Prosiding Farmasi ISSN:

Prosiding Farmasi ISSN: 2460-6472 Pengujian Aktivitas Antioksidan pada Fraksi Berbeda dan Penentuan Kadar Flavonoid Total Dari Daun Jalantir(Erigeron sumatrensis Retz.)yang Berasal dari Jawa Barat Indonesia Antioxidant Activity Test on Different Fraction and Determination of Flavonoid Level from Jalantir Leaves (Erigeron sumatrensis Retz.) Coming from West Java Indonesia 1 Taufik Nugraha, 2 Kiki Mulkiya, 3 Reza Abdul Kodir 1,2,3 Prodi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Islam Bandung, Jl. Tamansari No.1 Bandung 40116 email: 1 taufiknea@gmail.com, 2 qqmulkiya@gmail.com, 3 reza.abdul.kodir@gmail.com Abstract. A study has been conducted about antioxidant activity and total flavonoid contetnts from Jalantir leaves (Erigeron sumatrensis Retz.). Simplicia powder extraction using maceration method by ethanol 95% and continued into phytochemical screening due to simplicia powder. Fractination performed by liquid-liquid extraction method using n-hexane, ethyl acetate, and water. The antioxidant activity of the ethanol extracts and fractions was monitoring by silica gel GF254 TLC with the mobile phase of ethanol extract are choloform:ethanol (9,5:0,5); the mobile phase of n-hexane fraction are n-hexane:ethyl acetate (8:2); the mobile phase of ethyl acetate fraction are n-hexane:ethyl acetate (6:4); and the mobile phase of water fraction are buthanol:acetic acid glacial:water (6:1:3). Testing the antioxidant activity carried out on the fractions by DPPH (1,1-diphenyl-2-pichrylhydrazyl) using spectofotometric UV-VIS. Total flavonoid contents was perfomed using spectrofotometric UV-VIS. The result showed that the antioxidant activity of n-heksan fraction, ethyl acetate fraction, and water fraction for respectively of Jalantir are 610,37 ppm, 71,3 ppm, 64,42 ppm. Total flavonoid contents ofn-heksan fraction, ethyl acetate fraction, and water fraction for respectively are 8,4317±0,21, (g QE/100 g), 14,6267±0,11 (g QE/100 g), dan 1,9543±0,01, (g QE/100 g). The best result of antioxidant activity showed by water fraction and did not affected by total flavonoid contents. Keywords: Jalantir (Erigeron sumatrensis Retz.), antioxidant activity, total flavonoid contents. Abstrak.Telah dilakukan penelitian pengujian aktivitas antioksidan dan penetapan kadar flavonoid total dari daunjalantir (Erigeron sumatrensis Retz.). Ekstraksi serbuk simplisia menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 95%. Penapisan fitokimia dilakukan terhadap serbuk simplisia. Fraksinasi dilakukan dengan metode ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut n-heksan, etilasetat, dan air. Pemantauan aktivitas antioksidan dilakukan terhadap ekstrak etanol dan fraksi secara kromatografi lapis tipis (KLT) dengan silika gel GF254 sebagai fase diamdan untuk fase gerak ekstrak etanol berupa kloroform : etanol (9,5:0,5), fraksi n-heksan yaitu n-heksan : etil asetat (8:2), fraksi etil asetat yaitu n-heksan:etil asetat (6:4), dan fase gerak fraksi air yaitu butanol : asam asetat glasial : air (6:1:3). Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan terhadap fraksi dengan metode peredaman DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) menggunakan spektrofotometri UV-VIS. Penetapan kadar flavonoid total dilakukan secara metode menggunakan spektrofotometri sinar ultraviolet-visible. Hasil pengujian menunjukkan bahwa fraksinat daun Jalantir yaitu fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, dan fraksi air memiliki aktivitas antioksidan berturut-turut sebagai berikut: 610,37 ppm, 71,3 ppm, 64,42 ppm. Sedangkan hasil penetapan kadar flavonoid total pada fraksi berturut-turut sebagai berikut:8,4317±0,21, (g QE/100 g), 14,6267±0,11 (g QE/100 g), dan 1,9543±0,01, (g QE/100 g). Dengan demikian, aktivitas antioksidan tertinggi ditunjukkan oleh fraksi air dan tidak dipengaruhi oleh kadar flavonoid total di dalam sampel. Kata Kunci: Jalantir (Erigeron sumatrensis Retz.), aktivitas antioksidan, kadar flavonoid total. 755

756 Taufik Nugraha, et al. A. Pendahuluan Antioksidan adalah bahan yang bekerja dengan cara menghambat atau mencegah keruntuhan, kerusakan atau kehancuran sel akibat hasil dari proses oksidasi yang berasal dari radikal bebas. Radikal bebas didalam sel tubuh dapat terbentuk akibat dari polusi ataupun terpapar radiasi kuat. (Youngson, 2005 ). Keseimbangan oksidan dan antioksidan sangat penting berkaitan dengan sistem immunitas tubuh manusia. Terutama untuk menjaga integritas dan fungsi dari organ tubuh seperti membran lipid, protein sel dan asam nukleat serta mengontrol transduksi sinyal dan ekspresi gen dalam sel imun. (Meydani et al., 1995:1462). Sumber-sumber antioksidan terbagi menjadi dua kelompok yaitu antioksidan sintetik dan antioksidan alami. Antioksidan sintetik merupakan antioksidan yang diperoleh dari hasil reaksi sintesis kimia. Sedangkan antioksidan alami yaitu antioksidan yang diperoleh dengan cara ekstraksi dari bahan alami. (Prabantini. 2010:170). Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi aktivitas antioksidan dari ekstrak fraksin-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi air daun Jalantir (Erigeron sumatrensis Retz.)dengan metode peredaman radikal bebas DPPH; melakukan penetapan profil kromatografi lapis tipis (KLT) danpenentuan kadar flavonoid total. B. Landasan Teori Gambar 1.1. Tumbuhan Liar Keluarga Asteraceae Jalantir http://goo.gl/ehg1et, Antioksidan adalah bahan yang bekerja dengan cara menghambat atau mencegah keruntuhan, kerusakan atau kehancuran sel akibat hasil dari proses oksidasi yang berasal dari radikal bebas. (Youngson, 2005 ). Antioksidan bekerja dengan mendonorkan salah satu elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga senyawa oksidan tersebut dapat dihambat aktivitasnya. (Winarsi, 2007:77-79). Kandungan flavonoid didalam tumbuhan memiliki beberapa kegunaan seperti pengatur pertumbuhan, pengatur fotosintesis, kerja terhadap serangan serangga, aktivitas antimikroba dan antivirus. Selain itu dalam dunia pengobatan flavonoid bersifat sebagai antioksidan yang berfungsi mengobati gangguan fungsi hati (Robinson, 1995:191-193). Untuk menentukan aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan metoda peredaman radikal bebas DPPH (1,1 diphenil-2-picrylhidrazyl). Dengan metode ini dapat memberikan informasi reaktivitas senyawa yang diuji terhadap radikal bebas yaitu DPPH. DPPH ketika elektronnya telah berpasangan oleh keberadaan penangkapan radikal bebas, maka absorbansi DPPH menurun secara stoikiometri sesuai jumlah elektron yang diambil. Adanya antioksidan dapat merubah warna larutan DPPH dari ungu menjadi Volume 2, No.2, Tahun 2016

Pengujian Aktivitas Antioksidan pada Fraksi Berbeda 757 kuning. Metoda ini memiliki beberapa keuntungan yaitu mudah, cepat, dan sensitif untuk pengujian aktivitas antioksidan senyawa tertentu dan ekstrak tanaman (Sunarni, 2005). Kadar flavonoid total dapat diperoleh dengan menggunakan dua metode. Metode pertama merupakan metode kolorimetri menggunakan alumunium klorida (AlCl 3 ) dan berdasarkan pada pembentukan kompleks antara alumunium klorida dengan gugus keton C-4 dan gugus hidroksil C-3 atau C-5 kelompok flavon dan flavonol yang menghasilkan warna kuning. Selain itu, juga membentuk kompleks asam labil dengan gugus ortho-dihidroksil dalam cincin A atau B flavonoid. Kuersetin dilaporkan sesuai untuk membuat kurva kalibrasi sehingga larutan standar kuersetin berbagai konsentrasi digunakan untuk membuat kurva kalibrasi (Ibrahim et al., 2011). Metode kedua merupakan metode kolorimetri dengan DNP (2,4- dinitrophenylhydrazine). Prinsip metode ini adalah reagen 2,4-dinitrophenylhydrazine yang bereaksi dengan karbonil keton dan aldehid untuk 2,4-dinitrophenylhydrazine sehingga menghasilkan warna merah (Flach et al., 2014). Metode kolorimetri menggunakan alumunium klorida karena sederhana, cepat dan mudah dilakukan. C. Hasil Penelitian Penapisan fitokimia Penapisan fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan golongan senyawa kimiaseperti golongan senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, fenol, tannin, terpenoid dan kuinon serta steroid pada simplisia. Hasil penapisan fitokimia yang terdapat pada simplisia dapat dilihat pada tabel1. Farmasi,Gelombang 2, Tahun Akademik 2015-2016

758 Taufik Nugraha, et al. Tabel 1. Hasil penapisan Fitokimia Simplisia Daun Jalantir. Golongan senyawa Simplisia Jalantir Fenolat + Alkaloid + Flavonoid + Tannin - Monoterpen + Seskuiterpen + Triterpenoid - Steroid + Saponin - Kinon + Berdasarkan tabel 1 simplisia daun Jalantir teridentifikasi memiliki kandungan golongan senyawa flavonoid. Hal ini menunjang untuk dilakukan pengujian kadar flavonoid total. Hasil ini sama seperti yang dilakukan oleh penelitian Jack (2008) bahwa Jalantir (Erigeron sumatrensis) diketahui memiliki beberapa kandungan golongan senyawa kimia metabolit sekunder seperti flavonoid, fenolik, alkaloid. Volume 2, No.2, Tahun 2016

Pengujian Aktivitas Antioksidan pada Fraksi Berbeda 759 Pengujian aktivitas antioksidan Pemantauan aktivitas antioksidan secara KLT dengan pereaksi DPPH 0,2%. 1 2 3 4 Gambar 1. Keterangan : Kromatogram lapis tipis dan aktivitas antioksidan dengan fase diam silica gel GF 254 ekstrak fraksi 1 = Fraksi N-Heksan ( fase gerak n-heksan 8:2 etil asetat), 2 = Fraksi etil asetat ( fase gerak heksan 6:4 etil asetat), 3 = Fraksi air ( fase gerak butanol : asam asetat glasial : air 6:1:3). ekstrak etanol (fase gerak kloroform 9,5:0,5 etanol). Berdasarkan hasil pengujian pada gambar 1, dari fraksi n-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi air menunjukkan bahwa dari ketiga fraksi positif memiliki aktivitas antioksidan. Hal ini ditandai dengan perubahan warna yang terjadi pada spot menjadi berwarna kuning setelah di semprot oleh pereaksi radikal bebas DPPH 0,2%. Tabel 2.Hasil pengujian aktivitas antioksidan (IC 50 ) Simplisia Aktivitas Antioksidan (IC50) Fraksinat N-Heksan (ppm) Fraksinat Etil Asetat (ppm) Fraksinat Air (ppm) Vit. C (ppm) Jalantir 610,37 71,3 64,42 5,58 Lokatmala 1473,77 39,49 52,89 6,47 Sintrong 1176,15 31,74 71,29 5,45 Farmasi,Gelombang 2, Tahun Akademik 2015-2016

760 Taufik Nugraha, et al. Tabel 3. Tingkat kekuatan antioksidan(jun, 2006: 2118) Intensitas IC 50 Sangat aktif Aktif Sedang Lemah < 50 ppm 50-100 ppm 101-250 ppm 250-500 ppm Pengujian aktivitas antioksidan sampel dengan metode DPPH dilakukan melalui pengaruh nilai IC 50 secara spektrofotometri. Hasil pengujian aktivitas antioksidan fraksi dari daun Jalantir dapat dilihat pada tabel 2. Tingkat kekuatan antioksidan sampel dapat dikelompokkan berdasarkan nilai IC 50. Suatu sampel dapat dinyatakan sebagai antioksidan kuat apabila nilai IC 50 < 50 µ/ml (Blois, 1959). Berdasarkan hasil pengujian pada tabel 2, menunjukkan bahwa fraksi n-heksan memiliki intensitas kekuatan antioksidan dengan IC 50 > 500 ppm sehingga dapat dikelompokkan sebagai antioksidan dengan kekuatan yang lemah. Pada fraksinat etilasetatdan fraksi air daun Jalantir memiliki nilai IC 50 berada pada rentang 50-100 ppm, sehingga dapat dikategorikan memiliki aktivitas antioksidan dengan intensitas aktif. Penetapan Kadar Flavonoid Total Penentuan kadar flavonoid total dilakukan berdasarkan metode Chang, et al.(2002) dengan prinsip reaksi pembentukan senyawa berwarna kuning yang bereaksi dengan AlCl 3. Tabel 4. Pengolahan data kadar flavonoid total secara statistika dengan metode Tukey One Way ANOVA. % Kadar Flavonoid Total (g QE/100 g) Simplisia Fraksi N-Heksan Fraksi Etil Asetat Fraksi Air Jalantir 8.4317 ± 0.21 14.6267 ± 0.11 1.9543 ± 0.01 Padatabel 4, data pengukuran kadar flavonoid total kemudian diolah menggunakan metoda statistika secara ANOVA satu arah dengan metode Tukey untuk mengetahui perbedaan bermakna antara ekstrak fraksi satu dengan ekstrak fraksi yang lainnya pada selang kepercayaan p<0,05. Pada tabel terlihat rata-rata kadar flavonoid total untuk Fraksinat n-heksanjalantir sebesar 8,4317 ± 0.21(g QE/100 g). Berdasarkan data tidak terdapat perbedaan bermakna pada p<0.05 dengan fraksi etilasetat.kadar flavonoid pada fraksi n-heksan, jika dikorelasikan terhadap aktivitas antioksidan tidak sebanding dengan aktivitas antioksidan, sehingga dapat dikatakan bahwa aktivitas Volume 2, No.2, Tahun 2016

Pengujian Aktivitas Antioksidan pada Fraksi Berbeda 761 antioksidan pada fraksi n-heksan tidak dipengaruhi oleh kadar flavonoid. Hasil Pengolahan data secara statistika pada fraksi etilasetatpada tabel terlihat rata-rata kadar flavonoid total sebesar 14,6267± 0.11(g QE/100 g). Berdasarkan data tidak terdapat perbedaan bermakna pada p<0.05 dengan fraksi n-heksan. Dengan hasil penetapan kadar flavonoid pada fraksi etilasetat dari tumbuhan daun Jalantir menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan dengan kadar flavonoid memiliki korelasi. Hasil Pengolahan data secara statitiska pada fraksi air pada tabel terlihat ratarata untuk Jalantir sebesar 1,9543± 0.01(g QE/100 g). Berdasarkan data terdapat perbedaan bermakna pada p<0.05 dengan fraksi n-heksan dan fraksi etilasetat.dengan penetapan hasil kadar flavonoid pada fraksi air dari simplisia menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan dengan kadar flavonoid memiliki korelasi. D. Kesimpulan Berdasarkan penilitian disimpulkan aktivitas antioksidan tertinggi dengan metode DPPH dengan nilai IC 50 terdapat pada fraksi air daun Jalantir sebesar 64,42ppm dan kandungan flavonoid total tertinggi ditunjukkan oleh fraksi etilasetat dari daun Jalantir sebesar 14.6267 ± 0.11(g QE/100 g). Sehingga dapat diduga bahwa aktivitas antioksidan daun Jalantir tidak dipengaruhi oleh kadar flavonoid total. Daftar Pustaka Backer, A.C., and Van Den Brink, B.C.R 1965. Flora of Java (Spermatophytes Only). Vol II. N. V.P Noordhroff-Groningen: The Netherlands. Blois., MS. (1958). Antioxidant Determinations by the Use of A Stable Free Radical. Nature 181,1199-1200. Chang, C,C., Ming, H.Y., Hwei M.W., Jiing, C.C. (2002). Estimation Of Total Flavonoid content in Propolis by Two Complementary Colorimetric Methods. Journal Of Food and Drug Analysis, 10(3):178-182. Cronquist, A (1981). An Integrated System Of Classification Of Flowering Plants. New york: Columbia University Press. ISBN 9780231038805 Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1977). Materia Medika Indonesia, Edisi I, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1995). Farmakope Indonesia Edisi IV.Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat 3-5. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan makanan, Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.(2009). Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Direktorat Jenderal pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. Farnswoth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants, Journal ofpharmaceutical Science 55 (3):245-268, American Pharmaceutical Association. Ibrahim. 2011. Analisis Total Fenol, Total Flavonoid dan Aktivitas Antioksidan Sayuran Pakchoy (Brassica chinensis L.) dengan Perawatan Ekstrak Bawang Putih Terfermentasi. Skripsi, Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Riau Jack, I.R; OKOROSAYE-ORUBITE, K., (2008). Phytochemical analysis and antimicrobial activity of the extract of leaves of fleabane (Conyza sumatrensis). InternationalJournal. Appl. Sci. Environ. Manage. December, Vol. 12(4) 63 65. Farmasi,Gelombang 2, Tahun Akademik 2015-2016

762 Taufik Nugraha, et al. Jun, M., H.Y., Hong J., Wang., X., C.S. (2006). Comparison of Antioxidant Activities of Isoflavones From Kudzu Root (Puerarialobate ohwi). The Journal of Food Science. Institute of Technologist. 2117-2122. Markham, K.R., (1966). Cara Identifikasi Flavonoid, terjemahan Padmawinata, K., Penerbit ITB, Bandung. Meydani, S.N., D. Wu, Santos, M.S., dan Hayek. M.G. (1995). Antioxidant and immune response in aged persons. The American Journal of Clinical Nutrition Vol. 62 No.6. Molyneux, (2004). The Use Of Stable Free Radical Diphenylpicryl hidrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci. Technol, 26 (2):212-218. Prabantini, Dwi. (2010). A to Z Makanan Pendamping ASI, Yogyakarta: Andi offset. Robinson, T.1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi ke-4 Terjemahan Kosasih Padmawinata. ITB. Press. Bandung Sunarni, T., (2005). Aktivitas Antioksidan Penangkap Radikal Bebas Beberapa Kecambah Dari Biji Tanaman Familia Papilionaceae, Jurnal Farmasi Indonesia 2 (2), 2001,53-61 Winarsi, H. (2007). Antioksidan Alami dan Radikal Bebas Potensi dan Aplikasi Dalam Kesehatan. Kanisius, Yogyakarta. Youngson, Robert. 2005. Antioksidan : Manfaat Vitamin C dan E bagi Kesehatan. SusiPurwoko, Penerjemah; Editor Edisi Bahasa Indonesia, Lilian Juwono.Arcan. Jakarta. Volume 2, No.2, Tahun 2016