Lampiran 1. Pengambilan Sampel Daun Rhizophora mucronata Lamk. dari Kawasan Wisata Alam Angke Kapuk, Jakarta Utara.

Transkripsi

1 Lampiran 1. Pengambilan Sampel Daun Rhizophora mucronata Lamk. dari Kawasan Wisata Alam Angke Kapuk, Jakarta Utara. a. Stasiun Pengambilan Sampel Daun Rhizophora mucronata Lamk. No Stasiun Plot Kualitas Air 1 Stasiun 1 S : E : Stasiun 2 S : E : Stasiun 3 S : E : S : E : Suhu : 33 C ph : 7.49 Salinitas : b. Lokasi Pengambilan Sampel Daun Rhizophora mucronata Lamk. Stasiun 1 Stasiun 2 Stasiun 3 66

2 67 Lampiran 2. Pembuatan Serbuk Kering Daun Rhizophora mucronata Lamk. Sampel Basah Sampel Kering Sampel Dihaluskan Serbuk Kasar Sampel Diayak Serbuk Halus Daun Rhizophora mucronata Lamk.

3 68 Lampiran 3. Ekstraksi Daun Rhizophora mucronata Lamk. dengan Metode Maserasi Bertingkat Proses Maserasi Pemisahan Filtrat Pemasangan dan Residu Labu Evaporasi Filtrat n-heksan Hasil Maserasi ke- 1, ke-2, dan ke- 3

4 69 Filtrat Etil Asetat Hasil Maserasi ke- 1, ke-2, dan ke- 3 Filtrat Butanol Hasil Maserasi ke- 1, ke-2, dan ke- 3 Proses Evaporasi

5 70 Lampiran 4. Perhitungan Nilai Rendemen Ekstrak Daun Rhizophora mucronata Lamk. a. b. c.

6 71 Lampiran 5. Pembuatan Larutan Stok dan Pengenceran pada Uji In Vitro A. Larutan Stok Ekstrak n-heksan/ekstrak Etil Asetat/Ekstrak n-butanol ppm dalam Akuades Steril Konsentrasi Ekstrak ppm = x x 10 ml = 100 mg = 0,1 g = ekstrak 0,1 g dilarutkan hingga 10 ml B. Pengenceran Konsentrasi Ekstrak n-heksan/ekstrak Etil Asetat/Ekstrak n- butanol dari Larutan Stok ppm Konsentrasi 1000 ppm V1 x M1 = V2 x M2 10 ml x 1000 = V2 x V2 = 1 ml 1 ml dari larutan stok Ekstrak n-heksan/ekstrak Etil Asetat/Ekstrak n-butanol ppm ditambah akuades steril hingga 10 ml Konsentrasi 100 ppm V1 x M1 = V2 x M2 10 ml x 100 = V2 x V2 = 0,1 ml 0,1 ml dari larutan stok Ekstrak n-heksan/ekstrak Etil Asetat/Ekstrak n- butanol ppm ditambah akuades steril hingga 10 ml Konsentrasi 10 ppm V1 x M1 = V2 x M2 10 ml x 10 = V2 x V2 = 0,01 ml 0,01 ml dari larutan stok Ekstrak n-heksan/ekstrak Etil Asetat/Ekstrak butanol ppm ditambah akuades steril hingga 10 ml

7 72 C. Larutan Kloramfenikol 30 ppm Konsentrasi 30 ppm = = 0,3 mg = 0,0003 g = kloramfenikol 0,0003 g dilarutkan dalam 10 ml Pengenceran Ekstrak n-heksan Pengenceran Ekstrak Etil Asetat Larutan konsentrasi dihomogenkan

8 73 Lampiran 6. Pembuatan Media Nutrien Agar Laut (NA Laut) 1. Siapkan erlenmeyer yang sudah steril 2. Masukkan Nutrien Agar (NA) sebanyak 7 gram ke dalam 250 ml air laut yang sudah steril. 3. Letakkan erlenmeyer yang sudah berisi NA laut tersebut ke atas hot plate, panaskan sampai mendidih sambil diaduk dengan menggunakan magnet stirrer. 4. Setelah mendidih, Nutrien Agar Laut diangkat kemudian ambil magnet stirrer. Nutrien Agar Laut siap digunakan. Media Nutrien Agar Laut

9 74 Lampiran 7. Pembiakan Bakteri Vibrio harveyi 1. Siapkan stok koloni bakteri Vibrio harveyi awal. 2. Siapkan media Nutrien Agar (NA) laut. 3. Siapkan cawan petri yang sudah steril, kemudian masukkan media NA laut ke dalam cawan petri. 4. Tunggu media NA laut sampai berbentuk agar. 5. Setelah terbentuk agar, ambil koloni bakteri Vibrio harveyi pada media stok dengan menggunakan jarum ose (1-2 ose) dan oleskan ke media NA laut. 6. Kemudian tutup kembali cawan petri media NA laut dan media stok koloni bakteri Vibrio harveyi. 7. Media NA laut pembiakan bakteri Vibrio harveyi dimasukkan ke dalam inkubator dengan temperatur 37 C sedangkan media stok koloni bakteri Vibrio harveyi dimasukkan ke dalam lemari pendingin. 8. Tunggu sampai 1-2 hari biakan bakteri di inkubator. 9. Pembiakan berhasil dapat dilihat dari permukaan media berwarna putih. 10. Pembiakan siap digunakan dan apabila belum dipakai masukkan ke dalam lemari pendingin. Semua proses yang dilakukan berada di ruang laminar dan aseptis, hal ini dilakukan untuk menjaga setiap perlakuan tidak terjadi kontaminasi. Bakteri Vibrio harveyi yang telah diremajakan

10 75 Lampiran 8. Pembuatan Larutan Bakteri Vibrio harveyi Kepadatan 10 7 CFU/ml 1. Isolat bakteri uji dengan kepadatan 10 7 sel bakteri yang telah dikultur diambil dengan menggunakan jarum ose (2-3 ose) kemudian dilarutkan ke dalam air laut steril sebanyak 10 ml. 2. Bandingkan larutan bakteri yang telah dilakukan dengan larutan Mc Farland. Larutan Mc Farland 0,5 terdiri dari: 0,05 ml larutan BaCl 2 + 9,95 ml larutan H 2 SO 4 Perbandingan kekeruhan Larutan Bakteri dengan Mc Farland 0,5

11 76 Lampiran 9. Proses Uji In Vitro (a) (b) (a) Proses Penambahan Larutan Bakteri sebanyak 0,1 ml (b) Larutan Bakteri diratakan dengan Menggunakan L glass Perendaman paper disk pada masing-masing konsentrasi ekstrak Paper disk diangin-anginkan sebelum diletakkan pada media NA yang telah dioleskan larutan bakteri Vibrio harveyi

12 77 Lampiran 10. Pengukuran Besar Zona Hambat pada Uji In Vitro Pengukuran Besar Zona Hambat dengan Menggunakan Jangka Sorong a. Zona Hambat Ekstrak n-heksan 10 ppm 100 ppm 1000 ppm ppm

13 78 b. Zona Hambat Ekstrak Etil Asetat 10 ppm 100 ppm 1000 ppm ppm c. Zona Hambat Ekstrak Butanol 10 ppm 100 ppm

14 ppm ppm d. Zona Hambat Kontrol Positif Kloramfenikol (Kontrol +)

15 80 Lampiran 11. Pengenceran Konsentrasi Ekstrak Butanol Daun Rhizophora mucronata Lamk. pada saat LC 50 Larutan Stok Ekstrak Butanol ppm dalam 300 ml Air Laut Konsentrasi Ekstrak ppm = x x 300 ml = 3000 mg = 3 g = ekstrak 3 g dilarutkan dalam 300 ml air laut Pengenceran Konsentrasi Ekstrak Butanol dari Larutan Stok ppm Konsentrasi 1000 ppm V1 x M1 = V2 x M2 300 ml x 1000 = V2 x V2 = 30 ml 30 ml dari larutan stok Ekstrak butanol ppm ditambah air laut hingga 300 ml Konsentrasi 100 ppm V1 x M1 = V2 x M2 300 ml x 100 = V2 x V2 = 3 ml 3 ml dari larutan stok Ekstrak butanol ppm ditambah air laut hingga 300 ml Konsentrasi 10 ppm V1 x M1 = V2 x M2 300 ml x 10 = V2 x V2 = 0,3 ml 0,3 ml dari larutan stok Ekstrak butanol ppm ditambah air laut hingga 300 ml

16 81 Pengenceran Ekstrak Butanol Pengamatan Mortalitas Udang Windu pada Saat LC 50

17 82 Lampiran 12. Mortalitas Udang Windu pada Saat LC jam Menggunakan Ekstrak Butanol Daun Rhizophora mucronata Lamk. Konsentrasi Waktu Kontrol 10 ppm 100 ppm 1000 ppm ppm Dedah menit menit jam jam jam jam jam jam jam jam Total Keterangan: dalam setiap akuarium terdapat 6 ekor benih udang windu

18 83 Lampiran 13. Hasil Perhitungan LC 50 dengan Menggunakan EPA Probit EPA PROBIT ANALYSIS PROGRAM USED FOR CALCULATING LC/EC VALUES Version 1.5 LC 50 48_Penaeusmonodon_EkstrakButanol Conc. Proportion Observed Predicted Number Number Responding Proportion Proportion Exposed Resp. Adjusted Responding Responding for Controls Chi - Square for Heterogeneity (calculated) = Chi - Square for Heterogeneity (tabular value at 0.05 level) = Mu = Sigma = Parameter Estimate Std. Err. 95% Confidence Limits Intercept ( , ) Slope ( , ) Theoretical Spontaneous Response Rate =

19 84 LC 50 48_Penaeusmonodon_EkstrakButanol Estimated LC/EC Values and Confidence Limits Point Exposure 95% Confidence Limits Conc. Lower Upper LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC LC/EC

20 85 Lampiran 14. Konsentrasi Ekstrak Butanol Daun Rhizophora mucronata Lamk. pada saat Uji In Vivo Berdasarkan hasil dari LC 50 didapat nilai konsentrasi yang digunakan adalah 455,772 ppm, maka: A. Kontrol 0% = (tanpa perendaman ekstrak) B. Konsentrasi 25% = 455,772 x 0,25 = 113,943 ppm C. Konsentrasi 50% = 455,772 x 0,5 = 227,886 ppm D. Konsentrasi 75% = 455,772 x 0,75 = 341,829 ppm E. Konsentrasi 100% = 455,772 x 1 = 455,772 ppm Larutan Ekstrak Butanol Untuk Perendaman Udang Windu Saat In Vivo Tata Letak Penempatan Akuarium Saat Uji In Vivo