Kampus Binawidya Pekanbaru, 28293, Indonesia

Transkripsi

1 ISSN PENENTUAN WAKTU OPTIMUM PRODUKSI ANTIMIKROBA DAN UJI FITOKIMIA EKSTRAK KASAR FERMENTASI BAKTERI ENDOFIT Pseudomonas sp. DARI UMBI TANAMAN DAHLIA (Dahlia variabilis) Elita A. *, Saryono S., Christine J. Mahasiswi Prodi S Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau Dosen Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau Kampus Binawidya Pekanbaru, 89, Indonesia Abstract Dahlia s tuber have been known to be potential as the sources of secondary metabolite compound as antimicrobial. Some of endophytes could produced certain phytochemicals originally characteristic of the host. A total number of four endophyte bacteria Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas cepacia LBKURCC7, and Pseudomonas stutzeri or Pseudomonas cepacia LBKURCC0 were isolated from Dahlia s tuber in Padang Luar, West Sumatera. Optimization time of fermentation is necessary to obtain optimum products of antimicrobial compound. Therefore, the study was conducted to determine the effect of bacterial growth time on the production of antimicrobial compounds by endophyte bacteria. Antimicrobial activity examination was carried out through agar diffusion method by measuring inhibition zone growth against two pathogen bacteria, Escherichia coli and Staphylococcus aureus and then the phytochemicals were qualitatively estimated. The research results indicated that two of the endophyte bacterial isolates, Pseudomonas stutzeri LBKURCC and Pseudomonas cepacia LBKURCC7 have antibacterial activity. Optimum time of fermentation for production of antimicrobial compounds by Pseudomonas stutzeri LBKURCC, and Pseudomonas cepacia LBKURCC7 was obtained at 7 hours. The inhibition zone of this compounds against Escherichia coli were (9, ± 0,8) mm and (8,7 ± 0,7) mm, and Staphylococcus aureus were (9, ± 0,8) mm and (8, ± 0,) mm. The qualitative phytochemicals identification of antibacterial compounds produced by endophyte bacteria Pseudomonas stutzeri LBKURCC and Pseudomonas cepacia LBKURCC7 showed positive result for saponin. Key words: Endophyte bacteria, Dahlia variabilis, antimicrobial activity. PENDAHULUAN Sampai saat ini seperempat dari obatobat modern yang beredar di dunia berasal dari bahan aktif yang diisolasi dan dikembangkan dari tanaman (Radji, 00). Pemanfaatan metabolit secara langsung dari tanamannya banyak menemui kendala dikarenakan jumlahnya yang terbatas dan siklus hidup tumbuhan yang relatif lama (Prihatiningtias, 007). Oleh karena itu, memerlukan alternatif lain yaitu dengan memanfaatkan bakteri endofit dalam jaringan tanaman yang dapat memproduksi senyawa metabolit sekunder sejenis yang terdapat dalam tanaman (Strobel, 00). Umbi tanaman dahlia telah diketahui menghasilkan metabolit sekunder golongan fenolik, flavonoid, dan saponin yang memiliki aktivitas anti-mikroba (Suryadi, 007). Pada penelitian sebelumnya telah diisolasi bakteri endofit Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas cepacia LBKURCC7, dan Pseudomonas stutzeri atau Pseudomonas cepacia LBKURCC0 dari umbi tanaman Dahlia (Dahlia variabilis) berbunga ungu, kuning, merah hati, dan orange dari Padang Luar, Sumatera Barat. Senyawa metabolit sekunder terutama senyawa antimikroba oleh isolat bakteri endofit ini dapat diproduksi dengan cara menumbuhkannya pada media fermentasi Mueller-Hinton Broth (Utami, 0) dan

2 salah satu faktor yang mempengaruhi produksi metabolit sekunder yaitu waktu pertumbuhan bakteri tersebut (Pratiwi, 008). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh waktu pertumbuhan bakteri pada produksi antimikroba dari ekstrak kasar media fermentasi bakteri endofit Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas cepacia LBKURCC7, dan Pseudomonas stutzeri atau Pseudomonas cepacia LBKURCC0. Waktu optimum fermentasi ditetapkan dengan menentukan aktivitas antimikroba tertinggi yang ditimbulkan oleh filtrat hasil fermentasi. Pengujian aktivitas antimikroba dilakukan menggunakan metode difusi agar terhadap dua bakteri patogen Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Berdasarkan waktu optimum produksi antimikroba oleh bakteri endofit tersebut kemudian dilakukan uji fitokimia terhadap ekstrak kasar media fermentasi bakteri endofit untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder yang diharapkan sama dengan tanaman inangnya. BAHAN DAN METODA Persiapan inokulum bakteri endofit Pseudomonas sp. Produksi metabolit antibakteri oleh bakteri endofit Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas cepacia LBKURCC7, dan Pseudomonas stutzeri atau Pseudomonas cepacia LBKURCC0 dilakukan dengan cara menumbuhkannya dalam medium cair. Untuk fermentasi bakteri endofit digunakan medium Mueller-Hinton Broth (MHB). Masing-masing koloni bakteri endofit yang telah diinkubasi pada medium NA selama jam pada suhu 7 o C, diambil ose dan dipindahkan ke dalam 0 ml medium MHB. Media diinkubasi selama jam, suhu 7 o C kemudian digunakan sebagai starter inokulum. Penentuan waktu fermentasi optimum bakteri endofit Pseudomonas sp. Sebanyak ml inokulum koloni bakteri endofit (OD 00nm =0,) diinokulasi ke dalam 0 ml media fermentasi MHB, dan diinkubasi pada temperatur ruang dengan rotary shaker kecepatan 0 rpm selama 9 jam. Pengukuran waktu pertumbuhan 0 jam dimulai pada saat inokulasi pertama kultur bakteri endofit ke dalam media fermentasi. Setiap 0,,, 0, 8,, 7, 78, dan 9 jam waktu inkubasi produksi metabolit antibakteri; pertumbuhan bakteri endofitik ini 7 diukur ODnya dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 00 nm. Penentuan waktu optimum produksi antimikroba ini digambarkan dalam bentuk kurva pertumbuhan bakteri endofitik. Setiap jam waktu produksi (, 8, 7, dan 9 jam) dilakukan uji aktivitas antimikroba terhadap bakteri Gram-negatif Escherichia coli dan bakteri Gram-positif Staphylococcus aureus untuk mengetahui waktu optimum produksi antimikroba. Kultur bakteri endofit hasil fermentasi disentrifugasi pada kecepatan 800 rpm, suhu o C selama 0 menit (Utami, 0) untuk memisahkan supernatan dari massa selnya. Supernatan disaring steril dengan millipore syringe filter 0, m yang kemudian digunakan sebagai ekstrak kasar fermentasi dalam uji antimikroba dan analisis fitokimia. Semua perlakuan dilakukan secara aseptik dan diulangi sebanyak tiga kali. Uji aktivitas metabolit antibakteri Isolat bakteri uji patogen Esche-richia coli dan Staphylococcus aureus ditumbuhkan pada media lempeng NA (Nutrient Agar) dan diinkubasi selama jam pada suhu 7 o C. Isolat yang sudah tumbuh diambil masingmasing ose dan diinokulasi ke dalam 0 ml media NB (Nutrient Broth). Media diinkubasi selama jam, suhu 7 o C kemudian digunakan sebagai inokulum. Pengenceran inokulum bakteri patogen dengan air salin (NaCl 0,8%) dilakukan apabila OD 00nm setelah jam lebih besar dari 0, (Cappuccino & Sherman, 0). Inokulum bakteri patogen (OD 00nm 0, setara dengan 0 7 CFU/mL) (Martins et al., 0) di-inokulasi sebanyak ml ke dalam tabung reaksi yang berisi media MHA cair sebanyak ml (suhu ± 0 o C) kemudian divortex dan dituangkan ke dalam cawan petri, agar dibiarkan memadat. Ekstrak kasar fermentasi steril isolat bakteri endofit Pseudomonas stutzeri LBKURCC, dan Pseudomonas cepacia LBKURCC7 sebanyak 0 L diteteskan pada kertas cakram steril (diameter mm) dan dibiarkan mengering. Kontrol positif yang digunakan adalah Amoxan 0 g dan kontrol negatif yang digunakan adalah media fermentasi steril. Kemudian kertas cakram diletakkan di atas media MHA yang telah diinokulasi bakteri uji (Escherichia coli atau Staphylococcus aureus). Selanjutnya cawan petri diinkubasi pada suhu 7 o C dengan kondisi cawan petri dibalikkan. Diameter zona bening disekitar kertas cakram diukur setelah inkubasi selama ± -8 jam.

3 Uji fitokimia ekstrak kasar fermentasi Pseudomonas sp. Ekstrak kasar media fermentasi steril bakteri endofit Pseudomonas sp. yang memiliki aktivitas antimikroba dilakukan uji fitokimia pada waktu optimum produksi antimikroba (Devi et al., 0) untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan.. Uji terpenoid/steroid Ekstrak kasar media fermentasi steril bakteri endofitik Pseudomonas sp. dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dicampur kloroform beramoniak kemudian ditambahkan H SO N ke dalam tabung dan dikocok kuat. Campuran didiamkan hingga terbentuk dua lapisan yaitu lapisan asam (atas) dan lapisan kloroform (bawah). Lapisan kloroform diletakkan di plat tetes dan dibiarkan menguap lalu ditambahkan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat (pereaksi Lieberman- Burchard). Apabila terbentuk warna hijau-biru menandakan adanya senyawa steroid dan warna merah menandakan adanya senyawa terpenoid. Uji alkaloid Lapisan asam diambil dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan pereaksi Dragendorff dan pereaksi Mayer. Hasil dinyatakan positif mengandung alkaloid apabila terjadi perubahan warna menjadi jingga setelah penambahan pereaksi Dragendorff dan warna putih setelah penambahan pereaksi Mayer.. Uji fenolik Ekstrak kasar fermentasi diletakkan di atas plat tetes dan ditambahkan larutan besi (III) klorida. Hasil positif dinyatakan dengan adanya perubahan warna larutan menjadi biru-hitam.. Uji flavonoid Ekstrak kasar fermentasi dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan etanol 70% dan dipanaskan. Campuran ditambahkan lempeng logam magnesium dan setetes asam klorida pekat. Hasil positif mengandung flavonoid bila terjadi perubahan warna larutan menjadi merah muda.. Uji saponin Akuades ditambahkan ke dalam tabung reaksi yang berisi ekstrak kasar fermentasi dan dipanaskan hingga mendidih. Kemudian larutan dikocok kuat dan apabila terbentuk busa yang stabil selama ±0 menit 8 maka sampel dinyatakan mengandung saponin. Data pengukuran pertumbuhan isolat bakteri endofitik digambarkan sebagai kurva pertumbuhan. Hasil uji antimikroba disajikan secara statistik deskripsi dengan Uji Duncan Jarak Berganda untuk mengetahui perbandingan zona hambat yang dihasilkan oleh ekstrak kasar fermentasi isolat bakteri endofitik Pseudomonas stutzeri LBKUR- CC, Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas cepacia LBKURCC7, Pseudomonas stutzeri atau Pseudomonas cepacia LBKURCC0 yang diisolasi dari umbi dahlia (Dahlia variabilis). HASIL DAN PEMBAHASAN Penentuan waktu fermentasi optimum Pseudomonas sp. Penentuan waktu fermentasi optimum untuk produksi antimikroba oleh ekstrak kasar isolat bakteri endofit Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas stutzeri LBKURCC, Pseudomonas cepacia LBKURCC7, dan Pseudomonas stutzeri atau Pseudomonas cepacia LBKURCC0; ditentukan dengan pembuatan kurva pertumbuhan isolat bakteri endofit dan uji aktivitas antimikroba setiap waktu produksi jam. Pada penelitian ini, fase adaptasi pertumbuhan isolat Pseudomonas stutzeri LBKURCC dan Pseudomonas cepacia LBKURCC7 berlangsung hingga jam dan setelah fermentasi selama jam terjadi fase pertumbuhan logaritmik. Produksi senyawa antimikroba belum terjadi hingga jam ke-8 dan mulai menunjukkan adanya aktivitas antimikroba setelah proses fermentasi berlangsung selama 7 jam Uji aktivitas metabolit antibakteri Waktu optimum produksi antimikroba oleh ekstrak kasar media fermentasi bakteri endofit Pseudomonas sp. ditentukan dengan pembuatan kurva hubungan antara waktu inkubasi, pengukuran Optical Density (OD) isolat bakteri endofit setiap waktu produksi 0,,, 0, 8,, 7, 78, dan 9 jam serta uji aktivitas antimikroba setiap waktu produksi jam (, 8, 7, dan 9 jam). Uji aktivitas antimikroba dilakukan dengan metode difusi agar sebanyak tiga kali pengulangan dengan volume sebesar 0 µl/cakram. Kontrol positif yang digunakan yaitu Amoxan dengan konsentrasi 0 µg (b/v). Kontrol negatif yang digunakan yaitu media fermentasi steril.

4 Rata-rata diameter zona hambat yang ditimbulkan oleh filtrat isolat LBKURCC dan LBKURCC7 pada kultur umur 7 jam terhadap E. coli dapat dilihat pada Tabel serta terhadap S. aureus dapat dilihat pada Tabel. Pada kultur umur 9 jam terlihat pertumbuhan sel telah memasuki fase kematian, diameter zona hambat yang ditimbulkan oleh filtrat isolat Pseudomonas stutzeri LBKURCC dan Pseudomonas cepacia LBKURCC7 mengalami penurunan dengan rata-rata diameter dapat dilihat pada Tabel dan Tabel baik terhadap Escherichia coli ataupun terhadap Staphylococcus aureus. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dua isolat bakteri endofit P. stutzeri LBKURCC dan P. cepacia LBKUR-CC7 memiliki aktivitas penghambatan terhadap E.coli dan S.aureus sedangkan dua isolat lainnya P. stutzeri LBKURCC dan P. stutzeri atau P. cepacia LBKURCC0 tidak memiliki aktivitas penghambatan. Hubungan antara pertumbuhan bakteri endofit P. stutzeri LBKURCC dan P. cepacia LBKURCC7 dan aktivitas antimikroba terhadap S.aureus dan E.coli dapat dilihat pada Gambar dan Gambar. Hasil penelitian ini sejalan dengan pernyataan Pelczar et al. (98), bahwa metabolit sekunder (antimikroba) dihasilkan oleh mikroorganisme pada akhir fase stasioner pertumbuhannya. Hal ini disebabkan karena metabolit sekunder biasanya disintesis pada akhir siklus pertumbuhan sel, yaitu pada fase stasioner saat populasi tetap karena jumlah sel yang tumbuh sama dengan jumlah sel yang mati. Sintesis metabolit sekunder dimulai pada saat beberapa zat gizi di dalam media pertumbuhan mikroorganisme telah habis. Keterbatasan zat gizi tersebut menyebabkan terakumulasinya induser enzim metabolit sekunder dan terlepasnya gen-gen untuk sintesis metabolit sekunder (Pratiwi, 008). Gambar. Hubungan antara pertumbuhan bakteri endofit (a) Pseudomonas stutzeri LBKURCC dan (b) Pseudomonas cepacia LBKURCC7 dan aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus. Gambar. Hubungan antara pertumbuhan bakteri endofit (a) Pseudomonas stutzeri LBKURCC dan (b) Pseudomonas cepacia LBKURCC7 dan aktivitas antimikroba terhadap Escherichia coli. 9

5 Tabel. Aktivitas antimikroba ekstrak kasar P. stutzeri LBKURCC, P. stutzeri LBKURCC, P. cepacia LBKURCC7, P. stutzeri atau P. cepacia LBKURCC0 terhadap Escherichia coli. Rata-rata diameter hambat (mm) jam 8 jam 7 jam 9 jam Amoxan (,9 ± 0,07) b (,9 ± 0,0) b (,8 ± 0,) a (, ± 0,) b Kontrol (-) LBKURCC LBKURCC - - (9, ± 0,8) c (8,8 ± 0,) c LBKURCC7 - - (8,7 ± 0,7) c (8,8 ± 0,0) d LBKURCC Catatan: *Diameter hambat ekstrak kasar P.stutzeri LBKURCC, P.stutzeri LBKURCC, P.cepacia LBKURCC7, P.stutzeri /P.cepacia LBKURCC0. Pangkat huruf yang sama menyatakan tidak berbeda secara nyata pada tingkat % (p>0,0) berdasarkan uji Duncan jarak berganda. Tabel. Aktivitas antimikroba ekstrak kasar P. stutzeri LBKURCC, P. stutzeri LBKURCC, P. cepacia LBKURCC7, P. stutzeri atau P. cepacia LBKURCC0 terhadap Staphylococcus aureus. Rata-rata diameter hambat (mm) jam 8 jam 7 jam 9 jam Amoxan (, ± 0,0) a (,9 ± 0,0) a (,9 ± 0,07) a (, ± 0,) b Kontrol (-) LBKURCC LBKURCC - - (9, ± 0,8) c (9,7 ± 0,) c LBKURCC7 - - (8, ± 0,) d (8, ± 0,0) d LBKURCC Catatan: *Diameter hambat ekstrak kasar P. stutzeri LBKURCC, P. stutzeri LBKURCC, P. cepacia LBKURCC7, P. stutzeri atau P. cepacia LBKURCC0. Pangkat huruf yang sama menyatakan tidak berbeda secara nyata pada tingkat % (p>0,0) berdasarkan uji Duncan jarak berganda. Identifikasi senyawa fitokimia bakteri endofit Pseudomonas sp. Uji fitokimia dilakukan terhadap ekstrak kasar media fermentasi bakteri endofit Pseudomonas sp. yang memiliki aktivitas antimikroba yaitu P. cepacia LBKURCC7 dan P. stutzeri LBKURCC yang telah diinkubasi di dalam media fermentasi Mueller-Hinton Broth selama 7 jam. Kontrol yang digunakan sebagai pembanding yaitu media fermentasi steril. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak kasar media fermentasi bakteri endofit P. cepacia LBKURCC7 dan P. stutzeri LBKURCC mengandung metabolit sekunder golongan saponin (Tabel ). Uji fitokimia yang telah dilakukan oleh Suryadi (007) terhadap umbi dahlia menunjukkan bahwa umbi dahlia mengandung senyawa metabolit sekunder flavonoid, fenolik, dan saponin. Saponin adalah senyawa aktif yang menimbulkan busa jika dikocok dalam air sehingga bersifat seperti sabun, memiliki molekul yang dapat menarik air atau hidrofilik dan molekul yang dapat melarutkan lemak atau lipofilik sehingga dapat mengganggu permeabilitas membran sel bakteri, mengubah struktur dan fungsi membran, dan akhirnya menyebabkan membran sel akan rusak dan lisis (Arabski et al., 0). Menurut Tan & Zou (00), mikroba endofit memang dapat menghasilkan senyawa bioaktif yang karakternya mirip atau sama dengan inangnya. Contohnya adalah senyawa Oleandrin sebagai senyawa antikanker, selain dihasilkan oleh tanaman Nerium indicum, ternyata juga dihasilkan oleh mikroba endofit yang diisolasi dari daun Nerium indicum (Prihatiningtias, 007). Endofit juga memiliki kemampuan untuk mentransformasi komponen kimia dalam tanaman inangnya (Agusta, 009) seperti bakteri endofit Bacillus polymixa yang diisolasi dari tumbuhan Artemisia annua dengan kemampuan untuk memproduksi senyawa biotransformasi artemisinin sebagai senyawa bioaktif antimalaria (Simanjuntak et al., 00). Oleh karena itu, kemungkinan komponen fenolik dan flavonoid yang terdapat dalam umbi tanaman dahlia mengalami transformasi menjadi struktur kimia yang lain oleh bakteri endofit P. cepacia LBKURCC7 dan P. stutzeri LBKURCC. 0

6 (a) (b) Gambar. Skrining isolat P. stutzeri LBKURCC, P. stutzeri LBKURCC, P. cepacia LBKURCC7, dan P. stutzeri atau P. cepacia LBKURCC0 pada jam (a) ke-7, (b) ke-9 terhadap Escherichia coli (kiri) dan Staphylococcus aureus (kanan) Keterangan : (kontrol positif), (kontrol negatif), (Pseudomonas stutzeri LBKURCC), (Pseudomonas cepacia LBKURCC7), (Pseudomonas stutzeri LBKURCC), (Pseudomonas stutzeri atau Pseudomonas cepacia LBKURCC0). Tabel. Uji fitokimia ekstrak kasar isolat bakteri endofitik P. cepacia LBKURCC7 dan P. stutzeri LBKURCC Bahan uji Alkaloid Flavonoid Terpenoid Fenolik Saponin Kontrol LBKURCC LBKURCC Keterangan: + = terdeteksi, - = tidak terdeteksi Metabolit sekunder KESIMPULAN DAN SARAN Produksi metabolit antimikroba oleh bakteri endofit dilakukan dengan cara fermentasi dalam medium cair Mueller- Hinton Broth (MHB). Salah satu faktor yang mempengaruhi produksi metabolit sekunder yaitu waktu pertumbuhan bakteri tersebut. Indikator waktu optimum produksi antimikroba adalah waktu dimana senyawa antimikroba diproduksi secara maksimal yang ditandai dengan terbentuknya zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri Gram-negatif Escherichia coli dan bakteri Gram-positif Staphylococcus aureus. Hasil penelitian menunjukkan bahwa dua isolat bakteri endofitik Pseudomonas stutzeri LBKURCC and Pseudomonas cepacia LBKURCC7 menunjukkan aktivitas antibakteri dengan rata-rata diameter zona hambat pada kultur umur 7 jam masingmasing yaitu sebesar (9,±0,8) mm dan (8,7±0,7) mm terhadap E. coli serta (9, ±0,8) mm dan (8,±0,) mm terhadap S. aureus. Hal ini mengindikasikan bahwa kultur umur 7 jam (hari ke-) merupakan waktu optimum produksi senyawa antibakteri terhadap bakteri patogen E. coli dan S. aureus. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak kasar media fermentasi bakteri endofit LBKURCC7 dan LBKUR-CC mengandung metabolit sekunder golongan saponin. Melihat potensi anti-bakteri yang dihasilkan oleh isolat bakteri endofit P. stutzeri LBKURCC dan P. cepacia LBKURCC7 sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang isolasi dan identifikasi senyawa aktif antimikrobial dari ekstrak kasar media fermentasi isolat bakteri endofit ini. UCAPAN TERIMA KASIH Penelitian ini dibiayai oleh Hibah Pasca DIKTI 0 atas nama Prof. Dr. Saryono, M.Si.

7 DAFTAR PUSTAKA Agusta, A Biologi dan Kimia Jamur Endofit. Bandung: ITB. Arabski M, Wegierek-Ciuk A, Czerwonka G, Lankoff A, & Kaca W. 0. Effect of saponin againts Clinical E.coli strains and eukaryotic cell lines. Journal of Biomedicine and Biotechnology 0(): -. Cappuccino JG & Sherman N. 0. Microbiology a Laboratory Manual. Ed. 9. San Francisco: Benjamin Cummings. Devi NN, Prabakaran JJ, & Wahab F. 0. Phytochemical analysis and enzyme analysis of endophytic fungi from Centella asiatica. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 0(): -. Martins IM, Cortés JCG, Munoz J, Moreno MB, Ramos M, Clemente-Ramos JA. 0. Differential activities of three families of specific β(,)glucan synthase inhibitors in wild-type and resistant strains of fission yeast. The Journal of Biological Chemistry (8): 8-9. Pelczar MJ & Chan ECS. 98. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta: Universitas Indonesia. Pratiwi ST Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga. Prihatiningtias W Prospek mikroba endofit sebagai sumber senyawa bioaktif. Majalah Obat Tradisional (). Radji M. 00. Peranan Bioteknologi dan Mikroba Endofit Dalam Pengembangan Obat Herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian (): -. Simanjuntak P, Bustanussalam, Otovina DM, Rahayuningsih M, & Said EG. 00. Isolasi dan identifikasi artemisinin dari hasil kultivasi mikroba endofitik dari tanaman Artemisia annua. Majalah Farmasi Indonesia (): 8-7. Strobel G & Daisy B. 00. Bioprospecting for Microbial Endophytes and Their Natural Products. Microbiology and Molecular Biology Reviews 7: 9-0. Suryadi AE Ekstraksi dan Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Umbi Dahlia (Dahlia variabilis). Skripsi FMIPA Universitas Riau. Pekanbaru. Tan RX, & Zou WX. 00. Endophytes: a rich source of functional metabolites. Nat. Prod. Rep. 8: 8 9. Utami U. 0. Isolation, Identification and Antimicrobial Activities Selection of Endophytic Bacterial from Mangrove Plantation Brugulera gymnorrhiza. International Journal of Academic Research (): 87-9.