J. Sains & Teknologi, April 2017, Vol. 17 No. 1 : 96 102 ISSN 1411-4674 PENGARUH ALBUMIN TELUR MEDIUM SEXING TERHADAP MOTILITAS, PERESENTASE HIDUP, DAN ABNORMALITAS SPERMATOZO Y SETELAH PEMBEKUAN PADA SAPI BALI Effect of Medium Egg Albumin Sexing on Motility, Viability, and Spermatozoa Y Abnormality after the Freezing on Bali Cattle Risdha Damayanti 1, Abd. Latief Toleng 2,Muhammad Yusuf 3 1 Program Studi Ilmu dan Teknologi Peternakan, Pascasarjana, Universitas Hasanuddin, Makassar (risdha_damayanti@yahoo.co.id) 2 Dosen Prodi Ilmu dan Teknologi Peternakan, Fakultas Peternakan, Universitas Hasanuddin, Makassar (latief_tolleng@yahoo.com) 3 Dosen Prodi Ilmu dan Teknologi, Fakultas Peternakan, Universitas Hasanuddin, Makassar (ramadhanti_yusuf@yahoo.com) ABSTRAK Salah satu upaya yang perlu dilakukan adalah meningkatkan angka kelahiran sapi jantan melalui teknologi reproduksi dengan metode yang memungkinkan untuk merubah proporsi jantan yaitu sexing spermatozoa dengan mengoptimalisasi spermatozoa Y hasil sexing dan setelah pembekuan menggunakan metode Gradien Albumin Telur dengan pengencer Andromed. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektifitas metode sexing gradien albumin telur terhadap pembekuan spermatozoa Y pada sapi Bali. Parameter yang diukur pada penelitian ini motilitas, persentase hidup, dan abnormalitas. Kemudian data dilakukakan dengan menganalisa motilitas, persentase hidup dan abnormalitas yang disajikan dalam bentuk data analysis perbedaan anova. Hasil rata-rata motilitas, pesentase hidup, dan abnormalitas menunjukkan tidak adanya perbedaan nyata (P>0,05). Kesimpulan metode sexing gradien albumin telur dengan pengencer andromed menunjukkan hasil yang efektif dalam mempertahankan kualitas spermatozoa Y pada sapi Bali selama pembekuan, gradien albumin telur untuk 10%, 20%, dan 30% masih efektif untuk pembekuan spermatozoa Y. Kata kunci: Sexing, Motilitas, Persentase Hidup, dan Abnormalitas. ABSTRACT One of the efforts that need to be done to increase the birth rate of the bulls is through reproductive technology with a method that allows to change the proportion of males is sexing spermatozoa to optimize the results of sexing and Y spermatozoa after freezing using gradient method. The aim of this research is to determine the effectiveness of egg albumin gradien sexing method spermatozoa Y freezing on Bali cattle. The research was performed by analysis of variance (ANOVA). The measured parameters in this research included motility, viability, and fresh cement abnormality before and after the sexing using egg albumin gradient sexing with andromed. The result showed that there was no difference in average motility, viability, and abnormality (p> 0,05). The study confirms that egg albumin gradient sexing and andromed diluter showed an effective result in maintaining the quality of spermatozoa Y with Bali cattle during freezing. Egg albumin gradient 10%, 20% and 30% were still effective for freezing the spermatozoa Y. Keywords: Sexing, Motilit, Viability, and Abnormality. 96
Risdha Damayanti ISSN 1411-4674 PENDAHULUAN Sapi Bali merupakan sapi potong asli Indonesia dan merupakan hasil domestikasi dari Banteng (Bos Bibosbanteng), yang memiliki potensi besar untuk mensuplai kebutuhan protein. Selanjutnya dikatakan bahwa sapi Bali murni mempunyai peran penting dalam perkembangan peternakan di Indonesia (Arifiantini dkk., 2006). Untuk mengembangkan peternakan di Indonesia kualitas ternak sapi Bali dapat dilakukan yaitu melalui teknologi reproduksi seleksi pejantan yang berkualitas baik (pejantan unggul) dan memproduksi semen pejantan unggul, sehingga menghasilkan keturunan yang berkualitas baik. Salah satu upaya untuk memperbanyak kelahiran sapi jantan adalah melalui teknologi reproduksi dengan melakukan Inseminasi Buatan menggunakan semen beku hasil sexing yang mengandung spermatozoa berkromosom Y. Pengembangan kualitas semen sapi Bali unggul dengan metode sexing merupakan salah satu aspek untuk memaksimalkan potensi pejantan sapi lokal dan kualitas ternak sapi Bali, serta meningkatkan laju peningkatan populasi sapi Bali dan juga dapat menjaga kemurnian sapi Bali (Anonim, 2014). Semen yang umum digunakan untuk melakukan inseminasi yaitu semen beku dan semen cair. Namun, semen beku memiliki daya simpan yang lebih lama dibandingkan dengan semen cair (Wijayanti & Simanjuntak 2006). Dalam proses pembuatan semen beku, nutrisi yang terdapat pada pengencer yang digunakan sangat berperan penting dalam melindungi spermatozoa. Oleh sebab itu, pengencer harus mampu menyediakan bahan makanan sebagai sumber energi bagi spermatozoa (Arifiantini & Yusuf 2004). Pengencer semen komersial memudahkan dalam penggunaannya karena telah tersedia dalam paket siap pakai dan mengandung seluruh bahan-bahan yang diperlukan untuk kriopreservasi semen, salah satunya adalah pengencer Andromed yang memiliki beberapa kelebihan diantaranya memiliki komposisi lengkap yang dibutuhkan oleh spermtozoa. Hal inilah yang menjadi tujuan dilakukannya penelitian untuk menguji kualtitas spermatozoa Y setelah pembekuan sapi Bali pada pengencer Andromed dengan metode gradien albumin telur. BAHAN DAN METODE Waktu dan Lokasi Penelitian Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November 2015 sampai dengan bulan Februari 2016. Bertempat di Laboratorium Reproduksi Ternak, Fakultas Peternakan, Universitas Hasanuddin, Makassar. Materi Penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu gelas objek, cover glass, tabung reaksi, mikropipet, hemocytometer, pipet tetes, sentrifuge, CASA Sperm Vision, dan mikroskop. Bahan yang digunakan adalah semen sapi Bali yang diperoleh dari 3 pejantan sapi Bali, albumin telur, putih telur ayam kampung, eosin 2%, aquabidest, andromed, tissue, straw, aluminium foil, kertas label, kertas saring, dan alkohol 70%. Metode Penelitian Pengambilan semen dilakukan pada pagi hari. Pejantan dibawa ke kandang jepit dan dipertemukan dengan betina pemancing untuk memberi rangsangan libido kepada pejantan yang akan ditampung semennya. Vagina buatan yang telah disiapkan diberi pelicin, apabila terdapat tanda-tanda pejantan akan menaiki betina pemancing, maka vagina buatan dipasang pada penis untuk menampung semen, setelah itu dilakukan pemeriksaan secara makroskopis dan mikroskopis. Pemeriksaan semen dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis. Penilaian semen secara makroskopis meliputi warna, volume, ph, dan konsistensi. Pemeriksaan secara mikroskopis meliputi motilitas, persentase hidup dan abnormalitas. Putih telur ayam kampung (bagian yang encer) dipisahkan dari kuning telur dengan cara disaring menggunakan kertas saring. Pengenceran dilakukan menggunakan dengan menambahkan pengencer andromed dengan aquabidest dengan perbandingan 1:4 kemudian di homogenkan dan dimasukkan dalam waterbath dengan suhu 37 o C. Pengencer andromed dicampur dengan putih telur menggunakan mikropipet. Gradien albumin putih telur dibuat dengan mencampurkan albumin telur dengan Andromed menghasilkan konsentrasi 10%, 20% dan 30%. Gradien disusun mulai dari konsentrasi 10%, 20% dan 30% dengan volume masing- 97
Sexing, Motilitas, Persentase Hidup, dan Abnormalitas ISSN 1411-4674 masing 3 ml kemudian ditambahkan dengan semen masing-masing 1 ml. Setelah pengencer yang akan digunakan telah siap, maka dilakukan proses pembekuan. Semen hasil sexing dikemas dalam bentuk ministraw dan di equilibrasi pada suhu 3 0 5 0 C selama 3-4 jam didalam lemari pendingin. Selanjutnya proses pembekuan dengan meletakkan straw ke dalam kotak yang berisi N 2 cair selama 10-15 menit. Kemudian straw disimpan didalam container yang berisi N 2 cair pada suhu -196 0 C, thawing semen beku dilakukan dengan menggunakan air pada suhu 37 0 C selama kurang lebih 30 detik. Setelah itu dilakukan evaluasi kualitas semen. Parameter Yang Diukur Motilitas dilihat dibawah mikroskop elektrik berdasarkan gerakan spermatozoa yang hidup dan bergerak maju/progresif. Data diperoleh dengan cara meneteskan sampel semen pada gelas obyek kemudian ditutup dengan cover glass lalu diamati di bawah mikroskop, dengan perhitungan sebagai berikut: Sangat baik (+++), jika terlihat adanya gelombang-gelombang besar, banyak, gelap, tebal dan aktif gumpalan awan hitam dekat waktu hujan yang bergerak cepat berpindah-pindah tempat; Baik (++), bila terlihat gelombang -gelombang kecil, tipis, jarang, kurang jelas dan bergerak lamban; Lumayan (+), jika tidak terlihat gelombang melainkan hanya gerakangerakan individual aktif progresif ; Buruk (0), bila hanya sedikit atau ada gerakan-gerakan individual. Jumlah persentase sperma yang hidup ditandai dengan tidak adanya penyerapan warna bahan pewarna pada spermatozoa. Satu tetes zat warna ditempatkan pada suatu gelas obyek yang bersih dan hangat (suhu 37 C) yang kemudian satu tetes kecil semen ditambahkan dan dicampurkan lalu diulas dengan menggunakan gelas obyek lainnya. Perhitungannya berdasarkan perbandingan antara jumlah sperma hidup yang ditandai dengan kepala tidak berwarna, sebaliknya sperma yang terwarnai akan dinyatakan mati sebab eosin hanya dapat menembus sel sperma yang telah rusak, sehingga nampak terwarnai. Total sperma yang diamati dan dinyatakan dalam persen (%). jumlah sperma yang tidak terwarnai Persentase (%) sperma hidup = x 100% Total jumlah sperma yang dihitung Penyimpangan pada bentuk morfologi spermatozoa yang dapat menurunkan daya fertilitas spermatozoa. Abnormalitas yang dihitung adalah abnormalitas kepala putus, kepala bercabang, ekor putus, ekor bercabang, ekor melingkar dan ekor melengkung. Jumlah sperma yang abnormal Persentase (%) sperma hidup = x 100% Total jumlah sperma yang dihitung Analisis Data. Analisa data dilakukan dengan menganalisa motilitas, persentase hidup dan abnormalitas yang disajikan dalam bentuk data analysis perbedaan Anova. HASIL Semen segar yang diperoleh adalah berwarna krem, ini menunjukkan bahwa semen tersebut normal. Volume rata-rata semen sapi Bali hasil evaluasi semen segar adalah 2 ml. Derajat keasamaan (ph) rata -rata semen Sapi Bali hasil evaluasi adalah 6, 3. Rata-rata konsistensi semen sapi Bali hasil evaluasi yaitu konsistensi kental. Motilitas atau daya gerak spermatozoa rata - rata berkisar (++) 2 Nilai. Hasil evaluasi tabel 1 motilitas individu semen segar sapi Bali adalah dengan nilai 90,6%. Persentase hidup semen segar sapi Bali menunjukkan dengan nilai yang baik dengan nilai 69,6%. Dan persentase abnormalitas semen segar sapi Bali adalah 9,2%. Tabel 1. Kualitas semen pejantan sapi Bali yang berbeda Kualitas Pejantan A B C Rata-rata Makroskopis Warna Krem Krem Krem Krem Volume (ml) 2 2 2 2 Ph 6,0 7,0 6,0 6,3 Konsistensi Sedang Kental Kental Kental Mikroskopis Motilitas Massa +++ ++ ++ ++ Motilitas Individu (%) 91,3 88,3 91,3 90,6 Persentase Hidup (%) 70,7 70,5 67,5 69,6 Abnormalitas (%) 7,9 8,4 12,4 9,2 Hasil data tabel 2 motilitas individu spermatozoa sapi Bali setelah equilibrasi dengan nilai motilitas 10% (73, 6), 20% (71,9) dan 30% (71,9). Persentase hidup setelah equilibrasi memiliki nilai persentase hidup yang baik 10% 98
Risdha Damayanti ISSN 1411-4674 (84,2), 20% (81,9) dan 30% (83,4). Dan Abnormalitas spermatozoa pada pengencer Andromed memiliki nilai persentase abnormalitas yang baik yaitu 10% (13,8), 20% (15,1) dan 30% (13,6). Motilitas individu spermatozoa sapi Bali setelah thawing dengan nilai motilitas 10% (59,2), 20% (58,0), dan 30% (59,3). Persentase hidup spermatozoa setelah thawing memiliki nilai persentase hidup yang baik, yaitu 10% (83,0 ), 20% (83,8 ) dan 30% (82, 9). Abnormalitas spermatozoa pada pengencer Andromed setelah thawing memiliki nilai persentase abnormalitas yang baik yaitu pada 10% (21,7), 20% (23,3) dan 30% (23,0). Berdasarkan hasil penelitian bahwa hasil data anova menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata (P>0, 05) terhadap motilitas semen beku sapi Bali dengan pengencer Andromed. Hasil data anova menunjukkan persentase hidup spermatozoa sapi Bali pada pengencer Andromed menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata (P>0, 05). Hasil data anova abnormalitas spermatozoa sapi Bali pada pengencer Andromed menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata (P>0, 05). Tabel 2. Kualitas semen pejantan sapi Bali setelah equilibrasi dan setelah thawing dengan gradien albumin telur Perlakuan Setelah Equilibrasi Setelah Thawing Parameter Nilai P Parameter 10 % 20 % 30 % 10 % 20 % 30 % Nilai P Motilitas (%) 73,6±12,9 71,9±10,2 71,9±11,0 0,7067 59,2±18,8 58,0±23,0 59,3±22,6 0,9530 Persentase Hidup (%) Abnormalitas (%) 84,2±3,6 81,9±3,2 83,4±3,2 0,0186 83,0±5,1 83,8±5,6 82,9±4,6 0,7573 13,8±5,0 15,1±7,3 13,6±4,5 0,3971 21,7±8,4 23,3±8,7 23,0±9,4 0,6612 PEMBAHASAN Penelitian ini menunjukkan bahwa karakteristik makroskopis dan mikroskopis semen segar sapi Bali yang digunakan pada penelitian ini memperliatkan kondisi yang normal yang layak untuk diproses menjadi semen beku. Semen segar yang diperoleh adalah berwarna krem, ini menunjukka bahwa semen tersebut normal. Hal ini sesuai pendapat Partodihardjo (1992), menyatakan bahwa warna semen yang dihasilkan yaitu warna krem keputih-putihan, jika berwarna hijau kekuning-kuningan berarti mengandung kuman Pseudomonas Aeruginosa, semen yang berwarna merah berarti mengandung darah dan semen yang berwarna coklat berarti semen tersebut mengandung darah yang telah membusuk. Volume semen sapi Bali dihitung dengan cara melihat skala yang ada pada tabung semen. Anonim (2014), menyatakan bahwa volume semen dapat dipengaruhi oleh bangsa, umur, ukuran badan, tingkatan makanan, frekuensi penampungan dan faktor lain. Volume semen sapi bervariasi antar 1-15 ml. Nilai derajat keasaman (ph) menunjukkan kisaran yang normal yang diukur dengan menggunakan kertas lakmus yang memiliki rentang 6,0-7,0. Semen segar memiliki ph berkisar 6,2-6,8 (Anonim, 2010). Penilaian konsistensi dilakukan dengan cara mengoyang - goyangkan tabung semen. Feradis (2010), menyatakan bahwa konsistensi semen dikatakan kental apabila semen mempunyai konsentrasi 1000 juta sampai 2000 juta per ml. Nilai (++) 2 adalah gerakan massa yang baik ditandai dengan gelombang besar, tipis, jarang, dan bergerak lambat (Afriantini dkk., 2006). Hasil data anova motilitas semen segar sapi Bali menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata (P>0,05). Anonim (2014), menyatakan bahwa pejantan fertil mempunyai nilai 50-80% spermatozoa yang aktif dan progresif. ). Persentase hidup semen segar sapi Bali (P>0,05). Spermatozoa hidup dihitung berdasarkan hasil pewarnaan differensial eosin 2%. Spermatozoa mati akan menyerap warna sedangkan spermatozoa hidup tidak menyerap warna (Anonim, 2014). Selanjutnya ditambahkan oleh Garner & Hafez (2000), bahwa persentase hidup spermatozoa harus lebih dari 50%. Persentase abnormalitas semen segar sapi Bali menunjukkan bahwa adanya perbedaan yang nyata (P>0,05). Pada penelitian ini abnormalitas yang dijumpai umumnya berupa abnormalitas primer yakni ekor spermatozoa yang melingkar dan melenkung. Menurut Toelihere (1985), abnormalitas spermatozoa terbagi atas abnormalitas primer dan sekunder. Abnormalitas primer meliputi kepala yang terlampau besar, kepala terlampau kecil, kepala pendek melebar, kepala rangkap, ekor ganda; bagian tengah melipat, membengkok, dan ekor melingkar, putus 99
Sexing, Motilitas, Persentase Hidup, dan Abnormalitas ISSN 1411-4674 atau terbelah. Abnormalitas sekunder termasuk ekor yang putus, kepala tanpa ekor. Motilitas individu spermatozoa sapi Bali setelah equilibrasi dengan mengencer Andromed (P>0, 05). Hal ini menunjukkan bahwa spermatozoa yang menggunakan pengencer Andromed masih layak digunakan untuk melakukan inseminasi buatan. Hasil ini sesuai dengan penelitian Ervandi dkk (2013), yang menyatakan bahwa persentase motilitas individu spermatozoa mempunyai nilai antara 50-80%, dimana pada penelitian Ervandi dkk (2013), gradien albumin telur dengan pengencer andromed menggunakan tiga lapisan konsentrasi yaitu konsentrasi 10%, 30% dan 50%. Persentase hidup spermatozoa setelah equilibrasi pada pengencer Andromed menunjukkan adanya perbedaan yang nyata (P<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa gradien albumin telur dengan pengencer Andromed masih layak digunakan untuk melakukan inseminasi buatan. Hasil ini sesuai dengan penelitian Ervandi dkk (2013), yang menyatakan bahwa andromed mengandung lisitin yang cukup tinggi dan mengandung fruktosa yang mempunyai peranan penting sebagai sumber energi bagi spermatozoa, sehingga dapat hidup dan membran spermatozoa tetap normal. Hasil data anova abnormalitas spermatozoa sapi Bali pada pengencer Andromed (P>0,05). Hal ini menunjukkan bahwa spermatozoa pada pengencer Andromed masih layak digunakan untuk melakukan inseminasi buatan.abnormalitas spermatozoa yang ditemui umumnya berupa abnormalitas tersier yaitu kepala tanpa ekor atau ekor tanpa kepala. Disebabkan karena proses sentrifugasi saat pencucian spermatozoa. Sentrifugasi mengakibatkan tejadinya gesekan antara spermatozoa atau spermatozoa dengan medium pemisah maupun dengan dinding tabung.hal ini menyebabkan persentase abnormalitas spermatozoa dan kerusakan membran spermatozoa meningkat.abnormalitas spermatozoa yang baik jika abnormalitasnya tidak lebih dari 20% (Ball & Peters, 2004). Berdasarkan hasil penelitian bahwa hasil data anova setelah thawing menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata (P>0,05) terhadap motilitas semen beku sapi Bali dengan pengencer Andromed. Hal ini menunjukkan bahwa spermatozoa yang menggunakan pengencer Andromed masih layak digunakan untuk ppmelakukan inseminasi buatan, spermatozoa yang menggunakan Andromed masih layak digunakan untuk inseminasi buatan. Sebagaimana pendapat Toelihere (1993), yang menyatakan bahwa post thawing motility (PTM) semen beku yang layak IB yaitu sekitar 40%. Hal ini juga sesuai dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Fatimah (2011), menyangkut kualitas spermatozoa pada pengencer Andromed bahwa spermatozoa pada pengencer tersebut masih layak IB karena persentase motilitasnya masih berada diatas 40%. Persentase hidup spermatozoa setelah thawing menunjukkan tidak adanya perbedaan yang nyata (P>0,05). Hal ini menunjukkan bahwa gradien albumin telur dengan pengencer Andromed masih layak digunakan untuk melakukan inseminasi buatan. Pada penelitian ini, spermatozoa mati dan hidup dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna eosin. Hal ini sesuai dengan pendapat Mulyono (1998), yang menyatakan bahwa sperma yang terwarnai berarti sperma tersebut mati, sedangkan yang tidak terwarnai berarti sperma tersebut hidup.perubahan warna pada spermatozoa mati disebabkan oleh rusaknya membran plasma pada spermatozoa sehingga zat warna pada eosin terserap oleh spermatozoa tersebut. Abnormalitas spermatozoa sapi Bali pada pengencer Andromed setelah thawing (P>0,05). Hal ini juga menunjukkan bahwa spermatozoa pada pengencer Andromed masih layak digunakan untuk melakukan inseminasi buatan. Hal ini sesuai dengan pendapat Toelihere (1993), yang menyatakana bahwa selama abnormalitas spermatozoa belum melebihi 20% dari contoh semen, maka semen tersebut masih dapat dipakai untuk inseminasi. Abnormalitas spermatozoa terbagi menjadi dua kelompok yaitu abnormalitas primer dan sekunder. McPeake & Pennington (2009), mengelompokkan abnormalitas dalam dua kategori, yaitu primer (yang meliputi abnormalitas kepala dan bentukmidpiece abnormalitas midpiece dan tightly coiled tails) dan sekunder (kepala normal yang terputus, droplet dan ekor yang membengkok). 100
Risdha Damayanti ISSN 1411-4674 KESIMPULAN DAN SARAN Metode sexing Gradien Albumin telur dengan pengencer Andromed menunjukkan hasil yang efektif dalam mempertahankan kualitas spermatozoa Y pada sapi Bali selama pembekuan. Gradien albumin telur untuk 10 %, 20 dan 30 % masih efektif untuk pembekuan spermatozoa Y. Disarankan diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai IB menggunakan semen hasil sexing yang menggunakan pengencer Andromed dengan gradien albumin telur. DAFTAR PUSTAKA Anonim. (2010). Viabilitas Semen Sapi yang Dibekukan menggunakan Krioprotektan Gliserol.http://www.academia.edu/20108 73/viabilitas_semen_sapi_simental_yang_ dibekukan_menggunakan_krioprotektan_ gliserol. Diakses pada tanggal 9 Juni 2016. Anonim. (2014). https://sites.google.com/a/sammariebasra. com/rsia sammariebasra/pemilihanspermatozoa-x-y. Afiati F, Herdis dan Said S. 2013. Pembibitan Ternak Dengan Inseminasi Buatan.Penebar Swadaya. Jakarta. Arifiantini RI. & Yusuf TL. (2004). Keberhasilan penggunaan tiga pengencer dalam dua jenis kemasan pada proses pembekuan semen sapi Frisien Holstein. Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor. Bogor. Arifiantini R.I., Wresdiaty T., & Retnani E.F (2006). Pengujian Morfologi Spermatozoa Sapi bali (Bos Son daicus) Menggunakan Pewarnaan "Williams". Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor, Bogor. Ball P.J.H. & Peters A.R. (2004). Reproduction in cattle. Blackwell publishing. BlackwellPublishing Asia Pty Ltd, 550 Swanston Street, Carlton, Victoria 3053, Australia. Ervandi M., Susilawati T., & Wahyuningsih S. (2013). Pengaruh Pengencer yang Berbeda Terhadap Kualitas Spermatozoa Sapi Hasil Sexing dengan Gradien Albumin (Putih Telur). Fakultas Peternakan Brawijaya. Fatimah S. (2011). Motilitas dan persentase hidup spermatozoa sapi Friesian Holstein postthawing dalam pengencer skim kuning telur, tris kuning telur dan andromed. Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga. Surabaya. Feradis. (2010). Reproduksi Ternak. Alfabeta, Bandung. Garner. D. L. & Hafez E.S.E. (2000). Spermatozoa and Seminal Plasma. In: E.S.E, Hafez (Ed.). Reproduction in Farm Animals. 7th Ed. Lea and Febiger. Philadelphia. McPeake S.R. & Pennington J.A. (2009). Breeding soundness evaluation for beef and,dairybulls.(http://www.uaex.edu/other _areas/publications/pdf/fsa3046.pdf, diakses pada tanggal 26 Juni 2016) Mulyono S. (1998). Teknik Pembibitan Kambing dan Domba. Penebar Swadaya. Jakarta. Partodihardjo S. (1992). Fisiologi Reproduksi Hewan. Mutiara Sumber Widya. IPB. Bogor. Toelihere. (1985). Inseminasi Buatan Pada Ternak. Cetakan kedua. Angkasa Bandung. Toelihere M. R. (1993). Fisiologi Reproduksi pada Ternak. Fakultas Kedokteran Hewan. IPB. Penerbit Angksa. Bandung. Wijayanti G.E. & Simanjuntak S.B.I (2006). Viabilitas sperma ikan Nilem (Osteochilus hasselti C.V.) setelah penyimpanan jangka pendek dalam larutan ringer. 2:207-214. 101
Sexing, Motilitas, Persentase Hidup, dan Abnormalitas ISSN 1411-4674 102