SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT NAMA : dr. Nani Widjaja NIM : 1490751072 PROGRAM STUDI : ILMU BIOMEDIK JUDUL TESIS :PEMBERIAN GROWTH HORMONE MENINGKATKAN NEOVASKULARISASI, JUMLAH SEL FIBROBLAS DAN EPITELISASI PADA PROSES PENYEMBUHAN LUKA TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus) JANTAN TUA Dengan ini menyatakan bahwa karya ilmiah Tesis ini bebas plagiat. Apabila dikemudian hari terbukti terdapat plagiat dalam karya ilmiah ini, maka saya bersedia menerima sanksi sesuai Peraturan Mendiknas RI No. 17 Tahun 2010 dan Peraturan Perundang-undangan yang berlaku. Denpasar, 9 Agustus 2016 (dr. Nani Widjaja) 1
UCAPAN TERIMA KASIH Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat, rahmat, karunia serta petunjuk-nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis yang berjudul Pemberian Growth Hormone meningkatkan neovaskularisasi, jumlah sel fibroblas dan epitelisasi pada proses penyembuhan luka tikus Wistar (Rattus norvegicus) jantan tua dalam rangka memperoleh gelar Magister pada Program Studi Ilmu Biomedik, kekhususan Anti Aging Medicine, di Program Pascasarjana Universitas Udayana, Bali-Indonesia. Selama penelitian ini, penulis mendapat banyak pengalaman berharga yang memperkaya wawasan, serta sebagai proses pembelajaran hidup penulis baik dari segi ilmiah maupun aspek nilai sosial. Semua ini tidak lepas dari peran serta orangorang disekeliling penulis yang senantiasa mendukung dengan tulus dan ikhlas. Pada kesempatan ini, perkenankanlah penulis menyampaikan rasa hormat, penghargaan, dan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada : 1. Prof. Dr. dr. Wimpie Pangkahila, SpAnd, FAACS, selaku Pembimbing I, yang telah meluangkan waktunya untuk membimbing, mengarahkan, dan memberikan masukan kepada Penulis selama penyusunan tesis ini mulai dari awal hingga selesai. 2. Prof. Dr. dr. Alex Pangkahila, M.Sc., Sp. And, selaku Pembimbing II, yang telah meluangkan waktunya untuk membimbing, mengarahkan, dan 2
memberikan masukan kepada Penulis selama penyusunan tesis ini mulai dari awal hingga selesai. 3. Prof. dr. IGM. Aman, Sp. FK, selaku Penguji, yang telah memberikan masukan, saran, serta koreksi yang sangat berharga dalam penyusunan tesis ini. 4. Dr. rer.nat. dr. Ni Nyoman Ayu Dewi., M. Si, selaku Penguji, yang telah memberikan masukan, saran, serta koreksi yang sangat berharga dalam penyusunan tesis ini. 5. Dr. dr. Ida Iswari, Sp. MK., M. Kes, selaku Penguji, yang telah memberikan masukan, saran, serta koreksi yang sangat berharga dalam penyusunan tesis ini. 6. Prof. Dr. dr. Ketut Suastika, Sp.PD-KEMD selaku Rektor Universitas Udayana atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada Penulis untuk mengikuti dan menyelesaikan pendidikan Program Magister di Universitas Udayana, Bali. 7. Prof. Dr. dr. A. A Raka Sudewi, Sp. S (K), selaku Direktur Program Pascasarjana Universitas Udayana yang telah memberikan kesempatan kepada Penulis untuk menjadi mahasiswi pada Program Magister Ilmu Biomedik, Universitas Udayana, Bali. 8. Ferbian Siswanto, SKH, yang telah membantu membimbing penulis dalam menginterpretasikan hasil penelitian. 9. Suami tercinta (dr Ananta) serta anak dan cucuku tersayang (Ronald, Charles, Pauline dan Samantha)atas iringan doa, dukungan, perhatian dan 3
kasih sayang yang tulus dan tidak terhingga kepada Penulis, sehingga Penulis mampu menyelesaikan tesis ini. 10. Seluruh Dosen Ilmu Biomedik Universitas Udayana, Bali. Yang telah memberikan ilmunya yang sangat bermanfaat. 11. Para staf Ilmu Biomedik Universitas Udayana, Bali. Yang telah memberikan informasi dan bantuan kepada Penulis mulai dari awal sampai akhir menuntut ilmu di Bagian Biomedik. 12. Teman-teman angkatan 9 dan 10, tahun 2014 Anti Aging Medicine, terutama dr.herti E. Silalahi, M. Biomed, Mkes, PhD dan dr Herna, M.Biomed yang telah memberikan semangat dan bimbingan selama penyusunan tesis ini berlangsung. 13. Pasien-pasienku tercinta dari Klinik Jasmeen yang selalu mendukung dan mengerti akan kesibukan Penulis selama menempuh pendidikan master ini. Semoga Tuhan Yang Maha Esa senantiasa memberikan Rahmat-Nya kepada semua pihak yang telah membantu penyelesaian tesis ini. Penulis menyadari bahwa tesis ini jauh dari sempurna, karena itu Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun. Akhir kata Penulis ucapkan, Semoga hasil penelitian ini dapat memberikan manfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan di masa yang akan datang. Amin. Denpasar, 9 Agustus 2016 Penulis, 4
dr Nani Widjaja PEMBERIAN GROWTH HORMONE MENINGKATKAN NEOVASKULARISASI, JUMLAH SEL FIBROBLAS DAN EPITELISASI PADA PROSES PENYEMBUHAN LUKA TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus) JANTAN TUA ABSTRAK Luka adalah kerusakan atau penyimpangan dari struktur anatomis dan fungsional yang normal. Perubahan fisiologis yang terjadi pada proses regenerasi jaringan pasca terjadinya luka adalah neovaskularisasi, meningkatnya jumlah fibroblas dan terjadinya epitelisasi. HumanGrowth Hormone (HGH) memainkan peran penting dalam proses pertumbuhan, perkembangan, serta mempercepat penyembuhan. Tujuan penelitian ini adalah untuk membuktikan bahwa pemberian Growth Hormone meningkatkan neovaskularisasi, jumlah sel fibroblas dan epitelisasi pada proses penyembuhan luka tikus Wistar jantan tua. Rancangan penelitian yang digunakan adalah eksperimental, dengan post-test only control group design, menggunakan 24 ekor tikus. Pengambilan sampel dilakukan secara random, kemudian dibagi menjadi 4 kelompok yaitu 2 kelompok kontrol menjadi kelompok 7 hari (K7) dan kelompok 14 hari (K14) dan 2 kelompok perlakuan juga dibagi menjadi kelompok 7 hari (P7) dan kelompok 14 hari (P14) dengan masingmasing jumlah tikus 6 ekor/kelompok.semua kelompok tikus dibuat 1 buah luka insisi full thickness. Kelompok kontrol hanya diberikan aquades injeksi subkutan sebanyak 0,2 ml/hari dan kelompok perlakuan diberikan Growth Hormone sebanyak 0,018 IU diberikan secara injeksi subkutan setiap hari. Hasil penelitian ini menunjukkan rerata jumlah neovaskularisasi kelompok K7 adalah 16,17±1,941, sedangkan pada kelompok P7 adalah 29,33±3,777 (p<0,001). Setelah 14 hari perlakuan menunjukkan tidak terjadi neovaskularisasi pada kedua kelompok. Selain itu rerata jumlah sel fibroblas pada kelompok K7 adalah 124,67±11,877 dankelompok P7 adalah 166,67±8,262 (p<0,01), namun kelompok K14 adalah 96,17±3,189 dan pada kelompok P14 adalah 101,33±5,391 (p>0,05). Celah luka pada kelompok K7 adalah 772,37 ± 200,28 µm, sedangkan pada kelompok P7 tidak teramati adanya celah luka yang menunjukkan bahwa proses epitelisasi telah sempurna.dengan demikian disimpulkan bahwa pemberian Growth Hormone meningkatkan neovaskularisasi, jumlah sel fibroblas dan epitelisasi pada proses penyembuhan luka tikus Wistar (Rattus norvegicus) jantan tua. Kata kunci: growth hormone,neovaskularisasi, jumlah sel fibroblas, epitelisasi, penyembuhan luka 5
GROWTH HORMONE INCREASED NEOVASCULARIZATION, THE NUMBER OF FIBROBLAST AND EPITHELIZATION IN WOUND HEALING PROCESS OF OLD MALE WISTAR RATS (Rattus norvegicus) ABSTRACT Wound is damage or deviation from normal anatomical and functional structures. The physiological changes that occur in the process of tissue regeneration after injury is neovascularization, increased numbers of fibroblasts and the epithelialization. Human Growth Hormone (hgh) plays a major role in the growth, development, and accelerate healing process. The purpose of this study was to prove that the administration of growth hormone increases neovascularization, the number of fibroblasts and epithelization in wound healing process old male Wistar rats (Rattus norvegicus). The design of the study was experimental, with a randomized post-test only control group design, using 28 mice. Sample divided into four groups: two control groups and two treatment groups. The control group was divided into 2 groups into groups of 7 days (K7) and the group 14 days (K14). The treatment group was also divided into groups of 7 days (P7) and the group 14 days (P14) with each number of mice 6 mice / group. All groups of rats were made one full thickness incision. The control group was given distilled water as a subcutaneous injection of 0.2 ml / day and treatment groups were given growth hormone administered as many as 0,018 IU daily subcutaneous injection. The results of this study showed that the neovascularization of K7 group was 16.17±1.941, whereas the P7 group was 29.33 ± 3.777 (p <0.001). After 14 days of treatment showed no neovascularization occurs in both groups. Besides the average number of fibroblasts of K7 group was 124.67 ± 11.877 and P7 group was 166.67 ± 8.262 (p <0.01), however the K14 group showed an average of 96.17 ± 3.189 and the P14 group was 101.33 ± 5.391 (p> 0.05). Cracks wound on K7 group was 772.37 ± 200.28 μm, whereas in the group P7 was not observed indicated that epithelialization process has been done. It can be concluded that administration of growth hormone increased neovascularization, the number of fibroblasts and epithelialization in wound healing process of the old male Wistar rats (Rattus norvegicus). Keywords: growth hormone, neovascularization, the number of fibroblasts, epithelization, wound healing 6
DAFTAR ISI Judul... i Lembar Persetujuan... iii Penetapan Penguji... iv Surat Pernyataan Bebas Plagiat... v Ucapan Terima Kasih... vi Abstrak... ix Abstract... xi Daftar Isi...xiii Daftar Gambar...xvi Daftar Singkatan... xvii Daftar Lampiran...xviii Daftar Tabel... xix Bab I. Pendahuluan...1 1.1. Latar Belakang... 1 1.2. Rumusan Masalah... 4 1.3. Tujuan Penelitian... 5 1.4. Manfaat Penelitian... 5 BAB II. Kajian Pustaka... 6 2.1. Penuaan... 6 2.1.1. Definisi penuaan... 6 2.1.2. Penyebab Penuaan... 6 2.2. Kulit... 7 2.3. Luka... 8 2.3.1. Definisi Luka... 8 2.3.2. Fase-fase Penyembuhan Luka... 9 7
2.3.2.1. Fase Inflamasi... 10 2.3.2.2. Fase Proliferasi... 10 2.3.2.3. Fase Remodelling...11 2.4. Growth Hormone...12 2.4.1. Mekanisme Regulasi Growth Hormone... 13 2.4.2. Fungsi Growth Hormone...15 2.5. Hubungan Growth Hormone dengan Proses Penyembuhan Luka...19 BAB III. Kerangka Berpikir, Konsep dan Hipotesis Penelitian...21 3.1. Kerangka berpikir...21 3.2. Konsep Penelitian...23 3.3. Hipotesis Penelitian... 24 BAB IV. Metode Penelitian... 25 4.1. Rancangan Penelitian...25 4.2. Variabel Penelitian...26 4.2.1. Klasifikasi Variabel...27 4.2.1.1. Variabel bebas...27 4.2.1.2. Variabel Kendali...27 4.2.1.3. Variabel Tergantung...27 4.3. Tempat dan Waktu Penelitian...27 4.3.1. Tempat Penelitian...27 4.3.2. Waktu Penelitian...28 4.4 Subjek dan Sampel...28 4.4.1 Kriteria Subjek...28 4.4.2. Besaran Sampel...29 4.4.2.1. Penghitungan Besar Sampel...29 4.4.2.2. Tehnik Penentuan Sampel...29 4.5. Definisi Operasional variabel...30 4.5.1. Growth Hormone...30 4.5.2. Neovaskularisasi...30 8
4.5.3. Fibroblas... 31 4.5.4. Epitelisasi... 31 4.5.5. Pemeriksaan Histologi... 32 4.6. Bahan dan alat penelitian... 32 4.6.1. Bahan penelitian...32 4.6.2. Alat Penelitian...32 4.6.3 Pemilihan dan Pemeliharaan Hewan Uji...33 4.7. Prosedur Penelitian...34 4.8. Pengamatan Hasil...38 4.9. Alur Penelitian...39 4.10 Analisis Data...40 BAB V. Hasil Penelitian...41 5.1. Analisis Deskriptif...41 5.2. Uji Normalitas Data...45 5.3. Uji Homogenitas data...45 5.4. Uji Komparabilitas...46 5.4.1 Uji Komparabilitas Neovaskularisasi...46 5.4.2 Uji Komparabilitas Jumlah Sel Fibroblas...48 5.4.3 Uji Komparasi Epitelisasi...50 BAB VI. Pembahasan...51 BAB VII. Simpulan dan Saran... 56 7.1. Simpulan... 56 7.2. Saran... 56 Daftar Pustaka...57 Daftar Lampiran...61 9
DAFTAR GAMBAR Gambar 2.1. Penampang Kulit Manusia... 7 Gambar 2.2. Mekanisme regulasi Growth Hormone... 13 Gambar 3.1. Konsep Penelitian... 23 Gambar 4.1. Bagan Rancangan Penelitian... 25 Gambar 4.2. Hubungan Antar Variabel... 27 Gambar 4.3. Alur Penelitian... 39 Gambar 5.1 Histopatologi Jaringan Kulit Kelompok Kontrol (K7) setelah 7 hari perlakuan... 42 Gambar 5.2 Histopatologi Jaringan Kulit Kelompok Perlakuan (K14) setelah 7 hari perlakuan... 43 Gambar 5.3 Gambaran Histopatologi Sel Fibroblas Jaringan Kulit setelah 14 hari perlakuan... 43 Gambar 5.4 Perbandingan Rerata Jumlah Neovaskularisasi Sesudah 7 Hari Perlakuan Antar Kelompok... 47 Gambar 5.5 Perbandingan Rerata Jumlah Sel Fibroblas antar Kelompok pada Hari ke 7 dan Hari ke 14... 50 10
DAFTAR SINGKATAN AIDS FDA GH GHRH HE HGH : Acquired Immune Deficiency Syndromme : Food and Drug Administration : Growth Hormone : Growth Hormone Releasing Hormone : Hematoksilin Eosin : Human Growth Hormone IGF-1 : Insulin like Growth Factor 1 IU Mg Ml RE SC : International Unit : Mili Gram : Mili Liter : Retikulum Endoplasma : Subkutan 11
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Konversi Perhitungan Dosis...61 Lampiran 2. Tabel Konversi Usia Hewan dengan Usia Manusia... 62 Lampiran 3. Analisis Statistik...63 Lampiran 4. Dokumentasi Penelitian...66 12
DAFTAR TABEL Tabel 5.1 Hasil Analisis Deskriptif Data Variabel Penelitian...44 Tabel 5.2 Hasil Uji Normalitas Data Antar Kelompok...45 Tabel 5.3 Hasil Uji Homogenitas DataAntar Kelompok...46 Tabel 5.4 Rerata Jumlah Neovaskularisasi antar Kelompok...46 Tabel 5.5 Rerata Jumlah Sel Fibroblas antar Kelompok...48 Tabel 5.6 Analisis LSD Perbandingan Rerata Jumlah Fibroblas Antar Kelompok...49 13