49 Lampiran. Karakteristik Metode GC-AOAC dan Liquid Chromatography AOAC (Wood et al., 004) Performance characteristics for benzoic acid in almond paste, fish homogenate and apple juice (GC method) Samples Almond paste Fish homogenate Apple juice No. of 8 8 8 8 8 8 laboratories Units mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Mean value 98 987 50 044 4 00 S r 36 6 4 40.6 9.4 RSD r 3.7 % 3. %.8 %.0 % 6. %.7 % S R 33 83 7 76 5.8 3 RSD R 4.7 % 5.3 % 6. % 4.3 % 4.7 % 3.5 % Ho R 0.83.04 0.97 0.85.6 0.6 Av recovery 00.4 % 98.8 % 00. % 98.3 % 05.9 % 94.4 % Performance characteristics for benzoic acid in orange juice (liquid chromatography method) Samples (spike level) 0.5 3 4 0 No. of laboratories 9 9 9 9 9 Units µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml µg/ml Mean 0.57.0 3.0 3.78 9.6 Mean recovery % 4.0 0.0 00.3 94.5 96. S r 0.3 0.084 0.59 0.84 0.46 RSD r 9.9 % 8.7 % 5.8 % 4.87 % 4.79 % r 0.36 0.35 0.445 0.55 0.74 S R 0.59 0.6 0.76 0.55 0.665 RSD R 7.90 % 5.97 % 9.6 % 6.74 % 6.9 % Ho R.60.00 0.68 0.5 0.6 R 0.445 0.45 0.773 0.74.86 Key Mean The observed mean. The mean obtained from the collaborative trial data. r Repeatability (within laboratory variation). The value below which the absolute difference between two single test results obtained with the same method on identical test material under the same conditions may be expected to lie with 95 % probability. The standard deviation of the repeatability. S r
50 RSD r The relative standard deviation of the repeatability (Sr 00/mean). R Reproducibility (between-lab variation). The value below which the absolute difference between two single test results obtained with the same method on the identical test material under different conditions may be expected to lie with 95 % probability. S R The standard deviation of the reproducibility. RSD R The relative standard deviation of the reproducibility (SR 00/mean). Ho R The HORRAT value for the reproducibility is the observed RSDR value divided by the RSDR value calculated from the Horwitz equation.
Lampiran. Diagram Alir Penentuan Validasi dan Verifikasi 5
Lampiran 3. Tabel t 5
Lampiran 4. Tabel F 53
54 Lampiran 5. Diagram Alir Analisis Kualitatif Natrium Benzoat (AOAC 90.0B 999) Persiapan Sampel b. Padatan atau semi padatan : 50-00 g bahan + 300-400 ml air Dihancurkan dalam waring blender Ditambah NaOH 0 % sampai alkalis Dibiarkan jam, kemudian disaring b. Cairan : 50-00 ml sampel Ditambah NaOH 0 % sampai alkalis Disaring dengan kapas (jika kadar gula tinggi, encerkan sampai TPT 0-5 %) Pengujian Dipipet 00 ml atau lebih filtrat Dimasukkan ke labu pemisah Ditambah HCl (+3) sampai asam, ditambah lagi 5-0 ml HCl (+3) Diekstrak dengan 75-00 ml eter Dicuci ekstrak eter tiga kali dengan masing-masing 5 ml air @
55 @ Dimasukkan ekstrak eter ke pinggan porselin, diuapkan dalam penangas air Dilarutkan residu dalam air (jika perlu, panaskan sampai 80-85 o C,0 menit) Ditambah beberapa tetes NH 3 sampai basa Diuapkan untuk menghilangkan kelebihan NH 3 Dilarutkan residu dengan air panas (saring jika perlu) Ditambah beberapa tetes FeCl 3 0.5 % Endapan Ferribenzoat yang berwarna salmon menunjukkan adanya benzoat
56 Lampiran 6. Diagram Alir Analisis Kuantitatif Natrium Benzoat Secara Titrimetri (AOAC 963.9 999) Persiapan Sampel a. Prosedur Umum Dihomogenkan sampel Dimasukkan 50 ml atau 50 gram sampel ke labu takar 500 ml Ditambahkan NaCl powder Ditambahkan NaOH 0 % hingga alkalis Ditepatkan sampai tanda tera dengan larutan NaCl jenuh Dibiarkan + jam, dikocok berulang kali, disaring f. Sampel Saus Tomat 00 gram sampel + 5 gram NaCl powder Dipindahkan campuran ke labu takar 500 ml Dicuci wadah semula dengan + 50 ml larutan NaCl jenuh Ditambahkan NaOH 0 % hingga alkalis Ditepatkan sampai tanda tera dengan larutan NaCl jenuh Dibiarkan + jam, dikocok berulang kali (sentrifuse bila perlu) Disaring
57 Penetapan Sampel Dipipet 00-00 ml filtrat sampel Dimasukkan ke dalam labu pemisah Dinetralkan dengan HCl ( + 3) dan tambahkan lagi 5 ml HCl sesudah netral Diekstrak dengan kloroform beberapa kali (70, 50, 40, 30 ml) Diambil bagian jernih kloroform (Jika kloroform yang diperoleh kurang jernih, perlu dicuci dengan akuades sampai jernih) Dibilas labu pemisah dengan 5-0 ml CHCl 3 tiga kali. Didistilasi dengan lambat pada suhu rendah sampai volume ekstrak seperempat dari volume semula Diuapkan sampai kering pada suhu kamar di atas penangas air sampai tinggal beberapa tetes cairan saja yang tinggal. Dikeringkan residu semalaman (atau sampai bau asam asetat hilang jika sampelnya adalah saus tomat) dalam desikator yang mengandung H SO4 pekat Dilarutkan residu asam benzoat dalam 30-50 ml alkohol Ditambahkan -5 ml air dan atau tetes indikator PP Dititrasi dengan NaOH 0.05 N
Lampiran 7. Data Pengukuran Konsentrasi Natrium Benzoat pada Berbagai Perlakuan KETERANGAN PERLAKUAN PERLAKUAN PERLAKUAN 3 Ulangan Ulangan Ulangan Ulangan Ulangan Ulangan berat benzoat (g) 0.493 0.493 0.507 0.507 0.507 0.507 Volume benzoat (ml) 50 50 50 50 50 50 ppm benzoat standar 997. 997. 00.8 00.8 00.8 00.8 ppm benzoat dikali kemurnian 99% 987.8 987.8 99.77 99.77 99.77 99.77 Volume sampel (ml) 50 50 50 50 50 50 Berat sampel (g) 75.0 75.0 75.30 75.30 75.0979 75.0979 Berat KHP (g) 0.7 0.639 0.69 0.69 0.0957 0.0957 ml NaOH utk standarisasi 4.0 7.80 8.45 8.45 0.40 0.40 N NaOH 0.0448 0.04509 0.0449 0.0449 0.0450 0.0450 ml NaOH 4.60 4.40 4.35 4.45 4.40 4.45 ppm benzoat 989.05 95.738 933.7769 955.430 949.60 959.9469 Rata-rata benzoat (ppm) 970.6 944.5 954.55 Standar deviasi (ppm) 6.08 5.8 7.63 RSD (%).69.6 0.80 Persen recovery (%) 98.3 95.4 96.5 58
59 Lampiran 8. Contoh Perhitungan Konsentrasi Natrium Benzoat, SD, RSD, dan Persen Recovery Konsentrasi natrium benzoat pada perlakuan, ulangan berat KHP (g) N NaOH standard= 04.8 V NaOH (L) 0.7 N NaOH standard= = 0.0448 N 04.8 0.04 Volume larutan ppm Na Titer x N NaOH x 44 x yang dibuat pada x 0 6 benzoat = persiapan sampel anhidrat Volume yang diambil x berat sampel x 000 untuk penetapan = 4.60 x 0.0448 x 44 x 50 x 0 6 00 x 75.0 x 000 = 989.05 ppm Dengan cara yang sama, didapat konsentrasi natrium benzoat pada ulangan sebesar 95.738 ppm. Rata-rata konsentrasi benzoat sebesar = 970.6 ppm (x i x) SD= = n - (989.05-970.695) + (95.738-970.695) = 6.08 ppm SD 6.0769 RSD = 00 % = 00 % =.69 % x 970.695 konsentrasi benzoat terukur Persen Recovery = konsentrasi benzoat standar 970.695 = 00 % 987.8 00 % = 98.3 %
60 Lampiran 9. Uji t dan F Untuk Perlakuan dan Perlakuan Uji t. Hipotesis H0 : µ = µ H : µ µ. Hipotesis uji = uji t t hitung= sp x - x (/n ) + (/n ) sp= (n )s n + (n -) s + n ( -) 6.08 + ( -)5.8 sp= =.34 + - 970.6-944.5 t hitung= =.3.34 (/) + (/) 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau >- t α/ (v) t tabel = 9.95 dan -9.95 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan: rataan perlakuan tidak berbeda nyata dengan rataan perlakuan Uji F. Hipotesis H0 : s = s H : s s. Hipotesis uji = uji F s 6.08 F hitung= = =.95 s 5.8 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila F hitung < F α (v,v) F tabel = 405.85 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan : SD perlakuan tidak berbeda nyata dengan SD perlakuan
6 Lampiran 0. Uji t dan F Untuk Perlakuan dan Perlakuan 3 Uji t. Hipotesis H0 : µ = µ 3 H : µ µ 3. Hipotesis uji = uji t t hitung = sp x - x (/n ) + (/n ) 3 3 sp= (n -)s n + (n 3 -) s + n - 3 3 ( -)5.8 + ( -) 7.63 sp= =.0 + - 944.5-954.55 t hitung= = -0.836.0 (/) + (/) 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau >- t α/ (v) t tabel = 9.95 dan -9.95 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan: rataan perlakuan tidak berbeda nyata dengan rataan perlakuan 3 Uji F. Hipotesis H0 : s = s 3 H : s s 3. Hipotesis uji = uji F 3 s 5.8 F hitung= = = 3.958 s 7.63 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila F hitung < F α (v,v3) F tabel = 405.85 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan : SD perlakuan tidak berbeda nyata dengan SD perlakuan 3
6 Lampiran. Uji t dan F Untuk Perlakuan dan Perlakuan 3 Uji t. Hipotesis H0 : µ = µ 3 H : µ µ 3. Hipotesis uji = uji t t hitung = sp x - x (/n ) + (/n ) 3 3 sp = (n -)s n + + n (n 3 3 - -) s 3 ( -) 6.08 + ( -) 7.63 sp= = 9. + - 970.6-954.55 t hitung= = 0.836 9. (/) + (/) 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau >- t α/ (v) t tabel = 9.95 dan -9.95 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan: rataan perlakuan tidak berbeda nyata dengan rataan perlakuan 3 Uji F. Hipotesis H0 : s = s 3 H : s s 3. Hipotesis uji = uji F s 6.08 F hitung= = =.683 s 7.63 3 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila F hitung < F α (v,v3) F tabel = 405.85 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan : SD perlakuan tidak berbeda nyata dengan SD perlakuan 3
Lampiran. Hasil Uji ANOVA pada Berbagai Perlakuan 63
64 Lampiran 3. Rincian Biaya pada Berbagai Perlakuan (satu kali ulangan, duplo) Jenis Perlakuan Bahan Kimia Harga Kebutuhan Biaya NaCl powder p.a Rp 353,600/500 g 00 g Rp 70,70 NaOH p.a Rp 708,900/500 g g Rp,48 Perlakuan HCl pekat p.a Rp,700/L 5 ml Rp,4 Kloroform p.a Rp 344,50/.5 L 500 ml Rp 68,850 Alkohol p.a Rp 7,850/.5 L 00 ml Rp 0,94 TOTAL BIAYA Rp53,06 NaCl powder p.a Rp 353,600/500 g 00 g Rp 70,70 NaOH p.a Rp 708,900/500 g g Rp,48 Perlakuan HCl pekat p.a Rp,700/L 5 ml Rp,4 Kloroform teknis Rp 30,000/L 500 ml Rp 65,000 Alkohol teknis Rp 35,000/L 00 ml Rp 3,500 TOTAL BIAYA Rp4,75 NaCl powder teknis Rp 4,000/kg 00 g Rp,400 NaOH p.a Rp 708,900/500 g g Rp,48 Perlakuan 3 HCl pekat p.a Rp,700/L 5 ml Rp,4 Kloroform teknis Rp 30,000/L 500 ml Rp 65,000 Alkohol teknis Rp 35,000/L 00 ml Rp 3,500 TOTAL BIAYA Rp 7,03
Lampiran 4. Data Analisis Natrium Benzoat pada Saus Sambal dengan Metode Labu Pemisah KETERANGAN Ulangan Ulangan Ulangan 3 Ulangan 4 Ulangan 5 Ulangan 6 Ulangan 7 Volume sampel (ml) 50 50 50 50 50 50 50 Volume yg diambil (ml) 00 00 85 00 00 00 00 Berat sampel (g) 68.83 63.79 65.8977 65.5008 65.940 74.6583 79.839 Berat KHP (g) 0.093 0.0746 0.083 0.083 0.0738 0.076 0.0803 ml NaOH utk stdr 8.5 6.55 7.0 7.40 6.65 6.55 7.00 N NaOH 0.0553 0.0558 0.0560 0.0550 0.0543 0.0543 0.056 ml NaOH.75.65.5.60.65.95 3.0 ppm benzoat 80.9397 84.5748 773.897 785.9446 785.5948 77.407 8.0654 Rata-rata ppm benzoat 796.34 Standar Deviasi 4.84 RSD (%) 3. 65
Lampiran 5. Data Analisis Natrium Benzoat pada Saus Sambal dengan Metode Shaker KETERANGAN Ulangan Ulangan Ulangan 3 Ulangan 4 Ulangan 5 Ulangan 6 Ulangan 7 Volume sampel (ml) 50 50 50 50 50 50 50 Volume yg diambil (ml) 00 00 00 90 00 00 00 Berat sampel (g) 66.560 66.778 66.3789 70.999 67.546 66.7407 66.849 Berat KHP (g) 0.0770 0.076 0.0774 0.0765 0.0739 0.087 0.0754 ml NaOH utk stdr 6.75 6.60 6.75 6.60 6.40 7.50 7.60 N NaOH 0.0558 0.0564 0.056 0.0568 0.0565 0.0569 0.0486 ml NaOH.65.65.60.60.85.65 3.0 ppm benzoat 800.864 806.4654 79.0586 84.487 858.7 83.3358 8.43 Rata-rata ppm benzoat 87.46 Standar Deviasi 3.85 RSD (%).9 66
Lampiran 6. Metode Laboratorium Terakreditasi 67
68
Lampiran 7. Hasil Analisis Kuantitatif dari Laboratorium Terakreditasi 69
70
7
7 Lampiran 8. Uji t dan F Untuk Metode Labu Pemisah () dan Shaker () Uji t. Hipotesis H0 : µ = µ H : µ µ. Hipotesis uji = uji t t hitung= sp x - x (/n ) + (/n ) sp= (n )s n + (n -) s + n (7 -) 4.84 + (7 -) 3.85 sp= = 4.35 7+ 7-796.34-87.46 t hitung= = -.63 4.35 (/7) + (/7) 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau >- t α/ (v) t tabel = 3.055 dan -3.055 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan: rataan metode tidak berbeda nyata dengan rataan metode. Uji F. Hipotesis H0 : s = s H : s s. Hipotesis uji = uji F s 4.84 F hitung= = =.085 s 3.85 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila F hitung < F α (v,v) F tabel = 8.466 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan : SD metode tidak berbeda nyata dengan SD metode
73 Lampiran 9. Uji t dan F Untuk Metode Labu Pemisah () dan Laboratorium Terakreditasi () Uji t. Hipotesis H0 : µ = µ H : µ µ. Hipotesis uji = uji t t hitung= sp x - x (/n ) + (/n ) sp= (n )s n + (n -) s + n (7 -) 4.84 + ( -)4.40 sp= = 3.63 7+ - 796.34-839.00 t hitung= = -.5 3.63 (/7) + (/) 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau >- t α/ (v) t tabel = 3.499 dan -3.499 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan: rataan metode tidak berbeda nyata dengan rataan metode. Uji F. Hipotesis H0 : s = s H : s s. Hipotesis uji = uji F s 4.84 F hitung= = =.976 s 4.40 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila F hitung < F α (v,v) F tabel = 5858.950 4. Keputusan H0 diterima
74 5. Kesimpulan : SD metode tidak berbeda nyata dengan SD metode Lampiran 0. Uji t dan F Untuk Metode Shaker () dan Laboratorium Terakreditasi () Uji t. Hipotesis H0 : µ = µ H : µ µ. Hipotesis uji = uji t t hitung= sp x - x (/n ) + (/n ) sp= (n )s n + (n -) s + n (7 -) 3.85 + ( -)4.40 sp= =.74 7+ - 87.46-839.00 t hitung= = -.8.74 (/7) + (/) 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila t hitung < t α/ (v) atau >- t α/ (v) t tabel = 3.499 dan -3.499 4. Keputusan H0 diterima 5. Kesimpulan: rataan metode tidak berbeda nyata dengan rataan metode Uji F. Hipotesis H0 : s = s H : s s. Hipotesis uji = uji F s 3.85 F hitung= = =.743 s 4.40 3. Wilayah kritik pada α = 0.0 H0 diterima bila F hitung < F α (v,v) F tabel = 5858.950 4. Keputusan H0 diterima
5. Kesimpulan : SD metode tidak berbeda nyata dengan SD metode Lampiran. Hasil Uji ANOVA pada Metode Labu Pemisah, Metode Shaker, dan Metode Laboratorium Terakreditasi 75