UJI TOKSISITAS AKUT FRAKSI ETIL ASETAT DAUN PILADANG (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) TERHADAP MENCIT PUTIH JANTAN

Transkripsi

1 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 UJI TOKSISITAS AKUT FRAKSI ETIL ASETAT DAUN PILADANG (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) TERHADAP MENCIT PUTIH JANTAN Mimi Aria, Afdhil Arel, Nella Widya Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia Yayasan Perintis Padang mimiaria17@gmail.com ABSTRAK Telah diteliti efek toksisitas akut fraksi etil asetat Solenostemon scutellarioides L. Codd pada tikus putih jantan. Hewan uji dibagi menjadi enam kelompok: kelompok I () hanya diberi Na CMC,5% dan 5 kelompok lainnya perlakuan yang diberikan fraksi etil asetat Solenostemon scutellarioides (L). Codd yaitu kelompok II (dosis 1 mg / Kg), kelompok III ( mg / kg), kelompok IV (dosis mg / kg), kelompok V (dosis mg / kg), kelompok VI (dosis. mg/kgbb). Jumlah hewan yang mati dalam jam dan nilai LD5 ditentukan. Pengamatan dilanjutkan selama 1 hari pada hewan yang masih hidup dengan parameter berat badan, konsumsi makanan, berat feses, konsumsi minuman, volume urine dan berat hati dan ginjal dan pengamatan mikroskopis pada hati dan ginjal. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi asetat daun etil S. scutellarioides tidak menyebabkan kematian hingga dosis yang diberikan (. mg/kg) sehingga nilai LD5 tidak dapat ditentukan. Berdasarkan analisis ANOVA ada perbedaan yang signifikan (P <,5) pada data konsumsi pangan, berat feses, minum konsumsi, volume urine, dan berat hati tapi berat badan dan ginjal tidak perbedaan yang signifikan (P,5). Pengamatan warna hati dan ginjal tidak memperlihatkan perbedaan yang jelas. Kata kunci : Piladang, Solenostemon scutellarioides, toksisitas akut ABSTRACT The acute toxicity test of ethyl acetate fraction Solenostemon scutellarioides (L.) Codd in male white mice has been studied. The animals were divided into six groups : Group I (control) only given Na CMC,5% and 5 other groups treatment given ethyl acetate fraction Solenostemon scutellarioides L. Codd: group II (dose of 1 mg/kg), group III ( mg/kg), group IV (dose of mg/kg), group V (dose of mg/kg), group VI (dose of.mg/kgbb). Number of death animals was observed and recorded in hours and LD 5 value was determined. Observation was done for surviving animals in 1 days to determine body weight, food consumption, stool weight, drink consumption, urine volume and weight of liver and kidney and microscopic observation of the liver and kidney. The result showed that S. scutellarioides leaf ethyl acetate fraction didnot cause death until given dose (. mg/kg) so that LD 5 value couldn t be determined. Based on ANOVA analysis there were significant difference (P<,5) on data of food consumption, stool weight, drink consumption, urine volume, and weight of liver but body weight and edge of kidneys not significant difference (P,5). Color observations liver and kidney not clearly visible difference. Keywords : Piladang, Solenostemon scutellarioides, the acute toxicity. PENDAHULUAN Dewasa ini penelitian dan pengembangan tumbuhan obat baik di dalam maupun di luar negeri berkembang pesat. Penelitian yang berkembang terutama pada segi farmakologi maupun fitokimia, berdasarkan indikasi tumbuhan obat yang ISSN :

2 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 telah digunakan oleh sebagian masyarakat dengan khasiat yang teruji secara empiris. Hasil penelitian tersebut tentunya lebih memantapkan para pengguna tumbuhan obat akan khasiat maupun kegunaannya (Dalimartha, 3). Salah satu tumbuhan obat yang masih dalam pengembangan adalah Solenostemon scutellarioides (L.) Codd yang di Indonesia dikenal dengan nama iler atau miana. Tumbuhan ini berupa semak semusim yang banyak tersebar di Indonesia antara lain di pulau Sumatera, Jawa dan Sulawesi (Depkes RI, 199). Secara tradisional tumbuhan ini digunakan dalam bentuk bahan tunggal maupun ramuan untuk penggunaan obat luar dan obat dalam. Bagian-bagian yang dapat digunakan adalah daun dan akar (Kumala, 9). Daun piladang mengandung minyak atsiri, saponin, flavonoid dan polifenol (Kumala, 9). Flavonoid pada tanaman ini berkhasiat sebagai antiinflamasi (Benjamin, 197). Keefektifan fraksi dalam menurunkan volume eksudat dapat dilihat dari pengaruh kandungan senyawa kimia yang terdapat pada masing-masing fraksi. Berdasarkan hasil uji statistiknya bahwa tidak ada perbedaan nyata volume eksudat antara fraksi etil asetat dengan fraksi butanol. Ini menyatakan bahwa fraksi etil asetat memiliki efektivitas yang sama dengan fraksi butanol. Selain itu, juga dilihat dari hasil ekstrak yang di fraksinasi dengan etil asetat juga lebih banyak didapatkan dibanding fraksi lainnya. Oleh karena itu, dilanjutkan penelitian dengan pemilihan fraksi etil asetat daun piladang terhadap uji toksisitas akut (Aria dkk, 15). METODE PENELITIAN Alat Alat yang digunakan adalah seperangkat alat destilasi vakum, rotary evaporator, corong pisah, gelas ukur, sudip, spatel, pipet tetes, botol semprot, erlemeyer, kaca arloji, vial, aluminium foil, lumpang dan alu, timbangan analitik, krus porselen, oven, desikator, furnace, tabung reaksi, plat tetes, cawan penguap, timbangan hewan, kandang hewan dan perlengkapannya, alat suntik, corong, spidol, jam, peralatan bedah, kapas dan tisu. Bahan Bahan yang digunakan adalah ekstrak kental daun piladang (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd), n-heksan, etil asetat, aquadest, Na CMC, kloroform, serbuk Mg, HCl pekat, FeCl 3, norit, asam asetat anhidrat, H SO pekat, H SO N, pereaksi mayer, CHCl 3 amoniak,5n dan makanan mencit. Hewan Percobaan Hewan percobaan yang digunakan adalah mencit putih jantan dengan berat antara -35 g dan berumur -3 bulan. Ekstraksi Daun Piladang (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) Daun piladang yang telah diambil dibersihkan dari pengotor dan ditimbang sebanyak kg, lalu keringkan diudara terbuka yang terlindung dari cahaya matahari langsung. Setelah kering daun dirajang dan dijadikan serbuk dan ditimbang. Kemudian sampel yang telah dtimbang sebanyak gram dimasukkan dalam botol maserasi dan tambahkan etanol 7% sampai terendam. Biarkan di tempat gelap selama 5 hari sambil sesekali diaduk. Pisahkan hasil maserasi dengan penyaringan menggunakan kapas. Ulangi maserasi sebanyak 5 kali sampai diperoleh maserat yang jernih dengan cara yang sama dan seluruh filtrat digabungkan menjadi satu dan diaduk hingga rata, kemudian diuapkan dengan rotary evaporator sampai didapatkan ekstrak kental. Fraksinasi Daun Piladang (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) Ekstrak etanol daun piladang sebanyak 75 g difraksinasi dengan n-heksan dan air dengan perbandingan (1:1) sebanyak 3 ml dalam corong pisah, dikocok secukupnya. Setelah itu dibiarkan sampai terbentuk dua lapisan yaitu lapisan n-heksan dan lapisan air. Perlakuan ini dilakukan beberapa kali pengulangan ISSN :

3 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 sampai lapisan n-heksan terlihat jernih sehingga diperoleh fraksi n-heksan. Lapisan air kemudian difraksinasi dengan etil asetat dilakukan beberapa kali pengulangan seperti perlakuan diatas sehingga diperoleh fraksi etil asetat dan fraksi air. selanjutnya fraksi etil asetat diuapkan dengan rotary evaporator. Persiapan Hewan Percobaan Hewan percobaan yang digunakan adalah mencit putih betina sebanyak ± 3 ekor yang dikelompokkan secara acak menjadi kelompok, dimana tiap-tiap kelompok terdiri dari 5 ekor mencit. Sebelum diperlakukan mencit diaklimatisasi selama 1 minggu dan diberi makan dan minum yang cukup. Dosis Dosis fraksi etil asetat daun piladang (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) yang digunakan terdiri dari 5 variasi dosis : Kelompok 1 = () Na CMC,5% Kelompok = 1 mg/kg BB Kelompok 3 = mg/kg BB Kelompok = mg/kgbb Kelompok 5 = 1. mg/kgbb Kelompok =. mg/kgbb Pemberian Sediaan Uji Dosis yang digunakan adalah 1 mg/kg BB, mg/kg BB, mg/kg BB, 1. mg/kg BB,. mg/kg BB. Sebelum diberikan sediaan uji, hewan percobaan dipuasakan selama 1 jam, setelah itu dilakukan pemberian sediaan uji hanya satu kali pemberian secara peroral. Lalu dilakukan pengamatan selama jam, jika ada yang mati, dicatat. Uji Toksisitas Akut Pengamatan jumlah hewan yang mati dalam jangka selang waktu jam dicatat. Pengamatan dilanjutkan selama 1 hari untuk melihat efek toksik tertunda. Pengamatan Efek Toksik Tertunda Pada mencit yang masih hidup setelah jam sampai 1 hari setelah pemberian sediaan uji, kemudiaan dilakukan pengamatan terhadap : a. Penimbangan berat badan Berat badan masing masing mencit ditimbang dengan timbangan hewan setiap hari. b. Pengukuran konsumsi makanan Pengukuran konsumsi makan dilakukan dengan cara memberikan sejumlah tertentu makanan, lalu setelah jam sisa makanan yang tinggal ditimbang. Selisih antara berat awal makanan yang diberikan dengan berat makanan yang tinggal dinyatakan sebagai konsumsi makanan sehari. c. Pengukuran feses Pengukuran feses dilakukan dengan cara mengandangkan mencit dalam kandang metabolisme, lalu feses yang diekresikan selama jam ditampung dan ditimbang beratnya. d. Pengukuran konsumsi air minum Pengukuran konsumsi air minum dilakukan dengan cara pemberian sejumlah tertentu volume air. Setelah jam diukur volume air yang diberikan dengan volume air yang tinggal dinyatakan sebagai volume air minum sehari. e. Pengukuran volume urin Pengukuran volume urin dilakukan dengan cara mengandangkan mencit dalam kandang metabolisme lalu urin yang diekresikan selama jam ditampung dan diukur volumenya. f. Penentuan berat organ relatif hati dan ginjal Pada hari ke 1 hewan percobaan yang masih hidup dikorbankan dengan cara dislokasi leher. Organ organ seperti hati dan ginjal diambil lalu dibersihkan dan ditimbang selanjutnya ditentukan berat organ relatif terhadap berat badan masing masing hewan percobaan. Keterangan : % ISSN :

4 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 BOR = (Berat relatif organ hati) BO = (Berat organ) BR = (Berat Badan Hewan Saat dikorbankan) g. Pengamatan Makroskopik Organ Hati dan Ginjal Organ Hati dan Ginjal di amati secara visual. Analisa Data Data persentase hewan percobaan yang mati digunakan untuk perhitungan LD 5 dengan menggunakan metode grafik atau metode Farmakope Indonesia, sedangkan data yang diperoleh dari hasil pengamatan efek toksik tertunda diolah menggunakan metode statistik ANOVA arah kecuali untuk berat organ relatif hati dan ginjal diolah menggunakan metode statistik ANOVA 1 arah, kemudian dilanjutkan dengan uji Duncan menggunakan software statistic SPSS17. for Windows Evaluation. HASIL DAN PEMBAHASAN Dari gram daun piladang kering yang telah dirajang dan diserbukkan didapatkan ekstrak kental,9 gram dan rendemennnya 37,1% terhadap sampel kering dan 5, % terhadap sampel segar. Ekstrak kental etanol difraksinasi dengan metode ekstraksi cair-cair untuk mendapatkan fraksi semi polar (etil asetat). Fraksinasi dilakukan untuk memisahkan senyawa yang ada pada daun piladang berdasarkan tingkat kepolarannya. Dari 75 gram ekstrak etanol difraksinasi diperoleh berat fraksi etil asetat 15,1 g. Setelah dilakukan pemeriksaan organoleptis diperoleh data bahwa fraksi etil asetat berupa cairan kental, berwarna coklatkehitaman, berbau khas, dan rasa pahit. Rendemen yang diperoleh dari fraksi etil asetat adalah,%. Berat susut pengeringan fraksi kental etil asetat daun piladang yang diperoleh yaitu,%. Tujuan dilakukan pemeriksaan susut pengeringan adalah untuk mengetahui persentase senyawa yang hilang selama proses pemanasan, tidak hanya air tapi juga senyawa menguap lainnya (Depkes RI, ). Kadar abu dari fraksi kental etil asetat daun piladang yaitu 1,%. Tujuan dilakukan penetapan kadar abu adalah untuk mengetahui dan memberikan gambaran kandungan mineral yang berasal dari awal sampai akhir terbentuknya ekstrak, dimana senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap sehingga tinggal unsur mineral dan senyawa anorganik saja (Depkes RI, ). Pada pemeriksaan metabolit sekunder (skrinning fitokimia) fraksi etil asetat daun piladang mengandung flavonoid, fenolik, alkaloid, dan steroid. Pada uji toksisitas akut dilakukan terhadap mencit putih jantan yang terdiri dari kelompok yang tiap tiap kelompoknya terdiri dari 5 ekor. Pengamatan jumlah hewan yang mati dalam jangka selang waktu jam yaitu tidak ditemukan adanya kematian hewan percobaan sehingga tidak diperoleh nilai LD 5. Pengamatan dilanjutkan selama 1 hari untuk melihat efek toksik tertunda. Parameter yanng diamati yaitu berat badan, konsumsi makanan, berat feses, konsumsi minum, volume urin, pemeriksaan makroskopik organ hati dan ginjal serta penetuan berat relatif organ hati dan ginjal. Uji statistik analisis varian (two way ANOVA) menunjukkan bahwa selisih berat badan mencit putih jantan tidak berbeda secara nyata (P,5) antar kelompok perlakuan namun berbeda nyata antar hari perlakuan. ISSN :

5 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 3 mg/kgbb mg/kgbb 1 1 mg/kgbb Hari Ke - mg/kgbb Gambar 1. Hubungan Dosis dan Hari Terhadap Berat Badan Berdasarkan uji statistik analisis varian didapatkan hasil bahwa konsumsi makanan berbeda secara nyata (P,5) baik antar hari perlakuan maupun antar kelompok perlakuan. konsumsi makanan paling banyak ditunjukkan oleh kelompok dan konsumsi makanan yang paling sedikit ditunjukkan oleh kelompok dosis mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb 1 1 Hari ke Gambar. Hubungan Dosis dan Hari Terhadap Konsumsi Makanan Uji statistik analisis variasi ( two way ANOVA) didapatkan hasil bahwa berat feses berbeda secara nyata (P,5). kelompok dosis merupakan kelompok dosis dengan berat feses terbanyak dan tidak berbeda nyata dengan ISSN : 7-55 kelompok dosis. mg/kgbb, dosis 1. mg/kgbb serta kelompok. Hal ini kemungkinan disebabkan meningkatnya kontraksi usus sehingga feses lebih banyak di keluarkan. 95

6 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 3,5 3,5 1,5 1,5 mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb 1 1 Hari Ke Gambar 3. Hubungan Dosis dan Hari Terhadap Berat Feses Uji statistik analisis (two way ANOVA) volume konsumsi air minum berbeda secara nyata (P,5) antar kelompok perlakuan maupun antar hari perlakuan. Konsumsi minum paling banyak ditunjukkan oleh kelompok dan kelompok dosis 1. mg/kgbb, sedangkan konsumsi minum paling sedikit ditunjukkan oleh kelompok dosis mg/kgbb. Hewan akan banyak minum jika terjadi perangsangan sensasi haus akibat meningkatnya osmolaritas cairan ekstraseluler dan begitu juga sebaliknya (Guyton et al, 1997). 1 1 mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb 1 1 Hari Ke Gambar. Hubungan Dosis dan Hari Terhadap Volume Minum Uji statistik analisis varian (two way ANOVA) menunjukkan bahwa volume urin antar kelompok perlakuan dan antar hari perlakuan berbeda secara nyata (P,5). Volume urin paling banyak ISSN : 7-55 ditunjukkan oleh kelompok dan kelompok dosis 1. mg/kg BB, sedangkan yang paling sedikit ditunjukkan oleh kelompok mg/kgbb. 9

7 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1,9,,7,,5,,3,,1 1 1 Hari Ke mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb mg/kgbb Gambar 5. Hubungan Dosis dan Hari Terhadap Voluime urin Data berat organ relatif dianalisis dengan ANOVA satu arah dilanjutkan dengan uji Duncan. Berdasarkan uji statistik analisis varian (one way ANOVA) didapatkan hasil bahwa berat relatif organ hati berbeda nyata (p<,5) antar kelompok perlakuan. Berdasarkan uji Duncan terlihat bahwa berat relatif organ hati kelompok ( mg/kgbb) tidak berbeda nyata dengan kelompok (1. mg/kgbb), kelompok 1 () dan kelompok 3 ( mg/kgbb) namun berbeda nyata dengan kelompok dan kelompok 5 (. mg/kgbb). Kelompok (1. mg/kgbb) tidak berbeda nyata dengan kelompok ( mg/kgbb), kelompok 1 () dan kelompok 3 ( mg/kgbb) namun berbeda nyata dengan kelompok dan kelompok 5 (. mg/kgbb). Kelompok 1 () tidak berbeda nyata dengan kelompok ( mg/kgbb), kelompok (1. mg/kgbb) dan kelompok 3 ( mg/kgbb) namun berbeda nyata dengan kelompok dan kelompok 5 (. mg/kgbb). Kelompok 3 ( mg/kgbb) tidak berbeda nyata dengan kelompok ( mg/kgbb), kelompok (1. mg/kgbb) dan kelompok 1 () namun berbeda nyata dengan kelompok dan kelompok 5 (. mg/kgbb). Kelompok tidak berbeda nyata dengan kelompok (1. mg/kgbb), kelompok 1 (), kelompok 3 ( mg/kgbb) dan kelompok 5 (. mg/kgbb) namun berbeda nyata dengan kelompok ( mg/kgbb). Kelompok 5 (. mg/kgbb). 5, 5, 5,, 5,,, Berat relatif organ hati Berat relatif organ hati ISSN :

8 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 Gambar. Berat Relatif Organ Hati Pada Hari ke 1 Perbedaan berat relatif organ ginjal berdasarkan uji satistik anova dan uji lanjutan Duncan didapatkan hasil bahwa tidak adanya perbedaan antara semua kelompok (p,5) artinya fraksi etil asetat daun piladang tidak mempengaruhi organ ginjal. 1,5 1, 1,35 1,3 1,5 1, 1,15 1,1 Berat relatif organ ginjal Berat relatif organ ginjal Gambar 7. Berat Relatif Organ Ginjal Pada Hari Ke 1 Berdasarkan pengamatan makroskopik pada organ hati dan ginjal tidak terlihat adanya perbedaan warna secara jelas. Hal ini sesuai dengan hasil statistik yang menunjukkan bahwa fraksi etil asetat daun piladang tidak mempengaruhi organ secara nyata. KESIMPULAN Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat diambil kesimpulan bahwa fraksi etil asetat daun piladang (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) hingga dosis. mg/kgbb tidak menyebabkan kematian sehingga tidak diperoleh nilai LD 5 artinya fraksi etil asetat daun piladang (Solenostemon scutellarioides (L.) Codd) tidak memberikan efek toksik pada uji toksisitas akut. Pada pengamatan efek toksik tertunda selama 1 hari pemberian ekstrak daun piladang mempengaruhi berat feses, konsumsi makanan, volume minum, volume urin dan berat organ hati tetapi tidak mempengaruhi berat badan, berat organ ginjal dan pengamatan warna secara visual. DAFTAR PUSTAKA Aria, M., Verawati, Afdhil, A., Monika, 15, Uji Efek Antiinflamasi Fraksi Daun Piladang (Solenostemon scutelarioides (L.) (Codd) Terhadap Mencit Putih Betina, STIFI, Padang, Jurnal Scientia, Vol. 5 No., Hal Benjamin, V. T., A. Sofowora, B. O. Oguntimein and S. I. Inya-agha, 197.Phytochemical and Antibacterial Studies on The Essential Oil of Eepatorium Odoratum. ( Biology.htm/, diakses 5 desember 1) Dalimartha, S., 3, Atlas Tumbuhan Obat, Jilid 3, Puspa Swara, Jakarta. Departemen Kesehatan RI Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta. Departemen Kesehatan RI.. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Jakarta ISSN :

9 SCIENTIA VOL. NO., AGUSTUS 1 Guyton & Hall. 7. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 11. Alih Bahasa Irawati. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Kumala, Shirly dan Desi, 9, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Iler (Coleus scutellariodes Benth) Terhadap Beberapa Bakteri Gram (+) dan Bakteri Gram (-), Srengseng Jagakarsa. Jurnal penelitian, Vol. 7 No.1, Hal ISSN :