BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian Jenis penelitian yang digunakan adalah deskriptif tentang kadar bilirubin total dalam serum dan plasma pada balita yang dirawat inap di RS.Telogorejo. B. Tempat dan Waktu Penelitian 1. Tempat Penelitian Penelitian dilaksanakan di Laboratorium RS Telogorejo Semarang. 2. Waktu Penelitian Waktu penelitian dimulai pada tanggal 1 Maret sampai 31 Maret 2011. C. Populasi dan Sampel Penelitian 1. Populasi Penelitian Semua pasien balita yang periksa kadar bilirubin dan darah rutin yang di rawat inap di RS Telogorejo Semarang pada bulan Maret 2011. 2. Sampel Penelitian Sampel penelitian merupakan total populasi, pengambilan sampel pemeriksaan pada saat peneliti dinas jaga pada bulan Maret 2011 selama 21 hari.
D. Alat, Bahan dan Reagensia 1. Alat yang digunakan adalah : Automatic analyser hitachi 912, pipet otomatis, tip biru, pembendung, holder, tabung vakuntainer, tabung EDTA, jarum wing). 2. Bahan yang digunakan : Alkohol 70%, Bilirubin total merk Roche dengan No catalog 11489194 1 dan 2. E. Prosedur Pemeriksaan 1. Cara pengambilan darah vena a. Voler lengan atas dibersihkan dengan menggunakan alkohol 70 % dan biarkan sampai kering. b. Jarum dipasang pada holder dan ikatan pembendung dipasang pada lengan atas. c. Jarum ditusukkkan dengan menggunakan tangan kanan hingga ujung jarum masuk ke dalam vena dengan posisi lubang jarum menghadap ke atas. d. Tabung dimasukkan ke dalam holder tunggu beberapa saat hingga tercapai volume darah yang diinginkan, lepaskan tabung kemudian masukkan tabung EDTA tunggu sampai terisi darah hingga tanda batas, lepas perlahan lahan tabung EDTA, bolak balik tabung agar tercampur rata dengan antikoagulan. e. Kapas yang telah dibasahi alkohol 70% di letakkan di atas jarum dan jarum di cabut dari lengan.
f. Tabung diberi label ( barcode ) yang sesuai dengan identitas pasien. 2. Cara Membuat Serum a. Darah dalam tabung vakuntainer didiamkan selama 10 menit. b. Tabung disentrifius dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. c. Lapisan jernih berwarna kuning muda yang berada di bagian atas di pisahkan dengan menggunakan pipet dan dimasukkan pada tabung lain yang bersih dan diberi label ( barcode ) yang sesuai. 3. Cara Membuat Plasma a. Darah dalam tabung EDTA dibiarkan selama 5 menit. b. Tabung disentrifius dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. c. Lapisan jernih warna kuning muda yang berada di bagian atas adalah plasma EDTA dan di pisahkan dengan menggunakan pipet dan dimasukkan pada tabung lain yang bersih dan diberi label ( barcode ) yang sesuai. 4. Cara Kerja Pemeriksaan Kadar Bilirubin total. a. Metode : Dichlorophenyl diazonium. b. Prinsip : Bilirubin indirek yang terikat oleh albumin dibebaskan dengan adanya detergen. Bilirubin total akan bereaksi dengan garam 2,5-dichloro penyldiazonin akan membentuk warna merah. c. Prosedur : 1. Tabung reaksi diletakkan ke dalam alat Hitachi 912 2. Pada layar monitor alat hitachi di ketik data pasien dan nama parameter bilirubin kemudian tekan start condition lalu start.
3. Alat akan bekerja secara otomatis sampai keluar hasil. 5. Nilai Normal Bilirubin total (serum dan plasma) mempunyai nilai normal : Umur 2 5 tahun : 0.1-1.0 mg/dl. G. Analisa Data Data yang telah terkumpul kemudian diolah, disusun dan dilakukan analisa dan disajikan dalam bentuk deskriptif. H. Definisi Operasional 1. Bilirubin total adalah jumlah dari bilirubin direk dan bilirubin indirek. 2. Pemeriksaan kadar bilirubin total adalah pemeriksaan untuk mengetahui kadar bilirubin dalam serum atau plasma dengan metode Dichlorophenyl diazonium, menggunakan reagen Roche no catalog 11489194 1 dan 2 pada alat Hitachi 912 dengan nilai normal 0.1-1.0 mg/dl. 3. Serum adalah lapisan jernih berwarna kuning muda di bagian atas bila sejumlah darah di masukkan kedalam wadah (tabung) yang kemudian di sentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama 15 menit. 4. Plasma EDTA adalah darah yang ditambahkan antikoagulan EDTA, dibiarkan selama 5 menit kemudian di sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit. Lapisan jernih berwarna kuning muda di bagian atas adalah plasma EDTA.
5. EDTA adalah antikoagulan yang digunakan untuk mencegah pembekuan darah dimana konsentrasi yang dipakai adalah 1 mg/ml darah. 6. Balita adalah anak berumur 2 5 tahun yang di rawat inap di RS Telogorejo Semarang.