HASIL DAN PEMBAHASAN

Transkripsi

1 HASIL DAN PEMBAHASAN Jumlah sel tumor limfoid pada lamina propria Hasil pengamatan terhadap jumlah sel tumor limfoid pada lamina propria vili usus yang diperoleh dari setiap kelompok percobaan telah dihitung dan dianalisa sehingga hasilnya dapat dilihat pada Tabel 2 sebagai berikut: Tabel 2 Jumlah rata-rata sel tumor limfoid pada setiap perlakuan Parameter Perlakuan Jumlah sel tumor limfoid R0 R1 R2 R3 R4 155,25 63,21 ab 193,75 39,78 ab 212,75 31,44 b 302,25 14,73 c Keterangan: Huruf yang sama menyatakan tidak berbeda nyata (P>0,05) R0 = Pakan basal (kontrol) R1 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + serbuk kunyit 1,5 % R2 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + ZnO 120 ppm R3 = Pakan basal + serbuk kunyit 1,5 % + ZnO 120 ppm R4 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + serbuk kunyit 1,5 % + ZnO 120 ppm 134,50 24,79 a Rata-Rata sel tumor limfoid R0 R1 R2 R3 R4 Kelompok Perlakuan Gambar 5 Jumlah rataan sel tumor limfoid pada setiap perlakuan. Hasil perhitungan rataan jumlah sel tumor limfoid menunjukkan adanya perbedaan yang nyata ( P < 0,05) pada kelompok perlakuan. Di antara perlakuan tersebut, rataan jumlah sel tumor limfoid nyata lebih tinggi dijumpai pada

2 kelompok R2 dan R3, sedangkan jumlah yang paling rendah dijumpai pada kelompok R4. Menurut Tabbu (2000), rute infeksi penyakit Marek secara alami yang terpenting adalah melalui saluran pernafasan (inhalasi). Sel-sel epitel pada saluran pernafasan akan mengalami infeksi produktif dan infeksi akan menyebar ke berbagai organ salah satunya adalah usus. Virus akan hidup dalam limfosit T selama waktu yang tidak terbatas sehingga menyebabkan terbentuknya sel tumor limfoid. Menurut Jani et al. (1993), tanda yang dapat dilihat secara mikroskopis jika terinfeksi Marek adalah adanya proliferasi dari sel limfoid (tumor) baik yang berukuran kecil, sedang, dan besar. Gambar 6 Histopatologi lamina propria vili usus halus yang berisi sel limfoid ( ). Pewarnaan HE, kelompok R3, Bar = 40 µm. Infeksi akibat Marek s disease virus dapat terjadi dalam 3 bentuk yaitu infeksi produktif (sitolitik) yang terjadi di dalam epitel bulu dan menghasilkan virion yang mempunyai envelope dan bersifat infeksius. Infeksi laten yang bersifat nonproduktif hanya ditemukan di dalam limfosit, terutama limfosit T. Pada saat terjadi infeksi laten, genome dari virus telah terbentuk tetapi tidak

3 diekspresikan. Infeksi transforming dapat ditemukan pada sebagian besar sel yang mengalami transformasi pada tumor limfoid yang disebabkan oleh Marek (Tabbu 2000). Tingginya jumlah sel tumor limfoid pada kelompok R2 dan R3 diduga akibat kelanjutan dari infeksi Marek produktif menuju infeksi transforming yang menimbulkan limfoma yang ditandai dengan peningkatan jumlah sel tumor limfoid. Jumlah rataan sel tumor limfoid pada kelompok R1 dan R4 tidak berbeda nyata dengan kelompok R0. Kelompok R4 menunjukkan jumlah rataan sel tumor limfoid yang paling rendah dari semua kelompok perlakuan. Rendahnya jumlah rataan sel tumor limfoid pada kelompok R4 dapat diduga akibat adanya efek dari bawang putih dan kunyit sebagai antitumor serta zink yang mampu meningkatkan sistem kekebalan tubuh. Penambahan bawang putih ke dalam pakan dapat menurunkan resiko terjadinya tumor. Bawang putih mengandung alil sulfida yang mampu mencegah pembentukkan radikal bebas yang dapat memacu terjadinya tumor. Alil sulfida akan bereaksi dengan zat radikal bebas untuk menekan pembentukan radikal bebas. Dosis yang telah diuji pada manusia untuk menekan jumlah tumor pada organ pencernaan adalah 0,3 mg/kg (Currah 2002). Penambahan kunyit ke dalam pakan mampu menekan peningkatan sel tumor. Curcumin mampu menekan pertumbuhan tumor dengan mencegah produksi inos dan COX-2 penyebab tumor dan meningkatkan produksi aktivitas NF kb. Curcumin juga dapat meningkatkan produksi NO (Nitrik Oksida) pada sel NK (Natural Killer) untuk mencegah pertumbuhan sel tumor (Chattopadhyay 2004). Penambahan zink ke dalam pakan mampu meningkatkan sistem kekebalan dengan memacu peningkatan IgG pada unggas yang mampu menstimulasi sistem fagositosis. Zink juga mampu meningkatkan aktifitas Natural Killer Cells, fungsi dari makrofag (fagositosis dan intracellular killing), dan meningkatkan fungsi neutrofil sehingga tubuh mampu melawan benda asing yang masuk ke dalam tubuh. Zink yang masuk ke dalam tubuh akan diserap di saluran pencernaan yaitu pada usus halus sekitar 5-40%. Zink akan masuk ke dalam membran brush border usus halus melalui periselular dan media perantara sehingga zink dapat

4 disebarkan ke seluruh tubuh. Penambahan zink dengan dosis minimal sekitar 44 mg/kg dari jumlah total pakan telah diuji dan mampu meningkatkan sistem kekebalan tubuh ayam (Goswami et al 2005). Proliferasi sel goblet pada permukaan vili usus Proliferasi sel goblet merupakan suatu respon usus terhadap adanya zat toksik serta benda asing yang dapat mengiritasi dan menginfeksi sehingga menghasilkan mukus yang akan mengencerkan bahan toksik serta benda asing tersebut. Mukus yang disekresikan adalah glikoprotein kompleks yang mengandung 4 sub-unit glikoprotein dengan berat molekul tinggi dan tidak larut dalam air. Mucin akan mengalami dehidrasi membentuk gel dan menjadi selimut mukus yang melindungi epitel usus halus dan usus besar (Ganong 2002). Imamura (2003), menambahkan bahwa sel goblet menghasilkan enteropeptidase yang dapat membantu mengubah tripsinogen menjadi tripsin yang berperan penting untuk proses pencernaan. Hasil pengamatan terhadap proliferasi sel goblet pada permukaan vili usus yang diperoleh dari setiap kelompok percobaan telah dihitung dan dianalisa sehingga hasilnya dapat dilihat pada Tabel 3 sebagai berikut: Tabel 3 Persentase vili usus yang mengalami proliferasi sel goblet pada setiap Parameter Proliferasi sel goblet (%) perlakuan Kelompok RO R1 R2 R3 R4 47,50 32,02 a 45,00 17,32 a 60,00 25,82 a 60,00 38,29 a Keterangan: Huruf yang sama menyatakan tidak berbeda nyata (P>0,05) R0 = Pakan basal (kontrol) R1 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + serbuk kunyit 1,5 % R2 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + ZnO 120 ppm R3 = Pakan basal + serbuk kunyit 1,5 % + ZnO 120 ppm R4 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + serbuk kunyit 1,5 % + ZnO 120 ppm 40,00 11,55 a Seluruh kelompok pelakuan menunjukkan peningkatan persentase jumlah vili usus yang mengalami proliferasi sel goblet walaupun secara statistik tidak

5 menunjukkan perbedaan yang nyata (P>0,05). Kelompok R0 menunjukkan persentase vili usus yang mengalami proliferasi sel goblet yang lebih rendah jika dibandingkan dengan kelompok R2 dan R3. Hal ini diduga akibat kecenderungan pemberian herbal dan zink ke dalam pakan pada kelompok R2 dan R3 yang dapat meningkatkan proliferasi sel goblet untuk melindungi duodenum. Perbedaan dari setiap hasil perlakuan pada kelima kelompok dapat dilihat juga pada Gambar 7 sebagai berikut: Presentase Rata-Rata R0 R1 R2 R3 R4 Perlakuan Ransum Gambar 7 Rataan proliferasi sel goblet pada setiap perlakuan. Permukaan saluran pencernaan dilapisi oleh mucin yang dihasilkan oleh sel goblet dan berfungsi untuk lubrikasi, transport antara lumen, dan melindungi usus. Sel goblet mensekresikan mukus yang berfungsi untuk melindungi dinding usus sebagai respon terhadap rangsangan yang bersifat mengiritasi (Guyton dan Hall 1997). Jumlah sel goblet bervariasi pada setiap bagian usus dan akan bertambah apabila ada rangsangan yang tepat seperti terpapar oleh senyawa kimia, adanya benda asing atau pakan yang bersifat mengiritasi. Akibat stimulan tersebut, enterosit bermetaplasia menjadi sel goblet sehingga terjadi proliferasi sel goblet (Smith et al. 1974). Sel goblet akan berproliferasi apabila ada benda asing atau zat yang dapat mengiritasi. Peningkatan sekresi mucin terjadi akibat adanya tumor pada pankreas, paru-paru, saluran pencernaan dan lain-lain (Anonymous 2008c). Infeksi akibat penyakit Marek saat pemeliharaan ayam diduga menyebabkan peningkatan

6 proliferasi sel goblet karena dianggap untuk merespon adanya benda asing ataupun yang dapat mengganggu usus halus. Menurut Smirnov et al. (2004), peningkatan sekresi mucin dari sel goblet ke permukaan usus halus untuk membantu proses pencernaan dan penyerapan nutrisi karena mucin dibutuhkan untuk transport makanan antar lumen dan sebagai transport nutrisi yang masuk ke brush border. Peningkatan sekresi mucin oleh sel goblet juga dipengaruhi oleh pemberian ransum pakan yang berbeda. Gambar 8 Histopatologi vili usus halus mengalami proliferasi sel goblet ( ). Pewarnaan HE, kelompok R2, Bar = 100 µm. Tingginya jumlah vili usus yang mengalami proliferasi sel goblet pada kelompok R2 dab R3 diduga akibat pemberian herbal dan zink, sedangkan kelompok R0 tidak diberi tambahan herbal dan zink. Menurut Chattopadhyay 2004, pemberian Curcumin ke dalam pakan dapat meningkatkan sekresi mucin yang diujikan pada kelinci dengan dosis 50 mg/kg. Peningkatan sekresi mucin tersebut merupakan suatu respon untuk melindungi saluran pencernaan dari paparan yang bersifat mengiritasi.

7 Demielinasi saraf pada duodenum Pengamatan histopatologi pada saraf di duodenum, ditemukan adanya demielinasi saraf pada semua kelompok percobaan dengan tingkat keparahan yang sama. Ditemukan juga sel limfoid disekitar saraf dalam jumlah minimal. Demielinasi saraf duodenum dan adanya infiltrasi sel limfoid disekitar saraf yang mengalami demielinasi merupakan ciri yang dapat dilihat akibat ayam terinfeksi penyakit Marek. Demielinasi dicirikan dengan adanya vakuolisasi mielin dan adanya sel limfoid di sekitar saraf. Menurut Dijk et al. (2007), demielinasi merupakan lisisnya selubung mielin sehingga terbentuk vakuolisasi. Vakuolisasi mielin menyebabkan menurunnya fungsi mielin yaitu mempercepat hantaran gelombang. Hal ini berpengaruh pada fungsi pleksus secara umum terhadap sistem pencernaan. Berkurangnya fungsi pleksus tersebut menimbulkan gangguan peristaltik gastrointestinal, sekresi kelenjar saluran pencernaan serta gangguan aliran darah. Menurut Payne (1985), infeksi pada sel Schwann akibat Marek diduga sebagai penyebab terjadinya demielinasi dan demielinasi akan menyebabkan infiltrasi serta proliferasi sel. Demielinasi pada umumnya terjadi saat ayam berumur 4-5 minggu dan ditandai dengan adanya infiltrasi sel limfoid dan makrofag pada daerah lamina sel Schwann dan terjadinya kerusakan pada mielin. Jordan (1990) membagi tingkat keparahan akibat infeksi Marek ke dalam 3 tipe yaitu tipe A, B dan C. Menurut Tabbu (2000), lesi tipe A mempunyai karakter neoplastik, yang terdiri dari sel limfoid yang berproliferasi meliputi limfosit ukuran kecil, sedang dan besar serta terdapat beberapa limfoblast. Pada kasus tertentu dapat ditemukan adanya demielinasi saraf dan proliferasi sel-sel schwan. Lesi tipe B ditandai dengan adanya edema di antara serabut saraf, infiltrasi sel limfosit dan sel plasma yang bersifat ringan sampai parah. Edema pada saraf akibat penyakit Marek disertai oleh demielinasi dan proliferasi sel schwan. Lesi tipe C terdiri dari kumpulan sejumlah kecil limfosit dan sel plasma yang tersebar diantara serabut saraf. Dari hasil pengamatan, dapat dikatakan bahwa tingkat kerusakan akibat infeksi penyakit Marek pada masing-masing kelompok perlakuan termasuk ke dalam lesi tipe A dan B.

8 Gambar 9 Histopatologi saraf usus halus yang mengalami mengalami demielinasi (A) dan infiltrasi sel limfoid (B). Pewarnaan HE,, kelompok R4, bar = 100 µm. µm Pada Gambar 9 dapat dilihat terjadi vakuolisasi dan sel saraf tampak rusak serta adanya infiltrasi sel limfoid disekitar saraf walaupun dalam jumlah yang sedikit. Folikel limfoid sekunder pada sekal tonsil Sekal tonsil merupakan merupakan jaringan limfoid yang akan merespon agen asing yang masuk ke dalam tubuh. Organ sekal tonsil merupakan organ pertahanan yang strukturnya dicirikan dengan jaringan limfoid. Respon yang ditunjukkan berupa pembentukan folikel limfoid sekunder (Gambar 10). 10) Menurut Bacha (2000), sekal tonsil adalah jaringan limfoid di sekitar perbatasan sekum yang menyebar ataupun membentuk nodular di lamina propria ataupun submukosa. Menurut Pink (1976) dalam Roitt dan Delves (1992), struktur sekal tonsil mirip dengan usus buntu yang merupakan cabang usus dan berisi limfosit. Struktur organ ini ialah kripta, nodul limfatik (folikel limfoid), Musculus muscularis externa,, ekstrafolikuler, epitel dan vili.

9 Hasil pengamatan folikel limfoid sekunder pada sekal tonsil yang diperoleh dari setiap kelompok percobaan telah dihitung dan dianalisa sehingga hasilnya dapat dilihat pada Tabel 4 sebagai berikut: Tabel 4 Jumlah rataan folikel limfoid sekunder pada setiap perlakuan Parameter Folikel limfoid sekunder Kelompok R0 R1 R2 R3 R4 9,50 6,40 a 11,25 6,021 a 7,75 9,60 a 7,75 2,50 a Keterangan: Huruf yang sama menyatakan tidak berbeda nyata (P>0,05) R0 = Pakan basal (kontrol) R1 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + serbuk kunyit 1,5 % R2 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + ZnO 120 ppm R3 = Pakan basal + serbuk kunyit 1,5 % + ZnO 120 ppm R4 = Pakan basal + serbuk bawang putih 2,5 % + serbuk kunyit 1,5 % + ZnO 120 ppm 9,00 7,12 a Jumlah Rataan Folikel Limfoid R0 R1 R2 R3 R4 Kelompok Perlakuan Gambar 10 Rataan folikel limfoid sekunder pada sekal tonsil. Kelompok R2, R3 dan R4 menunjukkan jumlah folikel limfoid sekunder yang lebih rendah dan kelompok R1 menunjukkan jumlah folikel limfoid sekunder yang lebih tinggi apabila dibandingkan dengan kontrol walaupun secara statistik tidak menunjukkan perbedaan yang nyata (P>0,05). Menurut Jordan (1990), adanya infeksi Marek akan menyebabkan proliferasi sel limfoid. Rute infeksi penyakit Marek secara alami yang terpenting adalah melalui saluran pernafasan (inhalasi). Sel-sel epitel pada saluran

10 pernafasan akan mengalami mengalami infeksi produktif dan infeksi akan menyebar ke berbagai organ. Infeksi Marek diawali dengan infeksi akut produktif (sitolitik) yang terjadi di dalam epitel bulu dan menghasilkan virion yang mempunyai envelope dan bersifat infeksius. infeksius Infeksi laten yang ang bersifat nonproduktif hanya ditemukan di dalam limfosit, terutama limfosit T, T, kemudian dilanjutkan infeksi transforming berupa limfomatosis pada organ limfoid maupun organ di luar limfoid. Tingginya jumlah folikel limfoid sekunder pada kelompok R1 diduga akibat kelanjutan dari infeksi Marek produktif menuju infeksi transforming yang menimbulkan limfoma yang ditandai ditandai dengan peningkatan jumlah folikel limfoid sekunder yang berisi sel tumor limfoid. limfoid Gambar 11 Histopatologi sekal tonsil dan terdapat terdapa folikel limfoid imfoid sekunder (A). Pewarnaan HE, HE kelompok R13, bar = 100 µm. Jumlah folikel limfoid sekunder pada kelompok R2, R3 dan R4 lebih rendah apabila dibandingkan dengan kelompol kontrol (R0) dan R1. Penurunan jumlah folikel limfoid sekunder pada kelompok kelompok R2, R3 dan R4 diduga oleh adanya efek dari kombinasi antara bawang putih dan kunyit sebagai antitumor serta zink yang mampu meningkatkan sistem kekebalan tubuh.

11 Penambahan bawang putih ke dalam pakan dapat menurunkan resiko terjadinya tumor karena bawang putih mengandung alil sulfida yang mampu mencegah pembentukkan radikal bebas yang dapat memacu terjadinya tumor. Alil sulfida akan bereaksi dengan zat radikal bebas untuk menekan pembentukan radikal bebas. Dosis yang telah diuji pada manusia untuk mengurangi jumlah tumor pada organ pencernaan adalah 0,3 mg/kg (Currah 2002). Penambahan kunyit ke dalam pakan mampu menekan peningkatan sel tumor. Curcumin mampu menekan pertumbuhan tumor dengan mencegah produksi inos dan COX-2 penyebab tumor dan meningkatkan produksi aktivitas NF kb. Curcumin juga dapat meningkatkan produksi NO (Nitrik Oksida) pada sel NK (Natural Killer) untuk mencegah pertumbuhan sel tumor (Chattopadhyay 2004). Penambahan zink ke dalam pakan mampu meningkatkan sistem kekebalan dengan memacu peningkatan IgG pada unggas. Zink juga mampu meningkatkan aktifitas Natural Killer Cells, fungsi dari makrofag (pagositosis dan intracellular killing), dan meningkatkan fungsi neutrofil sehingga tubuh mampu melawan benda asing yang masuk ke dalam tubuh. Zink yang masuk ke dalam tubuh akan diserap di saluran pencernaan yaitu pada usus halus sekitar 5-40%. Zink akan masuk ke dalam membran brush border usus halus melalui periselular dan media perantara sehingga zink dapat disebarkan ke seluruh tubuh. Penambahan zink dengan dosis minimal sekitar 44 mg/kg dari jumlah total pakan telah diuji dan mampu meningkatkan sistem kekebalan tubuh ayam (Goswami et al 2005).