AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI FRAKSI POLAR EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP Klebsiella pneumoniae DAN Staphylococcus epidermidis SKRIPSI Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta Oleh : KOSWORO K 100 080 019 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2012 i
ii
DEKLARASI Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka. Surakarta, 27 Juni 2012 Peneliti Kosworo iii
KATA PENGANTAR Assalamuallaikum Warohmatullahi Wabarokatuh Alhamdulillahirobbil alamin, puji syukur penulis panjatkan hanya untuk- Mu ya Allah atas segala rahmat, nikmat, barokah, dan kekuatan yang tak terhingga untukku untuk terus melangkah. Sholawat dan salam semoga senantiasa tercurah kepada baginda tercinta Muhammad SAW hamba dan panutan terbaik segenap umat manusia, penyeru kebenaran dan pengingat manusia dari kelalaian. Alhamdulillah, penulis telah dapat menyelesaikan skripsi dengan judul AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN BIOAUTOGRAFI FRAKSI POLAR EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP Klebsiella pneumoniae DAN Staphylococcus epidermidis, disusun sebagai salah satu syarat mencapai Drajat sarjana Farmasi (S. Farm) Program Ilmu Studi Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta (UMS). Penulis banyak mendapatkan bimbingan, dukungan dan bantuan dari berbagai pihak sehingga penyusunan skripsi ini dapat terselesaikan. Untuk itu penulis menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada : 1. Bapak Dr. Muhammad Da i, M.Si., Apt. selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. 2. Bapak Andi Suhendi, S. Farm., Apt. selaku dosen pembimbing akademik. 3. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc selaku dosen pembimbing utama dan Bapak Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt. selaku dosen pembimbing pendamping. 4. Bapak Dr. Muhtadi, M.Si selaku penguji I dan Ibu Ika Trisharyanti DK, M.Farm., Apt selaku penguji II. 5. Kedua orang tua penulis tercinta, Bapak Hartono dan Ibu Ngadiyem, serta adikku Aji Kuncoro. 6. Tim peneliti ekstrak etanol daun sirsak, Henggar Prasetyo, Septianingrum, dan Jayanti. Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca pada umumnya dan khususnya dapat bermanfaat bagi penulis sendiri. Wassalamualaikum Warohmatullahi Wabarokatuh Surakarta, 27 Juni 2012. (Kosworo) iv
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL... i HALAMAN PENGESAHAN...... ii HALAMAN DEKLARASI... iii KATA PENGANTAR... iv DAFTAR ISI... v DAFTAR GAMBAR..... viii DAFTAR TABEL... ix DAFTAR LAMPIRAN... x DAFTAR SINGKATAN.... xi INTISARI... xii BAB I. PENDAHULUAN....... 1 Latar Belakang masalah....... 1 Rumusan Masalah....... 3 Tujuan Penelitian...... 3 Tinjauan Pustaka...... 4 Tanaman Sirsak........ 4 Sistematika Tanaman Sirsak....... 4 Nama daerah..... 4 Kandungan kimia..... 4 Khasiat tanaman... 4 1. Metode Penyarian... 5 2. Staphylococcus epidermidis... 5 3. Klesiella pneumonia... 6 4. Uji Aktivitas Antibakteri... 7 5. Bioautografi... 8 A. Landasan Teori... 8 B. Hipotesis... 9 v
BAB II. METODE PENELITIAN.... 10 A. Kategori Penelitian.... 10 B. Variabel Penelitian.... 10 C. Alat dan Bahan......... 10 D. Tempat Penelitian. 11 E. Jalannya Penelitian....... 11 1. Determinasi Tanaman.. 11 2. Pengumpulan Bahan.... 12 3. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak..... 12 4. Fraksinasi Ekstrak Etanol Daun Sirsak....... 12 5. Sterilisasi Alat dan Bahan... 13 6. Pembuatan Media.... 13 7. Pembuatan stok bakteri... 13 8. Pembuatan Suspensi Bakteri... 13 9. Pewarnaan Bakteri dan Uji Biokimia Bakteri... 14 10. Pembuatan Seri Konsentrasi Fraksi Semipolar... 14 11. Pembuatan Kontrol.. 14 12. Uji Antibakteri dengan Metode Dilusi Padat.. 15 13. Uji Komatografi Lapis Tipis 15 14. Analisis Hasil... 16 15. Pengujian Bioautografi 16 BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.. 17 A. Determinasi Tanaman.. 17 B. Fraksinasi Ekstrak Etanol Daun Sirsak...... 17 C. Identifikasi Bakteri.. 21 D. Uji Aktivitas Antibakteri. 23 E. Analisis Kualitatif Fraksi polar... 26 F. Uji Bioautografi... 29 vi
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN... 31 A. Kesimpulan... 31 B. Saran... 31 DAFTAR PUSTAKA... 32 LAMPIRAN... 35 vii
DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Optimasi Fase Gerak... 18 Gambar 2. Fraksinasi 1... 18 Gambar 3. Fraksinasi 2... 19 Gambar 4. Fraksinasi 3... 19 Gambar 5. Pengelompokkan fraksi... 20 Gambar 6. Hasil Pengecatan Gram... 21 Gambar 7. Hasil Uji Test Mannitol terhadap Klebsiella pneumoniae dan Staphylococcus epidermidis... 22 Gambar 8. Hasil Uji Penanaman Bakteri Klebsiella pneumonia pada Media KIA, LIA, dan MIO... 23 Gambar 9. Hasil Uji Antibakteri Fraksi Polar Ekstrak Etanol Daun Sirsak terhadap Staphylococcus epidermidis dan Klebsiella Pneumoniae 24 Gambar 10. Hasil Bercak Dideteksi dengan UV dan Berbagai Reaksi Semprot... 27 Gambar 11. Struktur senyawa yang Terdapat dalam Tumbuhan Sirsak... 28 Gambar 12. Hasil Uji Bioautografi Fraksi Polar Ekstrak Etanol Daun sirsak (Annona muricata L.) terhadap Klebsiella pneumoniae (A) dan Staphylococcus epidermidis (B)... 29 viii
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Hasil Uji Aktivitas Fraksi Polar Ekstrak Etanol Daun Sirsak terhadap Staphylococcus epidermidis dan Klebsiella pneumoniae... 24 Tabel 2. Hasil Analisis KLT Fraksi Polar Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata)... 27 ix
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Surat Determinasi... 35 Lampiran 2. Surat Keterangan Bakteri Staphylococus epidermidis... 37 Lampiran 3. Surat Keterangan Bakteri Klebsiella pneumoniae... 38 Lampiran 4. Perhitungan Rendemen dan Konsentrasi Fraksi Polar Ekstrak Etanol Daun Sirsak... 40 Lampiran 5. Perhitungan Harga Rf dan hrf pada Hasil Analisis KLT... 42 Lampiran 6. Komposisi Media Bakteri... 43 Lampiran 7. Kompisisi Cat Gram... 44 Lampiran 8. Pembuatan Reagen... 45 Lampiran 9. Foto Simplisia Daun Sirsak dan Fraksinasi... 46 x
DAFTAR SINGKATAN GF : Gips Flourecense UV : Ultraviolet VIS : Visibel KLT : Kromatografi Lapis Tipis KHM : Kadar Hambat Minimal LB : Liebermann Burchard (LB) µl : Mikroliter ml : Mililiter g : Gram µg : Mikrogram mg : Miligram cm : Sentimeter xi
INTISARI Tumbuhan sirsak (Annona muricata L.) merupakan salah satu tumbuhan yang digunakan sebagai obat tradisional. Annonaceae mengandung alkaloid, acetogenin, polifenol, terpen, dan senyawa aromatik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui Kadar Hambat Minimum (KHM) fraksi polar ekstrak etanol daun sirsak (Annona muricata L.) terhadap Klebsiella pneumonia dan Staphylococcus epidermidis serta senyawa yang yang bertanggung jawab terhadap aktivitas tersebut. Daun sirsak diekstraksi dengan etanol 96% secara maserasi dan dilakukan fraksinasi dengan Kromatografi Cair Vakum (KCV). Fraksi diuji aktivitas antibakteri menggunakan metode dilusi padat. Seri konsentrasi fraksi polar yang digunakan adalah 2,5% b/v, 3% b/v, 3,5 b/v, 4% b/v, dan 4,5% b/v. Uji kandungan senyawa dilakukan dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT), fase diam silika, dan fase gerak heksan : etil asetat (3:7). Uji bioautografi dengan menempelkan lempeng KLT yang diinokulasi suspensi bakteri, senyawa antibakteri ditunjukkan zona jernih. Hasil penelitian menunjukkan fraksi polar ekstrak etanol daun sirsak (Annona muricata L.) mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Klebsiella pneumonia dan Staphylococcus epidermidis dengan KHM berturut-turut sebesar 3% dan 3,5%. Golongan senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri baik terhadap Klebsiella pneumonia maupun Staphylococcus epidermidis merupakan senyawa golongan flavonoid, polifenol, antron dan triterpenoid. Kata kunci: Annona muricata L., antibakteri, fraksi polar, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus epidermidis. xii