BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN Jl. Pakuan Ciheuleut, PO Box 105 Bogor, Telp/Fax :

Transkripsi

1 BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN Jl. Pakuan Ciheuleut, PO Box 105 Bogor, Telp/Fax : , btpbogor@dephut.go.id

2 KATA PENGANTAR Kegiatan pengujian benih merupakan hal yang penting dalam produksi semai dan transaksi bibit komersil. Standarisasi metode pengujian dan mutu benih yang telah dihasilkan oleh Balai Litbang Teknologi Perbenihan hanya memuat uji perkecambahan (langsung). Sehingga untuk penyempurnaannya perlu dilengkapi dengan teknologi uji cepat viabilitas, agar para pengguna memiliki alternatif lain dalam melakukan pengujian benih. Buku ini merupakan kelanjutan dari buku I yang berisi standar prosedur uji cepat viabilitas benih berdasarkan uji tetrazolium topografis, uji hidrogen peroksida, uji eksisi embrio dan uji belah untuk 5 jenis benih tanaman hutan ( Acacia crassicarpa, Enterolobium cyclocarpum, Tectona grandis, Dalbergia latifolia dan Agathis loranthifolia) serta kunci interpretasi benih hidup dan benih mati berdasarkan uji cepat yang digunakan. Diharapkan informasi ini dapat membantu dan mempermudah para peneliti, akademisi dan laboran dalam melakukan aktivitas pengujian benih, serta pengguna lainnya dalam rangka memperoleh kepastian informasi kualitas benih dengan cepat. Ucapan terima kasih disampaikan kepada semua pihak yang telah membantu, baik tenaga maupun pikirannya sehingga buku ini dapat tersusun. Bogor, Desember 2003 Kepala Balai Litbang Teknologi Perbenihan Ir. Darmawan Budiantho, MP NIP i

3 KATA PENGANTAR CETAKAN KEDUA Dalam rangka penyebarluasan hasil penelitian dalam bentuk yang lebih praktis, Balai Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan (BPTPTH) telah menerbitkan buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan yang memuat informasi tentang standar prosedur uji cepat viabilitas benih berdasarkan Uji Tetrazolium Topografis; Uji Hidrogen Peroksida; Uji Eksisi Embrio dan Uji Belah untuk 5 jenis benih tanaman hutan, serta kunci interpretasi benih hidup dan benih mati berdasarkan uji cepat yang digunakan. Teknologi uji cepat viabilitas benih merupakan alternatif lain dalam melakukan pengujian benih. Informasi tersebut dikemas dalam bentuk praktis, lengkap, informatif dan mudah diaplikasikan untuk mengetahui kualitas benih secara cepat. Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan memperoleh respon yang positif dari: instansi pemerintah; swasta; maupun masyarakat umum. Berkaitan dengan hal tersebut mengakibatkan banyaknya permintaan terhadap buku ini. BPTPTH secara bertahap melakukan pencetakan ulang buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan, yang di dalam buku cetakan ke dua tersebut telah dilakukan penyempurnaan antara lain nama Balai Litbang Teknologi Perbenihan diubah menjadi Balai Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan; perbaikan redaksional sebagaimana tercantum pada ralat cetakan sebelumnya; serta penyempurnaan lainnya. Ucapan terimakasih disampaikan kepada semua pihak yang telah berperan dalam penyusunan Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan cetakan ke dua ini, sehingga buku ini dapat disusun dan dicetak ulang kembali. Semoga buku ini bermanfaat. Bogor, Desember 2014 Kepala Balai, iii

4 DAFTAR ISI KATA PENGANTAR... i KATA PENGANTAR CETAKAN KE 2... iii DAFTAR ISI... v DAFTAR TABEL... ix DAFTAR GAMBAR... xi DAFTAR LAMPIRAN... xiii I. PENDAHULUAN Mutu Benih Viabilitas Pengujian Viabilitas Uji Cepat Viabilitas Standarisasi Uji Cepat Viabilitas... 2 II METODE UJI CEPAT VIABILITAS Uji Tetrazolium Topografis Uji Hidrogen Peroksida Uji Eksisi Embrio Uji Belah... III. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Acacia crassicarpa Umum Uji Tetrazolium Topografis Standardisasi prosedur Kunci Interpretasi Uji Hidrogen Peroksida Standardisasi prosedur Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Belah Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi IV. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Enterolobium cyclocarpum Umum v

5 4.2. Uji Tetrazolium Topografis Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Hidrogen Peroksida Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Belah Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi V. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Tectona grandis Umum Uji Eksisi Embrio Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Belah Standardisasi prosedur Kunci Interpretasi VI. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Dalbergia latifolia Umum Uji Tetrazolium Topografis Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Hidrogen Peroksida Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Belah Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi VII. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Agathis loranthifolia Umum Uji Tetrazolium Topografis Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Hidrogen Peroksida Standardisasi Prosedur vi

6 Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi Uji Belah Standardisasi Prosedur Kunci Interpretasi DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN vii

7 DAFTAR TABEL No. Teks Hal. 1. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih A. crassicarpa Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. crassicarpa Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih A. crassicarpa Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih E. cyclocarpum Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih E. cyclocarpum Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih E. cyclocarpum Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih T. grandis Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih T. grandis Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih D. latifolia Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih D. latifolia Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih D. latifolia Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih A. loranthifolia Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. loranthifolia Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih A. loranthifolia ix

8 DAFTAR GAMBAR No. Teks Hal. 1. Sketsa Struktur Benih A. crassicarpa Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih A. crassicarpa Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih A. crassicarpa Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih A. crassicarpa Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih A. crassicarpa Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih A. crassicarpa Sketsa Struktur Benih E. cyclocarpum Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih E. cyclocarpum Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih E. cyclocarpum Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih E. cyclocarpum Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih E. cyclocarpum Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih E. cyclocarpum Sketsa Struktur Benih T. grandis Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih T. grandis Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih T. grandis xi

9 16. Sketsa Struktur Benih D. latifolia Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih D. latifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih D. latifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih D. latifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih D. latifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih D. latifolia Sketsa Struktur Benih A. loranthifolia Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih A. loranthifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih A. loranthifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih A. loranthifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih A. loranthifolia Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih A. loranthifolia xii

10 DAFTAR LAMPIRAN No. Teks Hal. 1. Bahan dan Alat yang Digunakan untuk Uji Cepat Viabilitas Benih (a). Uji Tetrazolium, (b). Uji Hidrogen Peroksida (c). Uji Eksisi Embrio dan (d). Uji Belah Prosedur Pengambilan Contoh Benih untuk Pengujian (BTP, 2000) Cara Pembuatan Larutan Tetrazolium Cara Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Glosari xiii

11 1.1. Mutu Benih 1.2. Viabilitas I. PENDAHULUAN Keberhasilan penanaman terutama dalam skala yang besar sangat dipengaruhi oleh interaksi antara faktor-faktor biotik, klimatik, edafik, teknik maupun manajemen. Secara tidak langsung faktor teknik seringkali dinyatakan sebagai penyebab utama kegagalan, misalnya karena rendahnya mutu benih. Untuk membedakan suatu benih bermutu atau tidak, secara visual sangat sukar. Apabila benih ditanam tanpa melalui proses pengujian mutu, maka perbedaan baru akan terlihat setelah benih tumbuh di lapangan atau setelah tanaman berproduksi, sehingga konsumen benih akan dirugikan karena kehilangan waktu, biaya dan kemungkinan harus melakukan penanaman ulang (Sadjad, 1980). Informasi yang diperoleh dari pengujian benih akan bermanfaat bagi produsen, penjual maupun konsumen benih, karena mendapat keterangan yang dapat dipercaya tentang mutu atau kualitas dari suatu benih. Pengujian benih adalah penilaian secara objektif tentang mutu benih yang diproduksi atau diedarkan. Pengujian benih terdiri dari: Pengujian karakteristik fisik benih dan pengujian karakteristik biologis benih. Pengujian karakteristik benih meliputi: Kemurnian benih, kadar air benih dan berat 1000 butir. Sedangkan karakteristik biologis benih meliputi: Pendugaan viabilitas dan vigor benih. Secara Garis besar pengujian kualitas suatu kelompok benih dapat dilakukan berdasarkan metode indikasi viabilitas benih. Viabilitas benih merupakan refleksi dari mutu benih, yang dapat didefinisikan sebagai daya hidup benih yang ditunjukkan oleh fenomena pertumbuhan benih atau gejala metabolismenya dan dapat pula ditunjukkan oleh keadaan organel sitoplasma atau kromosom. Sementara Gordon (1992), menyatakan bahwa viabilitas adalah kemampuan yang dimiliki oleh benih untuk berkecambah, sedangkan perkecambahan adalah keberhasilan proses di dalam benih untuk menghasilkan semai yang baik di persemaian Pengujian Viabilitas Viabilitas benih dapat dideteksi melalui beberapa pendekatan, pendekatan yang paling lazim dilakukan adalam melalui pendekatan fisiologis. Metode pendekatan fisiologis ini dibagi menjadi metode langsung dan tidak langsung. Metode langsung yaitu apabila pengamatan dilakukan pada setiap individu, sedangkan metode tidak langsung jika deteksi viabilitas tersebut dilakukan terhadap sejumlah benih sekaligus. Deteksi viabilitas benih dari gejala pertumbuhannya disebut penilaian dengan indikasi langsung, sedangkan penilaian viabilitas benih dari gejala metabolisme, bentuk fisik yang kesemuanya tanpa memperlihatkan gejala pertumbuhan disebut pendekatan dengan indikasi tidak langsung. Pada pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator pertumbuhan kecambahnya langsung sering disebut dengan indikasi langsung, di mana yang dinilai adalah kenormalan pertumbuhan kecambah dan dilakukan dalam 1

12 jangka waktu tertentu. Sedangkan metode pengujian yang didasarkan pada proses metabolisme benih yang merupakan indikasi tak langsung atau sering disebut juga dengan uji cepat Uji Cepat Viabilitas Pendugaan potensial perkecambahan dari suatu kelompok benih dengan mengecambahkannya langsung merupakan suatu metode yang hampir relevan dalam praktek bidang kehutanan. Tetapi pengujian tersebut akan membutuhkan waktu yang lama, seperti yang diungkapkan oleh Zanzibar (1996), bahwa pelaksanaan pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator gejala pertumbuhan kecambah biasanya memerlukan waktu yang relatif lama. Untuk jenis pohon hutan, waktu yang diperlukan berkisar antara 7-30 hari tergantung pada jenis benihnya. Dalam beberapa keadaan, jenis-jenis tertentu secara normal akan berkecambah secara lambat atau menunjukan gejala dormansi sehingga informasi mengenai viabilitas benih tidak dapat segera diperoleh. Keadaan ini akan berpengaruh terhadap benih yang diuji dan keputusan tentang pengadaan benih untuk keperluan yang bersangkutan misalnya untuk penanaman. Sehingga diperlukan metode pengujian viabilitas benih yang dapat menduga secara akurat namun lebih cepat dari pada pengujian perkecambahan secara langsung. Dalam hal ini maka dikembangkan uji cepat viabilitas benih. Tujuan dari uji cepat viabilitas benih menurut Manan (1976) dan Willan (1985), adalah: (a). Untuk menentukan secara cepat viabilitas benih suatu spesies yang berkecambah normal secara lambat atau menunjukkan dormansi di bawah perkecambahan normal. (B). Untuk menentukan viabilitas dari suatu sampel yang pada akhir uji perkecambahan menyatakan suatu persentase yang tinggi dari yang tidak berkecambah ( hard seed). Beberapa metode uji cepat yang dapat digunakan dalam menduga viabilitas benih, antara lain: uji belah ( cutting test), uji tetrazolium, uji hidrogen peroksida, metode radiografi, uji eksisi embrio, uji daya hantar listrik dan uji indigo carmine Standardisasi Uji Cepat Viabilitas Penilaian secara objektif dapat dilaksanakan dengan baik dalam melakukan uji cepat viabilitas bila ditetapkan adanya pembakuan dalam segala segi, mulai dari benih yang diuji, metode pengujian, alat pengujian, skill atau keahlian tenaga penguji sampai dengan parameter yang digunakan untuk menilai hasil pengujian tersebut. Standardisasi uji cepat viabilitas benih tanaman hutan mencakup standar prosedur pengujuan dan kunci interpretasi. Pedoman standardisasi uji cepat viabilitas ini diharapkan dapat membantu mempermudah aktivitas berbagai pihak yang berkepentingan dalam pengujian benih. Dengan adanya pedoman standar ini maka hasil pengujian lot benih akan seragam jika dikerjakan oleh pihak lain, informasi data hasil pengujian diharapkan mempunyai keakuratan 2

13 yang cukup baik dan dapat digunakan sebagai acuan dalam rangka penerapan aspek legalitas perbenihan. Metode uji cepat viabilitas benih tanaman hutan yang terdapat dalam pedoman ini meliputi : (1). Uji Tetrazolium Topografis ( Tetrazolium Topography Test), (2). Uji Hidrogen Peroksida ( Hidrogen Peroxida Test), (3). Uji Eksisi Embrio ( Exicion Embryo Test) dan (4). Uji Belah ( Cutting Test). Sedangkan jenis benih tanaman hutan yang diuji meliputi :(1). Krasikarpa ( Acacia crassicarpa), (2). Sengon Buto ( Enterolobium cyclocarpum), (3). Jati ( Tectona grandis), (4). Sonobrit ( Dalbergia latifolia) dan (5). Damar ( Agathis lorathifolia). 3

14 II. METODE UJI CEPAT VIABILITAS 2.1. Uji Tetrazolium Topografis Metode ini merupakan salah satu dari sejumlah metode uji secara biokimia yang telah dikembangkan dan merupakan teknik pengujian yang cukup tepat untuk menduga viabilitas benih. Dengan mengunakan metode ini, dalam waktu kurang lebih 24 jam viabilitas dari suatu kelompok benih telah dapat diduga. Walaupun metode uji tetrazolium telah dinyatakan oleh ISTA sebagai metode resmi untuk beberapa jenis kayu daun lebar dan konifer pada tahun 1976, tetapi sampai saat ini metode dan standar pengujian dengan cara tetrazolium untuk benih tanaman hutan masih sangat sedikit yang telah dibakukan dalam peraturan pengujian internasional/ista. Metode uji tetrazolium menggunakan prinsip bahwa setiap sel hidup akan berwarna merah oleh reduksi dari suatu pewarnaan garam tetrazolium dan membentuk endapan formazan merah sedangkan sel-sel yang mati menunjukan warna putih. Dengan merendamnya terlebih dahulu selama semalam, kemudian dibelah dan direndam dalam larutan garam selama beberapa jam, telah dapat menunjukan reaksi yang jelas dan dapat membedakan antara sel yang masih hidup dengan yang sudah mati. Reaksi tesebut diringkas sebagai berikut: CH 6 5 C N N C H H + N N C H 6 5 CH C HCl N N C H 6 5 N=N CH 6 5 Cl 2, 3, 5 trifenil tetrazolium chlorida 2, 3, 5 triferiil formazan Enzim yang mendorong terjadinya proses ini adalah dehidrogenase dan kegiatan ini berkaitan dengan respirasi. Faktor-faktor yang mempengaruhi reaksi tetrazolium menurut Byrd (1983) adalah suhu, ph larutan, perlakuan terhadap benih, konsentrasi larutan dan tekanan udara tempat pengujian dilakukan. Menurut Sutopo (1998), beberapa kelebihan dan kekurangan uji tetrazolium antara lain: (a). Jika diperlukan keterangan segera tentang viabilitas dari suatu kelompok benih tertentu, maka uji tetrazoiium akan dapat memberikan keterangan lebih cepat dibanding uji perkecambahan secara langsung. Tetapi untuk pelaksanaan uji tetrazolium diperlukan waktu yang lebih lama dari pada uji perkecambahan secara langsung. 5

15 (b). Untuk benih-benih yang sangat dorman atau yang lambat berkecambah lebih menguntungkan bila menggunakan uji tetrazolium. (c). Kadangkala suatu kelompok benih gagal berkecambah atau mungkin berkecambah lebih lambat dari biasanya disebabkan oleh tipe dormansi after ripening. Untuk menentukan viabilitas benih tersebut secara cepat maka dapat digunakan uji tetrazolium. (d). Efek phytotoxic dari fungisida, insektisida atau fumigasi dengan metyl bromide yang telah diperlakukan pada benih tidak dapat diketahui dengan uji tetrazolium. (e ). Uji tetrazolium tidak selalu dapat memberikan keterangan tentang kerusakan pada benih yang disebabkan oleh proses pengeringan. (f). Uji tetrazolium memerlukan lebih banyak kecakapan dan keputusan dari pada yang biasa diperlukan dalam uji perkecambahan secara langsung. Seringkali diperlukan beberapa kali pembesaran untuk dapat mempelajari dengan seksama pola noda dan lokasi daerah nekrotik yang tidak ternoda Uji Hidrogen Peroksida Hidrogen peroksida (H202) merupakan suatu larutan yang dapat merangsang perkecambahan benih, sehingga dapat digunakan untuk uji perkecambahan terhadap beberapa benih jenis konifer di Amerika Barat (Willan, 1985). Menurut Leadem (1984), metode pengujian benih dengan menggunakan hidrogen peroksida merupakan satu-satunya uji cepat viabilitas benih yang dapat merangsang perkecambahan benih dan dapat digunakan untuk mempercepat perkecambahan. Namun uji ini memerlukan waktu selama satu minggu penuh dan pengujiannya agak sulit untuk benih-benih yang berukuran kecil. Keuntungan penggunaan metode hidrogen peroksida sebagai uji cepat viabilitas benih antara lain: tidak mahal dan alat-alat yang dibutuhkan cukup sederhana, bersifat objektif dan sederhana dalam penyiapannya. Sedangkan kekurangan dari metode pengujian ini antara lain: Tidak praktis untuk benih yang berukuran kecil, pengujiannya bersifat merusak dan relatif lambat (memerlukan waktu 7-8 hari sampai memberikan hasil pengujian yang memuaskan) Uji Eksisi Embrio Merupakan uji viabilitas benih yang mempunyai nilai yang khusus karena digunakan terutama untuk mendeterminasi viabilitas benih yang bisanya berkecambah lambat atau memperlihatkan dormansi karena kulit benih dan/ atau embrio. Viabilitas benih tersebut dapat dideterminasi secara cepat 5-14 hari melalui pengamatan terhadap perilaku embrio dalam kondisi jaringan setelah pemotongan dan inkubasi selanjutnya. Embrio yang viabel akan memperlihatkan warna hijau, tumbuh atau tetap segar sementara embrio yang non viabel akan rusak. Meskipun uji ini bersifat labour intensif dan memerlukan keterampilan serta kesabaran dalam memotong embrio benih secara utuh, tapi merupakan alternatif yang dapat diterima untuk uji viabilitas benih, terutama untuk benihbenih yang memerlukan waktu yang lama jika diuji dengan metode pengujian yang umum, biasanya mencapai 60 hari. 6

16 Menurut Bonner et al. (1994), keuntungan penggunaan metode eksisi embrio sebagai uji cepat viabilitas benih antara lain: peralatan yang dibutuhkan untuk pengujian cukup sederhana, yang diuji merupakan kondisi benih sebenarnya dan mudah untuk dievaluasi. Sedangkan kekurangan dari metode ini antara lain: bersifat labour intensive dan memerlukan waktu yang panjang dalam mempersiapkan benih sebelum diuji, pengujiannya bersifat merusak dan relatif lambat (memerlukan waktu hari sampai memberikan hasil pengujian yang memuaskan) Uji Belah Uji belah ( cutting test) merupakan suatu metode uji cepat yang biasanya digunakan untuk menguji viabilitas benih dalam jumlah yang banyak. Uji ini dapat digunakan di lapangan untuk memperkirakan benih yang telah masak atau kualitas kumpulan benih ( seed lot) dalam kegiatan pengumpulan benih. Metode ini merupakan salah satu metode pengujian viabilitas benih yang paling sederhana, yang dilakukan dengan cara melihat secara langsung dengan mata terhadap benih yang telah dibelah dengan pisau atau skapel. Jika endospermnya mempunyai warna normal dengan embrio yang baik, maka benih tersebut mempunyai kemungkinan untuk berkecambah, sehingga pengujian ini bersifat sangat subjektif. Dengan hanya melihat penampilannya secara langsung, benih tersebut seperti hidup padahal kalau dikecambahkan mungkin tidak akan berkecambah. Sehingga hasil dari pengujian ini akan memberikan nilai perkecambahan yang lebih besar dibanding keadaan sebenarnya. Menurut Boner et al. ( 1994), keuntungan uji cepat viabilitas benih dengan metode belah antara lain: merupakan metode uji viabilitas benih yang cepat dan murah, dapat digunakan di lapangan untuk memeriksa kualitas benih yang dikumpulkan pada saat pemanenan dan hasil pengujian cukup akurat untuk benih-benih yang masih segar. Sedangkan kekurangan dari metode pengujian ini antara lain: sulit dilakukan untuk benih-benih yang berukuran kecil, memberikan hasil pengujian yang tidak tepat untuk benih-benih yang telah mengalami penyimpanan dan merupakan uji yang merusak. 7

17 3.1. UMUM III. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Acacia crassicarpa Benih A. crassicarpa memiliki kulit benih yang keras dan sulit ditembus air. Bila benih tersebut dikecambahkan secara konvensional dengan metode uji di atas kertas (UDK) maupun di rumah kaca diperlukan waktu lebih dari 21 hari. A. crassicarpa, termasuk ke dalam famili Leguminosae, umumnya memiliki 3 bagian dasar benih yaitu embrio, jaringan penyimpan cadangan makanan dan pelindung biji. Jaringan penyimpan cadangan makanan berupa kotiledon, sedangkan embrio terdiri dari radikel dan plumula. Pengamatan terhadap benih yang akan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitas difokuskan pada struktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula dan kotiledon (Gambar 1). Gambar 1. Sketsa Struktur Benih A. crassicarpa 3.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5- triphenil tetrazolium klorida), Na2HP O4.2H 2O, KH2PO 4, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur 9

18 pengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat pada Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Pembuatan Larutan Tetrazolium Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. Pada saat melubangi kulit, jangan sampai terkena kotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk. (2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam di dalam gelas piala. (3) Kupas kulit dan belah benih menjadi keping benih dengan silet. Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi radikel, plumula, dan kotiledon harus terbagi dua. (4) Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5 % yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih). (5) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam oven dengan suhu 40 C selama 4 jam. (6) Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquades selama detik. (7) Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikel, plumula dan kotiledon. (8) Amati intensitas dan luas pewarnaan yang terbentuk. Intensitas pewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) dan putih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan dengan membandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luas keseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaan yang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi. 10

19 Kunci Interpretasi Viabilitas benih A. crassicarpa yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasi pada Tabel 1 dan Gambar 2, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 3. Tabel 1. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih A. crassicarpa Benih Viabel Benih Non Viabel Gambar 2. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih A. crassicarpa 11

20 Berdasarkan Tabel 1 dan Gambar 2, secara umum kunci interpretasi uji tetrazolium untuk benih A. crassicarpa adalah sebagai berikut: (1). Benih viabel : a. Radikel 100 % merah sampai 100 % merah muda tanpa bercak pun dan plumula berwarna merah maupun merah muda tanpa putih. b. Kotiledon minimal 50 % merah atau merah muda. (2). Benih non viabel : a. Adanya bagian radikel dan plumula yang berwarna putih/bercak putih. b. Radikel berwarna merah muda lebih dari 50 % UJI HIDROGEN PEROKSIDA Standardisasi prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida, benomil, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat pada Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih Sterilisasi Bahan dan Alat Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Sterilisasi dengan Benomil Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomil selama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4. 12

21 Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1) Sterilkan benih A. crassicarpa dengan benomil (lihat ). (2) Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. (3) Rendam benih tersebut dalam larutan H2O2 1 % (volume larutan H2O 2 = 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil. (4) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelap pada suhu C. Pengujian dilakukan selama 4 hari. (5) Ganti larutan H2O2 dengan larutan H2O2 yang baru pada hari ke-1 dan ke-3. (6) Bilas benih dengan aquades, kemudian tempatkan benih tersebut dalam cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab. (7) Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasil pengukuran tersebut dicocokkan dengan kunci interpretasi Kunci Interpretasi Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjang radikel > 0,2 mm, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 0,2 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar UJI EKSISI EMBRIO Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, benomil, etanol 70% dan kertas saring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Cantoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat pada Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 13

22 Sterilisasi Bahan dan Alat Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Sterilisasi dengan Benomil Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomil selama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1) Sterilkan benih A. crassicarpa dengan benomil (lihat ). (2) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. (3) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dengan suhu perendaman 25 C. (4) Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudat yang dikeluarkan oleh benih. (5) Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketika membelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikut terbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril. (6) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembar kertas saring lembab. (7) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamar pada suhu konstan (20-25 C) selama 5 hari dengan periode pencahayaan minimal 8 jam per hari. (8) Amati setiap hari kondisi embrio dan buang embrio yang busuk dan berjamur. Apabila media mulai kering, semprotkan aquades secukupnya. (9) Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatan dicocokkan dengan kunci interpretasi Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih A. crassicarpa dapat dilihat pada Tabel 2, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 5 14

23 Tabel 2. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. crassicarpa 3.5. UJI BELAH Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, semprotan tangan, lup, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan menggunakan pendekatan yang terdapat pada Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengan gunting kuku. (2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dalam gelas piala. (3) Kupas kulit dan belah benih searah keping (memanjang) dengan menggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua. (4) Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunci interpretasi. 15

24 Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih A. crassicarpa dapat dilihat pada Tabel 3, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapat dilihat pada Gambar 6. Tabel 3. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih A. crassicarpa 16

25 Gambar 3. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih A. Crassicarpa Gambar 5. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. Crassicarpa Gambar 4. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih A. Crassicarpa Gambar 6. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih A. Crassicarpa 17

26 IV. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Enterolobium cyclocarpum 4.1. UMUM E. cyclocarpum yang dikenal dengan nama sengon buto, termasuk ke dalam famili Leguminosae. Uji viabilitas benih E. cyclocarpum secara konvensional yang dilakukan dengan perkecambahan langsung menggunkan media pasir tanah di rumah kaca memerlukan waktu lebih dari 20 hari. Seperti benih-benih yang tergolong ke dalam famili Leguminosae lainnya, benih E. cyclocarpum juga memiliki 3 bagian dasar benih yaitu embrio, jaringan penyimpan cadangan makanan dan pelindung biji. Pengamatan terhadap benih yang akan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitas difokuskan pada struktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula dan kotiledon (Gambar 7). Gambar 7. Sketsa Struktur Benih E. cyclocarpum 4.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5- triphenil tetrazolium klorida), Na2HPO 4.2H2O, KH2PO 4, etanol 70 %, kertas merang, lembaran plastik dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya 19

27 disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 50 butir benih Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan kertas merang dan alumunium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga diiakukan dengan menyemprotkan etanol 70, % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Pembuatan Larutan Tetrazoiium Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1). Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. Pada saat melubangi kulit, jangan sampai terkena kotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk. (2). Rendam benih dalam air dingin selama 48 jam. (3). Kupas kulit dan belah benih menjadi keping benih dengan menggunakan silet. Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hatihati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua. (4). Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5 % yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih). (5). Masukkan gelas piala tersebut ke dalam oven dengan suhu 40 C selama 4 jam. (6). Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquades selama detik. (7). Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikel plumula dan kotiledon. (8). Amati intensitas dan luas pewarnaan yang terbentuk. Intensitas pewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) dan putih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan dengan membandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luas keseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaan yang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi. 20

28 Kunci Interpretasi Viabilitas benih E. cyclocarpum yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasi pada Tabel 4 dan Gambar 8, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 9. Tabel 4. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih E. cyclocarpum 21

29 Gambar 8. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih cyclocarpum E. Berdasarkan Tabel 4 dan Gambar 8, secara umum kunci interpretasi uji tetrazolium untuk benih E. cyclocarpum adalah sebagai berikut: (1) Benih viabel : a. Radikel dan plumula berwarna merah dan merah muda. b. Kotiledon minimal mempunyai pola pewarnaan 40 % merah atau maksimal 15 % tidak berwarna (putih). (2) Benih non viabel: a. Benih mempunyai pola pewarnaan merah, merah muda sampai dengan putih b. Kotiledon maksimal mempunyai pola pewarnaan 40 % merah atau minimal 15 % putih. 22

30 4.3. UJI HIDROGEN PEROKSIDA Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida, natrium hipoklorit, etanol 70 %, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 50 butir benih Sterilisasi Bahan dan Alat Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 15 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1) Sterilkan benih E. cyclocarpum dengan natrium hipoklorit (lihat ). (2) Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. (3) Rendam benih tersebut dalam larutan H2O20,5 % (volume larutan H2O2 = 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil. (4) Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelap pada suhu C. Pengujian dilakukan selama 5 hari. 23

31 (5) Ganti larutan H2O2 dengan larutan H2O2 yang baru pada hari ke-1 dan ke-3. (6) Bilas benih dengan aquades, kemudian tempatkan benih tersebut dalam cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab. (7) Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasil pengukuran dicocokkan dengan kunci interpretasi Kunci Interpretasi Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjang radikel > 1 mm, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 1 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar UJI EKSISI EMBRIO Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70 % dan kertas saring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 50 butir benih Sterilisasi Bahan dan Alat Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian Pengkondisian. pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara 24

32 sebagai berikut : (1) Sterilkan benih E. cyclacarpum dengan natrium hipoklorit (lihat ). (2) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. (3) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 48 jam dengan suhu perendaman 25 C. (4) Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudat yang dikeluarkan oleh benih. (5) Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketika membelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikut terbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril. (6) Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembar kertas saring lembab. (7) Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamar pada suhu konstan (20-25 C) selama 5 hari dengan periode pencahayaan minimal 8 jam per hari. (8) Amati setiap hari kondisi embrio dan buang embrio yang busuk dan berjamur. Apabila media mulai kering, semprotkan aquades secukupnya. (9) Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih E. cyclocarpum dapat dilihat pada Tabel 5, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 11. Tabel 5. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih E. cyclocarpum 25

33 4.5. UJI BELAH Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70 % dan kertas merang Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 50 butir benih Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70 % secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1) Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengan gunting kuku. (2) Rendam benih tersebut dalam aquades selama 48 jam dalam gelas piala, (3) Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) dengan menggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua. (4) Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunci interpretasi Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih E. cyclocarpum dapat dilihat pada Tabel 6, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapat dilihat pada Gambar

34 Tabel 6. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih E. cyclocarpum 27

35 Gambar 9. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih E. cyclocarpun Gambar 11. Benih Viabel (a) dan Non Viab e l (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih E. cyclocarpun Gambar 10. Benih Viabel (a) dan Non Viab e l (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih E. cyclocarpun Gambar 12. Benih Viabel (a) dan Non Viab e l (b) Hasil Uji Belah untuk Benih E. cyclocarpun 28

36 5.1. UMUM V. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Teotona grandis T. grandis yang lebih dikenal dengan nama jati, termasuk ke dalam famili Verbenaceae. Jenis ini merupakan salah satu jenis komersil yang banyak ditanam dan telah dikembangkan sejak lama terutama di pulau jawa (perhutani). Untuk mengetahui viabilitas benih T. grandis secara konvensional dengan mengecambahkannya di persemaian pada media campuran tanah dan pasir (1 : 1) memerlukan waktu lebih kurang 90 hari. Buah T. grandis memiliki kulit luar yang lunak, di dalamnya terdapat kulit buah yang keras berwarna hitam, sekitar 3-4 butir benih berada di dalam buah ini. Benih T. grandis memiliki struktur tumbuh yang terdiri dari embrio, jaringan penyimpan cadangan makanan dan pelindung. Embrio terdiri dari kotiledon dan radikel (calon akar). Struktur tumbuh benih T. grandis dapat dilihat pada Gambar 13. Gambar 13. Sketsa Struktur Benih T. grandis 5.2. UJI EKSISI EMBRIO Standardisasi Prosedur Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70 %, kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih ( seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 29