiran 7. Alat Penelitian 1. Autoklaf 2. Oven 2. Inkubator untuk Bakteri 3. Inkubator untuk Jamur 5. Laminar Air Flow (LAF)