Hemositometer Hemositometer atau haemocytometer adalah perangkat awalnya dirancang untuk penghitungan sel darah. Sekarang juga digunakan untuk menghitung jenis sel serta partikel mikroskopis lainnya. Hemositometer ini ditemukan oleh Louis-Charles Malassez dan terdiri dari sebuah slide mikroskop kaca tebal dengan lekukan persegi panjang yang menciptakan sebuah kamar. Ruangan ini adalah diukir dengan lasergrid tergores garis tegak lurus. Perangkat ini dibuat dengan hati-hati sehingga daerah yang dibatasi oleh garis diketahui, dan kedalaman ruang ini juga dikenal. Oleh karena itu mungkin untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam suatu volume tertentu cairan, dan dengan demikian menghitung konsentrasi sel dalam cairan secara keseluruhan. Gbr 1. Hemositometer Hemositometer terdiri dari beberapa, besar, 1 x 1 mm (1 mm 2 ) kuadrat. Ini dibagi dalam 3 cara; 0,25 x 0,25 mm (0,0625 mm 2 ), 0,25 x 0,20 mm (0,05 mm 2 ) dan 0,20 x 0,20 mm (0,04 mm 2 ). Pusat, 0,20 x 0,20 mm ditandai, 1 x 1 mm persegi yang kemudian dibagi lagi menjadi 0,05 x 0,05 mm (0,0025 mm 2 ) kuadrat. Tepi-tepi
mengangkat dari hemositometer yang terus coverslip 0,1 mm dari grid ditandai. Hal ini memberikan setiap persegi volume yang ditetapkan. Tabel 1. Dimensi Hemositometer Dimensions Area Volume at 0.1 mm depth 1 x 1 mm 1 mm2 100 nl 0.25 x 0.25 mm 0.0625 mm2 6.25 nl 0.25 x 0.20 mm 0.05 mm2 5 nl 0.20 x 0.20 mm 0.04 mm2 4 nl 0.05 x 0.05 mm 0.0025 mm2 0.25 nl Struktur sel-ukuran yang akan dihitung adalah yang terletak antara tengah tiga baris di atas dan kanan alun-alun dan dari tiga baris di bagian bawah dan kiri alunalun. Dalam hemositometer Neubauer diperbaiki (umum media), jumlah sel per ml dapat ditemukan hanya dengan mengalikan jumlah sel ditemukan di grid hemositometer (daerah sama dengan kotak merah pada gambar di bawah) dengan 104 (10000). Gambar 2. Grid pada Hemositometer
Grid Hemositometer : Merah : 1 mm 2, 100 nl Hijau : 0,0625 mm 2, 6,25 nl kuning : 0,04 mm 2, 4 nl biru : 0,0025 mm 2, 0,25 nl kedalaman : 0,1 mm. Ketika sebuah sampel cair yang mengandung sel amobil ditempatkan pada ruangan, itu ditutup dengan kaca penutup, dan kapiler sepenuhnya mengisi ruang dengan sampel. Melihat kamar melalui mikroskop, jumlah sel dalam ruang dapat ditentukan dengan menghitung. Berbagai jenis sel dapat dihitung secara terpisah selama mereka bisa dibedakan secara visual. Jumlah sel di dalam ruang yang digunakan untuk menghitung konsentrasi atau kepadatan sel dalam campuran dari mana sampel diambil: itu adalah jumlah sel di dalam ruang dibagi dengan volume ruang itu (volume ruang yang diketahui dari mulai), memperhitungkan setiap pengenceran dan menghitung pintas : konsentrasi sel dalam campuran asli. Gambar 3. Penggunaan Hemositometer Hemocytometers sering digunakan untuk menghitung sel-sel darah, organel dalam sel, sel-sel darah dalam cairan tulang punggung ke otak setelah melakukan tusukan lumbal, atau jenis sel lain di suspensi. Menggunakan hemositometer untuk menghitung hasil bakteri dalam 'jumlah total' karena sulit untuk membedakan antara organisme hidup dan mati kecuali Trypan biru digunakan untuk noda sel non-layak.
Menghitung jumlah sel dengan menggunakan Hemositometer Menyiapkan hemositometer 1. Pastikan hemositometer sudah bersih menggunakan etanol 70%. 2. Basahi bahu hitung hemositometer dan lampirkan coverslip menggunakan tekanan lembut dan kecil secara melingkar. Fenomena dari cincin Newton dapat diamati ketika coverslip ditempel dengan benar, sehingga kedalaman ruang dapat dipastikan. Menyiapkan suspensi sel 1. Pastikan suspensi sel yang akan dihitung baik dicampur dengan baik agitasi lembut dari labu yang mengandung sel (atau wadah lain yang sesuai). Sebuah pipet serologi dapat digunakan jika diperlukan. 2. Sebelum sel disetting ambil sekitar 1 ml suspensi sel dengan menggunakan pipet serologi dan tempatkan dalam tabung Eppendorf. 3. Menggunakan sebuah pipet 100 ul, campuran sel-sel dalam sampel ini lagi (dengan lembut) dan. Ambil 100μl tempat ke Eppendorf baru, tambahkan 100 biru tripan ul dan campuran lembut lagi. Perhitungan 1. Menggunakan pipet Gilson, buatlah beberapa suspensi sel yang mengandung Tripan Blue. Hati-hati dalam mengisi hemositometer, lakukan dengan lembut. Berhati-hatilah untuk tidak berlebihan dalam mengisi ruangan. Biarkan sampel yang akan ditarik keluar dari pipet oleh dengan gaya kapiler, cairan harus bergerak ke arah tepi alur saja. Isi ulang pipet dan isilah ruang yang kedua jika diperlukan. 2. Fokus pada garis grid dari hemositometer dengan menggunakan mikroskop pada perbesaran 10X. Fokus pada satu set dari 16 persegi sebagaimana ditunjukkan dengan lingkaran pada gambar 4.
Gbr 4. Grid Hemositometer 3. Menggunakan penghitungan hand tally counter, hitung jumlah sel di daerah ini yang terdiri dari 16 kotak. Ketika menghitung, hitung hanya sel-sel yang hidup yang tampak sehat (tak bercacat oleh Tripan Blue). Hitung sel-sel yang berada dalam persegi. Sel-sel yang mati diwarnai dengan biru tripan dapat dihitung secara terpisah untuk perhitungan kelangsungan hidup. 4. Pindahkan hemositometer untuk set yang lain pada 16 sudut kotak dan terus dihitung sampai semua 4 set untuk 16 sudut kuadrat dihitung. 5. Hemositometer ini dirancang sehingga jumlah sel dalam satu set 16 kotak sudut sama dengan jumlah sel x 10 4 /ml Dengan demikian perhitungannya adalah : Total jumlah 4 set untuk 16 persegi = (sell/ml x 10 4) x 4 persegi dalam satu grid Hemositometer 1. Jumlahnya kemudian dibagi 4 2. Lalu kalikan dengan 2 untuk penyesuaian dengan pengenceran dengan Tripan Blue dengan perbandingan 1: 2 Kedua langkah ini akan setara jika dibagi 2 Contoh : Total sel = 145
Densitas sel = 145/2 = 72,5 x 10 4 /ml Kelangsungan Hidup (Viabilitas) Biru tripan digunakan untuk menunjukkan noda pada sel-sel mati. Sel biru mencari samar atau gelap dalam grid yang dihitung dihitung sebagai sel-sel ati. Untuk memeriksa viabilitas maka sel dibutuhkan : Live cell count (tidak termasuk sell tripan blue) Total cell count (termasuk sell yang diwarnai dengan tripan blue) Contoh :