5 detik dan berada dalam gemngan nitrogen cair (Senger 1980). Waktu. pengambilan sampel semen beku dalam proses pernindahan dari kontainer depo

Transkripsi

1 111. BAHAN DAN METODE 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian Pengujian kualitas semen beku dilakuican di Laboratorium Fisiologi Reproduksi dan Inseminasi Buatan, Bagian Reproduksi clan Kebidaaan Fakultas Kedokteran Hewan lnstitut P&an Bogor. Koleksi data mengenai teknik penanganim dan sampel semen beku diambil pada setiap tahap jalur distribusi. Penelitian berlangmg selama tujuh bulan mulai bulan April sarnpai dengan Oktober 3.2 Bahan dan Peralatan Penelitian Semen Beku qrozen semen) Semen beku yang digunakan adalah produksi BIB Lembang dan Singosari. - Sebanyak 383 sampel straw diambil mengikuti tahapan jalur distribusi yang meliputi : sampel yang belum didistribusikan (BIB Lembang dan BIB Singosari) dan sampel yang telah didistribusikan, yaitu Propinsi (Satuan Pelaksanaan Insemimi BuatadSPIB-I), Kabupaten (SPIB-11), Pos IB clan Inserninator. Sampel semen beku yang diambil dimasukkan ke aalam kontainer berisi nitrogen cair, dengan maksud untuk menghindari terjadinya kerusakan. Waktu pengambilan sampel semen beku dalam proses pernindahan dari kontainer depo (storage confainer) lapangan ke kontainer transpor dengan ketentuan selalu di bawah 5 detik dan berada dalam gemngan nitrogen cair (Senger 1980).

2 3.2.2 Bahan dan Alat-Alat Bahan yang digunakan meliputi semen beku, NaCl 0,031 M (lanttan hipotonik), NaCl fisiologis, akuadestilatz, nitrogen cair dan alkohol. Peralatan yang dipakai adalah mikroskop, kontainer (storage and transport container), kamar hitung Neubaeur, gelas obyek, gelas penutup (cover glass), penghitung (counter), hemositometer, inkubator dan pinset pengambil straw. 33 Prosedur Penelitian 33.1 Pelaksanaan Metode Survey Untuk mengetahui teknik penanganan semen beku ymg dilakukan deh petugas inseminasi buatan, dilakukan survey terhadap petugas yang fnenangani semen beku secara langsung di lapqan. Penentuan lokasi penelitian pada tingkat propinsi (Satuan Pelaksana Inseminasi Buatan - VSPIB-I) dan kabupaten (SPIB-11) adalah mengikuti metode penarikan contoh secara purposive berdasarkan kriteria a) pelaksanaan IB sangat intensif dan b) propinsi tersebut pernah dijadikan sebagai lokasi evaluasi IB pada tahun-tahun sebelumnya. Parameter pengamatan terhadap penanganan semen beku yang dapat mempengaruhi kualitas semen beku addah 1) tempat plaksanaan thawing, 2) lama thawing, 3) lama inseminasi, 4) teknik pengangkatan atau pemindahan senen beku antar kontainer, 5) pe- pinset dm 6) keadaan nitrogen cair. B- ktiteria tersebut dipe*hleh sebanyak tujuh ' propinsi dan setiap propimi diarnbil dua kabupaten, sebagaimana disajikan pada

3 Tabel 3. Nama-narna propimi dan kabupaten yang dijdikan sebagai lokasi penelitian No Propinsi Kabupaten (SPIB-I) (SPIB-11) 1 Sumatera Barat Agam Tanah Datar 2 Jawa Barat Ciamis Sumedang 3 Jaw Tengah DI Yogyakarta Jawa Timur Karanganyar Magelang Gunung Kidul Sleman Lamongan Gresik Sulawei Selatan Maros Takalar 7 Nusa Tenggara Barat Lombok Barat Lombok Tengah Lokasi kabupaten yang terpilih, dilakukan sampling terhadap pos IB dan inseminator den-gan menggunakan metode acak sederhana (simple random sampling). Semen beku yang akan dijadikan sekqai sampel pelitian diambil pada setiap tahap jalur distribusi dengan mengikuti metode acak sederhana Pemeriksaan Kualitas Semen Beku Secara Laboratoris Semen beku yang akan dievaluasi hams dilakukan pencairan kembali (thawing) dengan mengikuti metode Pace et al. (1981) pada sapi. Plastik straw yang berisi semen beku yang terendam dalam N2 cair diambil dengan pinset, kemudian

4 langsung dicdupkan ke daiam air bersuhu 37'~ selart~a 30 detik. Ada tiga jcnis parameter yang ditentukan rneldui pemeriksaan mikroskapis, yaitu a) pengukuran konsentrasi semen beku, b) persentase motilitas spermatozoa atau post thawing motility (PTM) dan c) persentase membran plasma utuh (MPU) Melalui pengukuran konsentrasi dan persentase motilitas dapat diketahui besarnya jumlah atau konsentrasi spermatozoa yang motil untuk setiap strawnya. Staodar Nasional Indonesia (SNI) teiah menetapkan bahwa konsentrasi spermatozoa minimal 25 juta/0,25 ml dan PTM minimal 40%. Dengan demikian dapat diketahui bahwa di dalam straw ferkandung spermatozoa yang motil sebanyak 10 jub spermatozoa/0,25 ml Pengukuran Konsentrasi Pengukuran konsentrasi spermatozoa dihitung secara kuantitatif, menggunakan kamar hitung Neubaeur. Semen diencerkan ke dalam tabung hemositometer khusus untuk leukosit dengan cara mengisi semen sampai 1 kemudian ditambahkan NaCl fisiologis sampai angka 11, sehingga diperoleh pengenceran sebesar 10 kali. Tabung yang telah berisi semen tadi, dhinogenkm dengan cara memutar tabung membentuk angka delapan. Semen beku yang telah tercampur homogen dengan NaCl fisiologis daiam tabung leukosit, sebagian dibuang terutama yang berada di ujung tabung dengan cara menyentuhkan ujwg tabung dengan kertas saring. Campuran homogen semen beh dengan NaCl fisiologis dalam gelembung tabung leukosit dihitung kandungan spermatozoanya. Penghitungan dilakukan dengan cara menyentuhkan ujung tabung t

5 L leukosit pada sisi cover glass yaw menutup kamar hitung Neubauer sehingga campuran homogen tersebut mengalir ke dalam kamar hitung Neubauer. Penghitungan konsentrasi dapat diketahui dari jumlah selusuh spermatozoa dalam lima kotak besar atau 80 kotak kecil. Secara ringkas untuk menghtung konsentrasi digunakan rumus : Konsentrasi (sperma/0,2s ml) = Penrzenceran x x total smrmatoma dihitung 4 i Penghitungan Persentase Motilitas Spermatozoa Penghitungan terhadap persentase motilitas spermatozoa berdasarkan jumlah spermatozoa yang bergerak progresif ke depan, dengan cara mqhitung jumlah spermatozoa yang mati (sperma tidak bergerak (irnrnotil), bergerolk di tempat, berputar, mundur dan bergerak oskilatoris) pada lima kotak besar kamar hittug hemositometer (empat kotak pada setiap sudut dan satu kotak di tengah). Setelah jumlah spermatozoa yang mati di dalam lima kotak dihitung, kemudian dibisukan pada suhu ruang sampai sekitar satu sampai dua jam atau dengan cara pemanasan hingga semua spermatozoa mati clan terimobilisasi pada gelas henmitometer Neubauer agar mudah dalam penghituqgan. Penghitungan kembali dilakukan pada 5 kotak hemositometer untuk mengetahui total seluruh spermatozoa. Hasil P-an antara total seluruh spermatozoa dengan spermatozoa yang mati w a n spermatozoa yang bergerak progresif (bergerak lurus ke depan'). Untuk mengetahui persentase motilitas spermatozoa dilakukan dengan cam membagikan total spern~atozoa yang bergerak progresif dengan total seluruh spermatoma dikalikan 100%, sebagaimana terlihat pada rumus di bawah ini. 25

6 Pementase Motilitas Spermatozoa = Suermatozoa Bernerak Pronresif x 100% Total Seluruh Spermatozoa Penghitungan Persentase Membran Plasma Utuh Pemeriksaan terhadap membran plasma utuh (MPU) dilakukm memakai uji yang pernah dilakukan oleh Jeyendran dan Zaneveld (1984), yaitu hypoosmotic swelling test (HOS test). Prosedur pemeriksaamya adalah dengan menggunakan modifikasi medium HOS benrpa NaCl hipotonik 0,03 1 M (0,179 g NaCl di dalam 100 ml akuades). Sebanyak 0,l ml semen dicampurkan ke dalarn 4,9 ml medium HOS lalu diinkubasi selama 45 menit pada suhu 37'~. Kemudian diperiksa dibawah mikroskop dengan pembesaran 40 kali. Jumlah spermatozoa yang dihitung adalah sebanyak 200 spermatozoa. Semen yang diperiksa akan terlihat adanya perubahan morfologik spermatozoa bila diinkubasi dengan medium HOS. Perubahan init'akan dicirikan oleh pembengkakan di bagian ujung ekor, lengkungan &or, &or yang memendek clan menebal yang menunjukkan utuhnya membran spermatozoa. 3.4 Pengolahan Data Ulltuk memperoleh informasi tentang teknik penanganan semen beku oleh, petwas IB dilakukan melaiui bantuan kuisicmer (metode survey). Data yang terkompilasi melalui metode survey dievaluasi menggunakan analisis deskriptif. Sedangkan data yang diperoleh dari pemeriksaan kualitas semen beku diolah dengan menggunakan sidik ragam (analysis of variance) dengan bantuan statistical andysis system (S AS). 26