Lampiran 1 Pembuatan Suspensi Fungi * 1. Pembuatan Suspensi Aspergillus niger 1 ose kultur murni 5 ml SDA miring, (+) 5 ml SDB suspensi Aspergillus niger inkubasi suhu kamar steril Aspergillus niger pada cawan petri selama 4 hari 2. Pembuatan Suspensi Candida albicans 1 ose 1 ml kultur murni 1 ose 5 ml SDB Candida albicans 48 jam dalam 5 ml SDB 48 jam ½ Mc Farland I pada SDA miring (peremajaan khamir) (± 1,7 x 10 6 mo/ml) 129
Lampiran 2 Penentuan Pengaruh Dimetilsulfoksida dengan Metode Dilusi Padat 1, ml 0,7 ml 0,5 ml 0,3ml 0,1 ml DMSO 100 % @ (+)10 ml SDA 50 C 9,09 % 6,54 % 4,76 % 2,91% 0,99 % dihomogenkan, dituang dalam cawan petri dihomogenkan, dibiarkan memadat inokulasi fungi * inkubasi amati ada/tidak ada KHM Keterangan lampiran: * fungi: Aspergillus niger, inkubasi suhu kamar selama 4 hari. * fungi: Candida albicans, inkubasi suhu kamar selama 2 hari. 130
Lampiran 3 Penentuan Daya Antifungi N-benzoil-N -feniltiourea, N-(4-metilbenzoil)-N - feniltiourea, N-(4-klorobenzoil)-N -feniltiourea, N-benzoil-N -(4-metilfenil)tiourea, dan N-(4-klorobenzoil)-N -(4-metilfenil)tiourea dengan Metode Difusi Cakram terhadap Aspergillus niger 1,75 ml 1,50 ml 1,25 ml 1,0 ml 0,75ml 0,50ml 0,25ml 0,05ml 40000 35000 30000 25000 20000 15000 10000 5000 1000 @ (+) DMSO ad 2 ml @ pipet 20 µl/cakram Letakkan cakram dalam cawan petri yang berisi SDA 30 ml yang telah diinokulasi Aspergillus niger Inkubasi suhu kamar selama 4 hari, kemudiian diamati ada/tidak ada DHP disekitar cakram 131
Lampiran 4 Penentuan Daya Antifungi N-benzoil-N -feniltiourea, N-(4-metilbenzoil)-N - feniltiourea, N-(4-klorobenzoil)-N -feniltiourea, N-benzoil-N -(4-metilfenil)tiourea, dan N-(4-klorobenzoil)-N -(4-metilfenil)-tiourea dengan Metode Difusi Cakram terhadap Candida albicans Base layer Seed layar SDA 30 ml 50ºC 10 menit Cawan Petri diameter 15 cm Suspensi fungi yang ½ Mc. Farland I pipet 0,1 ml Biarkan padat 10 ml SDA 50 C, 10 menit Tuang Seed layer diatas base layer (rotasi sampai homogen) Ratakan dan lakukan pra pengeraman sekitar 1,5-2 jam Difusi Cakram 132
1,75 ml 1,50ml 1,25ml 1,0ml 0,75ml 0,50ml 0,25ml 0,05ml 40000 35000 30000 25000 20000 15000 10000 5000 1000 @ (+) DMSO ad 2 ml @ pipet 20 µl/cakram Letakkan cakram dipermukaan media yang berisi base layer dan seed layer yang telah diberi suspensi Candida albicans Inkubasi suhu kamar selama 2 hari Amati ada/tidak ada DHP disekitar cakram 133
Lampiran 5 Penentuan Daya Antifungi N-benzoil-N -feniltiourea, N-(4-metilbenzoil)-N - feniltiourea, N-(4-klorobenzoil)-N -feniltiourea, N-benzoil-N -(4-metilfenil)tiourea, dan N-(4-klorobenzoil)-N -(4-metilfenil)-tiourea dengan Metode Dilusi Padat 1,75 ml 1,50ml 1,25ml 1,0ml 0,75ml 0,50ml 0,25ml 0,05ml 40000 35000 30000 25000 20000 15000 10000 5000 1000 @ (+) DMSO ad 2 ml @ dipipet 0,3 ml @ (+)10 ml SDA 50 C 1200 1050 900 750 600 450 300 150 30 dituang dalam cawan petri, dihomogenkan dan dibiarkan memadat inokulasi fungi * inkubasi Amati ada/tidak ada KHM Keterangan lampiran *Fungi Aspergillus niger: inkubasi suhu kamar selama 4 hari *Fungi Candida albicans: inkubasi suhu kamar selama 2 hari 134
Lampiran 6 Penentuan Daya Antifungi Ketokonazol dengan Metode Dilusi Padat Terhadap Aspergillus niger 1,75 ml 1,50ml 1,25ml 1,0ml 0,75ml 0,50ml 0,25ml 0,05ml 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 100 @ (+) DMSO ad 2 ml @ dipipet 0,3 ml @ (+)10 ml SDA 50 C 120 105 90 75 60 45 30 15 3 dihomogenkan, dituang dalam cawan petri dihomogenkan, dibiarkan memadat inokulasi Aspergillus niger inkubasi suhu kamar selama 4 hari amati ada/tidak ada KHM 135
Lampiran 7 Penentuan Daya Antifungi Ketokonazol dengan Metode Dilusi Padat Terhadap Candida albicans 1,75 ml 1,50ml 1,25ml 1,0ml 0,75ml 0,50ml 0,25ml 0,05ml 2000 1750 1500 1250 1000 750 500 250 50 @ (+) DMSO ad 2 ml @ dipipet 0,3 ml @ (+)10 ml SDA 50 C 60,0 52,5 45,0 37,5 30,0 22,5 15,0 7,5 1,5 dihomogenkan, dituang dalam cawan petri dihomogenkan, dibiarkan memadat inokulasi Candida albicans ½ Mc Farland I inkubasi suhu kamar selama 2 hari amati ada/tidak ada KHM 136
137 Lampiran 8
138
Mikroskopis Gambar (Pada pembesaran 15x40) 6 5 1: hifa vegetatif bersekat 2: sel kaki 3: konidiofor 4: vesikel 5: sterigma 6. konidiospora 2: sel kaki 3: konidiofor 4: vesikel 5: sterigma 6. konidiospora 4 1 2 3 (sel kaki tidak teramati pada Gambar ) (sel vegetatif bersekat tidak teramati) 139