HASIL Ekstraksi Rennet dari Abomasum Domba di Atas dan di Bawah Satu Tahun Perbandingan antara berat abomasum, fundus, dan mukosa daerah kelejar fundus dapat dilihat seperti disajikan pada Tabel 1. Tabel 1 Perbandingan berat abomasum, fundus, dan mukosa fundus dari domba di atas dan di bawah satu tahun Domba Berat (gr) Abomasum Fundus Mukosa A1 109.92 77.29 57.53 A2 102.53 70.89 46.93 B1 58.38 40.08 31.45 B2 66.67 47.36 38.58 Rata-rata ± SD 84.38 ±25.63 58.91 ± 17.98 43.62 ± 11.22 Keterangan: A1 dan A2 untuk domba umur di atas satu tahun, B1 dan B2 untuk domba umur di bawah satu tahun. Fraksinasi Ekstrak Kasar Rennet Pemisahan protein dengan teknik liquid IEF akan memisahkan protein dalam ekstrak kasar ke dalam tabung koleksi yang akan diuji ph (Tabel 2). Fraksi ke- Tabel 2 Hasil uji ph terhadap fraksi isolistrik ph A1 A2 B1 B2 1 1 1 1 1 2 1.5 2.5 2 2 3 2.5 3.5 2.5 2.5 4 3 4.5 3 3 5 3.5 5 3.5 4 6 4 11 4.5 4.5 7 5 12.5 5 6.5 8 10 13 6.5 10 9 14 14 11 12 10 14 14 11.5 13 11 14 14 12 14 12 14 14 12.5 14 13 14 14 13 14 14 14 14 14 14 15 14 14 14 14 16 14 14 14 14 17 14 14 14 14 18 14 14 14 14 19 14 14 14 14 20 14 14 14 14
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Gambar 3 Uji ph dengan kertas strip indikator ph memperlihatkan perubahan warna yang menunjukkan gradien peningkatan ph pada fraksi 1 sampai 20 1. Perbandingan Hasil Koagulasi yang Dipengaruhi oleh Aktivitas Enzimatis, Asam, dan Basa Rennet yang telah difraksinasi melalui pemusatan isolistrik ke dalam fraksi-fraksi koleksi kemudian diujikan terhadap ph maka akan menunjukkan peningkatan gradien. Hasil koagulasi susu pada kondisi perbedaan tingkat A keasaman tersebut terlihat B pada Gambar 4. C A B C Gambar 4 Gambaran Aktivitas koagulasi pada kondisi ekstrim asam menyebabkan susu pecah (A), penggumpalan sempurna membentuk curd oleh enzim khimosin (B), dan pada kondisi basa tidak menunjukkan koagulasi (C).
2. Koagulasi Ekstrak Kasar Rennet Tabel 3 Perbandingan waktu koagulasi ekstrak kasar rennet Rennet < 1 tahun Rennet > 1 tahun B1 1.57 A1 5.02 B2 1.26 A2 8.39 Rata-rata± SD 1.42±0.22 Rata-rata± SD 6.71± 2.38 B 1 B2 A1 A1 A2 Gambar 5 Hasil koagulasi rennet di bawah satu tahun (B1 dan B2) memperlihatkan curd yang lebih padat dan kompak dibandingkan hasil koagulasi rennet di atas satu tahun (A1 dan A2). 3. Koagulasi Rennet Hasil Fraksinasi Rennet yang telah difraksinasi selanjutnya diuji secara biologik terhadap kemampuan mengkoagulasaikan susu dengan parameter yang diamati adalah waktu koagulasi dan koaggulan yang terbentuk seperti terlihat pada Tabel 4 dan Gambar 6. Tabel 4 Perbandingan waktu koagulasi susu setelah penambahan rennet hasil pemusatan isolistrik
Fraksi < 1 Tahun Fraksi > 1 Tahun B1-6 0.16 A1-7 2.13 B2-6 0.21 A2-5 5.52 Rata-rata± SD 0.19±0.04 Rata-rata± SD 3.83± 2.40 B1-6 B2-6 A1-7 A2-5 Gambar 6 Hasil uji koagulasi fraksi di bawah satu tahun (B1-6 dan B2-6) yang memiliki kualitas koagulan yang lebih baik dibandingkan fraksi di atas satu tahun (A1-7 dan A2-5). Analisa Protein Identifikasi fraksi yang telah dipisahkan melalui pemusatan isolistrik dapat melalui berbagai metode analisa. SDS-PAGE adalah metode elektroforesis yang diaplikasikan untuk analisa campuran protein secara kualitatif, khususnya untuk melihat hasil purifikasi protein dan menentukan estimasi jumlah dan berat molekul (BM) protein. Poliakrilamid gel digunakan karena memiliki spesifikasi yang lebih baik pada molekul protein. 1. Analisa Protein Ekstrak Kasar Rennet
Pada pengujian analisa protein ekstrak kasar rennet, didapatkan gambaran yang mewakili kandungan protein pada mukosa fundus abomasum domba seperti terlihat pada Gambar 7. A B Gambar 7 Analisa protein ekstrak kasar rennet di atas satu tahun (A) dan di bawah satu tahun (B) menunjukkan keberadaan pita protein dengan variasi ketebalan dan intensitas warna. 2. Analisa Protein Hasil Fraksinasi Pada analisa protein rennet yang telah difraksinasi dapat dilihat bahwa masih terdapat pita protein yang beragam, seperti terlihat pada Gambar 8. Marker B2-1 B2-5 B2-6 B1-6 A1-6 A1-7 A2-5 B1-8 B2-20 36,5 kda 21.5 kda Khimosin (31 kda) Gambar 8 Hasil gel elektroforesis dari fraksi rennet domba di bawah satu tahun (B2-1, B2-5, B2-6, B1-6, B1-8, B2-20) dan di atas satu tahun (A1-6, A1-7, A2-5) diwarnai dengan pewarnaan silver memperlihatkan keberadaan pita khimosin pada lingkaran merah.