Dr. Dwi Suryanto Prof. Dr. Erman Munir Nunuk Priyani, M.Sc.

Transkripsi

1 BIO210 Mikrobiologi Dr. Dwi Suryanto Prof. Dr. Erman Munir Nunuk Priyani, M.Sc.

2 Kuliah 2. PENGAMATAN MIKROBA

3 Karena berukuran kecil, mikroba biasa diamati dengan mikroskop Mikroskop yang digunakan Leuwenhoek dan Hooke berupa mikroskop sederhana dengan hanya menggunakan 1 lensa Lensa kombinasi digunakan oleh Joseph Jackson Lister (ayah Joseph Lister) 1830

4 A. Mikroskop Compound Light Microscopy (Mikroskop Cahaya), untuk melihat benda-benda kecil dengan medan terang. Darkfield Microscope, untuk mengamati mikroba yang tidak dapat dilihat dengan mikroskop cahaya biasa, tidak dapat diwarnai dengan metode standard, atau mengalami distorsi setelah pewarnaan. Kondensor mikroskop ini menggunakan kondensor medan gelap yang tidak memungkinkan cahaya ditransmisi melewati spesimen terus ke lensa objektif.

5 Phase-Contrast Microscopy, memungkinkan eksaminasi struktur internal secara rinci dari mikroba hidup. Menggunakan kondensor khusus. Differential Interference Contrast Microscopy, mikroskop ini memungkinkan melihat objek menjadi 3 dimensi. Cahaya dipecah dan direkombinasi dengan prisma khusus.

6 Mikroskop cahaya

7 Jenis gambaran yang dihasilkan mikroskop cahaya. (a) struktur dalam terlihat dengan iluminasi medan terang (brightfield illumination). (b) Mikroskop fase kontras memberikan perbedaan yang besar struktur internal. (c) dengan mikroskop medan gelap tepi sel terlihat terang. (d) differential interference contrast microskopy menghasilkan penampakan tiga dimensi sel dan inklusinya.

8 Fluorescence Microscopy, menggunakan bahan fluoresen sehingga memberi warna, menggunakan cahaya uv atau mendekati uv. Jika objek secara alami tidak berfluoresen, objek dapat diwarnai dengan bahan fluoresen yang disebut fluorochrome. Contoh auramine O memberi warna kuning dengan uv, sangat diserap Mycobacterium tuberculosis; fluorescein isothiocyanate (FITC) memberi warna kuning terang, diserap oleh Bacillus anthracis. Teknik khusus dalam mikroskop ini yang disebut teknik antibodi-fluoresen atau immunofluoresen, menggunakan reaksi antigen-antibodi.

9 (a) Dasar immunofluoresen. Suatu zat warna bergabung dengan antibodi spesifik untuk bakteri. (b) Dalam teknik antibodi-fluoresen, struktur tempat melekatnya antibodi khusus terlihat terang.

10 Electron Microscopy, terdapat 2 jenis transmission electron microscopy (TEM) dan scanning electron microcopy (SEM). Perbedaan keduanya terletak pada penggunaan. TEM digunakan untuk melihat preparat irisan ultra tipis, preparat dapat diwarnai. Pada SEM spesimen tidak perlu disayat tipis dengan hasil pengamatan 3 dimensi. Kedua mikroskop dapat memperbesar bayangan objek pengamatan sampai puluhan ribu kali, sesuatu hal yang tidak bisa dilakukan dengan mikroskop cahaya biasa. Lensa pada mikroskop ini berupa medan listrik.

11 A B (a) Transmission electron microscope, (b) Scanning electron microscope

12 B. Penyiapan Spesimen Untuk Pengamatan Mikroskop Cahaya Preparat gantung. Preparat gantung dibuat dengan meneteskan suspensi spesimen hidup di tengah gelas penutup, kemudian tepinya diberi petroleum jeli seperti vaselin. Gelas penutup diletakkan terbalik pada gelas benda khusus yang cekung kemudian dibalik.

13 Cara pembuatan preparat gantung

14 Pewarnaan sederhana. Pewarnaan dengan menggunakan hanya satu zat warna basa air atau basa alkohol. Kadangkadang diberi mordant untuk menguatkan zat warna yang diberikan. Zat warna yang biasa digunakan misalnya biru metilena, karbolfuhsin, gentian violet, dan safranin. Penyiapan usapan dan cara pewarnaan. (a) Suspensi mikroba disebar tipis pada kaca benda dan dikeringanginkan. (b) Lapisan tipis difiksasi dengan api. (c) Lapisan terfiksasi diberi warna, kemudian (d) dibilas.

15 Pewarnaan diferensial. Teknik pewarnaan ini menyebabkan bagian sel terwarnai berbeda. a. Pewarnaan Gram, teknik ini dikembangkan pertama kali oleh Hans Christian Gram tahun Berdasarkan pewarnaan ini bakteri terbagi menjadi: gram-positif dan gram-negatif. b. Pewarnaan tahan asam, pewarnaan ini sering digunakan untuk genus Mycobacterium dan Noocardia

16 Cara pewarnaan Gram

17 Pewarnaan khusus. Pewarnaan ini digunakan untuk melihat bagian-bagian khusus dari sel bakteri. a. Pewarnaan negatif untuk kapsul, Banyak bakteri yang mempunyai kapsul di bagian luar sel. b. Pewarnaan endospora, endospora tidak dapat diwarnai dengan cara pewarnaan biasa, sebab zat warna tidak bisa menembus spora

18 Pewarnaan negatif untuk kapsul dan pewarnaan endospora dan flagella. (a) Tinta India memberikan latar belakang hitam, sehingga kapsul terlihat terang mengeliling sel. (b) Endospora terlihat terang di tengah sel berbentuk batang atau oval. (c) Flagella terlihat tebal seperti benang pada sel.

19

20

21