LAPORAN PRAKTIKUM PERSIAPAN MEDIA DAN STERILISASI OLEH : : RITA ANGGREANI WIDIASTUTI NIM : D1C KELOMPOK : IV KELAS : TPG-A 2014

Transkripsi

1 LAPORAN PRAKTIKUM PERSIAPAN MEDIA DAN STERILISASI OLEH : NAMA : RITA ANGGREANI WIDIASTUTI NIM : D1C KELOMPOK : IV KELAS : TPG-A 2014 JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI DAN INDUSTRI PERTANIAN UNIVERSITAS HALU OLEO KENDARI 2016

2 I.1 Latar Belakang I. PENDAHULUAN Medium memiliki syarat harus steril, agar tidak ada kontaminan yang tumbuh, untuk itu penyiapan medium dan sterilisasi alat dan bahan yang akan digunakan harus disterilkan terlebih dahulu. Selain itu, medium harus memiliki kandungan nutrient dan zat-zat yang sesuai dengan jenis dan tujuan medium tersebut. Nutrien dalam medium harus memenuhi kebutuhan dasar makhluk hidup, yang meliputi air, karbon, energi, nitrogen, mineral dan faktor tumbuh. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada suatu substrat yang disebut medium. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroorganisme tersebut harus sesuai susunanya dengan kebutuhan jenis-jenis mikroorganisme yang bersangkutan. Beberapa mikroorganisme dapat hidup baik pada medium yang sangat sederhana yang hanya mengandung garam anargonik ditambah sumber karbon organik seperti gula. Sedangkan mikroorganime lainnya memerlukan suatu medium yang sangat kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah atau bahan-bahan kompleks lainnya. I.2 Tujuan Tujuan dari praktikum ini yaitu untuk menyiapkan media tumbuh mikroorganisme yang steril. II. TINJAUAN PUSTAKA

3 Mikroorganisme harus dibiakkan di laboratorium pada bahan nutrien yang berperan penting untuk pertumbuhan dan perkembangbiakannya. Susunan bahan nutrien, baik bahan alami maupun sintetik/buatan, yang dipergunakan untuk pertumbuhan dan perkembangan bakteri. Macam nutrien yang digunakan tergantung dari macam bakteri yang dibiakkan (Yani, 2011). Medium merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran zat makanan (nutrient) yang berfungsi sebagai tempat tumbuh mikrobia. Selain untuk menumbuhkan mikrobia, medium dapat digunakan juga untuk isolasi, memperbanyak, pengujian sifat sifat fisiologi, dan perhitungan jumlah mikrobia (Tim Penyusun, 2014). Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan atau nutrisi yang diperlukan oleh mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi di dalam media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media, pertumbuhan dapat dilakukan dengan isolasi mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Bahan dasar adalah air (H 2 O) sebagai pelarut dari agar-agar (rumput laut) dimana agar-agar tersebut berfungsi sebagai pemadat media (Soni, 2010 dalam Mirsadiq, 2013). Persyaratan yang harus dipenuhi dalam penyiapan medium supaya mikroorganisme dapat tumbuh baik adalah mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan oleh mikroba, mempunyai tekanan osmose, tegangan permukaan, dan ph yang sesuai, tidak mengandung zat-zat penghambat dan steril (Rakhmawati, 2012).

4 Media dapat digolongkan berdasarkan bentuk, susunan kimia, dan fungsinya. Berdasarkan bentuk atau konsistensinya media terdiri dari media padat (solid medium) berbentuk padat, tidak mengandung agen cair, media cair (liquid medium) berbentuk cair, media ini dapat berupa bahan organik alamiah (yang dibuat dari kentang, wortel), atau dapat juga berupa bahan anorganik (misal silica gel), dan media semi padat (semi solid medium), media padat yang dapat dicairkan, apabila dalam keadaan panas berbentuk cair, sedangkan dalam keadaan dingin berbentuk padat, misalnya media agar (Tim Penyusun, 2014). Media EMBA (Eosin Methylen Blue Agar) mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilih mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti staphylococcus aureus, P. aerugenosa dan salmonella. Mikroba yang memfermentasikan laktosa akan menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap dengan kilap logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninyan tidak berwarna (Hastowo, 1992 dalam Bashar, 2013).

5 III. METODOLOGI PRAKTIKUM 3.1. Tempat dan Waktu Praktikum dilaksanakan di Laboratorium Agroteknologi Unit Fitopatologi, Fakultas Pertanian pada hari Selasa, 3 Mei 2016 pukul WITA Bahan dan Alat Bahan yang digunakan dalam praktikum ini yaitu media sintesis EMBA, aquades, Nutrient Broth, agar, 15% skim milk, pepton, NaCl, KH 2 PO 4, Bromthymol blue, media sintesis Potato Dextrosa Broth dan pati 15%. Alat yang digunakan dalam praktikum ini yaitu timbangan analitik, aluminium foil, gelas kimia, magnetic stirrer, hot plate, dan botol Schoot Prosedur Kerja Prosedur kerja praktikum ini yaitu sebagai berikut : - Media EMBA Menimbang media sintesis EMBA sebanyak g. Memasukkan media EMBA kedalam gelas kimia 1000 ml. Menambahkan aquades sebanyak 500 ml. Menghomogenkan campuran media tersebut menggunakan magnetic stirrer, setelah itu memasukkan campuran kedalam botol Schoot. Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclave. - Metode uji proteolitik Menimbang Nutrient Broth sebanyak 4.5 g. Menimbang agar sebanyak 5 g, lalu menambahkan 15% skim milk. Mencampur bahan-bahan tersebut kedalam gelas kimia 1000 ml, lalu menambahkan aquades sebanyak 500 ml. Menghomogenkan campuran media tersebut menggunakan magnetic stirrer, setelah itu memasukkan campuran kedalam botol Schoot. Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclave. - Metode NA Menimbang media sintesis Nutrient Broth sebanyak 4.5 g. Menimbang agar sebanyak 10 gr. Mencampur Nutrient Broth dan agar dalam gelas kimia 1000 ml.

6 Menambahkan aquades sebanyak 1000 ml. Menghomogenkan campuran media tersebut menggunakan magnetic stirrer, setelah itu memasukkan campuran kedalam botol Schoot. Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclave. - Media uji aerob dan anaerob Menimbang pepton 2.0 g; NaCl 5.0 g ; KH 2 PO g ; agar g ; Bromthymol blue 1% 3.0 g. Mencampur bahan-bahan tersebut kedalam gelas kimia 1000 ml lalu menambahkan aquades sebanyak 500 ml. Menghomogenkan campuran media tersebut menggunakan magnetic stirrer, setelah itu memasukkan campuran kedalam botol Schoot. Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclave. - Media PDA Menimbang media sintesis Potato Dextrosa Broth sebanyak 12 g. Menimbang agar sebanyak 5 g. Mencampur Potato Dextrosa Broth dan agar dalam gelas kimia 1000 ml. Menambahkan aquades sebanyak 500 ml. Menghomogenkan campuran media tersebut menggunakan magnetic stirrer, setelah itu memasukkan campuran kedalam botol Schoot. Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclave. - Media uji amilolitik Menimbang Nutrient Broth sebanyak 4.5 g. Menimbang agar sebanyak 5 g lalu menambahkan 15% pati. Mencampur bahan-bahan tersebut kedalam gelas kimia 1000 ml lalu menambahkan aquades sebanyka 500 ml. Menghomogenkan campuran media tersebut menggunakan magnetic stirrer, setelah itu memasukkan campuran kedalam botol Schoot. Sterilisasi media tersebut menggunakan Autoclave.

7 4.1. Hasil IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A : media uji proteolitik B : media NA C : media PDA D : media EMBA E : media uji amilolitik F : uji aerob dan anaerob 4.2. Pembahasan

8 Medium merupakan bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya, medium tersebut harus memenuhi syarat-syarat, antara lain adalah harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba, harus mempunyai tekanan osmosis, tegangan permukaan dan ph yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan ditumbuhkan, tidak mengandung zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba, harus berada dalam keadaan steril sebelum digunakan, agar mikroba yang di tumbuhkan dapat tumbuh dengan baik. Medium juga merupakan makanan atau campuran dari beberapa bahan makanan yang disiapkan untuk pertumbuhan mikroorganisme. Praktikum ini menggunakan media uji EMBA (Eosin Methylen Blue Agar). Media EMBA ( Eosin Methylen Blue Agar ) mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilih mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti Staphylococcus aureus, P. aerugenosa dan Salmonella. Mikroba yang memfermentasikan laktosa akan menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap dengan kilap logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya tidak berwarna. Adanya eosin dan methylen blue membantu mempertajam perbedaan tersebut. Agar EMB (levine) merupakan media padat yang dapat digunakan untuk menentukan jenis bakteri coli dengan memberikan hasil positif dalam tabung. EMB yang menggunakan eosin dan metilen blue sebagai indikator memberikan perbedaan yang nyata antara koloni yang meragikan laktosa dan yang tidak. Medium tersebut mengandung sukrosa karena kemempuan bakteri koli yang lebih cepat meragikan sukrosa daripada laktosa.

9 NA (Nutrient Agar) digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri. NA dibuat dengan komposisi agar-agar yang sudah dipadatkan sehingga NA juga bisa disebut dengan nutrient padat yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri. Medium NA adalah salah satu medium padat yang memiliki komposisi yaitu agaragar yang telah dipanaskan dan mencair dengan suhu 95 C. NA lebih bersifat umum sehingga mikroba banyak tumbuh pada media ini. PDA (Potato Dextrose Agar) digunakan untuk menumbuhkan fungi atau jamur. PDA merupakan salah satu media biakan karena kaya akan nutrisi yang dibutuhkan oleh mikroba untuk hidup. Nutrisi yang diberikan media untuk mikroba berupa karbohidrat (pati) dari kentang, glukosa dari dekstrosa atau fruktosa serta kandungan air dalam agar. Dalam pembuatan PDA disetiap prosesnya harus selalu steril, baik alat-alat yang digunakan untuk proses pembuatan haruslah steril. Contohnya: tangan, dalam proses ini tangan harus disterilkan oleh alkohol sebelum melakukan pembuatan PDA ini. Tujuannya yaitu agar PDA yang dibuat tidak ditumbuhi mikroorganisme yang tidak diinginkan. Media biakan adalah media steril untuk menumbuhkan mikroorganisme. Dalam pembuatan PDA, peranan agar-agar sebagai media tempat tumbuh dari jamur. Sedangkan kentang yang mengandung karbohidrat berperan untuk memberikan energi bagi mikroorganisme. Uji amilolitik dikhususkan pada pengujian bakteri amilolitik. Mikroorganisme yang bersifat amilolitik dapat memecah pati (amilum) yang terdapat dalam makanan menjadi senyawa yang lebih sederhana, terutama dalam bentuk glukosa. Kemampuan untuk menghidrolisis amilum menjadi glukosa, maltosa dan dekstrin karena mempunyai enzim amilase. Fungsi uji positif

10 hidrolisis amilum pada bakteri ditandai dengan tampaknya area jernih di sekitar pertumbuhan bakteri yang digoreskan. Fungi atau bakteri memproduksi α-amilase sehingga mampu menguraikan amilum dengan eksoenzim amilolitik tersebut amat luas antara mikroorganisme. Uji proteolitik diujikan pada bakteri proteolitik yaitu enzim pemecah protein yang diproduksi didalam sel kemudian dilepaskan keluar dari sel tetapi tidak semua mempunyai enzim protease ekstraselular. Pengujian secara kualitatif dilakukan dengan cara mengamati zona bening yang berada di sekitar koloni bakteri, kemudian membagi diameter zona bening dengan diameter koloni bakteri. Hasil bagi diameter tersebut dinyatakan sebagai aktifitas protease secara relatif. Aktivitas bakteri proteolitik juga dapat diketahui secara kuantitatif dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang ultra violet 280 nm. Panjang gelombang tersebut dapat ditangkap dan dipantulkan kembali oleh asam amino suatu protein berdasarkan gugus aromatik terutama asam amino tirosin, triptofan dan fenilalanin. Kelebihan metode ini yaitu sederhana, mudah serta tidak memerlukan penambahan reagen tertentu. Uji aerob dan anaerob, energi diperoleh melalui fosforilase oksidatif tetapi dalam prosesnya bisa menggunakan oksigen sebagai aseptor elektron terakhir (respirasi aerob) atau senyawa anorganik lain (respirasi anaerob). Pada mikroorganisme aerob, oksigen digunakan sebagai aseptor elektron terakhir, tidak

11 diperlukan reduksi senyawa intermediator seperti dalam fermentasi. Hasilnya senyawa-senyawa intermediet tersebut dapat dioksidasi sempurna menjadi karbon dioksida dan air. Metabolisme anaerob, elektron yang dibebaskan melalui reaksi oksidasi ditransfer melalui serangkaian transfer elektron dan energi dihasilkan melalui fosforilase oksidatif. Letak perbedaan antara respirasi aerob dana anaerob yaitu respirasi anaerob yang berperan sebagai aseptor elektron terakhir adalah senyawa anorganik, bukan oksigen. Peran utama nutrien adalah sebagai sumber energi, bahan pembangun sel, dan sebagai aseptor elektron dalam reaksi bioenergetik (reaksi yang menghasilkan energi). Oleh karenanya bahan makanan yang diperlukan terdiri dari air, sumber energi, sumber karbon, sumber aseptor elektron, sumber mineral, faktor pertumbuhan, dan nitrogen. Selain itu, secara umum nutrien dalam media pembenihan harus mengandung seluruh elemen yang penting untuk sintesis biologik organisme baru.

12 5.1. Kesimpulan V. PENUTUP Medium merupakan bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme di atas atau di dalamnya. Media juga merupakan makanan atau campuran dari beberapa bahan makanan yang disiapkan untuk pertumbuhan mikroorganisme. Media EMBA ( Eosin Methylen Blue Agar ) mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilih mikroba yang memfermentasikan laktosa. Agar EMB (levine) merupakan media padat yang dapat digunakan untuk menentukan jenis bakteri coli dengan memberikan hasil positif dalam tabung Saran Praktikum ini seharusnya dilakukan dengan benar karena praktikum ini berkaitan satu sama lain dengan praktikum selanjutnya.

13 DAFTAR PUSTAKA Bashar, Yazhid Pembuatan EMBA dan MCA. Di akses tanggal 4 Mei Mirsadiq, Lucky Laporan Praktikum Mikrobiologi Pertanian. Universitas Sebelas Maret. Surakarta. Rakhmawati, Anna Penyiapan Media Mikroorganisme. Universitas Negeri Yogyakarta. Yogyakarta. Tim Penyusun Petunjuk Praktikum M.K. Mikrobiologi Pertanian. Universitas Sebelas Maret. Surakarta. Yani Media Pertumbuhan Mikroba. Di akses tanggal 4 Mei 2016.

14 LAMPIRAN

15

16

17