Lampiran 1.Hasil Identifikasi Tumbuhan
Lampiran 2. Surat Etikal Klirens
Lampiran 3. Gambar Tumbuhan Petai a. Pohon Petai b. Biji Petai
c. Penampang Melintang satu papan petai d. Irisan Biji Petai
e. Simplisia Biji Petai f. Serbuk Simplisia Biji petai
g. Ekstrak simplisia biji petai
Lampiran 4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia Biji Petai Perbesaran 10x 1 2 3 4 Keterangan: 1. Parenkim 2. Amylum (Butir Pati) 3. Fragmen Perisperm 4. Berkas Pembuluh (Xylem)
Lampiran 5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Biji Petai 1. Perhitungan Penetapan Kadar Air % Kadar air = volume air (ml) x 100% berat sampel (g) a. Berat sampel = 5,010 g Volume air = 0,3 ml % Kadar air = 0,3 ml 5,010 g x 100% = 5,98% b. Berat sampel = 5,013 g Volume air = 0,275 ml % Kadar air = 0,275 ml x 100% = 5,48% 5,013 g c. Berat sampel = 5,020 g Volume air = 0,235 ml % Kadar air = 0,235 ml x 100% = 4,68% 5,020 g 5,98% + 5,48% + 4,68% % Kadar air rata-rata = = 5,38% 3 2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air Berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam air = x 100% Berat simplisia (g) 20 a. Berat sampel = 5,0550 g Berat sari = 0,1900 g
Lampiran 5. (Lanjutan) 0,19 g 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 18,79% 5,055 g 20 b. Berat sampel = 5,0600 g Berat sari = 0,2100 g 0,21g 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 20,75% 5,060 g 20 c. Berat sampel = 5,0460 g Berat sari = 0,2520 g 0,2520 g 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 24,9% 5,0460 g 20 18,97% + 20,75% + 24,90% % Kadar sari larut dalam air rata-rata = 3 = 21,48% 3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol Berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% Berat simplisia (g) 20 a. Berat sampel = 5,015 g Berat sari = 0,088 g 0,088 g 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 8,77% 5,015 g 20 b. Berat sampel = 5,011 g Berat sari = 0,095 g Lampiran 5. (Lanjutan)
0,095 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 9,47% 5,011g 20 c. Berat sampel = 5,009 g Berat sari = 0,128 g 0,128 g 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 12,77% 5,009 g 20 % Kadar sari larut dalam etanol rata-rata = 8,77% + 9,47 % + 12,77% 3 = 10,33% 4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total Berat abu (g) % Kadar abu total = x 100% Berat simplisia (g) a. Berat sampel = 2,0018 g Berat abu = 0,018 g 0,018g % Kadar abu total = x 100% = 0,89% 2,0018g b. Berat sampel = 2,0015 g Berat abu = 0,019 g 0,019g % Kadar abu total = x 100% = 0,94% 2,0015g c. Berat sampel = 2,0016 g Berat abu = 0,020 g Lampiran 5. (Lanjutan)
0,1876g % Kadar abu total = x 100% = 0,99% 2,0187g 0,89% + 0,94% + 0,99% % Kadar abu total rata-rata = = 0,94% 3 5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam Berat abu (g) % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% Berat simplisia (g) a. Berat sampel = 2,0015 g Berat abu = 0,013 g 0,013 g % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% 2,0015 g b. Berat sampel = 2,0018 g = 0,64% Berat abu = 0,016 g 0,016 g % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% 2,0018 g = 0,79% c. Berat sampel = 2,0016 g Berat abu = 0,016 g 0,016 g % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% 2,0016 g = 0,79% Lampiran 5. (Lanjutan) % Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata
= 0,64% + 0,79% + 0,79% 3 = 0,74 % Lampiran 6. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak Etanol Biji Petai 1. Perhitungan Penetapan Kadar Air
% Kadar air = volume air (ml) x 100% berat ekstrak (g) a. Berat sampel = 5,015 g Volume air = 0,25 ml % Kadar air = 0,25 ml x 100% = 4,98% 5,015 g b. Berat sampel = 5,018 g Volume air = 0,28 ml % Kadar air = 0,28 ml x 100% = 4,78% 5,018 g c. Berat sampel = 5,013 g Volume air = 0,24 ml % Kadar air = 0,24 ml x 100% = 4,58% 5,013 g 4,98% + 4,78% + 4,58% % Kadar air rata-rata = = 4,98% 3 2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air Berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam air = x 100% Berat ekstrak (g) 20 a. Berat sampel = 5,0240 g Berat sari = 0,2570 g Lampiran 6. (Lanjutan) 0,2570 g 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 25,60% 5,0240g 20
b. Berat sampel = 5,0239 g Berat sari = 0,2572 g 0,2572 g 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 25,60% 5,0239 g 20 c. Berat sampel = 5,0242 g Berat sari = 0,2577 g 0,2577 g 100 % Kadar sari larut dalam air = x x 100% = 25,63% 5,0242 g 20 25,60% + 25,60% + 25,63% % Kadar sari larut dalam air rata-rata = 3 = 25,61% 3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol Berat sari (g) 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% Berat ekstrak (g) 20 a. Berat sampel = 5,0012 g Berat sari = 0,3418 g 0,3418 g 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 34,24% 5,0012 g 20 b. Berat sampel = 5,0020 g Berat sari = 0,3414 g 0,3414 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 34,23% 5,0020 g 20 c. Berat sampel = 5,0018 g Lampiran 6. (Lanjutan) Berat sari = 0,3420 g 0,3420 g 100 % Kadar sari larut dalam etanol = x x 100% = 34,25% 5,0018g 20
34,24% + 34,23 % + 34,25% % Kadar sari larut dalam etanol rata-rata = 3 = 34,25% 4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total Berat abu (g) % Kadar abu total = x 100% Berat ekstrak (g) a. Berat sampel = 2,0022 g Berat abu = 0,017 g 0,017g % Kadar abu total = x 100% = 0,85% 2,0022g b. Berat sampel = 2,0023 g Berat abu = 0,016 g 0,016g % Kadar abu total = x 100% = 0,80% 2,0023g c. Berat sampel = 2,0026 g Berat abu = 0,019 g 0,019g % Kadar abu total = x 100% = 0,95% 2,0026g 0,85% + 0,80% + 0,95% % Kadar abu total rata-rata = = 0,87% 3 Lampiran 6. (Lanjutan) 5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Berat abu (g) % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% Berat ekstrak (g) a. Berat sampel = 2,0022 g Berat abu = 0,012 g 0,012 g % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% 2,0022 g b. Berat sampel = 2,0023 g = 0,60% Berat abu = 0,013 g 0,013 g % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% 2,0023 g = 0,64% c. Berat sampel = 2,0026 g Berat abu = 0,012 g 0,012 g % Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% 2,0026 g = 0,60% % Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata = 0,60% + 0,64% + 0,60% 3 = 0,62 % Lampiran 7. Bagan Alur Penelitian Biji Petai
Dipisahkan dari kulit luarnya Dibersihkan dari pengotor Dicuci sampai bersih, ditiriskan dan ditimbang Berat basah 3,8 kg Berat kering 954,9 g Dihaluskan Ditimbang 946,08 g serbuk simplisia Dikeringkan pada lemari pengering Karakterisasi simplisia a. Pemeriksaan makroskopik b. Pemeriksaan mikroskopik c. Penetapan kadar air d. Penetapan kadar sari larut dalam air e. Penetapan kadar sari larut dalam etanol f. Penetapan kadar abu total g. Penetapan kadar abu tidak larut asam Skrining fitokimia: a. Pemeriksaan alkaloida b. Pemeriksaan flavonoida c. Pemeriksaan tanin d. Pemeriksaan saponin e. Pemeriksaan steroida/triterpenoida f. Pemeriksaan glikosida Lampiran 7. (Lanjutan) 796,08 g Serbuk simplisia biji petai
Dimaserasi menggunakan etanol 96% yang telah didestilasi Maserat Ampas Diuapkan menggunakan rotavapor Dikentalkan dengan menggunakan waterbath Ekstrak kental 123,1 g Diuji aktivitas antimutagenik Dilakukan skrining fitokimia Hasil + Hasil (alkaloid, flavonoid, saponin, steroid/triterpenoid, glikosida)
Lampiran 8. Alat-alat a. Velocity 18R refrigerated centrifuge b. Oral sonde dan spuit 1 ml
Lampiran 8. (Lanjutan) b. Pinset dan gunting bedah c. Mikroskop
Lampiran 9. Hewan percobaan a. Mencit Jantan Putih
Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis Contoh perhitungan dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang diberikan secara oral pada mencit - Dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang dibuat adalah 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 800 mg/kg bb a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etanol biji petai : Timbang 200 mg, 400 mg dan 800 mg ekstrak etanol biji petai (EEBP), masingmasing dilarutkan dalam suspensi CMC b. Berapa volume suspensi ekstrak etanol biji petai yang akan diberikan secara oral pada mencit? Larutan induk baku (LIB) EEBP 5 g/100 ml = 50 mg/ml dan misal BB Mencit = 28 g Jumlah EEBP dosis 200 mg/kg bb = 28 g x 200 mg = 5,6 mg/mencit 1000g LIB EEBP yang dipipet 1 ml ad 5 ml = 50 mg/5 ml = 10 mg/ml Volume larutan yang diberi = 5,6 mg x 1 ml = 0,56 ml 10 mg Jumlah EEBP dosis 400 mg/kg bb = 28 g x 400 mg = 11,2 mg/mencit 1000g LIB EEBP yang dipipet 2 ml ad 5 ml = 100 mg/5 ml = 20 mg/ml Volume larutan yang diberi = 11,2 mg x 1 ml = 0,56 ml 20 mg Jumlah EEBP dosis 800 mg/kg bb = 28 g x 800 mg = 22,4 mg 1000 g LIB EEBP yang dipipet 4 ml ad 5 ml = 200 mg/5 ml = 40 mgl/ml Volume larutan yang diberi = 22,4 mg x 1 ml = 0,56 ml 40 mg
Lampiran 10. (Lanjutan) 1. Volume maksimal larutan sediaan uji yang diberikan pada berbagai hewan Jenis hewan uji Mencit (20-30 g) Tikus (100 g) Hamster (50 g) Marmot (250 g) Merpati (300 g) Kelinci (2,5 kg) Kucing (3 kg) Anjing (5 kg) Volume maksimal (ml) sesuai jalur pemberian i.v. i.m. i.p. s.c. p.o. 0,5 0,005 1,0 0,5-1,0 1,0 1,0 0,1 2,5 2,5 5,0-0,1 1-2 2,5 2,5-0,25 2-5 5,0 10,0 2,0 0,5 2,0 2,0 10,0 5-10 0,5 10-20 5-10 20,0 5-10 1,0 10-20 5-10 50,0 10-20 5,0 20-50 10,0 100,0 (Suhardjono, 1995) 2. Perbandingan luas permukaan tubuh hewan percobaan untuk konversi dosis Mencit 20 g Tikus 200 g Marmot 400 g Kelinci 1,5 kg Kucing 2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit 20 g Tikus 200 g Marmot 400 g Kelinci 1,5 kg Kucing 2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg 1,0 7,01 12,29 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9 0,14 1,0 1,74 3,3 4,2 9,2 17,8 56,0 0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5 0,04 0,25 0,44 1,0 1,06 2,4 4,5 14,2 0,03 0,23 0,42 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0 0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1 0,008 0,06 0,10 0,022 0,24 0,52 1,0 3,1 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,013 0,16 0,32 1,0 (Suhardjono, 1995)
Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis Penginduksi (Siklofosfamid) Dosis 50 mg/kg BB = 3500 mg/70 kg BB = 3500 mg x 0,0026 = 9,1 mg/20 g (mencit) = 9,1 mg/20 g x 28 g = 12,74 mg/mencit Konsentrasi Siklofosfamid 2 % = 20 mg/ml Volume (ml) = 12,74 mg/20 mg/ml x 1 ml = 0,64 ml
Lampiran 11. Hasil Perhitungan Statistik Menggunakan SPSS 16 a. Uji Deskriptif Descriptives Jumlahmikronukleus 95% Confidence Interval for Mean Std. Lower Upper N Mean Deviation Std. Error Bound Bound Minimum Maximum Kontrol normal Kontrol positif EEBP 200 mg/kg bb EEBP 400 mg/kg bb EEBP 800 mg/kg bb 5 32.800 2.3875 1.0677 29.836 35.764 30.0 36.0 5 154.000 3.0822 1.3784 150.173 157.827 150.0 158.0 5 96.800 1.3038.5831 95.181 98.419 95.0 98.0 5 68.000 5.0498 2.2583 61.730 74.270 61.0 74.0 5 37.800 4.4385 1.9849 32.289 43.311 32.0 43.0 Total 25 77.880 45.5021 9.1004 59.098 96.662 30.0 158.0 b. Uji ANOVA Satu Arah (One Way ANOVA) ANOVA Jumlahmikronukleus Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 49442.240 4 12360.560 995.214.000 Within Groups 248.400 20 12.420 Total 49690.640 24
c. Uji Post Hoc Tukey Multiple Comparisons Jumlahmikronukleus Tukey HSD 95% Confidence (I) Interval perlaku Mean Difference Upper an (J) perlakuan (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Bound Kontrol Normal Kontrol Positif -121.2000 * 2.2289.000-127.870-114.530 EEBP 200 mg/kg BB -64.0000 * 2.2289.000-70.670-57.330 EEBP 400 mg/kg BB -35.2000 * 2.2289.000-41.870-28.530 EEBP 800 mg/kg BB -5.0000 2.2289.205-11.670 1.670 Kontrol Positif Kontrol Normal 121.2000 * 2.2289.000 114.530 127.870 EEBP 200 mg/kg BB 57.2000 * 2.2289.000 50.530 63.870 EEBP 400 mg/kg BB 86.0000 * 2.2289.000 79.330 92.670 EEBP 800 mg/kg BB 116.2000 * 2.2289.000 109.530 122.870 EEBP 200 mg/kg BB EEBP 400 mg/kg BB EEBP 800 mg/kg BB Kontrol Normal 64.0000 * 2.2289.000 57.330 70.670 Kontrol Positif -57.2000 * 2.2289.000-63.870-50.530 EEBP 400 mg/kg BB 28.8000 * 2.2289.000 22.130 35.470 EEBP 800 mg/kg BB 59.0000 * 2.2289.000 52.330 65.670 Kontrol Normal 35.2000 * 2.2289.000 28.530 41.870 Kontrol Positif -86.0000 * 2.2289.000-92.670-79.330 EEBP 200 mg/kg BB -28.8000 * 2.2289.000-35.470-22.130 EEBP 800 mg/kg BB 30.2000 * 2.2289.000 23.530 36.870 Kontrol Normal 5.0000 2.2289.205-1.670 11.670 Kontrol Positif -116.2000 * 2.2289.000-122.870-109.530 EEBP 200 mg/kg BB -59.0000 * 2.2289.000-65.670-52.330 EEBP 400 mg/kg BB -30.2000 * 2.2289.000-36.870-23.530 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.
d. Uji Homogeneous Jumlahmikronukleus Tukey HSD Perlakuan N Subset for alpha = 0.05 1 2 3 4 Kontrol Normal 5 32.800 EEBP 800 mg/kg BB 5 37.800 EEBP 400 mg/kg BB 5 68.000 EEBP 200 mg/kg BB 5 96.800 Kontrol Positif 5 154.000 Sig..205 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.